JPH09208585A - 新規生理活性物質ｑｍ１６−ａ、その使用および製造法 - Google Patents
新規生理活性物質ｑｍ１６−ａ、その使用および製造法Info
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- JPH09208585A JPH09208585A JP1677396A JP1677396A JPH09208585A JP H09208585 A JPH09208585 A JP H09208585A JP 1677396 A JP1677396 A JP 1677396A JP 1677396 A JP1677396 A JP 1677396A JP H09208585 A JPH09208585 A JP H09208585A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 抗腫瘍性を有する新規な化合物を提供する。
【解決手段】 次式（１）で示される化合物ＱＭ１６−
Ａまたはその付加塩。 【化１】 上記の化合物ＱＭ１６−Ａまたはその付加塩を有効成分
として含有してなる抗腫瘍剤。ストレプトミセス属に属
し、化合物ＱＭ１６−Ａの生産能を有する菌株を適当な
培地で好気的に培養し、その培養物よりＱＭ１６−Ａを
得ることを特徴とする上記の化合物ＱＭ１６−Ａの製造
法。 【効果】 化合物ＱＭ１６−Ａおよびその付加塩は種々
の腫瘍細胞に対して強い増殖抑制活性を有し、特に抗腫
瘍剤もしくは腫瘍治療剤として有用である。
Ａまたはその付加塩。 【化１】 上記の化合物ＱＭ１６−Ａまたはその付加塩を有効成分
として含有してなる抗腫瘍剤。ストレプトミセス属に属
し、化合物ＱＭ１６−Ａの生産能を有する菌株を適当な
培地で好気的に培養し、その培養物よりＱＭ１６−Ａを
得ることを特徴とする上記の化合物ＱＭ１６−Ａの製造
法。 【効果】 化合物ＱＭ１６−Ａおよびその付加塩は種々
の腫瘍細胞に対して強い増殖抑制活性を有し、特に抗腫
瘍剤もしくは腫瘍治療剤として有用である。
Description
【０００１】〔発明の背景〕
【発明の属する技術分野】本発明はシクロプロピルピロ
ロインドール構造を有する新規物質に関し、さらに詳し
くは、抗腫瘍作用を有する新規物質ＱＭ１６−Ａおよび
その用途ならびに製造方法に関する。
ロインドール構造を有する新規物質に関し、さらに詳し
くは、抗腫瘍作用を有する新規物質ＱＭ１６−Ａおよび
その用途ならびに製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】抗腫瘍物質に関しては、既に多数のもの
が医薬として実用化されている。一般に、化学物質の生
理活性はその化学構造に依存するところが大きいため、
抗腫瘍性を有する新規な化合物に対しては、不断の希求
があると言えよう。
が医薬として実用化されている。一般に、化学物質の生
理活性はその化学構造に依存するところが大きいため、
抗腫瘍性を有する新規な化合物に対しては、不断の希求
があると言えよう。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記の希求
に応えるものである。
に応えるものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、ストレプ
トミセスに属する新規物質ＱＭ１６−Ａの産生能を有す
る菌株によって生産されうるＱＭ１６−Ａが高い抗腫瘍
活性を有することを見出し、この知見をもとに本発明を
完成させるに至った。すなわち、本発明による新規化合
物は、次式（１）で示される化合物ＱＭ１６−Ａまたは
その付加塩である。本発明は、また、この物質の用途に
関する。すなわち、本発明による医薬組成物、特に抗腫
瘍剤は、次式（１）で示される化合物ＱＭ１６−Ａまた
はその付加塩を有効成分として含有してなるものであ
る。本発明は、また、この物質の製造法に関する。すな
わち、本発明による次式（１）で示されるＱＭ１６−Ａ
の製造法は、ストレプトミセス属に属し化合物ＱＭ１６
−Ａの生産能を有する菌株を適当な培地で好気的に培養
し、その培養物よりＱＭ１６−Ａを得ること、を特徴と
するものである。
トミセスに属する新規物質ＱＭ１６−Ａの産生能を有す
る菌株によって生産されうるＱＭ１６−Ａが高い抗腫瘍
活性を有することを見出し、この知見をもとに本発明を
完成させるに至った。すなわち、本発明による新規化合
物は、次式（１）で示される化合物ＱＭ１６−Ａまたは
その付加塩である。本発明は、また、この物質の用途に
関する。すなわち、本発明による医薬組成物、特に抗腫
瘍剤は、次式（１）で示される化合物ＱＭ１６−Ａまた
はその付加塩を有効成分として含有してなるものであ
る。本発明は、また、この物質の製造法に関する。すな
わち、本発明による次式（１）で示されるＱＭ１６−Ａ
の製造法は、ストレプトミセス属に属し化合物ＱＭ１６
−Ａの生産能を有する菌株を適当な培地で好気的に培養
し、その培養物よりＱＭ１６−Ａを得ること、を特徴と
するものである。
【化３】
【０００５】〔発明の具体的説明〕
［新規化合物ＱＭ１６−Ａ］化合物ＱＭ１６−Ａは、式
（１）で示される構造を有するものであることは前記し
たところである。この化学構造は、プロトン核磁気共鳴
スペクトル、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル、紫外部吸収ス
