JPH06166684A

JPH06166684A - Ｓ−６３２−ｃ物質

Info

Publication number: JPH06166684A
Application number: JP783292A
Authority: JP
Inventors: Toshio Otani; 敏夫大谷; Kenichiro Yoshida; 健一郎吉田; Mitsuru Nakayama; 充中山; Shohei Nakagawa; 昌平中川; Akira Urakawa; 晃浦川
Original assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1992-01-20
Filing date: 1992-01-20
Publication date: 1994-06-14

Abstract

(57)【要約】【構成】式【化１】で表わされるＳ−６３２−Ｃ物質。【効果】抗真菌作用及び制癌作用を有し、医薬として有
用な新規物質が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規なＳ−６３２−Ｃ
物質に関する。本発明のＳ−６３２−Ｃ物質は、抗真菌
作用及び制癌作用を有しており、医薬として有用であ
る。

【０００２】

【従来の技術】本発明のＳ−６３２−Ｃ物質は、文献未
記載の新規化合物である。

【０００３】本発明物質の製造に用いるストレプトミセ
ス・スピーシーズＳ−６３２株より生産される化合物に
ついての報告が特開平１−２８９４９１号公報に開示さ
れており、その具体的な構造に関してはJ. Antibiotics
42, 654 〜661 （1989) に報告されている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗生
物質等として有用な新規物質を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は式

【０００６】

【化２】

【０００７】で表わされるＳ−６３２−Ｃ物質に係る。

【０００８】本発明のＳ−６３２−Ｃ物質は、次の理化
学的性質を有する。

【０００９】（１）性状：淡黄色油状物質。

【００１０】（２）実験式：Ｃ₁₇Ｈ₂₅ＮＯ₄（高分解能
電子衝撃（ＥＩ）マススペクトル法による）（３）分子量：３０７（電子衝撃（ＥＩ）マススペクト
ル法による）。

【００１１】（４）比旋光度：〔α〕²⁵ _D＝＋３５°
（Ｃ＝０．１７、クロロホルム中）。

【００１２】（５）紫外吸収スペクトル：メタノール溶
液中、λmax (nm)（ε）：２０３（６１４０）、２２０
（４２００sh）、２７０（９４０sh）。チャートを図１
に示す。

【００１３】（６）赤外吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤
法、νmax （cm^-1）：３４２５、３２２０、２９７０、
２９３０、１７１０、１６７０、１６４０sh、１３８
０、１２５５。チャートを図２に示す。

【００１４】（７）核磁気共鳴スペクトル：重クロロホ
ルム中、４００ＭＨｚで測定したチャートを図３に示
す。

【００１５】（８）溶解性：メタノール、エタノール、
クロロホルム、アセトン、酢酸エチル、ジメチルスルホ
キシドに良く溶け、ヘキサン、エーテルにわずかに溶
け、水に不溶である。

【００１６】（９）呈色反応：ヨード蒸気、硫酸、エー
リッヒ、リンモリブデン酸反応に陽性。ニンヒドリン、
トレンス反応に陰性。

【００１７】（１０）塩基性、酸性、中性の区別：弱塩
基性。

【００１８】本発明のＳ−６３２−Ｃ物質は、サッカロ
マイセス（Saccharomyces ）属の酵母類等の真菌類等に
抗菌活性を有する。

【００１９】また、Ｓ−６３２−Ｃ物質は、ヒト鼻咽腔
癌由来の株化培養細胞（ＫＢ細胞）に対する殺細胞作用
をも有する。

【００２０】本発明のＳ−６３２−Ｃ物質は、微生物の
培養により得ることができる。即ち、本物質はＳ−６３
２−Ｃ物質の生産能力を有する菌株（以下、Ｓ−６３２
物質生産菌と称する。）を適当な条件下で培養すること
によって培養液から採取することができる。

【００２１】本物質の製造に用い得るＳ−６３２物質生
産菌には、ストレプトミセス（Streptomyces）属に属す
る菌株が包含される。その一例として、ストレプトミセ
ス・スピーシーズＳ−６３２（Streptomyces species
Ｓ−６３２）株を例示できる。この菌株は、本発明者ら
が中華人民共和国山東省の土壌から新たに分離したスト
レプトミセス属に属する菌株であり、通商産業省工業技
術院微生物工業技術研究所に、微生物の表示「Strain
Ｓ−６３２」、受託番号「微工研条寄第１８４９号（Ｆ
ＥＲＭＢＰ−１８４９）」として寄託されている。

