JPS6297A - アントラサイクリン化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １豆夏五Ｉ 本発明は、新規なアントラサイクリン化合物に関する。

制癌性抗生物質としてアドリアマイシン、ダウンマイシ
ン、アクラシノマイシン等のアントラサイクリン化合物
は、癌化学療法上重要な位置を占めており、各種アナロ
グ及び誘導体の開発研究が２多くの研究者により精力的
に行われている。

一般に化合物の生理活性はその化学構造に依存するとこ
ろが大きく、アントラサイクリン化合物についてもその
アグリコン部分および糖部分の種類または置換基におい
て既存のものと異なる化合物に対しては不断の希求があ
るといえる。

１１匹ｌ１ 本発明は、上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明によるアントラサイクリン化合物バル
ミノマイシン（Ｂａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）は下式（Ａ
）で示される化合物またはその酸付加塩である。

０　０Ｈ０ （ただし式中Ｒは下記の（ａ）〜（ｄ＞のいずれかを示
す。） ユ」日と罠遵］しｌ」 本発明によるアントラサイクリン化合物であるバルミノ
マイシンは、前式（Ａ＞で示される化学構造を有する。

式中、置換基Ｒには（ａ）、（ｂ）（Ｃ）および（ｄ）
の４種があり、それぞれについて５″位の不斉炭素に関
し、二つの立体異性体が存在する。置換基Ｒとして（、
ａ）、（ｂ）または（Ｃ）を有する化合物は、立体特異
的に容易に相互変換し、これらの平衡混合物として存在
するのが普通である。

アルデヒド＋第一アむン塵）（カルピッ−ルアをン型）
（インンｆｆｌ）一般にこの平衡関係は、有様溶媒中で
は（Ｃ）が多くなる方向にずれ、また水および酸が共存
するときは（ａ）が多くなる方向にずれる。

置換基Ｒに二つの立体異性体が存在するところ、これら
の混合物も２種類存在し、本発明においてはそれぞれバ
ルミノマイシン■、バルミノマイシン■と呼ぶものとす
る。また、置換基Ｒとして（ｄ）を有する本発明化合物
は、バルミノマイシ、ンエまたは■を還元することによ
り得られるが（詳細後記）、バルミノマイシンエをＮａ
ＢＨ３ＣＮで還元して得られる化合物をバルミノマイシ
ンエｒと、またバルミノマイシン■をＮａＢＨ３ＣＮで
還元して得られる化合物をバルミノマイシンｌ［ｒと、
それぞれ呼ぶものとする。

バルミノマイシン■および■は、ともに現在のところ微
生物の培養によってのみ得られているが、この化学構造
は次のように決定したものである。

構造解析の概略は、第１図に示す通りである。

バルミノマイシン■および■は、ＦＤ−ＭＳで共にｍ／
２６３９に親イオンビークを与えること、紫外部可視部
吸収、赤外吸収および１Ｈ−ＮＭＲスペクトルがよく一
致しているが、ＴＬＣ上でのＲｆ値や比旋光度が異なる
こと等より互いに立体異性体であることが示唆された。

両化合物は０．１ＮＨＣ１中で８５℃で３０分間加熱す
ることより共に赤色のアグリコンを生じ、そのアグリコ
ンは１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、マススペクトル等よりカ
ルミノマイジノン（式？）（文献：ジャーナル・オブ・
アンチバイオチックス（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ　）　、第２９巻、第４６９〜４７１頁
、１９７６年）であると同定された。また、上記グリコ
サイドは、１％硫酸中で３０℃で部分加水分解を行なう
ことにより共に新たな赤色グリコサイドを生じた。得ら
れたグリコサイドは、いずれもシリカゲルＴＬＣでのＲ
ｆ値、比旋光度および’　Ｈ−ＮＭＲスペクトルがカル
ミノマイシンエ（弐旦）（文献二同上誌、第２７巻、第
２５４〜２５９頁、１９７４年）の標品とよく一致した
。

