JPH10310584A

JPH10310584A - 抗真菌化合物

Info

Publication number: JPH10310584A
Application number: JP9119074A
Authority: JP
Inventors: Takako Sugawara; 孝子菅原; Ahou Kiyou; 亜芳喬; Yoshie Kaneda; 佳枝金田; Tsutomu Ando; 勉安藤; Takashi Adachi; 孝安達
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1997-05-09
Filing date: 1997-05-09
Publication date: 1998-11-24

Abstract

(57)【要約】【課題】抗真菌作用を有する新規な生理活性物質を提供
すること。【解決手段】式【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明が属する技術分野】本発明は、抗真菌作用を有す
る新規化合物に関する。

【０００２】

【従来の技術】１９５０年以降の抗生物質に関する研究
開発の進歩により、細菌性の感染症はそのほとんどが駆
逐されるに至っている。その一方、平素は無害な弱病原
性微生物による日和見感染症が大きな問題となってお
り、真菌症がその多くを占めている。現在、抗真菌性化
合物として、アムホテリシンＢ、ナイスタチンなどのポ
リエン系抗生物質、またはフルコナゾール、ケトコナゾ
ールなどのアゾール系抗生物質などの化合物が開発され
ており、真菌症における臨床治療の中心となっている。
しかし、ポリエン系抗生物質は広い抗菌スペクトルを有
するが毒性が強く、アゾール系抗生物質は毒性は弱いも
のの、糸状菌に対する作用が十分ではなく、耐性菌の出
現も問題となっている。このため、抗真菌作用を有する
より有用な化合物の開発が望まれている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗真
菌作用を有する新規な生理活性物質を提供することにあ
る。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗真菌作
用を有する新規物質を土壌や植物由来の分離菌から得る
べく探索研究を重ねた結果、ある種の微生物がカンジダ
に対して抗真菌作用を有する新規な生理活性物質を生産
することを見い出し、本発明を完成するに至った。

【０００５】すなわち、本発明は、式

【０００６】

【化２】

【０００７】で表される化合物（以下、これをＡＦＡ０
５２０と略称する）である。

【０００８】また、本発明はＡＦＡ０５２０をからなる
医薬、及びＡＦＡ０５２０からなる抗真菌剤である。

【０００９】本発明の新規生理活性物質ＡＦＡ０５２０
を生産する菌株は、本発明者らが自然界から新たに分離
した菌株であり、微生物の名称Streptomyces sp. TA-03
64」及び微生物寄託番号「FERM P−16190」として工業
技術院生命工学工業技術研究所に寄託されている。

【００１０】

【発明の実施の形態】この菌株の菌学的性状を以下に示
す。

【００１１】Ａ．形態的性質基生菌糸はよく生育し分岐しているが、分断は見られな
い。気菌糸の形成及び胞子の形成は、イースト・麦芽寒
天培地及びオートミール寒天培地で良好である。寒天培
地中の胞子形成は認められない。気菌糸より単純分岐し
た波状または３〜５巻きの緩い螺旋状の分節胞子の連鎖
（２０〜４０胞子）を形成する。胞子の形はほぼ球形で
直径が０．９〜１．３μｍ、表面はややしわ状である。
また、胞子嚢や菌核の形成及び鞭毛胞子は観察されな
い。Ｂ．培養的性質各種培地上で、２８℃、１４日間培養した場合の肉眼的
観察結果を次の表１に示した。なお色の表示は日本規格
協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の系統色名を引用し
た。

【００１２】

【表１】

【００１３】Ｃ．生理学的性質生育温度試験は１週間、炭素源の資化性試験は２週間、
その他は３週間培養後に観察した。

【００１４】生育温度範囲：１６〜３８℃、最適生育温度：３０〜
３６℃ ゼラチンの液化：陰性脱脂乳の凝固：陰性脱脂乳のペプトン化：陽性メラニン様色素の生産：陰性でんぷんの加水分解：陽性炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地上）Ｌ−アラビノース： − Ｌ−ラムロース： − Ｄ−キシロース： ± ラフィノース： − Ｄ−グルコース：＋イノシトール： − Ｄ−フラクトース： − Ｄ−マンニトール： − シュクロース： − Ｄ．化学分類学的性質ジアミノピメリン酸の有無と光学異性型：ＬＬ型のジ
アミノピメリン酸が検出された。メナキノン：ＭＫ−９（Ｈ₈) が主成分として検出さ
れた。またＭＫ−９（Ｈ₆）もわずかに検出された。

