JPS63170392A - Ｓｃｍ−１２７物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、医薬、殊に　　　　゛抗真菌剤として有用な
ＳＣＭ−１２７物質および発酵法による該物質の製造法
に関する。

（発明が解決しようとする問題点、解決するための手段
） 本発明のＳＣＭ−１２７物質は、つぎの理化学的性状を
有する化学物質である。

（ｉ）融点＝１５３〜１５８°Ｃ （！１）光外部吸収スペクトル：第１図１ｉｉ１水素核
磁気共鳴スペクトル：第２図（ＩＶ）炭素−１３核磁気
共鳴スペクトル：第３図（Ｖ）　分子ｆｉ　：　５１３
　　（ＦＡＢマススペクトルによる）位；元素分析値（
ＣｚｓＨｌｏＮＯｇＰＮａ　＊　２　Ｈ２Ｏとして）Ｃ
ＨＮＰ 理論値（曽　　５２．５３　７．５８　２．４５　５．
４２実測値（曽　　５２．１３　７．２６　２．５０　
５．１４＆ｉＤ紫外部吸収スペクトル：第４図 へ＞”１ン、酢酸エチルに難溶 改）薄層クロマトグラフィーでのＲｆ値：Ｒｆ値　　展
開溶媒 ０．３８　　　　アセトニトリル−水混液（混合比５：
２）０．３１　　　　ｎ−プロパノ−ルー水混液（、，
３：１）（但し、シリカゲル６０Ｆ２．（メルク社製）
薄層クロマトグラフィープレートを使用し。

ＵＶ　２５４　ｎｍで検出した。） （発明の効果） ＳＣＭ−１２７物質は、各種真菌に対し抗菌活性を示す
と共に、各種腫瘍細胞に対し、増殖阻止活性を示す。つ
ぎにこれらの活性を測定方法と共に示す。

（ｉ）　　抗菌作用 実験方法 ＳＣＭ−１２７物質にメタノールを加え各種濃度（ｍｃ
ｉ／ｍｔ）の溶液を作る。８ｍｍ径の抗菌活性測定用の
薄手のペーパーディスク（東洋製作新製）にこの溶液を
しみ込ませ、余分な液を除いたのち、各種被検菌にてペ
ーパーディスク・アッセイを行なった。被検菌は２７℃
で培養を行ない生じる生育阻止円径（ｍｍ　）を測定っ
結果二　表−１ 検定培地：　サブロー寒天培地使用 （製造法） Ｓ０Ｍ７１２７物質は、ストレプトミセス属に属するＳ
ＣＭ−１２７物質生産菌を培養し、培養物からＳＣＭ−
１２７物質を採取することにより製造することができる
。

この製造法で使用するＳＣＭ−１２７物質生産菌の一例
としては、茨城県勝山市の山林土壌より分離したストレ
プトミセス・バイグロスコピカスＱサブ・スピーシズ・
ルテオラス・サブｅスピーシズｅノブ（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｅｕｓ　ｓｂ、ｓｐ
。

１ｕｔｅｏｌｕｓ　ｓｂ、ｓｐ、ｎｏｖ、）　（微工研
歯寄第８８２２号）を挙げることができる。この菌株の
菌学的性状を以下に記す。

１）形態 当該株は、顕微鏡下で、樹枝状圧分枝した基土菌糸上に
、複雑に枝分れした気菌糸を生じる。気菌糸の先端は螺
旋状を呈し、成熟した胞子鎖には、１０個以上の胞子の
連鎖が観察され、胞子の大きさは、０．６〜ｏ、ｓ　ｘ
　ｏ、ｓ〜１，５μｍ位でその表面は平滑である。胞子
のう、運動性胞子１輪生糸、菌核形成は認められない。