さらに、バルミノマイシンエをメタノール−１Ｎ酢酸水
溶液（２：１）混液に溶解後、ＮａＢＨ３ＣＮで還元す
ることにより、２種の赤色グリコサイドが得られた。そ
れらの一方はその比旋光度（〔α）、＋１７８°　（ｃ
ｏ、０２、ＣＨＣｌ３）。文献値＋１７０．４’ （ｃｏ、０５３、ＣＨＣｌ　３））、ＦＤ−ＭＳ（ｍ／
２６３９　（Ｍ＋Ｈ）”　）、　Ｈ−ＮＭＲスペクトル
（第１表）よりカルミノマイシンｌ１ｌ（式％式％ マイシンＡ１と同一物質。文献：アンチビオチキ（Ａｎ
ｔｉｂｉｏｔｉｋｉ　）第４８８〜４９２頁、１９８０
年、ジャーナル・オブ・アンチビオチックス（Ｊａｕｒ
ｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）　、第３４巻
、第７７４〜７７６頁、１９８１年、同上誌、第３４巻
、第９３８〜９５０頁、１９８１年）と同定された。ま
た、他方の還元体（バルミノマイシンＩｒ）はＦＤ−Ｍ
Ｓｒｍ／ｚ　６４２　（Ｍ＋Ｈ）＋に親イオンピークを
与え、”Ｃ−ＮＭＲスペクトル（第８図）で３３個の炭
素が確認され、かつその１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルをカ
ルミノマイシン■のそれと比較した場合に３′位（５１
，６ｐｐｍ）と６″位（５２，８ｐｐｍ　）の炭素のケ
ミカルシフトが大きく変化している以外は比較的一致し
ていた。

更に、その’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル（第５図）の解析
結果より、式５に示すような構造であることが判明した
。

一方、バルミノマイシン■を同様に ＮａＢＨ３ＣＮで還元すると、カルミノマイシン■（式
ユ）　（４−ヒドロキシバラマイシンＡ２、ルベオマイ
シンＡと同一物質。文献：カルミノマ２フ ィシン■の場合と同じ）（（α）、＋１２４゜（ｃｏ、
０１５、ＣＨＣｌ３）。文献値十１２０．６°　（Ｃ０
，１９９、Ｃｌ−ＩＣｌ３＞、＋　　　１ ＦＤ−ＭＳ、＋／ｚ　　６６０（Ｍ＋Ｈ）　　　、　　
Ｈ−ＮＭＲスペクトル（第１表））及びバルミノマイシ
ン［ｒが１９られた。後者はそのＦＤ−ＭＳ（ｎ＋／ｚ
６４２　（Ｍ、＋Ｈ）　＋）および１Ｈ−Ｎ’ＭＲスペ
クトル（第７図）より、式旦に示ず構造であることが判
った。但し、バルミノマイシンエｒとｌ［ｒとは、シリ
カゲルＴＬＣ上でのＲｆ値及び比旋光度が異なること等
より５″位の立体異性体であると考えられる。

以上の事実並びに後記のバルミノマイシンエおよび■の
理化学的性質を総合的に判断して、バルミノマイシンエ
および■は式１に示したような化合物のいずれかまたは
その平衡混合物であり、両、者は互いに５″位の立体異
性体であることが判明した。バルミノマイシンエおよび
■は溶液状態等で保存するとお互いに相互変換するが、
この事実も上記構造を支持している。

１■易多ヱ飴」盤男匝虫」酬λ吃隆 バルミノマイシン理科学的性状 本発明によるバルミノマイシンエ、■および両者の還元
体であるバルミノマイシンエｒ、ｌ［ｒの理化学的性状
は、第２図に示す通りである。但し、バルミノマイシン
エおよび■は、それぞれ実施例２で得た平衡混合物につ
いて測定したものである。

Ｖ＝　　バルミノマイシンエ、■の’Ｈ−ＮＭＲスペク
トルデーターバルミノマイシンの　゛ アントラサイクリン化合物バルミノマイシンエおよび■
は現在のところ微生物の培養によってのみしか得られて
いないが、類縁化合物からの合成化学的または微生物化
学的修飾によって製造することも、あるいは全合成化学
的に製造することも、できよう。

微生物の培養による場合の菌株としては、アクチノマジ
ュラ属に属していてアントラサイクリン化合物バルミノ
マイシンエたは■生成能を有するものが使用される。具
体的には、本発明者らの分離したＭＧ４６３−　ＶＦｄ
株がバルミノマイシンエおよび■を生産することが本発
明者らによって明らかにされているが、その他にも抗生
物質生産菌単離の常法によって適当なものを自然界より
分離することが可能である。また、ＭＧ４６３１／Ｆ４
株を含めてバルミノマイシン■または■生産菌を放射線
処理、その他の処理に付してバルミノマイシンエまたは
■の生産能を高める余地も残されている。さらにまた、
この微生物のバルミノマイシン産生に関する遺伝情報を
担う遺伝子ＤＮＡを形質転換、細胞融合その他の遺伝子
操作的手法によって、バルミノマイシンエまたは■生産
性の微生物を誘導することもできる。

