JPS5849235B2 - 新抗生物質ｘｋ−９９およびその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質およびその製造法（ご関する。

その目的とするところは、広範囲なダラム陽性菌や陰性
菌に対して強い抗菌力を示すとともに、抗腫瘍活性をも
有する新規な抗生物質を提供することにある。

本発明者らは、このような目的のもとに天然界より数多
くの微生物を入手して、抗生物質の生産性（ごついて研
究した。

その結果、東京都狛江市岩戸の畑土壌から分離した菌株
（ＭＫ−９９株と称する）を培地に培養すると培養物中
に抗生物質を生産する事実を見い出した。

この抗生物質はその後、化学的、物理的、生物学的性状
｛こついて分析が行なわれた結果、新規な抗生物質であ
ることが判明し、抗生物質ＸＫ９９と命名された。

以下、本抗生物質ＸＫ−９９およびその製造法について
詳述する。

Ａ．生産菌株ＭＫ−９９ 前記のＭＫ−９９菌株の形態的特徴および生理的性質を
観察、試験した結果は次の通りである。

■．形態的特徴 ＭＫ−９９菌株の天然培地上での生育は比較的良いが合
或培地上では悪い。

本菌株は一般に使用される寒天培地上で真性気中菌糸を
形或せず、一方良く生育した培地では基底菌糸が盛り上
がりひだを形或し、橙色を呈する。

寒天培地上の、あるいは液体培養によって得られたこの
基底菌糸を顕微鏡で観察すると、菌糸は直径約０．５μ
でよく伸長すると共に菌糸の先端附近では比較的短かく
多方向に分枝しており、又液体培養（こよって得られた
菌糸には分断が認められる。

基底菌糸にはそれから単純分枝した短胞子柄上あるいは
時々無柄に１個の黒色の胞子が着生しているが、菌糸の
最先端部分で又状（こ着生しているのも認められる。

電子顕微鏡での観察では、戒熟した胞子の直径は約０．
８〜１．２μであり、球状又は卵型を示し、その表面は
平滑である。

■．各種培地上での性状 ＭＫ−９９菌株を各種培地上で２７°Ｃ、２週間生育さ
せた時の生育の度合、色等（こついて以下Ｃこ示す。

色の表示はＣｏｌｏｒ ＨａｒｍｏｎｙＭａｎｕａｌ
（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
ｏｆＡｍｅｒ ｉ ｃａ ） ｉこよる色の分類（こ従
ったものである。

色は集落表面の菌叢色、基生菌糸の表面および裏面の色
を示す。

■．ツアベック寒天培地 生育せず。

２．グルコース・アスパラギン寒天培地 生育せず。

３ でんぷん寒天培地 生育せず。

４．グリセロール・アスパラギン寒天培地生育せず。

５．栄養寒天培地 生育：不良、平滑 色 ：ブライトメロンイエロー（３ａ） 可溶性色素：淡黄色 ６．卵寒天培地 生育：不良、平滑 色 ：ライトフィート（ ２ ｅａ ） ７．オー１へミール寒天培地 生育：普通、平滑 色 ：オレンジ（４１ａ） ８．イースト麦芽寒天培地 生育：普通、降起伏 色 ：ルゲツジクン（４ｎｅ） 可溶性色素：アンバー（３ｎｃ） ９ ベンネット寒天培地 生育：普通、畝状 色 ：オレンジラスト（４ｐｅ） 可溶性色素：淡黄色 １０．エマーソン寒天培地 生育：普通、平滑 色 ：ルセットオレンジ（ ４ ｐｃ ）可溶性色素：
アンバー（３ｐｃ） １１．グルコース・イースト寒天培地 生育：普通、平滑、黒色胞子層を若干形威色 ：ルセッ
トオレンジ（ ４ ｎｃ ）可溶性色素：アンバー（
３ ｐｃ ） １２ ヒツキートレスナー寒天培地 生育：普通、畝状 色 ：ルセットオレンジ（ ４ ｐｃ ）可溶性色素：
淡黄色 １３．ペプトン・イースト・鉄寒天培地 生育：不良、平滑 色 ：ブライトイエロー（３１ａ） 可溶性色素：淡黄色 １４，チロシン寒天培地 生育：不良、平滑 色 ：ブライトイエロー（３１ａ） 可溶性色素：ルストブラウン（５ｐｇ） ■ 生理的性質 ＭＫ−９９菌株の生理的諸性質を以下に示す。

