JPS61285992A - 抗腫瘍性抗生物質ｍｆ７３０−ｎ６及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、キタサトスポリア（Ｋｉ　ｔａｓａｔｏｓｐ
ｏｒｉａ’）属に属する微生物によって生産され、抗主
要活性及び抗菌活性を有する新規抗生物質並びにその製
造方法に関する。

〔従来の技術〕

抗腫瘍活性及び抗菌活性を有する抗生物質としては、ア
ドリアマイシン、アクラシノマイシン等のアントラサイ
クリン系のものを中心に多数の有用な化合物が提案され
ている。しかし、多種多様な癌を撲滅するには更に有用
な化合物の提供が待たれている。

この観点から提案され公知となっている化合物のうち、
本発明の抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ５に近似する理化学的
性質を示す物質としては、ＰＲ−１３５０物質（Ｃ１ｅ
ｒｏｃｉｄｉｎ）が開示されている。（例えば、特開昭
５７−１２０５２２号公報及びテトラヘドロン・レター
（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ）　、ｖｏ
ｌ、２５、ｋ　４　、　ｐｐ４６５〜４６Ｂ　、１９８
４）　、そして該ＰＲ−１３５０物質は酸化ジで示され
るハイドロキシ−アルデヒド〔■〕、ヘミアセタール（
ｎ）を含むモノマーと式ＣＩＩ［）で示されるダイマー
との相互間の平衡状態よりなる複合体であるとされてい
る。

〔発明が解決しようとする問題点〕

以上の如く、従来技術は、抗腫瘍性、抗菌活性を有する
新たな類に属する抗生物質を提供するものであるが、癌
種の多様性を考慮すると、抗ＩＩＩ瘍性物質の提供に対
する要望が止むものではない。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、従来より有用な抗生物質の発明、実用化
を促進してきたが、本発明もかかる研究の一端として、
従来の文献未載の新規抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６が実験
動物の各種の腫瘍細胞に対して、インビトロ（ｉｎｖｉ
ｔｒｏ）及びインビボ（ｉｎｖｉｖｏ）で強い抗腫瘍性
を有し、かつ、ダラム陽性菌及びダラム陰性菌の発育を
強く阻止することを見出し完成したのもである。

即ち、本発明によれば抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６は以下
に示す理化学的性質及び生物学的性質により特徴づけら
れる。

ｒ生　　ＭＦ７３０−Ｎ６の　ヒ　・性抗生物質ＭＦ７
３０−Ｎ６　モ上記公知ＰＲ−１３５０ｅＩＪ質と同様
に互変異性の複合体よりなるものと考えられるので、測
定条件、試料の鋼製方法によって、その理化学的性質は
異なってくる。以下に示す理化学的性質は後述の実施例
に示す方法によって調製した白色粉末に関するものであ
る。

＋１１　　融点 抗生物’！肝７３０−Ｎ６は通常、１１５〜１１９℃の
範囲内の融点を示す。

（２）旋光度 上記粉末の０．４６％クロロホルム溶液を調製した直後
の測定値は、〔α）　Ｐ　　＝　−２８，５’である。

（３）溶解性 抗生物質ＭＰ７３０−８６の上記白色粉末はメタノール
、エタノール、酢酸エチル又はベンゼンに易溶である。

一方、水又はｎ−ヘキサンに実質的に溶解しない。

（４）　　呈色反応 実施例１の方法で調製される白色粉末のメタノール液を
シリカゲルクロマトグラフィーにより展開したとき、抗
生物質−Ｆ７３０−Ｎ６に該当する両分の呈色性は以下
のとおりである。

塩化トリフェニルテトラゾリウム　　　陽性アニスアル
デヒド−硫酸反応　　　　　陽性ヨウ素蒸気　　　　　
　　　　　　　　陽性フェーリング試薬　　　　　　　
　　　陽性硝酸銀−アンモニア（トーレンス） 試薬　　　　　　　　　　　　　　　　陽性８％リンモ
リブデン酸−エタノール　　陽性ドラーゲンドルフ試液
　　　　　　　　陰性塩化第二鉄試液　　　　　　　　
　　　陰性（５）赤外線吸収スペクトル ＫＢｒＢｒ法によって調製した抗生物質、ＭＦ７３０−
Ｎ６白色粉末の特徴的な極大吸収は、３４３０．２９６
０、１７０５及び１６３５ｃＩｍ”’に吸収を有する。