ペクトル、赤外部吸収スペクトル及び質量分析スペクト
ルを詳細に解析して決定されたものである。本発明化合
物の物理化学的性状は以下に記す通りである。 （１）外観 黄色粉末 （２）融点 １６０〜１６２℃（分解） （３）溶解性 ＤＭＳＯ、ＤＭＦに可溶 メタノール、
エタノール、クロロホルム、アセトン、酢酸エチルに難
溶、水、ｎ−ヘキサンに不溶 （４）Ｒｆ値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ254 」使
用） クロロホルム−メタノール（２０：１） ０．４８ （５）ＦＡＢ−ＭＳスペクトル（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ）
+ ７０３ （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中） 図１
に示されている。 λmax nm （ε）：２７６（２７５００）、３７０（３
３３００） （８）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒディスク法）
図２に示されている。 （９）プロトン核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ、
重ＤＭＳＯ中） 図３に示されている。 （１０）13Ｃ核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ、重
ＤＭＳＯ中） 図４に示されている。 （１１）Ｃ38Ｈ34Ｏ8 Ｎ6 式（Ｉ）で示される化合物は、酸付加塩および塩基付加
塩が有り得る。本発明化合物は、これらの付加塩をも包
含するものである。酸付加塩としては、例えば無機酸、
例えば塩酸、硫酸、硝酸、リン酸など、あるいは有機
酸、例えば酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、オレイン
酸、パルミチン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマ
ル酸、グルタミン酸、パントテン酸、ラウリルスルホン
酸、との塩などをあげることができる。また、塩基付加
塩としては、例えばアルカリ金属化合物（例えば水酸化
ナトリウム、水酸化カリウムなど）との塩、アルカリ土
類金属化合物（例えば水酸化カルシウム、水酸化マグネ
シウムなど）との塩、アンモニウム塩、有機塩基（例え
ばトリエチルアミン、エタノールアミンなど）との塩な
どをあげることができる。なお、これらの付加塩を医薬
として使用する場合には、酸および塩基は薬学上許容さ
れるものでなければならないことは言うまでもない。
（１）で示される構造を有するものであることは前記し
たところである。この化学構造は、プロトン核磁気共鳴
スペクトル、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル、紫外部吸収ス
ペクトル、赤外部吸収スペクトル及び質量分析スペクト
ルを詳細に解析して決定されたものである。本発明化合
物の物理化学的性状は以下に記す通りである。 （１）外観 黄色粉末 （２）融点 １６０〜１６２℃（分解） （３）溶解性 ＤＭＳＯ、ＤＭＦに可溶 メタノール、
エタノール、クロロホルム、アセトン、酢酸エチルに難
溶、水、ｎ−ヘキサンに不溶 （４）Ｒｆ値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ254 」使
用） クロロホルム−メタノール（２０：１） ０．４８ （５）ＦＡＢ−ＭＳスペクトル（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ）
+ ７０３ （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中） 図１
に示されている。 λmax nm （ε）：２７６（２７５００）、３７０（３
３３００） （８）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒディスク法）
図２に示されている。 （９）プロトン核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ、
重ＤＭＳＯ中） 図３に示されている。 （１０）13Ｃ核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ、重
ＤＭＳＯ中） 図４に示されている。 （１１）Ｃ38Ｈ34Ｏ8 Ｎ6 式（Ｉ）で示される化合物は、酸付加塩および塩基付加
塩が有り得る。本発明化合物は、これらの付加塩をも包
含するものである。酸付加塩としては、例えば無機酸、
例えば塩酸、硫酸、硝酸、リン酸など、あるいは有機
酸、例えば酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、オレイン
酸、パルミチン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマ
ル酸、グルタミン酸、パントテン酸、ラウリルスルホン
酸、との塩などをあげることができる。また、塩基付加
塩としては、例えばアルカリ金属化合物（例えば水酸化
ナトリウム、水酸化カリウムなど）との塩、アルカリ土
類金属化合物（例えば水酸化カルシウム、水酸化マグネ