また、バルミノマイシン■ｒ、［ｒは、バルミノマイシ
ンＩ、■をそれぞれ合成化学的に還元することにより製
造される。

ＭＧ４６３−ｙＦＪ株 アントラサイクリン化合物バルミノマイシン生産能を有
する菌株として本発明者らの見出しているＭＧ４６３−
　ＶＦ４株は、下記の内容のものである。

（Ａ＞　　由来および寄託番号 ＭＧ４６３−ｙＦＪ株は、昭和５７年１０月に微生物化
学研究所において高知県南国市の土壌より分離された放
射菌であって、昭和５８年１１月２４日に工業技術院微
生物技術研究所に寄託されて、「微工研菌寄第７３５２
号」の番号を得ている。

（８）　　ＭＧ４６３−ｙＦ４株の菌学的性状（１）　
形態 ＭＧ４６３−ＶＦ４株Ｌｔ、顕′ｗ１＃！！下テ分枝シ
タ基中菌糸より、比較的長い気菌糸を形成する。

気菌糸の先端には、かぎ状の胞子連鎖および疑似胞子の
う（直径２〜４μ）が着生し、１０個以上の胞子の連鎖
がらせん状に固くまいている。胞子の表面は平滑である
。

（２）　各種培地における成育状態 色の記載について〔〕内に示す標準は、コンテイナー・
コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニ
イ・マニュアル（Ｃ０ｎｔａｉｎＯｒＣｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ　　ｏｆ　　ＡｍｅｒｉｃａのＣｏ１ｏｒ　　ｈ
ａｒａ＋ｏｎｙ　　ｍａｎｕａｌ）を用いた。

（イ）　シュクロース−硝酸塩寒天培地（２７℃培養） だいだイ（５ａｃ、　Ｐｅａｃｈ　Ｔａｎ　）　〜うず
赤（６１／２　ｉｃ、　Ｃｏｒａｌ　Ｒｏｓｅ）の発育
上に、白〜うすピンク（５ｂａ、　５ｈｅｌｌ　Ｐｉｎ
ｋ）の気菌糸１［生スル。

溶解性色素は、わずかに紫色をおびる程度である。

（ロ）　グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培
養） 発育はうす黄（２ｅａ、　Ｌｔ　Ｗｈｅａｔ　〜２　ｇ
ｃＳＢａｍｂｏｏ）〜にぶ黄だいだい（３ｌｃ、　Ａｍ
ｂｅｒ　）　、気菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめ
られない。

（ハ）　グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−
培地５．２７℃培養） 発育はにぶだいだい（４１ｃ１Ｐａｓｔｅｌ　Ｏｒａｎ
ｇｅ　）１、気菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめら
れない。

（ニ）　スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４．
２７℃） うす赤味だいだい（５ｉＣ，Ｌｔ　ＰｅｒＳｉｌａｌｌ
Ｏｎ）　〜うす赤（６ｉｃ、　Ｃｏｒａｌ　Ｒｏｓｅ）
の発育、上に、白〜うすピンクの気菌糸を着生する。溶
解性色素はみとめられない。

（ホ）　チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７．２７℃培
養） 発育はうすだいだい〜うす黄茶（３ｉｃ、ＬｔＡｍｂｅ
ｒ　）　、気菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめられ
ない。

（へ）　栄養寒天培地（２７℃培養） 発育はにぶ赤紫〜赤紫（６１／２　ｎｉ、　Ｒｏｓｅ　
Ｂｒｏｗｎ）気菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめら
れない。

（ト）　イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２．２
７℃培養） 発育はにぶ赤（６１／２　ｎｅ、　Ｂｒ１ｃｋ　Ｒｅｄ
　）　、気菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめられな
い。

（チ）　オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３．２７
℃培養） うす赤紫（７ｉｃ、　Ｃｏ１ｏｎｉａｌ　Ｒｏｓｅ　）
　〜にぶ赤紫（８Ｉｅ、　Ｒｏｓｅ　Ｗｉｎｅ　）の発
育上に、白〜、うすピンクの気菌糸を着生する。溶解性
色素は赤紫をおびる。発育の色および溶解性色素は、０
．５％ＮａＯＨ水の滴下により青紫色に変化し、０．５
ＮＨＣ＋水を滴下するとだいだい色となる。