温度ならびＣこミルクおよび繊維素に対する作用以外の
ものについては２７℃で２週間後の観察結果を示し、温
度は５日後、ミルク及び繊維素に対する作用（こついて
は１ケ月後の結果を示す。

１．炭素源の資化性：スクーチは良く資化され、Ｄ−グ
ルコース、Ｄ−フラク１・−スサツカロース、Ｄ−キシ
ロース、マンノースは比較的良く資化されるが、Ｄ−ア
ラビノース、グリセロール、Ｄ−ラクトース Ｌ−イノシトール、Ｄ−ラフイノース Ｌラムノース、
メリビオース、Ｄ−メリチ トース、サリシン、ドルシ１・−ル、ソルビトール、Ｌ
一エルボースは資化されない。

又Ｄ−カラクトース Ｄ−マンニ１〜−ルの資化性は弱
い。

２，ゲラチンの液化作用：非常（こゆっくりされる。

３．ミルク｛こ対する作用：変化なし ４．繊維素の分解作用：わずかＣこある。

５．澱粉の加水分解作用：ある ６．硝酸還元作用：なし ７．チロシナーゼの生威：ある ８．メラノイド色素の生或：ある ９．至適生育ｐＨ：６．８〜８．０ １０．至適生育温度：３０〜３８°Ｃ ＭＫ−９９菌株は寒天培地上Ｏこおいて真性気中菌糸を
形或せず基底菌糸に胞子を単一生戒する中温菌であり、
細胞壁の分析によりハイドロキシ、及びメン・ディアミ
ノピメリン酸（ ｈｙｄｒｏｘｙ −ｔ ｍｅｓｏ−Ｄ
ＡＰ ）を有し、全菌体の糖の分析からアラビノース、
キシロースを含有することから、放線菌のミクロモノス
ポラ属（こ属する菌株である。

ミクロモノスポラ属の分類についてルイデマンらは菌糸
、胞子柄の分枝法などの形態的特徴、炭素源の利用性な
どでもって行なえるのではないかと述べている。

又パージの〔マニュアル オブデイテクテイブ・バクテ
リオロジイ（ウィリアムス ウイルキンス社、バルチモ
ア、米国）〕第８版において本属の好気性菌はαメリビ
オスの利用性の有無で２グループ、そして糖の利用性の
データーが欠けているものを特徴的色素の生産有無で２
グループ｛ご計４グループに大きく分類し、更｛こそれ
ぞれを分類している。

本菌株はα−メリビオース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−ラフ
イノースを利用せず、炭素源の利用性からみた分類では
ミクロモノスポラ・パープレアに近いことになるが菌糸
の分枝法・表面が平滑な胞子の形威、産生される色素な
どの点で非常をこ異なる。

形態的特徴からＭＫ−９９菌株を本属の菌株と比較する
と、菌糸はミクロモノスポラ・ナラシノエンシス例えば
上述のパージー第８巻ほどの分枝は認められないが、先
端附近で比較的短かく戻状に分枝したりする点、胞子の
表面が平滑である点などからミクロモノスポラ・メラノ
スボレア（こ非常に似ている。

形態的特徴、炭素源の利用性のどちらを重視するかによ
って分類上の位置が異なるが、我々は形態的特徴を重視
し、ミクロモノスポラ・メラノスポレアの１種とする。

そしてミクロモノスポラ・メラノスポレアが澱粉無機塩
寒天培地で良く生育するのに本菌株は生育しないこと、
ミクロモノスポラ・メラノスポレアがミルクの凝固作用
、ペプトン化作用があるのに本菌株はないこと、ミクロ
モノスポラ・メラノスポレアがα−メリビオース、Ｄ−
ラクトースを利用するの（こ本菌株はしないこと、又本
菌株は各種培地でこはく色の可溶性色素の生産すること
から、本菌株をミクロモノスポラ・メラノスポレアの亜
種とし、ミクロモノスポラ・メラノスボレア・サフスペ
ーシス・コマエンシスと命名した。