シウムなど）との塩、アンモニウム塩、有機塩基（例え
ばトリエチルアミン、エタノールアミンなど）との塩な
どをあげることができる。なお、これらの付加塩を医薬
として使用する場合には、酸および塩基は薬学上許容さ
れるものでなければならないことは言うまでもない。
【０００６】［ＱＭ１６−Ａの製造］本発明者等は、化
合物ＱＭ１６−Ａを微生物培養により取得しているが、
それ以外の合目的的な任意の方法で製造することも可能
であろう。例えば類縁化合物から出発して、これを合成
化学的ないし微生物学的修飾により製造したり、あるい
は全合成によることもできよう。さらに、微生物培養に
よる場合でも、化合物ＱＭ１６−Ａの生産に関与する遺
伝子を適当な宿主微生物に組み込み、得られた形質転換
体を培養し、この培養物から化合物ＱＭ１６−Ａを取得
するという、遺伝子工学的手法を経てもよい。化合物Ｑ
Ｍ１６−Ａを微生物培養により取得する場合の菌株とし
ては、放線菌に属し、ＱＭ１６−Ａ生産能を有するもの
が好ましく使用される。具体的には、たとえば本発明者
らが分離した、ＱＭ１６株がこのようなＱＭ１６−Ａ生
産能を有する。また、抗生物質生産菌単離に慣用されて
いる手法により、自然界からこの物質を生産する他の適
当な菌株を得ることも可能である。ＱＭ１６株を含むＱ
Ｍ１６−Ａ生産菌を放射線照射その他の変異処理に付し
て、ＱＭ１６−Ａ生産能を高める余地もある。さらに前
述のように、遺伝子工学的手法を利用することもでき
る。
合物ＱＭ１６−Ａを微生物培養により取得しているが、
それ以外の合目的的な任意の方法で製造することも可能
であろう。例えば類縁化合物から出発して、これを合成
化学的ないし微生物学的修飾により製造したり、あるい
は全合成によることもできよう。さらに、微生物培養に
よる場合でも、化合物ＱＭ１６−Ａの生産に関与する遺
伝子を適当な宿主微生物に組み込み、得られた形質転換
体を培養し、この培養物から化合物ＱＭ１６−Ａを取得
するという、遺伝子工学的手法を経てもよい。化合物Ｑ
Ｍ１６−Ａを微生物培養により取得する場合の菌株とし
ては、放線菌に属し、ＱＭ１６−Ａ生産能を有するもの
が好ましく使用される。具体的には、たとえば本発明者
らが分離した、ＱＭ１６株がこのようなＱＭ１６−Ａ生
産能を有する。また、抗生物質生産菌単離に慣用されて
いる手法により、自然界からこの物質を生産する他の適
当な菌株を得ることも可能である。ＱＭ１６株を含むＱ
Ｍ１６−Ａ生産菌を放射線照射その他の変異処理に付し
て、ＱＭ１６−Ａ生産能を高める余地もある。さらに前
述のように、遺伝子工学的手法を利用することもでき
る。
【０００７】［ＱＭ１６株］ＱＭ１６−Ａ生産能を有す
る放線菌に属する一菌株で、本発明者らが分離したＱＭ
１６株は、下記のような内容のものである。 １）由来および寄託番号 本株は、岡山県 高梁市で採取した土壌から分離された
もので、平成８年１月１７日、工業技術院生命工学技術
研究所に、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５３６３として寄
託されている。 ２）菌学的性状 （１）形態 ＱＭ１６株は、グリセロ−ル・アスパラギン寒天培地、
スターチ無機塩寒天培地、チロシン寒天培地、イ−スト
・麦芽寒天培地、及びオ−トミ−ル寒天培地で良く生育
し、気菌糸の着生も、良好である。基生菌糸より生じた
気菌糸は、単純分枝をなして非常に良く伸長し、数多く
の胞子が連鎖する。その形態は、直線状およびループ状
をなし、中にはその先端の短い一部が螺旋状をなす部分
もある。また螺旋部分が癒着して、菌糸の固まりを呈
し、一見、胞子嚢状となることもある。通常、胞子の連
鎖は５０個以上で、形は俵型、大きさは０．５ 〜
０．６× ０．７ 〜 １．０μｍであり、その表面は
平滑である。又、胞子嚢、鞭毛胞子、菌核などの特殊形
態は認められない。 （２）各種培地上の生育 ＱＭ１６株を各種培地に２７℃、３週間培養した結果
は、第１表に示す通りである。 （３）生理的性質 ＱＭ１６株の生理的性質は、第２表に示す通りである。 （４）炭素源の利用性 ＱＭ１６株の炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリ−ブ
寒天培地上）は、第３表に示す通りである。 （５）ジアミノピメリン酸の分析 細胞壁構成のアミノ酸の１つであるジアミノピメリン酸
を分析した結果、ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出され
た。以上の菌学的性状を要約すると、次の通りである。 （ｉ）胞子鎖は直線状〜ループ状で、胞子の表面は平滑
である。 （ii）気菌糸の着生は非常に良好で、その色は黄味色で
ある。裏面色は、うす黄茶色〜暗い黄色〜黄味橙色〜に
ぶい橙色である。 （iii ）ペプトン・イースト・鉄寒天培地、及びトリプ
トン・イースト液体培地では、メラニン様色素は認めら
れないが、チロシン寒天培地では認められる。またいず
れでも可溶性色素は認められない。 （iv）シュークロースの資化性は弱い。 上記性状より、ＱＭ１６株はストレプトミセス属に属す
ると考えられる。ストレプトミセス属の既知菌種を検索
すると、近縁の種としてストレプトミセス・ミノエンシ
ス (Streptomyces minoensis)[ＩＳＰ（インタ−ナショ
ナル・ストレプトミセス・プロジェクト）の記載（E.B.
