JPS61268187A - 新規抗生物質ｓｋ−１０７１およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、新規な抗生物質ＳＫ−１０７１およびその製
造性に関するものである。

（発明の構成） 本発明者らは、放線菌の生産する抗生物質の探索の過程
において、新たに土壌より分離したー放線菌ＳＫ−１０
７１が嫌気性細菌などに有効な新規抗生物質を生産する
ことを見い出した。本生産菌株の同定および本物質を単
離した後、理化学的および生物学的性質を調べることに
よシ本発明を完成した。

本発明に係る構成物質ＳＫ−１０７１の理化学的性状は
、次のとおシである。

（１）元素分析：Ｃ６０，５０９３Ｈ６，０７％（２）
分子量： ６５０、高分解能マススペクトルでの分子イオンピーク
、ｍ／ｚ　６５０，２５１５、元素分析およびＣ−１３
核磁気共鳴スペクトル（第４図）から分子式Ｃ，，Ｈ，
，０，，が求められる。

（３）融　点：２３０−２３３ｃ （４）比旋光度：〔α］”、；−０，１”　（Ｃ＝　１
、アセトニトリル） （５）紫外線吸収スペクトル： ｓｏｂアセトニトリル水溶液中で２７７ｎｍおよび５５
０　ｎｍに吸収極大を示し、分子吸光係数はそれぞれ６
１７０．４６６０（第１９〕。

（６）赤外線吸収スペクトル： 第２図のとおりである。（ＫＢｒ法） （７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第３図のとおシ
である。

（ｇ）Ｃ−１３核磁気共鳴スペクトル：第４図のとおり
である。

（９）溶剤に対する溶解性は、アセトニトリル、アセト
ン、酢酸エチルに可溶であシ、水、ｎ−ヘキサンに不溶
である。

Ｑｌ呈色反応は、過マンガン酸カリ、　Ｈ，８０，に陽
性、ドラーゲンドルフ、ニンヒドリンに陽性である。

住υ酸性物質である。

上記の理化学的性質および後述する生物活性を有する点
で、既知の抗生物質は存在しないので、本発明による新
規抗生物質を８に−１０７１と命名した。

本物質の生物学的性質は、次のとおりである。

（１）抗菌性 寒天希釈法による最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、第１表に
示すとおりである。

第　　１　　表 試験菌　　　ＭＩＣ（μｔル） スタフィロコッカス・アウレウス　ＡＴＣＣ６５５８Ｐ
　　　）１００（ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃＣ３２ｓ　　
ａｕｒｅｕｓ）バチルス・ズブチルス　ＡＴＣＣ８５０
ｔ　　　　　　＞１００（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　５ｕｂ
ｔｉｌｉｓ）ミクロコツカス・ルテウス　ＡＴＣＣ９３
４１２５（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｅｕｓ　１ｕｔｅｕｓ）ニ
ジエリζア・コリ　ＮＩＨＪ　　　　　　　　　　　：
＞１００（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）シュー
ト篤か・エルギノーザ　ＩＦ０３０８０　　　　　　＞
１００（Ｐｓｅｕｄｏｚｎｏｎ３３　ａｅｒｕｇｉｎｏ
ｓａ）バクテロイデス・フラジリス　ＡＴＣＣ２３７４
５５０（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　　ｆｒａｇｉｌｉｓ
）フンバクテリウム・バリウム　ＡＴＣＣ８５０ｔ　　
　　　　：＞１　ｇ　。

（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｖａｒｉｕｍ）（２
）毒　性 本抗生物質をマウス腹腔内投与した場合のＬＤ、。

は１００ＩＲ９／ゆ以上である。

本発明の抗生物質ＳＫ−１０７１を生産するために使用
される微生物の実用的な例は、本発明者にょつて土壌か
ら分離された放線菌ＳＫ−１０７１株があげられる。こ
の菌は、工業技術院微生物工業技術研究所に受託番号「
微工研菌寄第８１ｏ７号」として寄託されている。その
菌学的性状は、次のとおシである。