【００２２】その菌学的性質は、次の通りである。

【００２３】（ａ）形態胞子形成菌糸の分枝法：単純分枝。

【００２４】胞子形成の形態：螺旋状（spirals ）（胞
子の形は円筒状）。

【００２５】胞子の数：１０〜５０胞子又はそれ以上。

【００２６】胞子の表面構造：著しいしわ状（rugos
e）、輪郭はこぶ状（warty ）、一部平滑（smooth）。

【００２７】胞子の大きさ：０．８〜１．０×１．１〜
１．２μｍ（ただし個々の胞子形が不明瞭のものが多
い）。

【００２８】鞭毛胞子の有無：無。

【００２９】胞子のうの有無：無。

【００３０】胞子柄の着生位置：気菌糸。

【００３１】菌核形成性の有無：無。

【００３２】（ｂ）各種培地における生育状態各種培地における生育状態は第１表に示す通りである。
観察法はＩＳＰの方法便覧に従い、分類色名は「色の標
準」（日本色彩研究所）で示した。なお、詳細な色は
「カラー・ハーモニイ・マニュアル」の色コードで
（）内につけ加えた。

【００３３】

【表１】

【００３４】

【表２】

【００３５】（ｃ）生理的性質生育温度範囲：２７〜３０℃の温度範囲で良好に生育す
る。

【００３６】ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・
ゼラチン培地、２７℃）：陽性（弱い）。

【００３７】同（単純ゼラチン培地、２０℃）：陰性。

【００３８】ミルクの凝固（３７℃）：陽性。

【００３９】ミルクのペプトン化（３７℃）：陽性。

【００４０】メラニン様色素の生成：チロシン寒天（Ｉ
ＳＰ−７）培地上、ペプトン・酵母エキス・鉄寒天（Ｉ
ＳＰ−６）培地上およびトリプトン・酵母エキス（ＩＳ
Ｐ−１）液体培地中で陰性。

【００４１】硫化水素の産生（ペプトン・酵母エキス・
鉄寒天（ＩＳＰ−６）に０．５％酵母エキスを添加した
培地）：陽性。

【００４２】デンプンの加水分解（スターチ・無機塩寒
天、ＩＳＰ−４培地）：陽性。

【００４３】硝酸塩の還元（１％硝酸カリウム含有ブイ
ヨン、ＩＳＰ−８培地）：陽性。

【００４４】セルロースの分解：陰性。

【００４５】（ｄ）炭素源の利用性（プリードハム・ゴ
トリーブ寒天、ＩＳＰ−９培地）Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクトー
ス、シュークロース、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、
イノシトール、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ガラクトース、
溶性デンプン、デキストリン、グリセロールおよびマル
トースを利用してよく発育し、Ｄ−グルコース、サリシ
ンを利用する。炭素源無添加の培地上でもわずかな生育
が認められる。

【００４６】（ｅ）菌体組成ベッカー（Becker）らの方法〔アプライド・ミクロバイ
オロジー（Appl. Microbiol.）１２，４２１〜４２３
（１９６４）〕により分析した結果、ＬＬ型のジアミノ
ピメリン酸が検出された。

【００４７】以上の菌学的性質、特に本菌株が基生菌糸
より多数の胞子の連鎖を有する気菌糸を形成し、細胞壁
組成のアミノ酸がＬＬ−ジアミノピメリン酸であり、鞭
毛胞子や胞子のうを形成しない性質を有することから、
ストレプトミセス属に属する菌株であることが明らかで
ある。

【００４８】よって本菌株を、ストレプトミセス・スピ
ーシーズＳ−６３２（Streptomycesspecies Ｓ−６３
２）と称することとした。

【００４９】本発明のＳ−６３２−Ｃ物質は、例えば上
記Ｓ−６３２株又はその変異株等のストレプトミセス属
に属する各種のＳ−６３２物質生産菌を適当な培地で培
養することにより製造できる。

【００５０】上記微生物の培養は、原則的に一般微生物
の培養に準じるものであり、通常液体培養による振盪培
養法、通気撹拌培養法等の好気的条件下で行なわれるの
が好適である。

【００５１】培養に用いられる培地としては、Ｓ−６３
２物質生産菌が利用できる栄養源を含有する培地であれ
ばよく、各種の合成培地、半合成培地、天然培地等をい
ずれも用いることができる。培地組成としては炭素源と
してのグルコース、シュークロース、フラクトース、グ
リセリン、デキストリン、澱粉、糖蜜、コーン・スティ
ープ・リカー、有機酸等を単独又は組合せて用い得る。
窒素源としてはファーマメディア、ペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、尿素等
の有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等の
無機窒素源を単独又は組合せて用い得る。また培地に
は、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、リン
酸塩、その他の重金属塩等も必要に応じて適宜添加使用
され得る。