Shirling and D.Gottlieb:Int.J.Syst.Bact.１８巻 １
４６（１９６８）] があげられる。しかし糖の利用性は
シュークロース、ラフィノースについて異なっているこ
とから、詳細な比較には基準菌株と本菌株の比較検討が
必要である。そこで現時点ではＱＭ１６株をストレプト
ミセス エスピー(Streptomyces sp.) ＱＭ１６と命名
する。尚、ＱＭ１６菌株は前述のように工業技術院生命
工学技術研究所に寄託申請し、平成８年１月１７日、Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−５３６３として受託されている。
る放線菌に属する一菌株で、本発明者らが分離したＱＭ
１６株は、下記のような内容のものである。 １）由来および寄託番号 本株は、岡山県 高梁市で採取した土壌から分離された
もので、平成８年１月１７日、工業技術院生命工学技術
研究所に、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５３６３として寄
託されている。 ２）菌学的性状 （１）形態 ＱＭ１６株は、グリセロ−ル・アスパラギン寒天培地、
スターチ無機塩寒天培地、チロシン寒天培地、イ−スト
・麦芽寒天培地、及びオ−トミ−ル寒天培地で良く生育
し、気菌糸の着生も、良好である。基生菌糸より生じた
気菌糸は、単純分枝をなして非常に良く伸長し、数多く
の胞子が連鎖する。その形態は、直線状およびループ状
をなし、中にはその先端の短い一部が螺旋状をなす部分
もある。また螺旋部分が癒着して、菌糸の固まりを呈
し、一見、胞子嚢状となることもある。通常、胞子の連
鎖は５０個以上で、形は俵型、大きさは０．５ 〜
０．６× ０．７ 〜 １．０μｍであり、その表面は
平滑である。又、胞子嚢、鞭毛胞子、菌核などの特殊形
態は認められない。 （２）各種培地上の生育 ＱＭ１６株を各種培地に２７℃、３週間培養した結果
は、第１表に示す通りである。 （３）生理的性質 ＱＭ１６株の生理的性質は、第２表に示す通りである。 （４）炭素源の利用性 ＱＭ１６株の炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリ−ブ
寒天培地上）は、第３表に示す通りである。 （５）ジアミノピメリン酸の分析 細胞壁構成のアミノ酸の１つであるジアミノピメリン酸
を分析した結果、ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出され
た。以上の菌学的性状を要約すると、次の通りである。 （ｉ）胞子鎖は直線状〜ループ状で、胞子の表面は平滑
である。 （ii）気菌糸の着生は非常に良好で、その色は黄味色で
ある。裏面色は、うす黄茶色〜暗い黄色〜黄味橙色〜に
ぶい橙色である。 （iii ）ペプトン・イースト・鉄寒天培地、及びトリプ
トン・イースト液体培地では、メラニン様色素は認めら
れないが、チロシン寒天培地では認められる。またいず
れでも可溶性色素は認められない。 （iv）シュークロースの資化性は弱い。 上記性状より、ＱＭ１６株はストレプトミセス属に属す
ると考えられる。ストレプトミセス属の既知菌種を検索
すると、近縁の種としてストレプトミセス・ミノエンシ
ス (Streptomyces minoensis)[ＩＳＰ（インタ−ナショ
ナル・ストレプトミセス・プロジェクト）の記載（E.B.
Shirling and D.Gottlieb:Int.J.Syst.Bact.１８巻 １
４６（１９６８）] があげられる。しかし糖の利用性は
シュークロース、ラフィノースについて異なっているこ
とから、詳細な比較には基準菌株と本菌株の比較検討が
必要である。そこで現時点ではＱＭ１６株をストレプト
ミセス エスピー(Streptomyces sp.) ＱＭ１６と命名
する。尚、ＱＭ１６菌株は前述のように工業技術院生命
工学技術研究所に寄託申請し、平成８年１月１７日、Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−５３６３として受託されている。
【０００８】
【表１】
【表２】
【表３】
【０００９】［ＱＭ１６−Ａの生産］培養法による化合
物ＱＭ１６−Ａは、以下のように放線菌に属するＱＭ１
６−Ａ生産菌を適当な培地で好気的培養に培養し、この
培養物から目的物を採取することにより製造することが
できる。培地は、ＱＭ１６−Ａ生産菌が利用しうる任意
の栄養源を含有するものでよい。具体的な例としては、
炭素源としてグルコース、ガラクトース、グリセロー
ル、及び油脂類などが使用でき、窒素源としては大豆
粉、魚粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキス、及びコーン
スティープリカーなどの有機物、並びにアンモニウム塩
または硝酸塩、たとえば硫酸アンモニウム、硝酸ナトリ
ウム及び塩化アンモニウムなどの無機物が利用できる。
必要に応じて、臭化カリウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、炭酸カルシウム、燐酸塩、重金属塩などの無機
塩類を添加することもできる。発酵中の発泡を抑制する
ため、慣用の適する消泡剤、たとえばシリコーン油を添
加することもできる。培養方法としては、一般に抗生物
質採取目的で常用されている生産方法におけると同じ
く、好気的液体培養法が適している。培養温度は１５〜
３５℃が適当で、特に２５〜３０℃がよい。この条件で
振盪培養すると、通常５日間でＱＭ１６−Ａ生産量は最
高に達する。ＱＭ１６−Ａが蓄積された培養物中におい
て、ＱＭ１６−Ａは培養濾液及び菌体中に存在する。こ
れからＱＭ１６−Ａを採取するには、任意の合目的的な
方法が利用可能であるが、たとえば抽出操作による方法
を用いることができる。具体的には、培養濾液中のＱＭ