２）各種培地での生育状態 各種寒天培地での性状は以下に示すとおりである。特に
記載しない限り、２８°Ｃで、２１日間培養し、常法に
従って観察したものである。

色調の記載については９色の標準（日本色彩研究所）に
よった。

（注）Ｇ；生育状態及び集落表面の菌叢色Ａ；気菌糸の
着生及びその色相 Ｒ；裏面の色相 Ｓ；可溶性色素 以上の培地のうち、イースト麦芽寒天培地（■５ｐ−２
）、オートミール寒天培地（ＩＳＰ−３）。

およびベネット寒天培地において、培養２週〜３週以降
にハイグロスコピックな様相を呈す。

３、生理的性側 （注）生育温度は各温度（５，１０，１５，２０，２８
，３０，３３゜３７、４０．４５．５００Ｃ）で、７−
２１日の観察結果。

ミルクに対する作用は３７℃で３〜２１日までの観察結
果、それ以外は特に指摘のない限り。

２８℃で２週間後の観察結果を示す。

４、炭素源の資化性 （プリドハム・ゴドリープ寒天培地、２８°Ｃ培養）５
、　ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）の分析Ｌｒ：ｃ）Ｉ
ｖ＋ｕ、ｒｔｎらの方法（ＬｚｃｕｖＡ２５Ｉｇｍ、　
ＭＰ、ｅｔ　ａｌ　；ＰＰ　２７７−２３８　ｉｎ　Ｄ
ＩＥＴＺ、　Ａｅｔａｌ　ｅｄ、、　Ａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃｅｔｅ　Ｔａｘｏｎｏｍｙ。

Ｓ　ＩＭ　５ｐｅｃｉａｌ　ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　
４６．１９８０　）に従い１本菌株の酸加水分解物の分
析を行なった結果ＬＬ　−ＤＡＰが検出された。

以上の結果より本菌株の性状をまとめると。

各種培地で良好な発育を示し、裏面の色相はうす黄〜５
す黄茶で、気菌糸は灰白〜黄味灰〜暗℃・茶入を呈し、
培養後期に、ノ・イグロスコピツクな様相を呈す。可溶
性色素の生成は認められなし・。気菌糸の先端に螺旋形
成が認められるが輪生糸、胞子の５などの特殊な形態は
認められない。

以上の結果から本菌株がストレプトミセス属に属する菌
種である事は明らかである。バーシーズ・マニュアル・
オプ・デターミネーティプ。

バクテリオロジー第８版、　７４８−８２９頁、　１９
７４年。

および各種の文献より９本菌株て類似な既知菌種を検索
した結果１本菌株は、ストレプトミセス・バイグロスコ
ピカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏ
ｐｉｃｕｓ　）グループに属する菌種であると判断され
る。

ＴＲＥＳＮＥＲ，ＨＤ　＆　Ｅ、Ｊ、ＢＵＣＫＵＳ、　
Ａｐｐ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　４（５１，２４３
−２５０，（ｉ９５６）πよれば、ストレプトミセス・
バイグロスコピカス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　、
ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　）グループの菌の一般的
特徴は、（ｉ）胞子を着生した気菌糸のマス・カラーが
茶入で、（２）胞子を着生した気菌糸が特徴的な螺旋状
を呈し、（３）ある種の寒天培地でハイグロスコピック
な様相を呈する事があげられる。このグループに属する
菌株は、非常に多く報告されており、ディーラ（ＤＩＥ
ＴＺ　）もほこのグループの菌を胞子の表面構造と形状
πより２グループに分ける事を提案している。

（ＤＩＥＴＺ、Ａ、ｅｔａｌ、、ｐｐ　１８３　　１８
９　　ｉｎ　ＡＲＡＩ、Ｔ　ｅｄ、。

Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、　Ｔｈｅ　Ｂｏｕｎｄａ
ｒｙ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ、　Ｔｏｐｐａｎ
　Ｃｏ、Ｌｔｄ、。