（Ｉ）形態的性状 ＳＫ−１０７１株の栄養菌糸は、各種寒天培地でよく発
達し、通常は隔壁を有しなｈ０気菌糸は各種寒天培地で
豊富に着先し、ビロード状あるｂは粉状を呈する。顕微
鏡下の観察では、気菌糸＃：を螺旋状を呈し、２０ケ以
上の胞子による長い連鎖を形成する。胞子は円筒形で、
表面は毛状である。胞子の大きさは１，２　Ｘ　００７
μｍである。菌核、胞子のうシよび遊走子は観察されな
い。

■各種培地上での培養性状 イー・ビー・シャーリング（Ｅ、Ｂ、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ
　）　ｂよびディー・ゴツトリーブ（Ｄ、ＧｏｔｔＨｅ
ｂ　）の方法〔インターナショナル・ジャーナル・オブ
・システィマチック・バクテリオロジー（Ｉｎｔ、Ｊ、
５ｙｓｔ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　）　１６．３１３　（１９６６
）　：］にょツー（調べた本生産菌の培養性状を次表に
示す。色調は標準色、！：ｔ、テ、カラー・ノーーモニ
ー・マニュアル（Ｃｏ１ｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎ
ｕａｌ　）第４版〔コンテナー・コーポレーション・オ
プ・アメ！Ｊ　力（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａ
ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ　）　１９５８年〕を
用いて決定し、色県名とともに括弧内にそのコードを併
せて記した。以下は特記しない限り、２７Ｇ。

２週間口の各培地における観察の結果である。

培養性状 培養性状 培養性状 （［Ｄ生理学的諸性質 （１）メラニン色素の生成 （イ）チロシン寒天　　　　　　　　　陰性（ロ）ペプ
トン・イースト鉄寒天　　　陰性に）トリプトン・イー
スト液　　　　　　陰性（２）チロシナーゼ反応　　　
　　　　　陰性（３）硫化水素の生産　　　　　　　　
　陰性（４）硝酸塩の還元　　　　　　　　　陽性（６
）スターチの加水分解　　　　　　　陽性（７）脱脂乳
の凝固（５７Ｃ）　　　　　　陰性（８）脱脂乳のペプ
トン化（３７Ｃ）　　　陽性（９）生育温度範囲　　　
　　　　　１５〜４５Ｃαυセルロースの分解　　　　
　　　陽性（ＩＶ）細胞の化学成分 ジアミノピメリン酸はＬＬｆｉであり、全菌体の糖の分
析ではアラビノースとガラクトースが認められた。

以上、本菌の菌学的性状を要約すると、次のとおシにな
る。

細胞壁組成としてＬＬ−ジアミノピメリン酸を有する。

ま九、形態的には、螺旋状の胞子鎖を形成し、胞子の表
面は毛状である。培養上の諸性質としては、栄養菌糸は
バンブーあるいはライトアイポリ−の色調を呈し、気菌
糸はプラウニッシュグレイの色調を呈する。可溶性色素
は生産しない。

これらの結果から、本菌はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属
に属し、ティー・ジー・プリド”　ム（Ｔ、Ｇ、Ｐｒｉ
ｄｈａｍ　）とエイチ・デー・トレスナ−（Ｈ，Ｄ、Ｔ
ｒｅｓｎｅｒ　）の分類〔パージニーズ・マニュアル・
オブ・デタミネーテイブ・バクテリオロジイ（Ｂｅｒｇ
ｅｙ　’ｓ　Ｍａｎｕａｌｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第８版、７４８
〜８２９頁、１９７４年〕によるグレイシリーズに属す
る菌種と考えられる。