（す）　グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） 発育は、うす赤味だいだい（４ｉＣ，ｐａｓｔｅｌｏｒ
ａｎｇｅ　〜５　ｉｃ、　Ｌｔ　Ｒｅｒｓｉｍｍｏｎ）
　、気菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめられない。

（ヌ）　スターチ寒天培地（２７℃培養）無色〜うすピ
ンクの発育上に、うつすらと白の気菌糸を着生し、溶解
性色素はみとめられない。

（ル）　リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）発育は無
色〜黄茶（３ｇｃ、　Ｌｔ　丁ａｎ）　、気菌糸は着生
せず、溶解性色素もみとめられない。

（ヲ）　セルロース（濾紙片添加合成液、２７℃培養） うすピンク（７ｅＣ，Ｒｏｓｅ　Ｈｉｓｔ　）の発育上
に、うつすらと白の気菌糸を着生する。

（ワ）　ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、発育はうすだい
だい〜にぶ赤（６ｉｃ、　Ｃｏｒａｌ　ｒｌｏＳｅ　〜
７　ｌｅ。

Ａｎｔｉｑｕｅ　Ｒｏｓｅ）　、気菌糸は着生せず、溶
解性色素もみとめられない。

グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培地）で
は、発育は無色〜うすだいだい、気菌糸は着生せず、溶
解性色素もみとめられない。

（力）　脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうず赤味だいだい（５ｉｃ、　Ｌｔ　ｐｅｒｓｔ
ｎ＋ｍｏｎ）気菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめら
れない。

（３）　生理的性質 （イ）　成育温度範囲 スターチ・無機塩寒天（ＩＳＰ−培地４）を用いて、２
０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各温
度で試験の結果、５０℃を除いてそのいずれの湿度でも
生育したが、最適温度は２７℃〜３７℃付近と思われる
。

（ロ）　ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン、２０℃
培養。グルコース・ペプトン・ゼラチン、２７℃培養） 単純ゼラチン、グルコース・ペプトン・ゼラチンともに
２８日間の培養を行なったが、液化をみとめなかった。

（ハ）　スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培
地およびスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） スターチ・無機塩寒天培地、スターチ寒天培地とｂに２
１日間の培養を行なったが、氷解性はみとめられなかっ
た。

（ニ）　脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７
℃培養） ２８日間の培養を行なったが、凝固、ペプトン化ともに
みとめられなかった。

（ホ）　メラニン色素の生成（トリプトン・イースト・
ブロス、ｌ５Ｐ−培地１゜ペプトン・イースト・鉄寒天
、ｌ５Ｐ−培地６゜チロシン寒天、ｌ５Ｐ−培地７゜い
ずれも、２７℃培養）いずれの培地でも陰性であった。

（へ）　炭素源の利用性（ブリドハム・ゴトリーブ寒天
培地、ｌ５Ｐ−培地９．２７℃培養）し−アラビノース
、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｌ−ラムノースを
利用して発育し、Ｄ−フラクトース、シュクロース、イ
ノシトール、ラフィノース、Ｄ−マンニトールはおそら
く利用しないと思われる。

（ト）　リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天、２７
℃培養） リンゴ酸石灰の溶解はみとめられない。

（チ）　硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリ含有ペプ
トン水、ｌ５Ｐ−培地８．２７℃培養）陽性である。

以上の性状を要約すると、ＭＧ４６３−ｙＦＡ株はよく
伸長した気菌糸にらせん形成を有し、また特異的な疑似
胞子のうがみとめられる。胞子の表面は平滑である。

種々の培地で、うすだいだい〜うす赤、あるいはにぶ赤
紫の発育上に、白〜うすピンクの気菌糸を着生する。な
おオートミール寒天培地では、赤紫の溶解性色素が観察
され、ｐＨにより色調が変化する。メラニン様色素を生
成せず、蛋白分解力、スターチの氷解性はともに陰性で
ある。

ところで、ＭＧ４６３−　ＶＦＪ株は、リシバリ工ら（
Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　ｅｔａｌ）　：インターナシ
ョナル・ジャーナル・オブ・システマチック・バリテリ
オロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　ｏｆｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ＢａＣｔｅｒｉｏｌｏ
（Ｊ／　）　、第２０巻、第４３５頁、１９７０）の提
唱する細胞壁の主要構成成分のタイプＩ［ＩＢを示す。