１６−Ａについては前記した水不混和性溶媒、例えば酢
酸エチルで抽出する。また菌体中のＱＭ１６−Ａについ
ては、濾過・遠心分離などで菌体集体を得て、これをメ
タノール、エタノール、アセトンなどで処理して抽出す
ることができる。菌体の分離を省略し、培養物をそのま
ま抽出操作に付すこともできる。適当な溶媒による向流
分配法も、広義の抽出の範疇に含めることができる。Ｑ
Ｍ１６−Ａ採取のための第２の手法は、吸着法に基づく
ものである。ＱＭ１６−Ａ含有の液状物、例えば培養濾
液や上記の抽出液を対象とし、適当な吸着剤、例えばシ
リカゲル、活性炭、「ダイヤイオンＨＰ２０］（三菱化
学社製）などにＱＭ１６−Ａを吸着せしめた後、適当な
溶媒で溶離して、これを減圧濃縮乾固することにより、
ＱＭ１６−Ａ粗標品が得られる。かくして得られたＱＭ
１６−Ａ粗標品をさらに精製するためには、上記の抽出
および吸着操作に必要に応じてゲル濾過法、高速液体ク
ロマトグラフィーなどを必要回数組み合わせて行なえば
よい。具体的には、たとえばシリカゲルなどの吸着剤、
「トヨパールＨＷ４０］（東洋ソーダ社製）などのゲル
濾過剤によるカラムクロマトグラフィー、「ＹＭＣパッ
ク」（山村科学社製）などによる高速液体クロマトグラ
フィー、さらにこれらと向流分配法の組合わせが可能で
ある。好ましくは、ＱＭ１６−Ａ粗標品を少量のＤＭＳ
Ｏに溶解し、「ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＭ］ＨＰＬＣカラム
に付し、７０％アセトニトリルで活性画分を溶出せし
め、これを濃縮乾固することによりＱＭ１６−Ａの純品
が得られる。本発明による化合物ＱＭ１６−Ａは、常法
によって前記したような酸付加塩および塩基付加塩の形
にすることができる。
物ＱＭ１６−Ａは、以下のように放線菌に属するＱＭ１
６−Ａ生産菌を適当な培地で好気的培養に培養し、この
培養物から目的物を採取することにより製造することが
できる。培地は、ＱＭ１６−Ａ生産菌が利用しうる任意
の栄養源を含有するものでよい。具体的な例としては、
炭素源としてグルコース、ガラクトース、グリセロー
ル、及び油脂類などが使用でき、窒素源としては大豆
粉、魚粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキス、及びコーン
スティープリカーなどの有機物、並びにアンモニウム塩
または硝酸塩、たとえば硫酸アンモニウム、硝酸ナトリ
ウム及び塩化アンモニウムなどの無機物が利用できる。
必要に応じて、臭化カリウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、炭酸カルシウム、燐酸塩、重金属塩などの無機
塩類を添加することもできる。発酵中の発泡を抑制する
ため、慣用の適する消泡剤、たとえばシリコーン油を添
加することもできる。培養方法としては、一般に抗生物
質採取目的で常用されている生産方法におけると同じ
く、好気的液体培養法が適している。培養温度は１５〜
３５℃が適当で、特に２５〜３０℃がよい。この条件で
振盪培養すると、通常５日間でＱＭ１６−Ａ生産量は最
高に達する。ＱＭ１６−Ａが蓄積された培養物中におい
て、ＱＭ１６−Ａは培養濾液及び菌体中に存在する。こ
れからＱＭ１６−Ａを採取するには、任意の合目的的な
方法が利用可能であるが、たとえば抽出操作による方法
を用いることができる。具体的には、培養濾液中のＱＭ
１６−Ａについては前記した水不混和性溶媒、例えば酢
酸エチルで抽出する。また菌体中のＱＭ１６−Ａについ
ては、濾過・遠心分離などで菌体集体を得て、これをメ
タノール、エタノール、アセトンなどで処理して抽出す
ることができる。菌体の分離を省略し、培養物をそのま
ま抽出操作に付すこともできる。適当な溶媒による向流
分配法も、広義の抽出の範疇に含めることができる。Ｑ
Ｍ１６−Ａ採取のための第２の手法は、吸着法に基づく
ものである。ＱＭ１６−Ａ含有の液状物、例えば培養濾
液や上記の抽出液を対象とし、適当な吸着剤、例えばシ
リカゲル、活性炭、「ダイヤイオンＨＰ２０］（三菱化
学社製）などにＱＭ１６−Ａを吸着せしめた後、適当な
溶媒で溶離して、これを減圧濃縮乾固することにより、
ＱＭ１６−Ａ粗標品が得られる。かくして得られたＱＭ
１６−Ａ粗標品をさらに精製するためには、上記の抽出
および吸着操作に必要に応じてゲル濾過法、高速液体ク
ロマトグラフィーなどを必要回数組み合わせて行なえば
よい。具体的には、たとえばシリカゲルなどの吸着剤、
「トヨパールＨＷ４０］（東洋ソーダ社製）などのゲル
濾過剤によるカラムクロマトグラフィー、「ＹＭＣパッ
ク」（山村科学社製）などによる高速液体クロマトグラ
フィー、さらにこれらと向流分配法の組合わせが可能で
ある。好ましくは、ＱＭ１６−Ａ粗標品を少量のＤＭＳ
Ｏに溶解し、「ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＭ］ＨＰＬＣカラム
に付し、７０％アセトニトリルで活性画分を溶出せし
め、これを濃縮乾固することによりＱＭ１６−Ａの純品
が得られる。本発明による化合物ＱＭ１６−Ａは、常法
によって前記したような酸付加塩および塩基付加塩の形
にすることができる。
【００１０】［ＱＭ１６−Ａの用途］本発明による化合
物ＱＭ１６−Ａおよびその付加塩は、抗腫瘍活性を有す
るという点で有用である。 １）生物活性 （１）ｉｎ ｖｉｔｒｏ 抗腫瘍活性 各種腫瘍細胞に対するＱＭ１６−Ａの増殖抑制作用を検
討した。平底９６穴マイクロプレートを用い、培地で被
試験物質を順次に段階希釈し、５ｘ１０3 ／ウエルの細
胞を加え、５％ＣＯ2 インキュベーター中、３７゜Ｃで
２〜３日間培養後、細胞数をＭＴＴ法でカウントした。
細胞数がコントロールの５０％に減少した濃度をＩＣ50
（ｎｇ／ｍｌ）とした。培地は、ＲＰＭＩ １６４０に