＋６１’Ｈ−ＮＭＲスペクトル 抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６白色粉末を重メタノールに溶
解させた直後の測定値は、それぞれδ値として、１．３
５（ｓｌ、１．５０〜１．８０（ｍｌ、１．７５（ｂｒ
ｓ）、１．８０〜２．３０＋ｍｌ、２．７０〜２．８５
（ｍｌ及び５．３０〜５．４０（ＩＩＩ＋に特徴的な吸
収を示す。

（７）紫外線吸収スペクトル 抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６白色粉末を、それぞれ下記の
溶媒系に溶解した直後に判定した場合の極大吸収（ｎｍ
）及びＥｉｈ値（（）内に示す）は、それぞれ メタノール：　２０３（６０）、　２８０（３１０、Ｉ
Ｎ　ＨＣ／　−Ｊ　タ／　−ル：　２０３（５８Ｌ　２
８０（３）０、ＯＩＮ　ＮａＯＨ−メタノール：　２０
７　（１２４）　、　２６７　（４８）を示す （８）抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６の誘導体及びその理化
学的性質 実施例１　ヴイテフヒ付加体の調製 ＭＦ７３０の粗精製物３０■の無水ベンゼン５〇−溶液
にカルボメトキシメチレントリフェニルホスホラン１０
０■を添加し、室温で１８時間かきまぜた後、反応混合
物を３０ｇのシリカゲルカラム（１５■−×２４０鶴）
に通導し、吸着させベンゼン−酢酸エチル混合溶媒（混
合比１０：１）で溶出した。

目的物を有する両分を集めさらにセファデックスＬ１（
−２０（１００ｍ）のカラム（２０ｗ　ｘ　３５０龍）
で酢酸エチル−メタノール混合溶媒（混合比２：ｌ）を
用い精製し、付加体上、叢の３：１平面部合物１２５■
を得た。

Ｒｆ　：　０．４４　（ベンゼン−アセトン　　１　：
　１）０．４０　（ベンゼン−酢酸エチル　３：１）主
生成物　上 ’　Ｈ＝ＮＭＲ（ＣＤ（Ｊ３）　　δ：０．９９（３１
−１，ｄ、Ｊ　＝７．０　Ｈｚ）１．００（３Ｈ，ｓ） １．３５（３８，ｓ） １．４７（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１５．０　
Ｈｚ）１．５０〜１．７５（３Ｌｍ） １　、７６　（４）１　、　ｂｒｓ） １．９５−２．１０（２Ｈ，ｍ） ２．２５（Ｉｌｌ、　ｂｒｓ） ２．６４（１Ｂ、ｄｄ、Ｊ＝２．Ｏｌｌｚ、１２．０　
Ｈｚ）２．８５（ＩＨ，ｄ、Ｊ　〜５．Ｏｌ１ｚ）３．
１７（ＩＨ，ｄ、Ｊ　〜５．Ｏ１ｌｚ）３．６６（ＩＨ
，ｄ、Ｊ　〜４．０　Ｈｚ）３．７９（３Ｈ，ｓ） ３．８０（３Ｈ，ｓ） ４．２０（ＩＨ，ｂｒｄ、Ｊ　　〜１３．０Ｈｚ）４．
２７（ＩＨ，ｄｄ、、Ｊ　　〜４．０　　Ｈｚ、１４．
０　　Ｈｚ）５．３５（ＩＨ，ｂｒ） ６．１８（ＩＨ，ｓ） ６．３８（１８，ｄ、Ｊ　　〜１６．２Ｈｚ）８．４７
（ＬＨ，ｄ、Ｊ　　〜１６．２Ｈｚ）副生成物　↓ ０．８４　（３１１，ｓ） ０．８９（３）１．ｓ） １．２６（３）１．ｄ、Ｊ　　　＝７．０　１１ｚ）１
．４６（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝９．５１１ｚ、１５．Ｏｆｉ
ｚ）１．５０〜２．７５（４Ｈ，ｍ） １．８１　（３Ｈ，ｂｒｓ） １．９５〜２．１０（２Ｂ、ｍ） ２．１８（ＬＨ，ｂｒｓ） ２．８０（ＩＨ，ｑ、Ｊ　＝７．０　）Ｉｚ）２．８５
（ＬＨ，ｄ、Ｊ　〜５．０　Ｈｚ）３．１６（Ｉｆｔ、
ｄ、Ｊ　〜５．０　Ｈｚ）３．７９（３ｔｌ、ｓ） ３．８］、（３８，ｓ） ３．８５（１）１．ｄ、Ｊ　　＝５．０　　）ｌｚ）４
．０３（１８，ｂｒｄ、Ｊ　　＝９．５　　Ｈｚ）４．
３８（ＩＨ，ｄ、Ｊ　　＝５．０　　Ｈｚ）５．２３（
ＩＨ，ｂｒ） ６．１２（１８，ｓ） ６．３７（ＩＨ，ｄ、Ｊ　　＝１６．２Ｈｚ）８．４３
（１８，ｄ、Ｊ　　＝１６．２Ｈｚ）実験例２．　　Ｐ
−ブロモベンゾイル　の量化合物１．２の混合物ｌＯ■
を無水ピリジン１−に溶解し、Ｐ−ブロモペンシルクロ
リド２０曙を添加し、室温で１８時間かきまぜた。反応
混合物を、減圧上濃縮し、残渣を酢酸エチル３０−に溶
解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和塩化ナト
リウム水溶液で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、
減圧下、溶媒を留去した。