Ｂ．ＭＫ−９９菌株の培養 本菌株の培養（こおいては通常の放線菌の培養法が一般
（こ用いられる。

培養のための栄養源としてはいろいろのものが用いられ
る。

炭素源としてはブドー糖、澱粉、マンノース、フラクト
ース、シュクロース、糖密などが単独または組合せて用
いられる。

さらに菌の資化性によって炭化水素、アルコール類、有
機酸なども用い得る。

無機および有機窒素源としては、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、硝酸ソーダ
などが、また天然窒素源としてはペプトン、肉エキス、
酵母エキス、乾燥酵母、コーンスチイープリカー、大豆
粉、カザミノ酸、ソリュブルベジダブルプロテイン、綿
実粕などが単独または組み合せて用いられる。

その他必要（こ応じて食塩、塩化カリ、炭酸カルシュー
ム、燐酸塩などの無機塩類を加えるほか、本菌の生育や
ＸＫ−９９の生産を促進する有機物や無機物を適当に添
加することができる。

培養法としては、液体培養法とくに深部撹拌培養法がも
つとも適している。

培養温度は２５〜４００Ｃ，ｐＨは中性付近で培養を行
なうことが望ましい。

液体培養で通常４ないし７日間培養を行なうと、本抗生
物質が培養液中および菌体中に生戊蓄積される。

培養物中の抗生物質の蓄積量が最犬に達した時に培養を
停止し、培養液中および菌体中から目的物を精製単離す
る。

Ｃ．ＸＫ−９９の精製・単離 培養物中から本物質の精製単離（こは、微生物代謝生産
物を、その培養物から単離するために普通用いられる方
法が利用される。

本抗生物質ＸＫ−９９は後記する如く水な難溶でメタノ
ール、エタノール ｎ−ブタノールなどの低級アルコー
ル（ご可溶、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチルなど
Ｑこは不溶であるので、これらの性質を利用した精製法
が用いられる。

すなわち、菌体から活性或分のメタノールによる抽出、
ＨＰ−１０レジンカラムク口マトグラフイーシリカゲル
カラムクロマトグラフィー、セファデツクス、ＬＨ−２
０カラムクロマイグラフイーなどの方法を適当（こ組合
せて用いることができる。

次にその一例を示す。培養を終了した培養液（こ済過助
剤を加えフィルタープレスなどＣこより炉過し、菌体を
培養液から分離する。

この菌体を水でよく水洗したのち、等容量のメタノール
を加え３０分間激しく撹拌する。

この操作（こより活性或分の大部分は菌体からメタノー
ル中に遊離してくる。

炉過により菌体を除いたのち炉液と菌体部分とを分ける
。

菌体部分をさらに少量のメタノールで洗滌して先の炉液
と洗滌液とを合せる。

これを減圧下でメタノールを濃縮、溜去する。

残った水層部分をヘキサンとよく混合してヘキサン層を
除く。

水層部分を減圧下で濃縮し混入する・＼キサンを溜去し
た後カセイソーダでｐＨを６．８に調整する。

この水溶液をＨＰ−１０樹脂〔三菱化或工業株製〕を充
填したカラム（こ通すと活性威分は樹脂（こ吸着される
ので、流出液および水洗液は放流し、よく水洗した樹脂
を８０％のメタノール水溶液で溶出する溶出画分をスタ
フイロコツカス゜アウレウス（ Ｓ ｔａｐｌｙｌｏｃ
ｏｃｃｕｓ ａｕ−ｒｅｕｓ）でパイオアツセイを行
ない抗菌活性のある画分のみを集める。

この画分を減圧下で濃縮乾固するとＸＫ−９９の粗粉末
を得ることができる。

ＸＫ−９９粗粉末からの精製はざらにつぎのような方法
により行なうことができる。

すなわち、シリカゲル粉末をｎ−ブタノール：酢酸：水
（３：１：１、容量比以下同じ）の混合溶媒（ご懸濁し
、ガラス製カラムに充填したあと、同じ組或の混合溶媒
でよく洗滌する。

このシリカゲルカラム上（こＸＫ−９９粗粉末をチャー
ジし、同じ混合溶媒で連続的ｆご溶出を行なう。

溶出画分をフラクションコレクターで分取し、名画分を
Ｓ．ａｕｒｅｕｓでバイオアツセイして抗菌活性のある
画分を集める。

この画分を減圧下で濃縮し、つづいて、８０％−メタノ
ール水溶液で，充填し、洗滌したセファデツクスＬＨ−
２０（商品名、ファルマシア社、スエーデン）のカラム
に導入する。