１９７６　）。この分類法によると１本菌株は１．胞子
の表面が平滑でだ円形であることより、グループ■、す
なわちストレプトミセス・ネオバイグロスコピカス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｎｅｏｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉ
ｃｕｓ　）グループに属する事になる。このグループの
菌種のうち２本菌株と最も類似性の高い既知菌種は、ス
トレプトミセス・バイグロスコピカス・サブ・エスピー
嗜グレボーサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒ
ｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　ｓｂ、ｓｐ。

ｇ’１ｅｂｏｓｕｓ　）があげられる（　ＯＨＭＯＲＩ
、　Ｔ　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ。

Ａｎｔｉｂｉｏ２５、　１５　（ｉ１，２１２７，１９
６２）。この菌種の各種培地での生育状態、糖の利用性
、塩化ナトＩＪ　ラム耐性、スターチの加水分解能、硝
酸塩の還元性、チロシナーゼ活性、ミルクに対する作用
などは前述の本菌株の性質とほぼ同一であるが、（・く
つかの培地（サペノク寒天、グリセロールサペック寒天
、普通寒天）で５す茶の可溶性色素を生産する点とスト
レプトマイシン系の抗生物質（グレボマイシン）の生産
性を有する点で本菌株と異なる。

以上の点から本菌株を、ストレプトミセス・バイグロス
コピカスの新亜種と判断し、ストレプトミセス・バイグ
ロスコピカス・サブ・スビーシズ・ルテオラス会すフ゛
・スビーシズ・ノフ。

（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ
ｕｓ　ｓｂ、ｓｐ、Ｉｕｔｅｏｌｕｓ　ｓｂ、ｓｐ、ｎ
ｏｖ、）と命名した。本菌株は、工業技術院微生物工業
技術研究所に、受託番号微工研菌寄第８８２２号として
寄託されている。

本発明に用いられる菌株は、他の放線菌にも見られるご
とく１人工的にまた自然て変異をおこしやすい、　　本
発明の上記微生物は天然から分離された放線菌であるが
９本発明で使用する微生物にはこれを紫外線、Ｘ線、化
学薬剤などで人工的に変異させた菌株及びそれらの自然
変異株をも包含するものである。

本発明の新菌糧に属する微生物は天然の土壌より分離し
て取得したものであるが、前記微生物工業技術研究所Ｃ
で寄託した菌株の凍結乾燥品を復元することによって容
易に取得することができる。本発明にお（・て、ストレ
プトミセス属に属するＳＣＭ　−１２７物質生産菌の培
養は一般微生物の培養方法に準じておこなわれるが通常
は液体培地による深部培養法が有利である。培養に用い
られる培地としては、該生産菌が利用する栄養源を含有
する培地であればよい。すなわち合成培地、半合成培地
あるいは天然培地が用いられ、培地の組成は、たとえば
炭素源としては　Ｄ−キシロース、グルコース、Ｄ−フ
ラクトース、Ｌ−ラムノース、マンニトール、グリセリ
ン、デキス）　ＩＪン、殿粉、植物油などが、窒素源と
しては肉エキス、ペプトン、グルテンミール、綿実粕、
大豆粉、落花生粉、魚粉、コーンスチーブリカー、乾燥
酵母、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、尿素ソの他の有機または無機の窒素源が用いられる
。また金属塩としてはＮａ、　Ｋ、　Ｍｇ、　Ｃａ、　
Ｚｎ、　Ｆｅなどの硫酸塩、硝酸塩、塩化物、炭酸塩、
燐酸塩などが必要に応じて添加される。さらに必要に応
じて。

メチオニン、システィン、シスチン、オレイン酸メチル
、ラード油、シリコン油、界面活性剤などの抗生物質生
成促進物質又は消泡剤が適宜使用される。

培養条件としては好気的条件下洗培養するのが一般的に
有利で、培養温度は約１８〜３５°Ｃの範囲が望ましく
、好ましくは約３０℃附近が用（・られ、培地のｐＨは
約５〜１０．好ましくは約６〜８の範囲に保持すると好
結果が得られる。培養期間は培地の組成、温度などＫよ
って変動するが、一般的［１〜５日程度でよく、培養終
了時に目的物置が選択的に蓄積される。