この残渣を１０ｇのシリカゲルカラム（１５９Ｘ　１０
５ｍ）に展開溶媒としてベンゼン−酢酸エチル混合溶媒
（混合比２０：１）を用い精製し、Ｐ−ブロモベンゾイ
ル体３８．２■を得た。

Ｒｆ＝０．３４（ベンゼン−酢酸エチル　５：１）（α
）　ｇｏ−ｓｓ、ｓ’　　（ｃｏ、２ｃＨａｚ）ＵＶ７
社％”　ｎｍ　（ｔ　）：　２４７（２７７００）、２
６８（１７１００）ＩＲｙ　社沖ｃｍ−’２９５０．１
７２０．１５９０．１２８０．１１７５Ｆ［ｌ−ＭＳ（
ｍ／　ｚ　）　　；　６６０，６５８（Ｍ”　）ＨＩ−
ＭＳ（ｍ／　ｚ　）　　；　６６０，１７０７　（Ｃｓ
＋Ｈ：＋ｑＯｑ　Ｂ　ｒ）６５８＋１７６８　（Ｃｓｓ
ＨｘｑＯｑ　　Ｂ　ｒ）ＨＮＭＲ（ＣＩｌｌＣｊ、）δ
： ０．８８（３Ｈ，ｄ、Ｊ　　＝７．０　Ｈｚ）１．０４
　（３Ｈ，ｓ） １．３９＜３Ｈ，ｓ） １．５５（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝１０．０Ｈｚ、］、５．Ｏ
ｆｉｚ）１．６６（ＩＨ，ｄ、Ｊ　　＝１５．０Ｈｚ）
１．６　　（ＩＬｂｒ） １．７５（ＩＨ，ｂｒ） １．７４（３）１．、ｂｒ） ２．０７　（２Ｈ，ｂｒ） ２．１７（ＩＨ，ｄｑ、Ｊ　＝　１４．０Ｈｚ、７．０
ｆｌｚ＞２．２９（ＩＨ，ｂｒ） ２．８４（ＩＨ，ｄ、Ｊ　　＝５．０　Ｈｚ）３．１８
（ＩＨ，ｄ、Ｊ　　＝５．０　Ｈｚ）２．９１（１８，
ｄｄ、Ｊ＝１．５　ｆｉｚ、１２．０　Ｈｚ）３．７５
（３Ｈ，ｓ） ３．７７（３Ｈ，ｓ） ４．４２（ＩＨ，ｂｒｄ、Ｊ　　＝１０．０Ｈｚ）５．
３６（ＩＨ，ｂｒ） ５．８１（ＩＨ，ｄ、Ｊ　　＝１４．０Ｈｚ）６．１８
（ＩＩ、ｓ） ６．４５（ＩＨ，ｄ、Ｊ　　＝１６．５Ｈｚ）７．５９
（２Ｈ，ｄ、Ｊ　　＝８．５　Ｈｚ）７．９４（２Ｈ，
ｄ、Ｊ　　＝８．５１１ｚ）８．４０（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ
＝１．０　Ｈｚ、１６．５’　Ｈｚ）以上本発明の抗生
物質ＭＦ７３０−Ｎ６は、公知のＰＲ−１３５０物質に
近似するものであるが、４個のメチル基及び２個の水酸
基を有する点で明瞭に異なり、新規な化合物であること
が明らかである。

生　　ＭＦ７３０−Ｎ６の生　′・性 （１）抗菌スペクトル 抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６の普通栄養寒天板上での各種
細菌に対する最低発育阻止ン；度は次の第１表に示すと
おりである。

第１表 試験菌　　　　　　最酸罰証献鴛ｇ／−）千サントモナ
ス・オリーセ　　　　　　　　　　　　　　　　ｂ（２
）抗腫瘍活性 抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６のマウス白血病Ｌ１２１０及
びマウスエーリフヒ腹水癌（ＥＡＣ）に対する治療効果
は、第２表に示すとおりである。