【００１５】以上の性状から、ＴＡ−０３６４株は Str
eptomyces 属の放線菌に分類することができるので、本
菌株を Streptomyces sp. TA-0364と命名した。ＡＦＡ
０５２０の生産は大略一般の発酵生産物を生産する場合
に準じ、各種の栄養物を含む培地で Streptomyces sp.
TA-0364 株を好気的条件下で培養することにより行う。

【００１６】培地は主として液体培地を用い、炭素源、
窒素源、無機塩よりなり、必要に応じてビタミン類、先
駆物質及び消泡剤を加えることができ、ｐＨは７前後に
調整する。炭素源としては、例えばグルコース、シュク
ロース、デキストリン、グリセリン、澱粉などを単独か
または混合して用いる。窒素源としては、例えば肉エキ
ス、オートミール、酵母エキス、大豆粉、ポリペプト
ン、コーン・スティープ・リカー、尿素、アンモニウム
塩などを単独または混合して用いる。無機塩としては、
例えばリン酸一カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナト
リウム、炭酸カルシウムなどを単独かまたは混合して用
いる。消泡剤としてはアデカノール、シリコン化合物な
どを用いることができる。

【００１７】培養方法は振盪培養、通気撹拌培養などの
好気的培養が適しており、ｐＨ４〜１０、２５〜３５℃
で２〜５日間、望ましくはｐＨ６〜７、２５〜２８℃で
４日間培養する。

【００１８】この培養により生産されたＡＦＡ０５２０
を単離するには、発酵生産物を採取する一般的な方法に
準じて行えばよい。例えば次の方法が効果的である。す
なわち、培養終了後、遠心分離または濾過により培養濾
液を得、ダイヤイオンＨＰー２０（商品名、三菱化成社
製）などのポリスチレン樹脂に吸着させた後、低級アル
コール、アセトンなどの有機溶媒で溶出させる。菌体は
低級アルコール、アセトンなどの有機溶媒で抽出する。
この菌体抽出液及び吸着樹脂からの溶出液を併せて減圧
濃縮し有機溶媒を除去した後、酢酸エチル、クロロホル
ム、ｎーブタノールなどの非水溶性有機溶媒に転溶し、
これを濃縮してシロップ状とする。このシロップを再度
ベンゼン、酢酸エチル、アセトン、メタノール、クロロ
ホルムなどの有機溶媒に溶解し、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィー、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー及
び逆相分配用ＯＤＳを充填したカラムクロマトグラフィ
ー及び高速液体クロマトグラフィーに付すことにより本
発明化合物を精製単離することができる。

【００１９】以上の精製法によって得られたＡＦＡ０５
２０はその分子量、紫外線吸収スペクトル、¹Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトル、¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル等の解析によ
り、化２のようにその構造が決定された。

【００２０】ＡＦＡ０５２０の理化学的性質を以下に示
す。

【００２１】（１）外観：白色粉末（２）融点：172〜182 ℃（分解）（３）分子量：512 （４）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₄₀Ｎ₂Ｏ_６（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２２＋４４．９^ｏ（ｃ．
０．２，メタノール) （６）質量分析値：ＦＡＢＭＳ（Pos.) m/z 535(M+Na)⁺ ＦＡＢＭＳ（Neg.) m/z 511(M-H)^- （７）高分解能ＦＡＢマススペクトル：実測値：589.2138 理論値：589.2081（Ｃ₂₉Ｈ₃₉Ｎ₂Ｏ₆Ｋ₂として計算）（８）紫外線吸収スペクトル： λ_max ^MeOHｎｍ（ε）：204(13700), 230(sh)(10800), 3
16(4800) λ_max ^MeOH-HClｎｍ（ε）：219(13800), 322(6900)
λ_max ^MeOH-NaOHｎｍ（ε）：203(29300), 230(sh)(1180
0), 215(5400) （９）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠中で測定したス
ペクトルを図１に示す。

【００２２】（１０）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重メタ
ノール中、５００ＭＨｚで測定したスペクトルを図２に
示す。

【００２３】（１１）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重メタ
ノール中、１２５ＭＨｚで測定したスペクトルを図３に
示す。

【００２４】（１２）溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシド、ピリジン、メタノールに可溶クロロホルム、アセトンに難溶水、ヘキサンに不溶（１３）呈色反応：陽性：ヨード、硫酸陰性：ニンヒドリン、アンスロン硫酸（１４）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性

