JPH07196686A - 化合物ｔａｎ−１７４６類、その製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】腫瘍治療剤として有用な化合物を提供する。 【構成】一般式 【化１】 （式中、Ｒはエステル化されていてもよい水酸基を示
す）で表される化合物またはその塩。 【効果】本発明の化合物またはその塩は、優れた抗腫瘍
作用を示し、ヒトあるいは哺乳動物の悪性腫瘍の治療に
用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗腫瘍剤として有用な新
規環状ペプチド化合物ＴＡＮ−１７４６（以下、ＴＡＮ
−１７４６と略称することもある）に関する。

【０００２】

【従来の技術】環状ペプチドとして、マウスの肥満細胞
腫の増殖抑制作用を有するクラミドシン（Chlamydoci
n）〔ヘルベチカ・キミカ・アクタ（Helvetica Chimica
Acta）、第５７巻、５３３頁（１９７４年）、ヨーロ
ピアン・ジャーナル・オブ・キャンサー（European Jou
rnal of Cancer）、第１０巻、８０１頁（１９７４年）
等〕、抗腫瘍作用を示すトラポキシン（Trapoxin）Ａお
よびＢ〔ザ・ジャーナル・オブ・アンチビオチクス（Th
e Journal of Antibiotics）、第４３巻、１５２４頁
（１９９０年）〕等が知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】悪性腫瘍による死亡例
は年々増加の一途をたどっており、有効な新しい治療法
の開発が切望されている。中でも、化学療法の分野で
は、現在使用されている抗腫瘍剤の効果が充分なものと
は言えず、悪性腫瘍を完全に抑制できる新しい抗腫瘍剤
の開発が求められている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる現
状に鑑みて、新たな観点から研究を重ねた結果、土壌か
ら分離された多数の微生物中、ある種の微生物が新規物
質を産生すること、該微生物がバーティシリウム属に属
すること、該微生物を適宜の培地に培養することによっ
て、ヒトおよび動物細胞由来の癌細胞の増殖を阻害し、
ｒａｓガン遺伝子で形質転換したマウスＮＩＨ３Ｔ３細
胞の形態を正常細胞様に復帰する活性化合物を培地中に
蓄積しうることを知り、活性化合物を単離し、これをＴ
ＡＮ−１７４６と称することにした。本発明者らは、こ
の化合物の物理化学的および生物学的性質から新規物質
であることを確かめ、さらに検討を加えた結果、本発明
を完成した。本発明は、（１）一般式

【化２】 （式中、Ｒはアシル化されていてもよい水酸基を示す）
で表される化合物またはその塩、（２）Ｒが水酸基であ
る上記（１）記載の化合物ＴＡＮ−１７４６、（３）バ
ーティシリウム属に属し、化合物ＴＡＮ−１７４６を生
産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に
化合物ＴＡＮ−１７４６を生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする化合物ＴＡＮ−１７４６の製造
法、（４）上記（１）記載の化合物またはその塩を含有
してなる抗腫瘍剤および（５）化合物がＴＡＮ−１７４
６である上記（４）記載の抗腫瘍剤を提供するものであ
る。