第２表 未治療マウスの生存日数 以上は、マウスにＬ−１２１０細胞（Ｉ　Ｘ　１０５個
／−）またはエーリソヒ腹水癌細胞（２Ｘ１０ｈ個／−
）を腹腔に接種した。その直後より連続１０日間腹腔内
投与したところ顕著な延命効果を示した。

（３）　　急性毒性 抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６の急性毒性はマウス腹腔内投
与でＬＤ、。１００■／　ｋｇであった。

以上の抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６は、本願によって開示
される第２の発明に従って有利に製造することができる
。

即ち、抗生物質ＭＦ７３０−８６生産菌を栄養培地に培
養し、培養物から該抗生物質を採取することを特徴とす
る抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６の製造方法を提供するにあ
る。

本発明にいう生産菌とは、抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６を
生産しうる微生物であれば、その属、種を問わないが、
具体的なものとしては放線菌に属する微生物であって、
本発明者が奈良県岩井用うまわたし橋周辺の土壌試料よ
り分離した放線菌で昭和６０年５月２１日付で、通商産
業省工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第８
２４７号として寄託した放線菌？ＩＦ７３Ｏ−Ｎ６を有
利に用いることができる。

その栄養源としては、放線菌の栄養源として通常使用さ
れるもの、例えば炭水化物、窒素源、無機塩などの同化
できる源を使用できる。例えば、ぶどう糖、グリセリン
、麦芽糖、蔗糖、糖蜜、デキストリン、澱粉などの炭水
化物や、大豆油、落花生油などの油脂のごとき炭素源、
ペプトン、肉エキス、綿実粉、大豆粉、酵母エキス、カ
ゼイン、コーン・スチーブリカー、ＮＺ−アミン、硫酸
アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウムな
どの窒素源、燐酸二カリウム、燐酸ナトリウム、食塩、
炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガンなど
の無機塩が使用でき、必要により微量金属例えばコバル
ト、鉄などを添加することができる。栄養源としては、
その他、抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６生産菌が利用して抗
生物質ＭＦ７３０−Ｎ６を生産しうるちのであればいず
れの公知の栄養源でも使用できる。

上記のごとき栄養源の配合割合は特に制約されるもので
なく、広範囲に亘って変えることができ、使用する抗生
物質ＭＦ７３０−Ｎ６生産菌にとって最適の栄養源の組
成及び配合割合は、当業者であれば簡単な小規模実験に
より容易に決定することができる。

また、上記の栄養源からなる栄養培地は、培養に先立ち
殺菌することができ、この殺菌の前又は後で、培地のｐ
Ｈを６〜８の範囲、特にＰＨ６，５〜７．５の範囲に調
節するのが有利である。

かかる栄養培地での抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６生産菌の
培養は、一般の放線菌による抗生物質の製造において通
常使用されている方法に準じて行うことができる。通常
好気的条件下に培養するのが好適であり、通常攪拌しな
がら及び／又は通気しながら行うことができる。また、
培養方法としては静置培養、振盪培養、通気攪拌をとも
なう液内培養のいずれも使用可能であるが、液体培養が
抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６の大量生産に適している。

使用しうる培養温度は抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６生産菌
の発育が実質的に阻害されず、該抗生物質を生産しうる
範囲であれば、特に制限されるものではなく、使用する
生産菌株に応じて適宜選択できるが、特に好ましいのは
２５〜３０℃の範囲内の温度を挙げることができる。

培養は通常抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６が十分に蓄積する
まで継続することができる。その培養時間は培地の組成
や培養温度、使用温度、使用生産菌株等により異なるが
、通常１２〜２４時間の培養で目的の抗生物質を得るこ
とができる。

培養中の抗生物質？ＩＦ７３Ｏ−Ｎ６の蓄積量は肺炎桿
菌ＫＰ　ＰＣＴ　６０６株を使用して、通常の抗生物質
の定量に用いられる円筒平板法により定量することがで
きる。

かくして、培養物中に蓄積された抗生物質ＭＦ７３０−
Ｎ６は、培養後必要により、濾過、遠心分離などのそれ
自体公知の分離方法によって菌体を除去した後、その濾
液上澄液から適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や、吸
着やイオン交換能を利用したクロマトグラフィーを単独
でまたは、組合せて使用することにより単離精製して採
取することができる。ここに用いられる有機溶媒として
は、クロロホルム、酢酸エチル等、抗生物質ＭＦ７３０
−Ｎ６を溶解でき、水に実質的に不溶なものを挙げるこ
とができる。また、吸着やイオン交換能を有するクロマ
トグラフィー担体としては、活性炭、シリカゲル、多孔
性ポリスチレンージビニルヘンゼン樹脂若しくは各種の
イオン交換樹脂を用いることができる。