【００２５】

【発明の効果】本発明の化合物は表２に示すように強い
抗真菌作用を示し、抗真菌剤として有用である。

【００２６】

【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
具体的に説明する。

【００２７】実施例１００ｍｌ当りオートミール２ｇ、グルコース２ｇ、
肉エキス０．３ｇ、塩化ナトリウム０．３ｇ、塩化マ
ンガン（４水和物）０．０４ｇ、硫酸第二鉄（水和物）
０．０４ｇ及び炭酸カルシウム０．３ｇを含む無菌
液体培地にStreptomyces sp. TA-0364 株を接種し，２
８℃，９６時間振盪培養した。次に種培地と同じ組成の
無菌培地を内容量５Ｌの培養槽４基に３Ｌずつを入れ、
それぞれ５０ｍｌの前記種培養液を接種し、２８℃、１
２０時間通気撹拌培養した。

【００２８】培養終了後、上記培養液１２Ｌを遠心分離
し、得られた菌体をアセトン１Ｌで２回抽出した。アセ
トンを留去後残査に適量の水を加え、５００ｍｌの酢酸
エチルで２回分配し、酢酸エチル画分を無水硫酸ナトリ
ウムで脱水後濃縮して濃縮物３２ｇを得た。

【００２９】前項の濃縮物２８ｇをヘキサンで抽出して
オイル成分を除いた後、残査２５．７ｇをメタノール３
０ｍｌに溶解し、メタノール／水（１：１）で調製した
ＯＤＳ（商品名、和光純薬）を充填した１Ｌのカラムに
付し、５０％、６０％と８０％メタノール（ｐＨ７．０
リン酸バッファー）溶液で溶出した。活性物質を含む６
０％と８０％メタノール溶出画分をあわせ、溶媒を留去
した後、水層をｎ−ブタノール１５０ｍｌで抽出し、茶
色粉末状物質１．５９ｇを得た。

【００３０】前項の物質１６０ｍｇをメタノール１．６
ｍｌに溶解し、以下の条件で行った高速液体カラムクロ
マトグラフィーにより分取を行った。

【００３１】カラムサイズ：１０¢×１５０ｍｍ担体：ＹＭＣーＯＤＳ、ＡＭ−３２２−３（ＹＭＣ社
製）溶媒組成：３５％アセトニトリル（ｐＨ７．０リン酸バ
ッファー）流速：２．３ｍｌ／ｍｉｎ温度：５０℃ 検出波長：２２０ｎｍ装置：ウオーターズ社製６００Ｅ保持時間１１．４分の画分を集め、アセトニトリルを留
去してｎ−ブタノールで抽出し、メタノールで調製した
セファデックスＬＨ−２０カラム（商品名、ファルマシ
ア社製）で脱塩し、メタノールを留去して１０．２ｍｇ
のＡＦＡ０５２０を得た。

【００３２】試験例抗真菌作用（試験方法）ＡＦＡ０５２０の各種酵母、糸状菌に対す
る最小発育阻止濃度（ＭＩＣ，単位μｇ／ｍｌ）を微量
液体希釈法により測定した。酵母類に対してはイースト
ナイトロジェンベース（ＹＮＢ，ディフコ社製）＋１
％グルコース培地を用い、２ｘ１０⁴分生子／ｍｌとな
るように菌を接種した。３７℃、１８時間培養を行い、
菌の発育が肉眼的に認められない最小濃度をＭＩＣとし
た。糸状菌に対してはサブローデキストロースブロス培
地（ディフコ社製）を用い、接種菌量２ｘ１０³分生子
／ｍｌに調製した。アスペルギルスは２８℃、７２時間
培養、トリコフィトンは１２０時間培養し、最小発育阻
止濃度（ＭＩＣ）を求めた。

【００３３】（結果）結果を表２に示す。

【００３４】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＫＢｒ法にて測定したＡＦＡ０５２０の赤外線
吸収スペクトルを示す。

【図２】重メタノール中、５００ＭＨｚで測定したＡＦ
Ａ０５２０の¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

【図３】重メタノール中、１２５ＭＨｚで測定したＡＦ
Ａ０５２０の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者安藤勉東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内 (72)発明者安達孝東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式【化１】で表される化合物。
【請求項２】請求項１記載の化合物からなる医薬。
【請求項３】請求項１記載の化合物からなる抗真菌剤。