牛胎児血清（１０％）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍ
ｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、２ー
メルカプトエタノール（５．０ｘ１０-5Ｍ）を加えたも
のを使用した。被試験物質は水に難溶なので、ＤＭＳＯ
に溶解後、培地で希釈した。 結果：ＩＣ50 Ｐ３８８（マウス白血病） ０．０８ｎｇ／ｍｌ Ｋ５６２（ヒト白血病） ０．８６ｎｇ／ｍｌ Ａ４３１（ヒト上皮癌） ０．７２ｎｇ／ｍｌ ＭＫＮ２８（ヒト胃癌） ０．７５ｎｇ／ｍｌ 結果に示されるように、ＱＭ１６−Ａは各種腫瘍細胞に
対して極めて低濃度でその増殖を抑制した。 （２）ｉｎ ｖｉｖｏ 抗腫瘍活性 ＱＭ１６−Ａは腫瘍細胞を接種したマウスに対して延命
効果を示した。マウス白血病細胞Ｐ３８８を１ｘ１０6
個を腹腔内に接種したＣＤＦ1 マウスの腹腔内にＱＭ１
６−Ａを１、５、９日目に０．０３７ｍｇ／ｋｇずつ投
与すると、対照群に、対して１３１％の延命効果が認め
られた。 ２）医薬組成物／抗腫瘍剤 このように、本発明のＱＭ１６−Ａは悪性腫瘍に対して
抗腫瘍性を示す事が明らかにされた。従って、本発明化
合物は、医薬（もしくは医薬組成物）として、特に抗腫
瘍剤もしくは腫瘍治療剤として使用することができる。
抗腫瘍剤としての本発明化合物は、合目的的な任意の投
与経路、具体的には、動物の場合には腹腔内投与、皮下
投与、静脈または動脈への血管内投与および注射による
局所投与などの方法が、またヒトの場合は静脈内投与、
動脈内投与、注射による局所投与、腹腔、胸腔への投
与、経口投与、皮下投与、筋肉内投与、舌下投与、経皮
吸収、または直腸投与により投与することができる。本
発明化合物を薬剤として投与する場合は、投与方法、投
与目的によってきまる適当な剤型、具体的には、注射
剤、懸濁剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、軟膏
剤、クリーム剤等の形態で投与することができる。これ
らの製剤を製造するには、製薬上許容される担体あるい
は希釈剤等、具体的には溶剤、可溶化剤、等張化剤、保
存剤、抗酸化剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、安定剤等を
添加することができる。溶剤としては、例えば水、生理
食塩水等が、可溶化剤としては、例えばエタノール、ポ
リソルベート剤が、賦形剤としては、例えば乳糖、デン
プン、結晶セルロース、マンニトール、マルトース、リ
ン酸水素カルシウム、軽質無水ケイ酸、炭酸カルシウム
等が、結合剤としては、例えばデンプン、ポリビニルピ
ロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロース、アラビアゴム等
が、崩壊剤としては、例えばデンプン、カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム等が、滑沢剤としては、例えば
ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油等が、安定
剤としては、例えば乳糖、マンニトール、マルトース、
ポリソルベート類、マクロゴール類、ポリオキシエチレ
ン硬化ヒマシ油等があげられる。また、必要に応じて、
グリセリン、ジメチルアセトアミド、７０％乳酸ナトリ
ウム、界面活性剤、塩基性物質（例えば、エチレンジア
ミン、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、アルギニ
ン、メグルミン、トリスアミノメタン）を添加すること
もできる。これらの成分を用いて、注射剤、錠剤、顆粒
剤、カプセル剤等の剤型に製造することができる。本発
明化合物の投与量は、動物実験の結果および種々の状況
を勘案して、連続的または間欠的に投与したときに総投
与量が一定量を越えないように定められる。具体的な投
与量は、投与方法、患者または被処理動物の状況、例え
ば年齢、体重、性別、感受性、食事（食餌）投与時間、
併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて変化
することは言うまでもなく、また一定の条件のもとにお
ける適量と投与回数は、上記指針をもとにして専門医の
適量決定試験によって決定されなければならない。具体
的には、成人１日あたり０．０１〜５００ｍｇ程度、好
ましくは０．１〜１００ｍｇ程度である。
物ＱＭ１６−Ａおよびその付加塩は、抗腫瘍活性を有す
るという点で有用である。 １）生物活性 （１）ｉｎ ｖｉｔｒｏ 抗腫瘍活性 各種腫瘍細胞に対するＱＭ１６−Ａの増殖抑制作用を検
討した。平底９６穴マイクロプレートを用い、培地で被
試験物質を順次に段階希釈し、５ｘ１０3 ／ウエルの細
胞を加え、５％ＣＯ2 インキュベーター中、３７゜Ｃで
２〜３日間培養後、細胞数をＭＴＴ法でカウントした。
細胞数がコントロールの５０％に減少した濃度をＩＣ50
（ｎｇ／ｍｌ）とした。培地は、ＲＰＭＩ １６４０に
牛胎児血清（１０％）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍ
ｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、２ー
メルカプトエタノール（５．０ｘ１０-5Ｍ）を加えたも
のを使用した。被試験物質は水に難溶なので、ＤＭＳＯ
に溶解後、培地で希釈した。 結果：ＩＣ50 Ｐ３８８（マウス白血病） ０．０８ｎｇ／ｍｌ Ｋ５６２（ヒト白血病） ０．８６ｎｇ／ｍｌ Ａ４３１（ヒト上皮癌） ０．７２ｎｇ／ｍｌ ＭＫＮ２８（ヒト胃癌） ０．７５ｎｇ／ｍｌ 結果に示されるように、ＱＭ１６−Ａは各種腫瘍細胞に