上記菌株の変異株も本発明の方法に使用することができ
る。

培地としては、放線菌の培養に適する炭素源、鼠素源、
無機物、必要に応じてその他の栄養物をほどよく含有す
る合成培地または天然培地を使用することができる。

培地に使用される炭素源、窒素源は、使用菌株の利用可
能なものならばいずれの檻類でもよい。

すなわち、炭素源としては、たとえば、グルコース、グ
リセロール、フラクトース、マルトース、マンニット、
キシロース、ガラクトース、リボース、澱粉またはその
加水分解物等の種々の炭水化物が使用できる。その濃度
は通常、培地に対して０．１〜５チ（グルコース換算）
が好ましい。また、グルコン酸、ピルビン酸、乳酸、酢
酸等の各種有機酸、グリシン、グルタミン酸、アラニン
等の各種アミノ酸、さらにはメタノール、エタノール等
のアルコール類や、ノルマルパラフィン等の各種の非芳
香族系炭化水素、ある込は植物性もしくは動物性の各種
油脂等も使用可能である。窒素源としては、アンモニア
、塩化アンモニウム、燐酸アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム等の各種の無機酸あるいは有機
酸のアンモニウム塩類、尿素、ペプトン、ＮＺ−アミン
、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーンスチープリ
カー、カゼイン加水分解物、フィツシュミールあるいは
その消化物、大豆粉あるいはその消化物、脱脂大豆ある
いはその消化物、踊加水分解物等の含窒素有機物質、さ
らにはグリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミ
ノ酸が使用可能である。

無機物としては各種燐酸塩、硫酸マグネシウム、食塩等
、さらＫｉｔの重金属塩が使用される。

また、栄養要求性を示す変異株を用いる場合には、当然
その栄養要求を満足させる物質を培地に加えなければな
らないが、この種の栄養素は、天然物を含む培地を使用
する場合には、とくに添加を必要としない場合がある。

発酵は振盪培養または通気攪拌深部培養等の好気的条件
下で行なう。培養温度は通常２０〜４０Ｃである。培養
期間は通常１〜８日で、菌体内外に抗生物質ＳＫ−１０
７１が生成蓄積する。

培養終了後に培養物よシ抗生物質ＳＫ−１０７１を、た
とえば、次の方法で採取する。培養物を遠心分離によシ
、戸液と沈澱物とに分離する。

ｐ液からは活性炭、多孔性合成高分子樹脂、イオン交換
樹脂等に吸着させ、溶出させることにより抽出する。沈
澱物からは酢酸エチルまたはノルマルブタノールや含水
アセトン等の有機溶媒で抽出する。抽出物を適宜濃縮乾
固することにより、ＳＫ−１０７１の粗物質を得る。粗
物質はさらに１脂溶性物質の精製において通常用すられ
る公知の方法、たとえば、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー等のａ線法などを適宜組合わせることによシ精
裂される。これらの精製方法で得られる活性画分を濃縮
乾固することにより、抗生物質ＳＫ−１０７１の粉末を
得ることができる。

本発８Ａにおいて、抗生物質ＳＫ−１０７１の検出およ
び定量は、シリカゲル薄膜クロマトグラフィー（メルク
社製シリカゲル６０Ｆ□４、厚さｏ、ｚｎｍ。

展開溶媒ベンゼン／アセトン＝３：１．抗生物質８に−
１０７１のＲｆ値０．４０　）およびクロストリジウＡ
−パーフリンゲ７ス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒ
ｆｒｉ　−ｎｇｅｎｓ　）ＡＴＣＣ５６２４を用イル生
物学的検定法ニよった。

（発明の効果） 上記のとおり抗生物質ＳＫ−１０７１は襠性が低く、主
として嫌気性細菌に活性を示す。したがって、本物質は
、ヒトおよび動物の微生物感染症に対する治療薬、予防
薬としての使用が期待される。

（実施例） 次に、本発明の抗生物質ＳＫ−１０７ｆの実施例を示す
が、この実施例は単なる一例を示すものであって、本発
明を限定するものではない。

放線菌ＳＫ−１０７１株（微工研寄第８１０７号）の斜
面培養から一白金耳を１００ｄの種培地（グルコース０
．１優、スターチ２．４％、ペプトン０．３チ、肉エキ
ス０．３％、酵母エキス０．５％、炭酸カルシウム０．
４％）を入れた５０ロー容の坂ロフラスコに接種し、２
７Ｃで２日間振盪培養して種培養を得た。この種培養４
００ｒｎｔを、４０Ｌの生産培地（グルコース０，１９
３．スターチ２．４％、ペプトン０．５慢、肉エキス０
．３％、酵母エキス０．５チ、炭酸カルシウム０．４％
、硫酸第一鉄７水塩１　ｎ９／ｌ。