すなわち、全菌体中に、メン−２，６−ジアミノピメリ
ン酸および糖成分としてグルコース、マンノース、リボ
ース、マジュロースを有することが確められた。

以上の点から、ＭＧ４６３−１／Ｆ４株は、アクチノマ
ジュラ（Ａｃｔ　１ｎｏａ＋ａｄｕｒａ　）に属する放
線菌と考えられる。プレオブラツエンスカヤら（Ｐｒｅ
ｏｂｒｏｚｈｅｎｓｋａｙａ　ｅｔａｌ　）によるアク
チノマジュラ属の検索表（ザ・バイオロジー・オブ・ジ
・アクチノミセテス・アンド・リレーテッド・オーガニ
ズムズ（Ｔｈｅ　８ｉ０１０ｇｙＯｆ　ｔｈｅ　ＡＣｔ
ｉｎＯｌｉＶＣｅｔｅＳａｎｄ　Ｒｅｔａｔｅｄ　Ｏｒ
ａａｎｉｓｍｓ　）　、第１２巻、第３０頁、１９７７
年）に基づき、ＭＧ４６３−　ｙＦ４株に近縁の種を検
索すると次の２種があげられる。すなわち、アクチノマ
ジュラ・ロゼオビオラセ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　
ｒｏｓｅｏｖｉｏｌａｃｅａ、文献：野々村ら、醗酵工
学雑誌、第４９巻、第９０４頁、１９７１年）およびア
クチノマジュラ・カルミナタ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒ
ａ　ｃａｒｍｉｎａｔａ１文献：ゴースらＧａｒｓｅ　
ｅｔａｌ）アンチビオチキ（＾ｎｔｉｂｉｏｔｉｋｉ　
）、第８巻、第６７５頁、１９７３年）である。

アクチノマジュラ・ロゼオビオラセとアクチノマジュラ
・カルミナタとは、極めて近縁の種と考えられ、両者の
相異点は基中菌糸の色調のみである。すなわち、上記の
検索表によると、オートミール寒天上でカルミナタの基
中菌糸はうすいライラック色〜赤味ライラック、赤味紫
、ロゼオビオラセはピンク赤となっている。従って、こ
の２種とＭＧ４６３１／Ｆ４株の比較実験がのぞましい
のであるが、アクチノマジュラ・カルミナタを入手する
ことが出来なかった。

次に示す表は、ＭＧ４６３−　ｙＦ４株とアクチノマジ
ュラ・ロゼオビオラセＩＭＣＡ−００１３（ＫＣＣＡ−
０１４５＞株との比較試験の成績である。右側の欄は、
アクチノマジュラ・カルミナタの文献上の記載である。

表から明らかなように、ＭＧ４６３−　ｙＦＪ株とアク
チノマジュラ・ロゼオビオラセＩＭＣＡ−００１３株は
、Ｄ−キシロースの利用性がわずかに異なるのみで極め
てよく一致している。アクチノマジュラ・ロゼオビオラ
セは、文献上ではゼラチンの液化および牛乳のペプトン
化が弱い陽性であるが、実際の試験ではどちらも陰性で
あった。

一方、カルミノマイシンの生産菌として知られるアクチ
ノマジュラ・カルミナタは、生理・生化学性状について
の記載がほとｌυどなく、ＭＧ４６３−　ｙＦ４株とは
至適温度範囲に差がみられるが、その他の性状について
の相異点は不明である。形態および培養性状については
、ＭＧ４６３−　ＶＦ４株とアクチノマジュラ・カルミ
ナタには相異がないように思われる。また、アクチノマ
ジュラ・カルミナタとアクチノマジュラ・ロゼオビオラ
セの相異点も明らかではない。従って、ＭＧ４６３−ｙ
［４株はアクチノマジュラ・ロゼオビオラヒに極めて近
縁の種であるが、生産抗生物質が同様であるアクチノマ
ジュラ・カルミナタを近縁の種から除外することは出来
ない。アクチノマジュラ・カルミナタを何とかして入手
し、比較検討することが先決である。

これらのことより、ＭＧ４６３−ｙＦＪ株はアクチノマ
ジュラ・ロゼオビオラセ（Ａｃｔ　ｉｎｏｍａｄｕｒａ
ｒｏｓｅｏｖｉｏｌａｃｅａ　）及びアクチノマジュラ
・カルミナタ（＾ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　Ｃａｒｍｉ
ｎａｔａ）の両種に近縁の種と同定した。