【０００５】上記一般式（I）に関し、Ｒで表されるア
シル化されていてもよい水酸基におけるアシル基として
は、例えば有機カルボン酸から誘導されるアシル基等が
挙げられる。該アシル基としては、例えばホルミル基、
アルカノイル（アルキルカルボニル）基、アリールカル
ボニル基、アラルキルカルボニル基、アルキルオキシカ
ルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アラルキル
オキシカルボニル基、複素環カルボニル基などが挙げら
れる。上記アシル基は、好ましくは、アルカノイル基、
アリールカルボニル基およびアルキルオキシカルボニル
基である。アルカノイル（アルキルカルボニル）基およ
びアルキルオキシカルボニル基におけるアルキル基とし
ては、例えば炭素数１ないし６の直鎖状もしくは分枝状
のアルキル基等が挙げられる。このようなアルキル基と
しては例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピ
ル、ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル等が挙げ
られる。アリールカルボニル基およびアリールオキシカ
ルボニル基におけるアリール基としては、例えば炭素数
６ないし１４のアリール等が挙げられる。このようなア
リール基としては、例えばフェニル、トリル、キシリ
ル、ビフェニル、１−または２−ナフチル、１−、２−
または９−アントリル、１−、２−、３−、４−または
９−フェナントリル、１−、２−、４−、５−または６
−アズレニル等が挙げられる。アラルキルカルボニル基
およびアラルキルオキシカルボニル基におけるアラルキ
ル基としては、例えば炭素数７ないし１３個のアラルキ
ル基等が挙げられる。このようなアラルキル基として
は、例えばベンジル、１−フェニルエチル、２−フェニ
ルエチル、１−フェニルプロピル、２−フェニルプロピ
ル、３−フェニルプロピル、ベンズヒドリル、α−また
はβ−ナフチルメチル等、さらにｏ−、ｍ−またはｐ−
メチルベンジル、ｏ−、ｍ−またはｐ−エチルベンジ
ル、ｏ−、ｍ−またはｐ−イソプロピルベンジル、ｏ
−、ｍ−またはｐ−tert−ブチルベンジル、２,３−、
２,４−、２,５−、２,６−、３,４−または３,５−ジ
メチルベンジル、２,３,４−、３,４,５−または２,４,
６−トリメチルベンジル、５−イソプロピル−２−メチ
ルベンジル、２−イソプロピル−５−メチルベンジル、
２−メチル−５−tert−ブチルベンジル、２,４−、２,
５−または３,５−ジイソプロピルベンジル、３,５−ジ
−tert−ブチルベンジル、１−（２−メチルフェニル）
エチル、１−（３−メチルフェニル）エチル、１−（４
−メチルフェニル）エチル、１−（２−イソプロピルフ
ェニル）エチル、１−（３−イソプロピルフェニル）エ
チル、１−（４−イソプロピルフェニル）エチル、１−
（２−tert−ブチルフェニル）エチル、１−（４−tert
−ブチルフェニル）エチル、１−（２−イソプロピル−
４−メチルフェニル）エチル、１−（４−イソプロピル
−２−メチルフェニル）エチル、１−（２，４−ジメチ
ルフェニル）エチル、１−（２，５−ジメチルフェニ
ル）エチル、１−（３，５−ジメチルフェニル）エチ
ル、１−（３，５−ジ−tert−ブチルフェニル）エチル
等の炭素数１〜５のアルキル基を有する置換アラルキル
基等が挙げられる。

【０００６】複素環カルボニル基における複素環基とし
ては、窒素原子、酸素原子および／または硫黄原子のヘ
テロ原子を１〜４個含む５または６員の複素環基があげ
られる。このような複素環基としては、例えばピロリジ
ニル、ピロリニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリ
ル、フリル、チエニル、オキサゾリル、イソオキサゾリ
ル、イソチアゾリル、チアゾリル、ピペリジノ、ピペリ
ジニル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペラ
ジニル、ピリミジニル、インドリル、１，２，３−トリ
アゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，３，４−ト
リアゾリル、テトラゾリル、１，３−ジオキソラニル、
モルホリノ、モルホリニル、２−オキソピロリジニルな
どが挙げられる。さらに該複素環基は５又は６員環
（例、ベンゼン、ピリジン、シクロヘキサンなど）と縮
合して２環性縮合環基（例、８−キノリル、８−プリニ
ルなど）を形成していてもよい。上記アルキル基、アリ
ール基、アラルキル基、複素環基は、適当な置換基
（例、ヒドロキシ基、カルボキシル基、Ｃ_1-6アルキル
で置換されていてもよいアミノ基など）で１または２個
置換されていてもよい。前記のアシル基としては、さら
に好ましくは炭素数２〜７のアシル基（例、アセチル、
プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イ
ソバレリル、ピバロイル、ベンゾイル、メトキシカルボ
ニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イ
ソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、tert−
ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニルなど）が
挙げられる。

【０００７】上記一般式（I）中、立体異性体が存在す
るが、それらの各異性体も本発明に含まれる。また一般
式（I）で表される化合物は、塩を形成していてもよ
い。例えば分子中にアミノ基等の塩基性基を有する場
合、酸付加塩を形成し、またカルボキシル基等の酸性基
を有する場合、塩基塩を形成してもよい。本発明のＴＡ
Ｎ−１７４６は、ＴＡＮ−１７４６を生産する能力を有
する微生物を培地に培養し、培養物中に該化合物を生
成、蓄積せしめ、これを採取することにより製造され
る。本発明のＴＡＮ−１７４６の製造に用いることがで
きる微生物としてはバーティシリウム属に属し、ＴＡＮ
−１７４６を生産する能力を有する微生物であればいず
れのものでもよい。例えば、福井県で採取した土壌より
分離された糸状菌ＦＬ−３６５８１株があげられる。