かくして、前記した特性を有する抗生物資、　ＭＦ７３
０−Ｎ６が得られる。

次の実施例により本発明を更に詳細に説明する。

〔実施例〕

実施例１　抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６の製造寒天斜面培
地に培養した放線菌ＭＦ７３０−Ｎ６株（微工研菌寄第
８２４７号）をブドウ糖１％、酵母エキス１％を含む液
体培地（ｐ）１７．２に調整、５００　Ｒ１容）を三角
フラスコに１１０　！ＲＩずつ分注し常法により１２０
℃、２０分滅菌してこれに接種し、２７℃で４８時間回
転振盪培養（毎分１８０回転）して種母培養液を得た。

この種母培養液１１０−を、１５１の下記の生産培地を
入れた３０１容ジャーファーメンタ−に接種した。２７
℃で毎分１５０回転、通気量毎分１５ｎの条件で３０時
間通気培養を行なった。この培養ｍ′＃Ａ中に消泡剤と
してシリコンＫＭ−７５（信越化学■製、商標）を数滴
添加した。

このジャーファーメンタ−２基分の培養液を濾過助剤を
用いて吸引濾過し、２４Ａの濾液を得た（以後この濾液
１艷の前述の肺炎桿菌ＫＰ　ＰＣＩ６０６株に対する机
面活性をＩＵとして、物質吸支を示す。） この濾液をｐＩ（５，０に調整したのち、１２１のクロ
ロホルムで２回抽出をした（１５，０ＯＯＵ／Ｔ　：抽
出液の総括性）。

抽出液を減圧下で１４に濃縮し、ポウ硝を加えて脱水濾
過後０．５％活性炭を添加することによって脱色した。

活性炭を濾別した後、さらに減圧下で濃縮し、シリカゲ
ルクロマトグラフィー（３、５ｃｖａＸｌｌｃｍ）を用
い、クロロホルム／メタノール（１００／３）にて展開
処理した。活性区分を集める減圧下で濃縮した後、メタ
ノールで置換したダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成■
製、商標）も用いたカラムクロマトグラフィー　（３，
５ｃｍ　Ｘ　ｌ１ｃｍ）にかけ、５０％メタノール水か
ら１００％メタノールまでの直線勾配法で溶出した。活
性区分を集めメタノールを減圧下で濃縮した後、さらに
凍結乾燥し、１ｋ（６，５００Ｕ／Ｔ）の淡黄色粉末を
得た。

次ぎに、この粉末を逆層薄層板を用いる薄層りロマトグ
ラフィーでアセトニトリルノ水（７／３）により展開し
た後、活性区分をかきとりメタノールで抽出して純品３
■（８４０１１／Ｔ）の抗生物質ＭＦ７３０−Ｎ６を得
た。このものは、前述した理化学的性質で特徴づけられ
る。

生童亙上皿底　　　　　　　　　（％）グルコース　　
　　　　０．０８ ガラクトース　　　　０．１６ マルトース　　　　　０．１６ デキストリン　　　　　０．３２ バタトソイトン　　　　０．１６ 硫酸アンモニウム　　０．１６ 消泡剤　　　　　　　１〜２滴 ｐＨ７，２（ＰＲ） １ヱ血礼状 本実施例に用いたＭＦ７３０−Ｎ６菌株（微工研菌寄第
８２４７号）の菌学的性状は以下のとおりである。

上−長煎 ＭＦ７３０−Ｎ６株は、顕微鏡下で分枝した基中菌糸よ
り比較的長い、真直ぐな（Ｒｅｓｔｉｆｌｅｘｉｂｉｌ
ｅｓ）気菌糸を形成し、螺旋形成及び輪生技はみとめら
れない。成熟した胞子鎖は１０個〜２０個以上の胞子の
連鎖をみとめ、胞子の大きさは０．４〜０．６×０．８
〜１．４　ミクロン位で、胞子の表面は平滑である。た
だし、走査型電子顕微鏡で観察すると、胞子表面の“し
わ”が目立ってみられる。