このカラムを同じく８０％メタノールー水溶液で溶出す
ると、ＸＫ−９９は溶出液中に溶出されてくるので、Ｓ
．ａｕｒｅｕｓによるパイオアツセイによりＸＫ−９９
の含まれる画分を集め、減圧下で濃縮乾固すればＸＫ９
９の精製標品を得ることができる。

かくして得られたＸＫ−９９の理化学的性状はつぎに示
すとおりである。

本物質は不定形の赤褐色粉末で元素分析値（測定値）は
Ｃ ５８．２４％、Ｈ４．５７％、Ｎ９．８３％であ
り、マススペクトラム（こより推定される分子量は３９
０である。

融点は２５０℃以上で明瞭な融点を示さず分解する。

本物質のメタノール溶液の紫外部吸収スペクトルを第１
図（ご示す。

本物質のメタノール溶液中での比旋光度は〔α〕ビー−
３６００（Ｃ Ｏ．１、ＭｅＯＨ）である。

本物質のＫＢｒ 中で測定した赤外吸収スペクトルを第
２図に示す。

図から明らかなごとくつぎの波数に吸収極太を示す。

３４００、２９００、１７２０，１６００，１３４５、
１３７０，１２８０，１２６０，１２４０、１１１５、
１０７０，８３０，７４００（ＣｒｆＬ−’）。

本物質はメタノール、エタノールに可溶であり、水には
難溶だがベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル ｎ−ハ
キサンなどの有機溶媒｛こは不溶である。

ＸＫ−９９の各種展開剤によるペーパークロマトグラフ
イー及び薄層クロマトグラフイーのＲｆ値を表１、２に
示す。

表 ＩＸＫ−９９のペーパークロマ 展開剤 １． ２０％一塩化アンモニウム水溶液 ２，水飽和ｎ〜ブタノール ３ ｎ−ブタノール：酢酸：水 （３：１：１） 水飽和酢酸エチル ２％−ｐ−トルエンスルホン酸、 ２％−ピペリジン添加水飽和ｎ ブクノール トグラフ Ｒｆ値 ０．０ ０．１５ ０．４５ ０．０ ０２８ 炉紙：東洋済紙４５ １ （ ２ Ｘ ４ ０Ｃｗｌ）
展開：２８℃、上昇法、展開時間：１，４は３時間、２
，３，５は１５時間 検出： Ｓ． ａｕｒｅｕｓによるバイオオートグラフ
イーによる。

表 ２ＸＫ−９９の薄層クロマトグラフイー■ ２， ３． ｎ ｎ ｎ 展開剤 ブタノール：酢酸：水 （４：１：５）の上層部分 ブクノール：酢酸：水 （４：１：５）の下層部分 ブタノール：ピリジン：水 （１０：１：１０）の上層部分 Ｒｆ値 ０．５０ ０．００ ０．３０ 展開剤 ｎ−ブクノール：ピリジン：水 （１０：１：１０）の下層部分 ジイソブチルケトン：酢酸：水 Ｒｆ値 ０．２０ （８：５：１） 薄層：セルロース（イーストマン、 ０．７０ ＃１３２５４、２０ｃＩｒＬ×２０ｃｒｒＬ）展開：室
温で４時間、上昇法による。

検出： Ｓ． ａｕｒｅｕｓのバイオオートグラフイー
による。

つぎにＸＫ−９９の各種微生物（ご対する抗菌スペクト
ルを示すと表３のとおりである。

つぎ（こＸＫ−９９の抗癌活性について述べる。

Ｓａｒｃｏｍａ １ ８ ０固型癌細胞を雄のｄｄｙ系
マウス（こ一匹轟り５Ｘ１０６細胞数を皮下注射し、１
月後ＧｊＸＫ−９９を０．３％一カノレボキシメチノレ
セルロースに懸濁した試料を腹腔内投与で１回投与し、
７日間飼育後癌細胞の大きさを測定し、無処理区と比較
した。