塩化マンガン４水塩１１１９／ｌ、硫酸亜鉛７水塩１１
ｎｇ／ｌ、硫酸銅５水塩１η／１．塩化コバルト２水塩
ＩＩｎ？／７．’（ｉ−人れ九３０　／、容ジャーファ
メンターｉ基に分けて接種し、２７Ｃで３日間通気攪拌
培養（通気量１０ｔ／顛、攪拌２５０　ｒｐｍ　）を行
なった。

培養液４０ｔをシャープレス型遠心分離機を用いて遠心
分離し、菌体と培養上清に分離する。菌体１ｃ９０％ア
セトン溶液２．５ｔを加え攪拌し、再抽出を行なった。

このアセトン溶液を減圧下で濃縮し、アセトンを除去し
た後、培養上溝１８／、と合わせ、塩酸でｐＨ４に調整
した。これを６５０−のダイカイオンＨｐ−２０を充填
したカラムに通した後、７０チア七トン水で溶出しｂ’
ｔずつ分画した。活性画分（ム１〜３）を集めて減圧下
濃縮し、アセトンを除去した後、塩酸でｐＨ５に調整し
、１ｔの酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を減圧下で
濃縮乾固することにより、タール状物質８４０Ｉｎ９を
得九。

タール状物質８４０ｍ９をメタノールに溶解しセライト
と混合した後、ａｍ乾固した。この粉末を’Ｊｄベンゼ
ンに懸濁し、あらかじめベンゼンに懸濁させたシリカゲ
ル（４０ｆ、メルク社！ＪＪ　、　Ａｒｔ。

９３８５　）を充填したカラム上端に添加した。カラム
をベンゼン／アセトン（４：１）で溶出し、１０−ずつ
分画した。活性画分（ム２３〜３９）を集めて減圧下で
濃縮することによシ、油状物質１５０ηを得た。

油状物質１５０■は１．５−アセトニトリルに溶かし、
１５回に分けて高速液体クロマトグラフィー（カラム、
山村化学研究所ＭＹＭＣ人−３２４；展開溶媒　６５％
アセトニトリル水、流速５―／　ｗｘ　；検出　ＵＶ２
１０ｎｍ；保持時間９．８分）を行なった。この活性分
画を減圧下で濃縮乾固することにより、白色粉末３９ダ
を単離した。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＳＫ−１０７１の紫外線吸収スペクト
ル（５０％アセトニトリル水溶液中の測定）、第２図は
赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）、第３図はプロトン
核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中で測定）、第
４図はＣ−１３核磁気共鳴スペクトル（重アセトン中で
測定）を示す。 代理人　清　水　　　猛　、′。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）次の理化学的性質を有し、分子式Ｃ＿３＿２Ｈ＿
   ３＿３Ｏ＿１＿３で表わされる抗生物質ＳＫ−１０７１
   。 ［１］比旋光度：〔α〕＾１＾８＿Ｄ−０．１°（Ｃ＝
   １、アセトニトリル） ［２］第１図に示される紫外線吸収スペクトル ［３］第２図に示される赤外線吸収スペクトル ［４］第５図に示されるプロトン核磁気共鳴スペクトル ［５］第４図に示されるＣ−１３核磁気共鳴スペクトル
2. （２）下記の理化学的性質を有し、分子式Ｃ＿３＿２Ｈ
   ＿３＿３Ｏ＿１＿３で表わされる抗生物質ＳＫ−１０７
   １を生産する能力を有する放線菌を培地に好気的に培養
   し、該抗生物質ＳＫ−１０７１を生産蓄積させ、これを
   採取することを特徴とする抗生物質ＳＫ−１０７１の製
   造法。 ［１］比旋光度：〔α〕＾１＾８＿Ｄ−０．１°（Ｃ＝
   １、アセトニトリル） ［２］第１図に示される紫外線吸収スペクトル ［３］第２図に示される赤外線吸収スペクトル ［４］第３図に示されるプロトン核磁気共鳴スペクトル ［５］第４図に示されるＣ−１３核磁気共鳴スペクトル