対して極めて低濃度でその増殖を抑制した。 （２）ｉｎ ｖｉｖｏ 抗腫瘍活性 ＱＭ１６−Ａは腫瘍細胞を接種したマウスに対して延命
効果を示した。マウス白血病細胞Ｐ３８８を１ｘ１０6
個を腹腔内に接種したＣＤＦ1 マウスの腹腔内にＱＭ１
６−Ａを１、５、９日目に０．０３７ｍｇ／ｋｇずつ投
与すると、対照群に、対して１３１％の延命効果が認め
られた。 ２）医薬組成物／抗腫瘍剤 このように、本発明のＱＭ１６−Ａは悪性腫瘍に対して
抗腫瘍性を示す事が明らかにされた。従って、本発明化
合物は、医薬（もしくは医薬組成物）として、特に抗腫
瘍剤もしくは腫瘍治療剤として使用することができる。
抗腫瘍剤としての本発明化合物は、合目的的な任意の投
与経路、具体的には、動物の場合には腹腔内投与、皮下
投与、静脈または動脈への血管内投与および注射による
局所投与などの方法が、またヒトの場合は静脈内投与、
動脈内投与、注射による局所投与、腹腔、胸腔への投
与、経口投与、皮下投与、筋肉内投与、舌下投与、経皮
吸収、または直腸投与により投与することができる。本
発明化合物を薬剤として投与する場合は、投与方法、投
与目的によってきまる適当な剤型、具体的には、注射
剤、懸濁剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、軟膏
剤、クリーム剤等の形態で投与することができる。これ
らの製剤を製造するには、製薬上許容される担体あるい
は希釈剤等、具体的には溶剤、可溶化剤、等張化剤、保
存剤、抗酸化剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、安定剤等を
添加することができる。溶剤としては、例えば水、生理
食塩水等が、可溶化剤としては、例えばエタノール、ポ
リソルベート剤が、賦形剤としては、例えば乳糖、デン
プン、結晶セルロース、マンニトール、マルトース、リ
ン酸水素カルシウム、軽質無水ケイ酸、炭酸カルシウム
等が、結合剤としては、例えばデンプン、ポリビニルピ
ロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロース、アラビアゴム等
が、崩壊剤としては、例えばデンプン、カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム等が、滑沢剤としては、例えば
ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油等が、安定
剤としては、例えば乳糖、マンニトール、マルトース、
ポリソルベート類、マクロゴール類、ポリオキシエチレ
ン硬化ヒマシ油等があげられる。また、必要に応じて、
グリセリン、ジメチルアセトアミド、７０％乳酸ナトリ
ウム、界面活性剤、塩基性物質（例えば、エチレンジア
ミン、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、アルギニ
ン、メグルミン、トリスアミノメタン）を添加すること
もできる。これらの成分を用いて、注射剤、錠剤、顆粒
剤、カプセル剤等の剤型に製造することができる。本発
明化合物の投与量は、動物実験の結果および種々の状況
を勘案して、連続的または間欠的に投与したときに総投
与量が一定量を越えないように定められる。具体的な投
与量は、投与方法、患者または被処理動物の状況、例え
ば年齢、体重、性別、感受性、食事（食餌）投与時間、
併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて変化
することは言うまでもなく、また一定の条件のもとにお
ける適量と投与回数は、上記指針をもとにして専門医の
適量決定試験によって決定されなければならない。具体
的には、成人１日あたり０．０１〜５００ｍｇ程度、好
ましくは０．１〜１００ｍｇ程度である。
【００１１】〔実験例〕
【実施例】以下は、本発明化合物ＱＭ１６−Ａの製造例
を示すものであるが、本発明はこれによって限定される
ものではない。 ［ＱＭ１６−Ａの製造］ （１）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解して調製したものである。 ポテトスターチ １０．０ｇ グルコース １０．０ｇ グリセロール １０．０ｇ ポリペプトン ５．０ｇ 酵母エキス ２．０ｇ コーンステイ ープリカー １０．０ｇ ＮａＣｌ １．０ｇ炭酸カルシウム ３．２ｇ ｐＨ ７．４ 上記培地１００ｍｌを５００ｍｌ容のイボ付き三角フラ
スコヘ分注したものに殺菌後、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ sp. ＱＭ１６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５３６３）をス
ラントより各々のフラスコヘ１白金耳ずつ接種し、２７
℃にて５日間、２００ｒｐｍで振盪培養した。 （２）ＱＭ１６−Ａの採取 上記の条件で培養後、培養液（１リットル）をブフナー
濾過し、菌体を得た。この菌体を０．５リットルのアセ
トンで抽出した。抽出液を減圧下０．２リットルに濃縮
後、培養濾液と合一し等量の酢酸エチルで２回抽出し
た。抽出液に無水硫酸ナトリウムを添加して脱水し、濾
過した後、濾液を濃縮し、１５０ｍｇの濃縮物を得た。
この濃縮物をクロロホルム−メタノ−ル（３０：１）で
平衡化したシリカゲル（和光純薬製「ワコーゲル Ｃ−
２００］）のカラム（３ｃｍφ×３０ｃｍ）に吸着さ
せ、同一組成の溶液各３００ｍｌで展開した。ＱＭ１６
−Ａを含む画分を集めて粗ＱＭ１６−Ａを２５ｍｇ得
た。この粗ＱＭ１６−ＡをＤＭＳＯに溶解し、ＹＭＣ
ＯＤＳ−ＡＭカラム（（２ｃｍφ ｘ ２５ｃｍ）、７
０％アセトニトリルにて展開）を用いてＨＰＬＣ分取を
行なうことにより、純粋なＱＭ１６−Ａを３．５ｍｇ得