培養物より本発明の目的物を単離採取するには通常の微
生物の培養物より抗生物質を単離する方法が適用される
。ＳＣＭ−１２７物質は培養液中に含有されるので、遠
心分離またはｒ過により菌゛体を除去した後、ＦＩ通過
液ら有効物質の抽出をおこなう。すなわち適当な溶剤に
対する溶解性および溶解度の差、溶液からの析出性およ
び析出速度の差、８々の吸着剤に対する吸着親和性の差
、２種の液相間における分配の差などを利用する一般の
抗生物質の製造に用いられる手段によって９分離、採取
、精製される。この方法は必要に応じて単独に用いられ
、ある（・は任意の順序に組合せ、また反覆して適用で
きる。

つぎに、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する
。

ＳＣＭ−１２７物質の製造例 グルコース０．５％、グリセリン１．０％、テキストリ
フ２．０％、大豆粉０．５％、肉エキス０．３％、ポリ
ペプトン０．５％、イーストエキストラクト０．５％、
プレンハートインツユジョンブイヨン培地（栄研）　０
．５２％、炭酸カルシウム０．２％を含む培地（ｐＨ８
，０）　１２０　ｒｎｌを５００　ｍＺ容三角フラスコ
に分注し、１２０°Ｃ２０分間滅菌したのち、寒天培地
上ニ生育させたストレプトミセス・ハイクロスコピカス
・サブφスビーシズｅルテオラス・サブ・スビーシズ・
ノブ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｔｒｒｏｓｃｏ
ｐｉｃｕｓ　ｓｂ。

ｓｐ、１ｕｔｅｏｌｕｓ　ｓｂ、ｓｐ、ｎｏｖ、　）と
命名したＳＣＭ　−１２７物質産生株を接種し、毎分２
２０回転のロータリーシェーカーで２８°Ｃ２４８時間
振盪培養する。次に。

この培養液を同様に調製した滅菌培地２０本（ｉ２０ａ
ａｌ／　５００　ｍＺ容三角フラスコ）　Ｋ　４　ｍＺ
ずつ接種し同様に培養する。本培養用培地として、デキ
ストリン１．０％、Ｄ−マンノース１．０％、大豆粉１
．０％、ファーマメディア、０．５％、硫酸マグネシウ
ム０．０５％、リン酸水素二カリウム０．０５％、アデ
カ／　−ル０．０３％を含む培地（ｐＨ７，０）　８０
ｔを１５０Ｚ容培養槽に入れて、上記培養液２０本全量
を接種し２通気量８０ｔ／分攪拌速度１５０回転／分で
２８℃、９０時間通気攪拌培養を行う。培養終了後４Ｎ
の塩酸を加えてｐＨ７，０に調整したのち、ラジオライ
）＄６００（昭和化学工業■製）を加えて吸引−過する
。この培養ｒ液７２１をダイヤイオンＨＰ−２０（三菱
化成工業ＫＫ製）７．２ｔを充填したカラムに吸着せし
め、水２２１で洗浄後５０％アセトン水溶液２２１で溶
出する。

活性画分を減圧下に６ｔまで濃縮したのち。

濃縮液をｐＨ７，０に調整し、酢酸エチル６ｔを加えて
分液する。水層を分離したのち、４Ｎ水酸化ナトリウノ
・でｐＨ８２ＯＫ調整し、ｎ−ブタノール６Ｌを加えて
さらに分液する。ｎ−ブタノール層を水洗後減圧濃縮す
ると８ｇのブタノール抽出物が得られる。