培養／バルミノマイシン■および■の生木発明によるア
ントラサイクリン化合物バルミノマイシン■および■は
、アクチノマジュラ属に属するバルミノマイシン■また
は■生産菌を適当　′な培地で好気的に培養して培養物
から目的物を採取することによって製造することができ
る。

培地は、バルミノマイシン■または■の生産菌が利用し
うる任意の栄養源を含有するものでありうる。具体的に
は、たとえば、炭素源としてグリセリン、グルコース、
シュークロース、マルトース、デキストリン、スターチ
、油脂類などが使用でき、窒素源として大豆粉、綿実粕
、肉エキス、ペプトン、乾燥！Ｓｙ母、酵母エキスおよ
びコンスチーブリカーなどの有機物並びにアンモニウム
塩または硝酸塩、たとえば、硫酸アンモニウム、硝酸ナ
トリウムおよび塩化アンモニウム等の無機物が使用でき
る。また、必要に応じて、食塩、塩化カリウム、りん酸
塩、重金属塩などの無芸塩類を添加することができる。

発酵中の発泡を抑制するために常法に従って適当な消泡
剤、たとえば、シリコーン、大豆油等を適宜添加するこ
ともできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく好気的液体深部培養法が最も適している
。培養温度は２０〜３５℃、好ましくは２５〜３０℃、
が適当であり、培養方法は一般に行われている抗生物資
の生産の方法と同じく好気的液体深部培養法が最も適し
ている。この方法で、バルミノマイシン■または■の生
産量は、振とう培養、通気撹拌培養共に３〜５日で最高
に達する。

このようにしてバルミノマイシン■または■の蓄積され
た培養物が得られる。培養物中では、バルミノマイシン
エまたは■は、その一部は菌体中にも存在するが、その
大部分は培養炉液中に存在する。

このような培養物からバルミノマイシン■または■を、
採取するには、合目的的な任意の方法が利用可能である
。その一つの方法は、抽出の原理に基くものであって、
具体的には、たとえば、培養か液中のバルミノマイシン
エたは■については、これを水不混和性のバルミノマイ
シンエまたは■用溶奴たとえば酢酸エチル、酢酸ブチル
、クロロホルム、ブタノール等で抽出する方法（培養が
液は中性ないし微塩基性であると抽出効率が良好である
）あるいは、菌体内のバルミノマイシンエまたは■につ
いては濾過、遠心分離等で得た菌体集体を酢酸エチル、
クロロホルム、メタノール、エタノール、ブタノール、
アレトン、メチルエチルケトン、塩酸溶液、酢酸溶液な
どで処理して回収することができる。菌体を分離せずに
、培養物をそのまま上記抽出操作に付すこともできる。

菌体を破壊してから抽出に付すこともできる。向流分記
法も抽出の範囲に入れることができる。

培養物からバルミノマイシン■または■を採取する他の
方法の一つは、吸着の原理に基づくものであって、既に
液状となっているバルミノマイシン■または■含有物、
たとえば、培養炉液あるいは上記のようにして抽出操作
を行なうことによって得られる抽出液、を対象として、
適当な吸着剤、たとえば、ダイアイオンＨＰ２０．アル
ミナ、シリカゲル、「セファデックスＬＨ２０Ｊ　　（
ファルマシア社）等を用いたカラムクロマトグラフィー
、液体クロマトグラフィーその他によって目的バルミノ
マイシン■または■を吸着させ、その後溶離させること
によって、バルミノマイシンエまたは■を得ることがで
きる。このようにして得られたバルミノマイシンエまた
は■の溶液を減圧濃縮乾固すれば、バルミノマイシンエ
または■の粗標品が赤色粉末として得られる。