た。
を示すものであるが、本発明はこれによって限定される
ものではない。 ［ＱＭ１６−Ａの製造］ （１）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解して調製したものである。 ポテトスターチ １０．０ｇ グルコース １０．０ｇ グリセロール １０．０ｇ ポリペプトン ５．０ｇ 酵母エキス ２．０ｇ コーンステイ ープリカー １０．０ｇ ＮａＣｌ １．０ｇ炭酸カルシウム ３．２ｇ ｐＨ ７．４ 上記培地１００ｍｌを５００ｍｌ容のイボ付き三角フラ
スコヘ分注したものに殺菌後、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ sp. ＱＭ１６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５３６３）をス
ラントより各々のフラスコヘ１白金耳ずつ接種し、２７
℃にて５日間、２００ｒｐｍで振盪培養した。 （２）ＱＭ１６−Ａの採取 上記の条件で培養後、培養液（１リットル）をブフナー
濾過し、菌体を得た。この菌体を０．５リットルのアセ
トンで抽出した。抽出液を減圧下０．２リットルに濃縮
後、培養濾液と合一し等量の酢酸エチルで２回抽出し
た。抽出液に無水硫酸ナトリウムを添加して脱水し、濾
過した後、濾液を濃縮し、１５０ｍｇの濃縮物を得た。
この濃縮物をクロロホルム−メタノ−ル（３０：１）で
平衡化したシリカゲル（和光純薬製「ワコーゲル Ｃ−
２００］）のカラム（３ｃｍφ×３０ｃｍ）に吸着さ
せ、同一組成の溶液各３００ｍｌで展開した。ＱＭ１６
−Ａを含む画分を集めて粗ＱＭ１６−Ａを２５ｍｇ得
た。この粗ＱＭ１６−ＡをＤＭＳＯに溶解し、ＹＭＣ
ＯＤＳ−ＡＭカラム（（２ｃｍφ ｘ ２５ｃｍ）、７
０％アセトニトリルにて展開）を用いてＨＰＬＣ分取を
行なうことにより、純粋なＱＭ１６−Ａを３．５ｍｇ得
た。
【００１２】
【発明の効果】本発明によるＱＭ１６−Ａおよびその付
加塩は、シクロプロピルピロロインドール構造を有する
新規物質であって種々の腫瘍細胞に対して強い増殖抑制
作用を示し、医薬（もしくは医薬組成物）として、特に
抗腫瘍剤もしくは腫瘍治療剤として有用である。
加塩は、シクロプロピルピロロインドール構造を有する
新規物質であって種々の腫瘍細胞に対して強い増殖抑制
作用を示し、医薬（もしくは医薬組成物）として、特に
抗腫瘍剤もしくは腫瘍治療剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係る新規物質ＱＭ１６−Ａの紫外部吸
収スペクトル（メタノール中）を示す。
収スペクトル（メタノール中）を示す。
【図２】本発明に係る新規物質ＱＭ１６−Ａの赤外部吸
収スペクトル（ＫＢｒディスク法）を示す。
収スペクトル（ＫＢｒディスク法）を示す。
【図３】本発明に係る新規物質ＱＭ１６−Ａのプロトン
核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ、重ＤＭＳＯ中）
を示す。
核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ、重ＤＭＳＯ中）
を示す。
【図４】本発明に係る新規物質ＱＭ１６−Ａの13Ｃ核磁
気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ、重ＤＭＳＯ中）を示
す。
気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ、重ＤＭＳＯ中）を示
す。
Claims (4)
- 【請求項１】次式（１）で示される化合物ＱＭ１６−Ａ
またはその付加塩。 【化１】 - 【請求項２】請求項１に記載の化合物ＱＭ１６−Ａまた
はその付加塩を有効成分として含有してなる医薬組成
物。 - 【請求項３】請求項１に記載の化合物ＱＭ１６−Ａまた
はその付加塩を有効成分として含有してなる抗腫瘍剤。 - 【請求項４】ストレプトミセス属に属し、化合物ＱＭ１
６−Ａの生産能を有する菌株を適当な培地で好気的に培
養し、その培養物よりＱＭ１６−Ａを得ることを特徴と
する、次式（１）で示される化合物ＱＭ１６−Ａの製造
法。 【化２】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1677396A JPH09208585A (ja) | 1996-02-01 | 1996-02-01 | 新規生理活性物質ｑｍ１６−ａ、その使用および製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1677396A JPH09208585A (ja) | 1996-02-01 | 1996-02-01 | 新規生理活性物質ｑｍ１６−ａ、その使用および製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09208585A true JPH09208585A (ja) | 1997-08-12 |
Family
ID=11925537
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1677396A Pending JPH09208585A (ja) | 1996-02-01 | 1996-02-01 | 新規生理活性物質ｑｍ１６−ａ、その使用および製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09208585A (ja) |
-
1996
- 1996-02-01 JP JP1677396A patent/JPH09208585A/ja active Pending
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