この抽出物をｎ−プロパツール：水＝５＝１混液に溶解
し、ワコーゲルＣ−２００（和光紬薬■ｇ）２４０ｇを
同溶剤系にて充填したカラムにのせ。

同混液でカラムクロマトグラフィーな行い活性画分を集
めて減圧濃縮すると４５０■の活性物質が得られる。

これをアセトニトリル：メタノール：水：イソグロバノ
ール＝　１８　：　８　：　６　：　２から成る溶液に
溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（Ｋｉｅｓｅｌ
ｇｅｌ　６０　（メルク社製）４１ｇ）に供する。同溶
液で展開、溶出する活性画分を集めて減圧濃縮すると１
２０■の活性物質が得られる。さらにこの物質をアセト
ニトリル：水＝５：１の溶液に落解し同溶液で展開する
シリカゲルクロマトグラフィー（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　
６０　（メルク社製）ｘｏｇ）を行う。

活性画分を集めて減圧濃縮すると４５１１１ｇの活性物
質が得られる。これをＯＤＥ　−４２５１−ＡＭ　（ｉ
０１０９６Ｘ２５０．センシュウ科学■製）を担体とす
る衝液（ｐＨ７，０）　＝　１０　：　２０　：　５：
６５で溶出分画する。

活性画分を集め、濃縮し、濃縮液を３０％メタノ−ルＩ
Ｉｃ溶かし、　ＨＰ−２０（５ｍＺ）を充填したカラム
に吸着せしめ、水５０ｍ１で洗浄後、５０％アセトン水
１５ｍｔで溶出し、減圧濃縮して純粋な白色粉末として
活性物質９■を得た。本物質は高速液体クロマトグラフ
Ａ−で単一ピークを示す。

本物質の理化学的性状は前述の通りである。なお２本物
質の活性区分の確認にはカンジダアルビカンスＡＴＣＣ
１０２３４を用いる生物検定、高速液体クロマトグラフ
ィーを用いて行った。

【図面の簡単な説明】

第１図は、　　ＳＣＭ−１２７物質の赤外部吸収スペク
トルを示す。 第２図は、　　ＳＣＭ−１２７物貢の水素核磁気共鳴ス
ペクトルを示す。 第３図は、　　ＳＣＭ−１２７物質の炭素−１３核磁気
共鳴スペクトルを示す。 第４図は、　　ＳＣＭ−１２７物貴の紫外部吸収スペク
トルを示す。 手続補正書 昭和６２年９　月−Ｌｚ日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、つぎの理化学的性状を有するＳＣＭ−１２７物質 （ｉ）融点：１５３〜１５８℃ （ｉｉ）元素分析値（Ｃ＿２＿５Ｈ＿３＿９ＮＯ＿８Ｐ
   Ｎａ・２Ｈ＿２Ｏとして） 　　　　　　　Ｃ　　　　　Ｈ　　　　Ｎ　　　　Ｐ 理論値（％）５２．５３　７．５８　２．４５　５．４
   ２ 実測値（％）５２．１３　７．２６　２．５０　５．１
   ４ （ｉｉｉ）赤外部吸収スペクトル：第１図 （ｉＶ）水素核磁気共鳴スペクトル：第２図 （Ｖ）炭素−１３核磁気共鳴スペクトル：第３図 （Ｖｉ）分子量：５１３ ２、ストレプトミセス属に属するＳＣＭ−１２７物質生
   産菌を培養し、培養物からＳＣＭ−１２７物質を採取す
   ることを特徴とするＳＣＭ−１２７物質の製造法。 ３、ＳＣＭ−１２７物質生産菌がストレプトミセス・ハ
   イグロスコピカス・サブ・スピーシズ・ルテオラス・サ
   ブ・スピーシズ・ノブ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙ
   ｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　ｓｂ．ｓｐ．ｌｕｔｅｏｌｕ
   ｓ　ｓｂ．ｓｐ．ｎｏｖ．）（微工研菌寄第８８２２号
   ）である特許請求の範囲第２項記載の製造法。