このようにして得られるバルミノマイシンエまたは■の
粗標品をさらに生成するためには、上記の抽出法および
吸着法を必要に応じて組合せて必要回数実施し、必要に
応じて再結晶を行なえば良い。たとえば、シリカゲル、
「セファデックスＬＨ２０Ｊ　、弱酸性イオン交換樹脂
、［ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ　（三菱化成製）などの吸
着剤や、ゲル濾過剤を用いたカラムクロマトグラフィー
法、適当な溶媒を用いた液体クロマトグラフィー、向流
分配法および１ＩＷＪクロマトグラフイー法等を組合わ
せて実施することができる。具体的には、たとえば、バ
ルミノマイシンエまたは■の粗粉末を少量のクロロホル
ムに溶解し、シリカゲルカラムを用いて適当な溶媒で展
開すると、各有効成分が分かれて溶出するので、目的の
活性区分をまとめて減圧濃縮後、更に薄層クロマトグラ
フィーで目的成分、をかきとることにより、はぼ単一物
質として目的標品を得ることができる。また、更に純化
する為には、高速液体クロマトグラフィーを用いること
ができる。

本発明のバルミノマイシンＩｒまたはｌ［ｒは、バルミ
ノマイシン■または■を合成化学的に還元、　　するこ
とにより製造することができる。この還元反応は、有機
合成化学の分野で用いられている合目的的な任意の方法
によって行なうことができる。

たとえば、バルミノマイシンエまたは■をメタノールに
溶解し、ＮａＢＨ３ｃＮを加えて反応させればよい。こ
のようにして得られるバルミノマイシンＩｒまたはｌｉ
ｒを単離・精製するには、アントラザイクリングリコサ
イドについて常用されている任意の方法、例えばシリカ
ゲル等を用いるクロマトグラフィー、によればよい。

このようにして得られるバルミノマイシン（■、■・ｒ
、［、ＩＩｒ）は、それ自体公知の方法により、例えば
、塩酸、硫酸、リン酸などの無機酸、あるいは酢酸、プ
ロピオン酸、マレイン酸、オレイン酸、パルミチン酸、
クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、パントテン酸
、ラウリル酸、スルボン酸などの有キ酸で処理すること
により酸付加塩に変えることができる。

バルミノマイシンの用途 本発明によるアントラサイクリン化合物は制癌活性およ
び強い抗菌活性を有するので、医薬品として有用な化合
物である。その生物活性のいくつかを以下に示す。

（１）　細胞毒性（組織培養） 本発明によるバルミノマイシンは、非常に低い濃度でＰ
３８８白血病細胞の増殖を阻害した。しかも、アドリア
マイシンや他のカルミノマイシン系のアントラサイクリ
ンに比べ、同等〜１００倍以上も強い細胞毒性を有して
いることが判明した。

結果は、下表に示す通りである。

（２）　抗腫瘍活性 ＧＯＦ、マウス腹腔に１１２１０白血病細胞を１×１０
５個移植後、腹腔内に０．２５ｄずつ薬剤を下記のスケ
ジュールで投与して、抗腫瘍活性を求めた。表中の値は
、生理食塩水を投与した対照群のマウスの生存日数を１
００としたときの試験群のマウスの延命率（Ｔ／Ｃ％）
を示したものである。（但し、０日とはＬ１２１０移植
日を意味する。） 投与スケジュール−０日〜１０日（毎日）投与スケジュ
ール：０日〜９日（毎日）（３）　抗菌活性 本発明によるバルミノマイシンエ、Ｉｒ及びカルミノマ
イ゛シン■の抗菌力を寒天希釈法により求めた。最小増
殖阻止濃度（ＭＩＧ）は下表に示した通りである。

実　　　験　　　例 （１）　種母の調製 使用した培地は、下記の組成のものである。

グルコース　　　　　　　　　　１％ グリセロール　　　　　　　　　１％ シュークロース　　　　　　　　１％ オートミール　　　　　　　０．５％ アジブロン（商標）　　　　　　２％ プレスイースト（商標）　　　　１％ カザミノ酸　　　　　　　　０．５％ 炭酸カルシウム　　　　　　０．２％ （殺菌前ｐＨ７，０） 上記培地１００Ｍ１を５００ｄ容三角フラスコに分注殺
菌したものへＭＧ４６３−ＶＦ４をスラントより１白金
耳接種し、ロータリーシェーカー上で、３０℃にて５日
間振どう培養したものを種母とした。

（２）　培養 使用した培地は、下記の組成のものである。

グリセロール　　　　　　　　３％ 魚　　　粉　　　　　　　　　　　　　　　　　　２％
炭酸カルシウム　　　　　　０．２％ ３０リツトル容ジヤーフアメンターに上記培地１５リツ
トルを入れて殺菌したものに、上記種母を５００ｍ接種
し、１５０　ｒｐｍで撹拌しながら、１５リットル／分
の通気下に２７℃で４８時間培養を行なった。