その結果を表４に示す。平均体重１９±１ｇのマウスを
使用した。

これらの結果から明らかなよう＃（：ＸＫ−９９は広範
囲のダラム陽性菌や陰性菌Ｑこ対して強い抗菌活性を有
している。

またＳａｒｃｏｍａ １ ８ ０固型癌（こ対じても顕
著な治療効果を示している。

これらの広範囲な抗菌活性及び抗癌活性からみて本物質
が囲薬用の抗生物質として有用な物質であると考えられ
る。

つぎ（こ本物質を既知の抗生物質と比較してみる。

ミクロモノスポラの生産する類似の物質としてハロミシ
ンＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ（米国特許第３５１１９０９号、米国
特許第３８８０８３９号など）やりファマイシンＳ，Ｓ
Ｖ（米国特許第３８８４７６３号など）などのいわゆる
アンサマクロライド抗生物質群が、また抗癌性抗生物質
としてはアクチノマイシン コンプレックス（米国％許
第３９ ５ ４ ９ ７ ０号など）などがある。

さら｛こ一般の放線菌の生産する抗生物質の中でＸＫ−
９９と類似の性質を示・すものとしてアドリアマイシン
（Ｆ ． Ａｒｃｒｍｏｎｅら、Ｔｅｔｒａｈｅｄ．
Ｌｅｔｔ，， １３， １．００７（１９６９）な
ど）、ダウイマイシン（英国特許第１００３３８３号な
ど）、アクラシノマイシン（Ｔ．ＯＫｉ ら、Ｊ，
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ， ２８ ， ８３ ０ （
１ ９ ７５ ）など）があげられる。

そこでこれらの物質について、いくつかの方法（こより
ＸＫ−９９とを比較検討を行なった。

その結果を表５に示す。この結果から明らかなよう（こ
バチルス・ズブチリスに対する抗菌活性において既知の
抗生物質とＸＫ−９９との間には大きな差が認められる
。

またスタフイ口コックス・アウレウスに対する抗菌力と
バチルス・ズブチリスに対する抗菌力の比〔Ｃ〕は、リ
ファマイシンなどのアンサマクロライド系抗生物質群を
除いていずれもＸＫ−９９とは大幅に異なる。

二種微生物に対する抗菌活性の比〔Ｃ〕において近似の
値を示すアンサマクロライド系抗生物質群は、ペーパー
クロマトグラフ上のＲｆ値ＣこおいていずれもＸＫ−９
９とは明らかに異なっている。

アドリアマイシン等のアンスラサイクリン系抗生物質群
は上記の表から明らかなように二種の微生物に対する抗
菌力の比〔Ｃ〕が全く異なるうえ（こ、これらの物質は
、共通の性質として溶液のｐＨを変化させることにより
、アルカリ性では青紫色、酸性側では黄色に変化する性
質があげられるいる。

しかしながらＸＫ−９９はその溶液のｐＨを変化させて
も色の変化は認められず明らかにこれらの抗生物質とは
異なるものである。

このような事実から本発明の目的化合物抗生物質ＸＫ−
９９はこれまで１ご全く類を見ない新規な物質であるこ
とは明らかである。

つぎに本発明の実施例を示すが、これは単なる一例示で
あって何等本発明を限定するものではない。

実施例 １ 種菌としてミクロモノスポラ・メラノスポレア・サフス
ペーシス・コマエンシス（ Ｍｉ ｃ ｒｏｍｏｎｏｓ
ｐｏｒａ ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｅａ ｓｕｂｓｐ ｃ
ｏｍａｅｎｓｉｓ）ＭＫ−９９株（ＮＲＲＬ１１１００
）、（微工研菌寄第３９５４号）を用い、第一種培地と
してグルコース２％、ペフトン０．５％、酵母エキス０
．５％、炭酸力ルシューム０．１％（殺菌前ＰＨ７．２
）の培地を用いた。