２．１立１におｌる　　　ヒ 色の記載について〔〕内に示す標準は、コンテイナー・
コーポレーション・オブ・アメリカ・のカラー・ハーモ
ニー・マニュアル（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡｍｅｒｉｃａのＣｏｌｏｒｈａｒ
ｍｏｎｙ　ｍａｎｕａｌ）を用いた。

（１１シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）無
色の発育上に、明るい茶灰（３ｄｃ、Ｎａｔｕｒａ１〜
３ｆｅ、５ｉｌｖｅｒ　Ｇｒａｙ　）の気菌糸を着生し
、溶解性色素は認められない。

（２）　　グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃
）うす買薬（２ｅｃ、Ｏａｔｍｅａｌ　）の発育上に、
明るい茶灰（３ｆｅ、５ｉｌｖｅｒ　Ｇｒａｙ　）の気
菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培
地５，２７℃培養） 無色の発育上に明るい茶灰（３ｄｃ、Ｎａｔｕｒａｌ　
）の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（４）スターチ・無機塩寒天培地Ｃｌ５Ｐ−培地４゜２
７℃土合養〕 うす買薬Ｃ２ｇｃ、　Ｂａｍｂｏｏ）の発育上に明るい
茶灰（３ｆｅ、５ｉｌｖｅｒ　Ｇｒａｙ　〜５ｆｅ、Ａ
ｓｈｅｓ　）の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められ
ない。

（５）チロシン寒天培地（ＩＳＩ’−培地７．２７℃培
養〕無色の発育上に明るい茶灰（５ｆｅ、Ａｓｈｅｓ　
）の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（６）栄養寒天培地〔２７℃培養〕 、発育はうす買薬（２ｇｃ、Ｂａｍｂｏｏ）　＋気菌糸
は着生せず、溶解性色素は認められない。

（７）　　イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２．
２７℃培養〕 うす買薬（２ｉｅ、Ｌｔ　Ｍｕｓｔａｒｄ　Ｔａｎ）の
発育上に明るい茶灰（３ｆｅ、５ｉｌｖｅｒ　Ｇｒａｙ
　）の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３．２７℃
培養〕無色の発育上に明るい茶灰（５ｆｅ、Ａｓｈｅｓ
　）の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（９）　　グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）
無色の発育上に明るい茶灰Ｃ３ｄｃ、ＮａｔｕｒａＩ〜
３ｆｅ、５ｉｌｖｅｒ　Ｇｒａｙ　）の気菌糸を着生し
、溶解性色素は認められない。

０１　　スターチ寒天培地（２７℃培養）うす黄（３ｃ
ａ、５ｈｅｌｌ　）の発育上に白色の気菌糸をうつすら
と着生し、溶解性色素は認められない。

ａυ　リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）無色〜うす
黄（２ｃａ、Ｌｔ　Ｉｖｏｒｙ）の発育上に、白色の気
菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素は認められない。

叩　セルロース（ろ紙片添加合成液２７℃培養）発育は
無色、気菌糸は明るい茶仄、溶解性色素は認められない
。

α濁　ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）及びグルコース・ペプ
トン・ゼラチン培地（２７℃培養）では、いずれも発育
は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められない
。

ａ船　脱脂牛乳（３７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。

ユ生ユ煎判亘 （１）　　生育温度範囲 グルコース・アスパラギン寒天培地を用いて、２０℃、
２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各温度で試
験の結果、５０℃を除いて何れの温度でも生育するが、
最適温度は２７℃〜３０℃付近と思われる。

（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、２０
℃培養及びグルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２７
℃培養〕 単純ゼラチン培地の場合は、培養後５日目頃から液化が
始まり、その作用は中等度〜強い方である。

グルコース・ペプトン・ゼラチン培地の場合は、培養後
２日目頃から液化が始まり、その作用は強い方である。

（３）　　スターチの加水分解くスターチ・無機塩寒天
培地及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） いずれも培養後５日目頃から氷解性がみとめられ、その
作用は中等度である。

（４）　　脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３
７℃培養） 培養後２日目頃から凝固が始まり、直ちに完了し、ペプ
トン化が始まる。ペプトン化は培養後１５日回定完了し
た。その作用は強い方である。

（５）　　メラニン様色素の生成（トリプトン・イース
ト・ブロスｌ５Ｐ−培地１：ペプトン・イースト・鉄寒
天ｌ５Ｐ−培地６：チロシン寒天ｌ５Ｐ−培地７何れも
２７℃培養） いずれの培地においても、メラニン様色素の生成は認め
られない。