（３）　バルミノマイシンエおよび■の採取得られた培
養液を濾過し、炉液をｐＨ５，０に調整後、「ダイヤイ
オンＨＰ−２ＯＪカラム４．０Ｘ４０αに吸着させ、水
及び５０％メタノール角々６リツトルで洗浄後、１００
％メタノール５リツトルで溶出を行ない、溶出液を濃縮
して、バルミノマイシンエおよび■を含む粗粉末３．０
びを得た。

得られた赤色粗粉末を少量のクロロホルムに溶解後、５
０ｇのシリカゲル（メルク社「キーゼルゲル６０」）の
カラムに吸着させ、クロロホルム−メタノールの比率を
少しずつ変化させながら、段階的に溶出させ、バルミノ
マイシンエおよび■が溶出した区分を濃縮して、バルミ
ノマイシン■および■の赤色粗粉末４０ηを得た。

実施例２ 実施例１で得られた赤色粉末４０ｍｇを少量のクロロホ
ルムに溶解後、厚さ０．２５履で２０Ｘ２０ｃＩＩのシ
リカゲルの薄層（メルク社「キーゼルゲル６０Ｆ２５４
」）１０枚に吸着させ、クロロホルム−メタノール−酢
酸−水＝７０：１０：１：１混液にて展開し、分離した
バルミノマイシンＩ及び■の区分をそれぞれかきとり、
クロロホルム−メタノール＝２：１の混液でシリカゲル
より溶出させた。このようにして得た両分を、ｒＮ　ｕ
　ＣＩ　ｅ　ＯＳ　ｔ　Ｉ　　５Ｃ１ｇＪを用い、溶出
液アセトニトリル−０，２％リン酸水（４０：　６０）
で高速液体クロマトグラフィーにより更に精製した、バ
ルミノマイシンエおよび■の赤色粉末をそれぞれ３．０
６ｇ１ｇおよび３、ｏｖａｙｍた。

友亙■ユ 実施例２で得られたバルミノマイシンエ４．５ηを５１
ｄのメタノールに溶解し、ＮａＢＨ３ＣＮ２ＩＩ＃ｇを
添加後１５分間反応さき、水２０ｄとクロロホルム２０
Ｉｄを反応系に加えて抽出後、クロロ。

ホルム層を減圧下で濃縮した。得られた濃縮液をシリカ
ゲルの１１層に吸着させ、クロロホルム−メタノール＝
１０：１混液にて展開し、分離したバルミノマイシンＩ
ｒ画分をかきとり、クロロホルム−メタノール＝１＝１
の混液でシリカゲルより溶出させた。このようにして得
た画分をそれぞれ濃縮後、クロロホルム−メタノール−
１：１混液にて平衡化した「セファデックスＬ　ｌ−１
２ＯＪカラム１．ＯＸ２０ｃｍを同じ組成の混液にて通
過させ、減圧乾固して、バルミノマイシン■ｒを２．５
ＩＩ＃ｇ得た。同様の方法で、バルミノマイシン■より
バルミノマイシンＩｒ画分た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明化合物の構造解析の概略を示す説明図
である。 第２図は、本発明化合物バルミノマイシン■の赤外吸収
スペクトル図（クロロホルム中）を模写したものである
。 第３図は、本発明化合物バルミノマイシン■の赤外吸収
スペクトル図（クロロホルム中）を模写したものである
。 第４図は、本発明化合物バルミノマイシン■ｒの赤外吸
収スペクトル図（ＫＢｒ錠）を模写したものである。 第５図は、本発明化合物バルミノマイシンＩｒの１）−
１−ＮＭＲスペクトル図を模写したものである。 第６図は、本発明化合物バルミノマイシンｌｒの赤外吸
収スペクトル図（ＫＢｒ錠）を模写したものである。 第７図は、本発明化合物バルミノマイシンＩＩｒの１）
（−ＮＭＲスペクトル図を模写したものである。 第８図は、本発明化合物バルミノマイシン■ｒの１３０
−ＮＭＲスペクトル図を模写したものである。 手続ネ山正書 ｌに１和６１年９月２２日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 次式（Ａ）で示されるアントラサイクリン化合物バルミ
   ノマイシン、またはそれらの酸付加塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ａ） （ただし式中Ｒは下記の（ａ）〜（ｄ）のいずれかを表
   わす。） ▲数式、化学式、表等があります▼（ａ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ｂ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ｃ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ｄ）