種菌一白金耳を５０ｍｌ容太型試験管に入れた上記の種
培地に植菌し、３０℃で３日間培養する。

この種培養液１０ｍｌを、３００Ｔｌｌ容エルレンマイ
ヤーフラスコ中に入った３０ｍｌの第二種培地に植菌す
る。

第二種培地の組戒は第一種培地の組或と同じである。

第二種培養は３０℃で２日間振盪培養する。

この種培養液３０ｍｌを２ｌバッフル付きエルレンマイ
ヤーフラスコに入った３００７７１ｌの第三種培地に植
菌する。

第三種培地の組或は第一種培地の組成と同じである。

第三種培養は３０℃で２日間振盪培養する。

この第三種培地０．９Ａ？（フラスコ３本分）を３０Ａ
容のステンレススチール製ジャーフ，７アーメンター中
の主発酵培地１５Ａ’に植菌する。

主発酵培地組成はラクトース３％、ソルブルベジタブル
・プロテイン１％、ＮＺ−アミンタイプＡ０．５％、酵
母エキス０．５％、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０ ５ｍ９／
ｌ， ＭｎＣｌ２− ４Ｈ２０ ５１’ｌ’ｌ９／ｌ、
ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０ ５即／ｌ，ＣｏＣｌ２・６Ｈ２
０１Ｔｎ９／ｌ，ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０２０１ｖ／ｌ、
ＣａＣＯ３０．２％（殺菌前ＰＨ７．３）の培地を用い
る。

この主発酵培養は３０℃で４日間通気攪拌方式（回転数
３ ５ Ｏ ｒ．ｐ，ｍ， ，通気量１ ５ ｌ／ｍｉ
ｎ）により行なう。

かくして得られた発酵液に炉過助材としてラジオライ｝
＃６００（昭和化学工業株製〕を約１ｋｇ加え、菌体を
炉別する。

炉液は別にとり、菌体を約１１の水でよく洗滌する。

洗滌した菌体および炉過助材の混合物を５ｌのメタノー
ル中に懸濁し、攪拌機で約３０分間激しく攪拌する。

この操作によりＸＫ−９９は菌体から大部分溶離してく
るので炉過によりメタノール溶液と菌体とを炉別し、菌
体部分はさらにもう一度５ｌのメタノール中に懸濁して
３０分間攪拌する。

Ｐ過により菌体を除き、炉液部分を最初のメタノール溶
液と合せて約１０Ａ？のＸＫ−９９を含むメタノール溶
液を得る。

この溶液を減圧下で濃縮し約５００ｒｒＬｌの液量とす
る。

これに３００ｍｌのｎ−ヘキサンを加え激しく振盪した
のち、放置しヘキサン層を除く。

さらにもう一度３００ｍｌのヘキサンを加え激しく振と
うしてヘキサンに溶解する不純物を除去したのち、つい
で２００ｍｌのエチルエーテルを加え激しく振盪して静
置しエーテル層を除く。

このエーテル抽出をもう一度繰り返してエチルエーテル
に溶解する不純物を除去する。

得られた水層部分を蒸溜水で１ｌに稀釈しＰＨを６．８
に調整する。

この水溶液をＨＰ−１０樹脂（三菱化成製）１００ｍｌ
を充填したガラス力ラムに通し、活性成分を樹脂に吸着
させる。

約３００１ｒＬｌの蒸溜水でカラムを洗滌したのち、流
出画分と水洗液はすてる。

ついで０．２Ｎのアンモニア水を含む８０％−メタノー
ル水溶液でＨＰ−１０カラムを溶出する。

溶出画分を１０ｍｌずつフラクションコレクターにより
分取し、約３００ｍｌの８０％アンモニア性メタノール
を流す。

得られた溶出画分をＳ． ，ａｕｒｅｕｓテヘーハーデ
ィスク法により検定するとフラクション番号８−１５の
試験管に抗菌活性が認められる。

この画分を集め、減圧下で濃縮し２ｍｌとする。この溶
液をあらかじめメタノールで懸濁しガラス製力ラムに均
一に充填したセファデックスＬＨ一２０（約１５０７７
１ｌ）のカラムにチャージする。

次いでメタノールで４０ｍｌ／ｈｒの流速でとのカラム
を溶出し、溶出フラクションを５ｍｌずつの分画に分け
て分取し、各分画についてＳ．ａｕｒｅｕｓでペーパー
ディスク法により抗菌活性の検定を行なうと、フラクシ
ョン番号３２−３５に抗菌活性のある両分が認められる
。