【００５２】尚、培養中発泡の著しい時は、例えば大豆
油、亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール、テトラデ
カノール、ヘプタデカノール等の高級アルコール類、各
種シリコン化合物等の消泡剤を適宜培地中に添加するこ
ともできる。

【００５３】培地のｐＨは、やや酸性ないし中性付近と
するのが好ましい。培養温度は、Ｓ−６３２物質生産菌
が良好に生育する温度、通常約２０〜３７℃、特に好ま
しくは約２７〜３０℃付近に保つのがよい。培養時間
は、液体振盪培養及び通気撹拌培養のいずれの場合も、
一般に３〜８日間程度とされる。上記培養によって目的
とするＳ−６３２−Ｃ物質が生成蓄積される。勿論上述
した各種の培養条件は、使用微生物の種類や特性、外部
条件等に応じて適宜変更でき、またそれぞれに応じて上
記範囲から最適条件を選択、調節できる。

【００５４】この培養により生産された抗生物質等とし
て有用なＳ−６３２−Ｃ物質を単離するには発酵生産物
を採取する一般的な方法に準じて行なうことができる。
例えば溶媒抽出、液体交換、あるいは結晶化等の各種手
段を単独または任意の順序に組合せて用いることができ
る。

【００５５】より詳しくは、上記培養により生産される
Ｓ−６３２−Ｃ物質は主として培養液体（濾液）中に存
在するので、常法に従いまず濾過、遠心分離等を行なっ
て、培養濾液と菌体固形分とを分離し、得られたＳ−６
３２−Ｃ物質を含む培養濾液については、水と混合しな
い酢酸エチル、クロロホルム、ブタノール等の溶媒を用
いてＳ−６３２−Ｃ物質を有機溶媒層に転溶させ、得ら
れた溶媒層に芒硝を加え、脱水後、溶媒を減圧下で留去
すればＳ−６３２−Ｃ物質を含む粗抽出物を得ることが
できる。必要があれば、塩酸又は硫酸にてｐＨを調節し
たり、又工業用食塩等を加えることにより抽出効率を高
くしたり、エマルジョン防止などの方法を講じることが
できる。

【００５６】更に精製するためには通常の脂溶性低分子
物質の精製手段を適用できる。すなわちシリカゲル、ア
ルミナ、マクロポーラス非イオン系吸着樹脂等の吸着剤
による種々の吸着クロマトグラフィー、およびＯＤＳ−
結合型シリカゲル等を用いる逆相クロマトグラフィーが
使用できる。これらのうち、溶出溶媒にクロロホルム／
アセトン、酢酸エチル／ベンゼン、ベンゼン／アセトン
等の混合溶媒系を用いるシリカゲルクロマトグラフィー
およびアセトニトリル／水、メタノール／水等の混合溶
媒系を溶出に用いる逆相クロマトグラフィーが最も有効
に利用できる。

【００５７】また、更に精製を必要とする場合には上記
クロマトグラフィーをくり返し行なうか又は溶出溶媒に
メタノールを用いたセファデックスＬＨ−２０（ファル
マシア社製）によるゲル濾過クロマトグラフィーなどを
適宜組みあわせて行なうことにより、高純度のＳ−６３
２−Ｃ物質を単離、精製することができる。

【００５８】

【実施例】次に実施例を挙げて更に詳細に説明する。

【００５９】なお、精製工程中の有効物質の確認は、Ｓ
−６３２−Ｃ物質により増殖抑制作用のみられる微生
物、例えばサッカロマイセスセレビジェＩＦＯ０
３０４（Saccharomyces cerevisiae ＩＦＯ０３０
４）を用いるバイオアッセイ法と、薄層クロマトグラフ
ィーまたはペーパークロマトグラフィーで展開させた
後、上記検定菌によるバイオオートグラフィーで検出す
る方法やヨード蒸気で発色して検出する方法を併用する
のが良い。