（６）　　炭素源の利用性（ブリドハム・ゴトリーブ寒
天培地ｒｓｐ−培地９．２７℃培養）Ｄ−グルコース、
Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノースを利用して発育し、
Ｄ−フラクトース、シュクロース、イノシトール、ラム
ノース、Ｄ−マンニトールは利用しない。ラフィノース
はおそらく利用しないと思われる。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天。

２７℃培養） リンゴ酸石灰の溶解は認められない。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ｒｓｐ−培地８．２７℃培養）陰性である。

４、化学昨１！ （１１２，６−ジアミノピメリン酸（２，６−ｄｉ−ａ
ｍｉｎｏｐｉｍｅｌｉｃ　ａｃｉｄ、ＤＡＰ）全菌体及
び細胞壁に、メソ−２，６−ジアミノピメリン酸と、わ
ずかなエルエル−２，６−ジアミノピメリン酸を認める
。

なお、大村らの方法、ジャーナル　オブ　アンチバイオ
ティクス（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ＋３４巻、１６３３頁、１９８１年）により得られ
た気菌糸区分には、主にエルエル−２，６−ジアミノピ
メリン酸、及び少量のメソ−２，６−ジアミノピメリン
酸を認める。又同様の方法により得られた、基中菌糸区
分には、主としてメソ−２゜６−ジアミノピメリン酸を
有し、エルエル型は極く少量である。

（２）？唐 全菌体には、マンノース、ガラクトース、グルコース、
リポースが認められ、細胞壁には、マンノース及びガラ
クトースを認める。なお、両者共に少量の未６１１認の
スポット（呈色）を示した。

（３］　ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）中のＧＣ含量（グ
アニン、シトシン） 紫外部吸収法パイオキミカ　ハイオヒイジカ（Ｓ、ＩＪ
ｌｉｔｚｕｒ；Ｂｉｏｃｈｉｉｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐ
ｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ＋２７２頁、１９７２年）によ
り、ＧＣ含量は７０．８％を示した。

（４１ＬＣＮ−Ａ（リピド・キャラクタリスティック・
ノカルジアーＡ） 薄層クロマトグラフィー法　ジャーナル　オプゼネラル
　マイクロバイオロジー（Ｍｏｒｄａｒｓｋａ、　１１
゜ａｎｄ　Ｍ、Ｍｏｒｄａｒｓｋｉ　　：　Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉ−”’ｇ
ｙ＋７１巻７７頁、　１９７２年）によりＬＣＮ−Ａは
認められない。

（５）　　細胞壁アミノ糖のアシルタイプ内円らの方法
、ジャーナル　オブ　ゼネラルアプライド　マイクロバ
イオロジー（Ｋｉｎｙａ　Ｕｃｈ−ｉｄａ　ａｎｄ　Ｋ
５　Ａｉｄａ　　：　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ
ｒａｌ　Ａｐｐｌｉ−ｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
、２３巻、２４９〜２６０頁、１９７７年）により、ア
セチル型を示す。

（６）　　細胞壁中のグリシン グリシンを認める。

以上の性状を要約すると、？１Ｐ７３０−Ｎ６株の気菌
糸は、螺旋形成及び輪生技ともに認められず、成熟した
胞子鎖は１０個ないし２０個以上の胞子を数える。

胞子の表面は平滑である。種々の培地で無色〜うす買薬
の発育上に、明るい茶灰の気菌糸を豊富に着生し、溶解
性色素は認められない、メラニン様色素は生成せず、蛋
白分解力は強く、スターチの氷解性は中等度である。

ＭＦＴ３０−Ｎ６株の細胞壁中には、メソ及びエルエル
−２，６−ジアミノピメリン酸、グリシン、ガラクトー
スが認められる。なお、気菌糸区分には主としてエルエ
ル−２，６−ジアミノピメリン酸を、基中菌糸区分には
主にメソ−２，６−ジアミノピメリン酸を認める。細胞
壁アミノ糖のアシルタイプは、アセチル型を示し、又、
ＬＣＮ−八を認めない。

ＯＮへ中のＧＣ含量は７０．８％を示す。

以上の点から、ＭＦ７３０−Ｎ６株はりシバリエ等イン
ターナショナル　ジャーナル　オブ　システマチ・７ク
バクテリオロジイ（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｃｒ　ｅｔ　ａ
ｌｊｎｔｅｒ−ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｆ　５ｙｓｔｅ＋ｍ５ｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ）２０巻、４３５頁、　１９７０年）らの提唱する、
細胞壁主要構成成分のタイプＩ〜■型のいずれにも該当
しないことを認めた。