この画分を集め、減圧下に濃縮してメタノールを溜去す
ると最終的にＸＫ一９９が暗褐色の粉末として得られる
。

ここで得られた収量は１５■であり、Ｓ ． ａｕｒｅ
ｕｓ に対する最少阻止濃度は０．７γ／ｍｌであっ
た。

実施例 ２ 種菌としては実施例１に示したものを用い、同じ《実施
例１に示したと同様の培地組成、培養方法で培養を行な
う。

培養終了後、炉過助材を加えて炉過した培養炉液（約１
２４）に２Ｎ一塩酸溶液を加えてＰＨを７．０に調整す
る。

この炉液を、水で懸濁してカラムにつめた１ｌのＨＰ−
１０樹脂に通塔する。

こうすると、培養期間中に菌体から遊離して培養済液中
に蓄積されていたＸＫ９９成分はＨＰ−１０樹脂に吸着
保持されるので、通塔終了後、約３ｌの蒸溜水で樹脂を
洗滌し、流出液および洗液はすてる。

ついで０． ２ Ｎのアンモニア水を含む８０％−メタ
ノール水溶液でＨＰ一１０カラムを溶出する。

溶出画分を１００ｍｌずつの画分で分散し、得られた溶
出画分をＳ．ａｕｒｅｕｓでペーパーディスク法により
検定すると、フラクション番号９〜１７にＳ．ａｕｒｅ
ｕｓに対する抗菌活性が認められる。

この両分を集め、減圧下で濃縮して約１０ｍｌとする。

これをあらかじめ、ｎ−プタノール：酢酸：水（３二１
：１）の混合溶媒で懸濁し、カラムに均一に充填したセ
ルロース（ＡＶＩＣＥＬ，フナコシ薬品製）の約５００
ｌ７Ｉ．ｌのカラムにチャージする。

ついで、同じくｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１
）の混合溶媒で、６０ｍｖｈｒの流速でカラムを溶出す
る。

溶出フラクションを２０１ｒＬｌずつ分取し、Ｓ．ａｕ
ｒｅｕｓによるヘーハーティスク法で検定すると、フラ
クション番号４２〜５６にＳ． ａｕｒｅｕｓに対する
抗菌活性が認められる。

この両分を集め、減圧下で濃縮し２ｙｎｌとする。

この溶液をあらかじめメタノールで懸濁しガラス製力ラ
ムに均一に充填した１５０ｍｌのセファデツクスＬＨ−
２００カラムにチャージする。

ついでメタノールで４０ｒｒＬ４／ｈｒの流速でこのカ
ラムを溶出し、溶出フラクションを５縦ずつの分画に分
けて分取し、各分画についてＳ．ａｕｒｅｕｓでペーパ
ーディスク法により抗菌活性の検定を行なうと、フラク
ション番号３４〜４０に抗菌活性のある両分が認められ
る。

この画分を集め、減圧下に濃縮してメタノールを溜去す
ると、最終的にＸＫ−９９が暗褐色の粉末として得られ
る。

ここで得られたＸＫ−９９は菌体画分から得られたもの
と同一物質であり取量は１７■であった。

またＳ．ａｕｒｅｕｓに対する最少阻止濃度は０．７ｒ
／ｍｌであった。

【図面の簡単な説明】

第１図はメタノールに溶解して測定したＸＫ９９の紫外
部吸収スペクトルである。 尚、中性でのスペクトルは実線で、酸性でのスペクトル
は点線で、アルカリ性でのスペクトルは一点鎖線で示し
たＰＨは塩酸およびカセイソーダ水溶液で調整した。 第２図は、臭化カリ錠剤法によるＸＫ−９９の赤外線吸
収スペクトルである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の理化学的性質を有する抗生物質ＸＫ９９。 （イ）性 状：赤褐色粉末 （口）分子量：３９０ （ハ）融 点：２５０℃以上（分解） ，（ニ）比旋光度：〔α〕Ｌ４−３６げ （Ｃ＝０．１、メタノール） （羽 紫外部吸収スペクトル ：第１図に示す。 （ハ）赤外線吸収スペクトル ：第２図に示す。 ２ ミクロモノスポラ属に属する抗生物質ＸＫ９９生産
   菌を栄養培地に培養し培養物中に抗生物質ＸＫ−９９を
   蓄積せしめ、該培養物から抗生物質を採取することから
   なる抗生物質ＸＫ−９９の製造法。