【００６０】又、ヒト鼻咽腔癌由来の株化培養細胞（Ｋ
Ｂ細胞）に対する殺細胞効果を調べることにより、有効
画分を確認することができる。

【００６１】

【実施例１】Ｓ−６３２−Ｃ物質の製造グルコース０．１％、グリセロール４．０％、ポテトス
ターチ０．２％、大豆粉２．０％、ペプトン０．５％、
乾燥酵母０．５％、塩化ナトリウム０．５％、炭酸カル
シウム０．２％よりなる培地（ｐＨ７．０）１００ｍｌ
を５００ｍｌの坂口振盪フラスコに分注し、滅菌後、ス
トレプトミセス・スピーシーズＳ−６３２株（微工研条
寄第１８４９号）を一白金耳量接種し、３０℃で３日間
往復振盪培養した（毎分１４０回、振幅７cm）。次に、
グリセロール３．０％、グルコース０．２％、ポテトス
ターチ０．２％、ペプトン０．３％、乾燥酵母０．５
％、塩化ナトリウム０．３％よりなる培地（ｐＨ６．
４）を５００ｍｌの三角フラスコに１００ｍｌずつ分注
し、滅菌後、上記の種菌を５％の割合で加え、３０℃、
９日間回転振盪培養した（毎分１８０回転、振幅７c
m）。培養終了後、培養液（１０Ｌ、ｐＨ７．８）を採
取し、遠心、濾過後、希水酸化ナトリウム溶液でｐＨ
７．６に調整し、酢酸エチル（２Ｌ）で２回撹拌抽出し
た。この酢酸エチル抽出画分を水で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥後、減圧濃縮して黄褐色の油状物質
（３．８ｇ）を得た。この油状物質をクロロホルム／ア
セトン（４：１）約１０ｍｌに溶解し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（メルク社製「キーゼルゲル」、
３．４×４４cm）に吸着させ、クロロホルム／アセトン
（４：１）で溶出、続いてクロロホルム／アセトン
（１：１）で溶出した。溶出フラクションのサッカロマ
イセス・セレビジェＩＦＯ０３０４を用いるバイオ
アッセイ法により、Ｓ−６３２−Ｃ物質を含む活性画分
を集め、溶媒を留去後乾固して、淡黄色油状物質４７６
ｍｇを得た。

【００６２】得られた油状物質をメタノールに溶解し、
その一部をＯＤＳ結合型シリカゲルカラム（野村化学社
製「ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ」、７．８×２５０m
m）に吸着させ、溶出溶媒としてメタノール／水（１：
１）を用い、流速１．０ｍｌ／分で溶出した。溶出フラ
クションをバイオアッセイ法により検出し、Ｓ−６３２
−Ｃ物質を含む活性画分を集め、有機溶媒を減圧留去し
た後、水溶液を凍結乾燥した。この操作を３回繰り返し
行ない、淡黄色油状物質１０ｍｇのＳ−６３２−Ｃを得
た。この高速液体クロマトグラフ装置にて本発明のＳ−
６３２−Ｃ物質をＵＶ２１０ｎｍで検出した場合は保持
時間約９１〜９２分のピークとして検出される。

【００６３】得られたＳ−６３２−Ｃ物質の系列寒天平
板希釈法によるサブロー（Sabouraud ）寒天培地での真
菌類（細胞数１０⁶個／ｍｌ）に対する最小発育阻止濃
度（ＭＩＣ）は第２表の通りである。３０℃、４８時間
培養後の判定の結果、Ｓ−６３２−Ｃ物質は、サッカロ
マイセス（Saccharomyces ）属の酵母類に活性を示し
た。

【００６４】また、Ｓ−６３２−Ｃ物質のヒト鼻咽腔癌
由来の株化培養細胞（ＫＢ細胞）に対する５０％増殖抑
制濃度（ＩＣ₅₀）は０．２μｇ／ｍｌであった。

【００６５】

【表３】

【００６６】

【実施例２】実施例１に示したのと同様の方法によって
得られたＳ−６３２−Ｃ物質を含有する酢酸エチル抽出
物４．６ｇを約１０ｍｌのベンゼン／アセトン（９：
１）に溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー
（３．５×４０cm）に吸着させ、ベンゼン／アセトン
（９：１）で溶出、続いてベンゼン／アセトン（１：
１）で溶出した。サッカロマイセス・セルビジェに対
し、活性を示す画分を前述の高速液体クロマトグラフィ
ー分析条件で検出し、単一ピークを示す画分を集め、溶
媒を留去後、乾固して淡黄色油状物質１８０ｍｇを得
た。

【００６７】得られた油状物質をｎ−ヘキサン／アセト
ン（３：２）を展開溶媒とするシリカゲル薄層クロマト
グラフィー（メルク社製「シリカゲル６０」、２０×２
０ｃｍ）を３回繰り返して行い、移動度（Ｒｆ値）約
０．４５を示す活性画分を分取し、酢酸エチルで活性画
分を溶出し、濃縮後、Ｓ−６３２−Ｃ物質を得た。この
分取シリカゲル薄層クロマトグラフィーを２回繰り返し
行うことによりＳ−６３２−Ｃ物質を４２ｍｇ得た。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明物質の紫外吸収スペクトルである。

【図２】本発明物質の赤外吸収スペクトルである。

【図３】本発明物質の核磁気共鳴スペクトルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式【化１】で表わされるＳ−６３２−Ｃ物質。