ＭＰ７３０−Ｎ６株は、１９８２年に大村らの設定した
キタサトスポリア（Ｋｉｔａｓａｔｏｓｐｏｒｉａ）属
〔ザ　ジャーナル　オフ゛　アンチバイオティックス（
丁ｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ａｎｔｊｂｉｏｔｉｃｓ
）３５巻、　１０１３頁、１９８２年：日本放ｖＡ蘭研
究会会報Ｎａ４５．　［ｌｉｃ、　、　１９８４年）〕
に近い性状を示している。

特に、この株が液体培養液中に形態的に明らかに異なる
サブマージド・スポアＣ３ｕｂｍｅｒｇｅｄ　５ｐｏｒ
ｅ）を生成することは、キタサトスポリア属に属せしめ
る強い理由となった。

キタサトスポリア属には、既知の４菌種があるが、ＭＦ
７３０−Ｎ６株に最も近似の性状を示すものにキタサト
スポリア・セタエ（Ｋｉｔａｓａｔｏｓｐｏｒｉａ　５
ｅｔａｅ）同上文献及び放線菌の同定実験法、日本放線
菌研究全編、１９８５年、Ｐ２４６）がある。

第３表は、キタサトスポリア・セタルバ　（セタエはセ
タルバの改名）を入手し、実地に比較見当した成績であ
る。

表から明らかなように、ＭＦ７３０−Ｎ６株とキタサト
スポリア・セタエは極めてよく一致した成績を示してい
る。両者の相違点としてあげられるのは、硝酸塩の還元
反応、ＤＮＡ中のＧＣ含量、全菌体の糖（ラムノース及
びリボース）及び生産抗生物質の４点である。硝酸塩の
還元反応については、文献成績を考慮しても、大きな相
違点とは考えられない。またＤＮＡ中のＧＣ含量の相違
は、測定方法にも問題があり、この数字の違いをどの程
度に判断するかは難しいところである。全菌体中の糖成
分ラムノース及びリボースの有無についてはＩＩＦＴ３
０−８６株の方にも、わずかながらラムノースが認めら
れ、又、セタルバにも極く少量のリボースが検出される
。これらのことより、ＭＰ７３０−Ｎ６株とキタサトス
ポリア・セタエ（前記のごとく、セタエはセタルバの改
名）は極めて近縁の種と推定される。ＭＦ７３０−Ｎ６
株をキタサトスポリア・セタエ（Ｋｉｔａｓａｔｏｓｐ
ｏｒｉａｓｅｔａｅ）ＭＦ７３０−Ｎ６と同定した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性質 Ａ）融点 １１５〜１１９℃ Ｂ）溶液を調整直後測定した旋光度 〔α〕＾２＾６＿Ｄ＝−２８．５°（Ｃ＝０．４６、ク
   ロロホルム） Ｃ）溶解性 メタノール、エタノール、酢酸エチル、ベ ンゼン Ｄ）呈色反応 塩化トリフェニルテトラゾリウム反応陽性 アニスアルデヒド−硫酸反応陽性 ヨウ素蒸気陽性 フェーリング試薬陽性 硝酸銀−アンモニア（トーレンス） 試薬陽性 ８％リンモリブデン酸−エタノール陽性 ドラーゲンドルフ試液陰性 塩化第二鉄試液陰性 Ｅ）紫外線吸収スペクトル λ＾Ｃ＾Ｈ＾３＾Ｏ＾Ｎ＿ｍ＿ａ＿ｘ（Ｅ＾１＾％＿１
   ＿ｃ＿ｍ）＝２０３＾ｎ＾ｍ（６０）、２８０＾ｎ＾ｍ
   （３）Ｆ）赤外線吸収スペクトル ＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルは下記の特性
   極大吸収波数を示す。 ３４３０、２９６０、１７０５及び１６３５ｃｍ＾−＾
   １に明瞭な吸収を示す。 Ｇ）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ＿３ＯＤ）δ値１
   ．３５（ｓ）、１．５０〜１．８０（ｍ）．１．７５（
   ｂｒｓ）、１．８０〜２．３０（ｍ）、２．７０〜２．
   ８５（ｍ）、５．３０〜５．４０（ｍ） を有することを特徴とする抗腫瘍活性及び抗菌活性を有
   する抗生物資ＭＦ７３０−Ｎ６。 ２、キタサトスポリア（Ｋｉｔａｓａｔｏｓｐｏｒｉａ
   ）属に属し、特許請求の範囲第１項記載の抗生物質ＭＦ
   ７３０−Ｎ６生産菌を栄養培地に培養し、培養物から該
   抗生物質を採取することを特徴とする抗生物質ＭＦ７３
   ０−Ｎ６の製造方法。