【０００８】ＦＬ−３６５８１株の菌学的性状を以下に
示す。 （ａ）各培地における生育状態 １）麦芽エキス寒天培地 生育は良好で、２４℃２週間後のコロニーの直径は、６
０〜７０ｍｍであった。表面は盛り上がった羊毛状の菌
糸体よりなり、中央部は隆起し、周辺部は薄くなってい
る。外縁は規則正しく縁取られている。気生菌糸の発達
は良好で、厚膜胞子が多数観察された。中央部から周辺
部にかけて灰白色から白色を呈する。裏面の中央部から
周辺部にかけては暗黄褐色から黄褐色を呈する。可溶性
色素の生成は認められない。 ２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地 生育は中程度で、２４℃２週間後のコロニーの直径は、
３５〜４５ｍｍであった。表面は盛り上がった羊毛状の
菌糸体よりなり、周辺部にかけてやや薄くなっている。
外縁は規則正しく縁取られている。気生菌糸の発達、分
生子の形成は良好であり、厚膜胞子も多数観察される。
中央部から周辺部にかけて灰白色から白色を呈する。裏
面の中央部は暗黄褐色を呈し、中間部から周辺部にかけ
ては黄褐色から黄色を呈する。可溶性色素の生成は認め
られない。ｐＨ３〜ｐＨ１２のいずれでも生育は良好、
生育温度範囲は１０℃〜３０℃である。２３℃〜２７℃
が至適温度である。３７℃では生育しない。 ３）ツァペック寒天培地 生育は中程度で、２４℃２週間後のコロニーの直径は、
５５〜６０ｍｍであった。表面は平坦でビロード状の菌
糸体よりなり、放射状に薄くひろがる。外縁は規則正し
く縁取られている。気生菌糸の発達は良好である。中央
部から周辺部にかけては灰白色から白色を呈する。裏面
は象牙色ないし灰白色を呈する。可溶性色素の生成は認
められない。 ４）オートミール寒天培地 生育は良好で、２４℃２週間後のコロニーの直径は、５
０〜６０ｍｍであった。表面は盛り上がった羊毛状の菌
糸体よりなり、中央部はやや陥没し、周辺部は薄くなっ
ている。外縁は規則正しく縁取られている。気生菌糸の
発達、分生子・厚膜胞子の形成は良好である。中央部は
白色を呈し中間部から周辺部にかけて灰白色を呈し、水
滴が認められる。裏面中央部は黄色を呈し、中間部から
周辺部にかけて象牙色を呈する。可溶性色素の生成は認
められない。

【０００９】（ｂ）形態的特徴 分 生 子 柄 ：明瞭でない。 フィアライド：葡ふく菌糸または気中菌糸から直接に、
単生あるいは２〜４本輪生状に生じる。細長く、先端に
向かって徐々に細くなる。長さ１０〜１５μｍ。幅 １.
０〜１.５μｍ（基部） ０.４〜０.６μｍ（先端部） 分 生 子 ：フィアロ型分生子。フィアライド先端か
ら１個形成される。楕円形〜長楕円形。 単細胞で無
色、表面は滑面。２．５〜３．０×１．３〜１．５μｍ 石垣状厚膜胞子（Dictyochlamydospore）：気中菌糸よ
り分枝した短い柄の上に、多数の厚膜細胞の集合からな
る石垣状厚膜胞子を生じ、多数観察される。全長の大き
さは １７〜２０×１３〜１７μｍであった。

【００１０】以上の結果から本菌株の諸性質は、以下の
ようにまとめられる。すなわち、葡ふく菌糸または気中
菌糸から直接単生あるいは輪生状にフィアライドを形成
するが、分生子柄は明瞭でない。フィアライドは細長く
先端に向かって徐々に細まる。分生子形成細胞はフィア
ロ型で、フィアライドの先端に個々に形成される。一定
の形をした石垣状の厚膜胞子を形成する。以上の諸性質
を、Dr.Walter Gams 著「Cephalosporium-artige Schim
melpilze」( Gustav Fischer Verlag・Stuttgart・1971 )
記載の同定検索表で照合すると、バーティシリウム属
（Verticillium）に属する事が明らかであり、更に詳し
く種の検索をすると、本菌株はバーティシリウム クラ
ミドスポリウム（Verticillium chlamydosporium）群に
属すると判断された。したがって、本菌株をバーティシ
リウム クラミドスポリウム（Verticillium chlamydos
porium）FL-36581と同定した。ＦＬ−３６５８１株は、
平成５年１２月２１日財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）
に受託番号ＩＦＯ ３２６０２として寄託され、また、
平成５年１２月２７日に通商産業省工業技術院生命工学
工業技術研究所（ＮＩＢＨ）に受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−
１４０３８として寄託されている。

【００１１】バーティシリウム属に属するＴＡＮ−１７
４６の生産菌は、他の糸状菌の場合と同様に、たとえば
紫外線、エックス線、放射線などの照射、単胞子分離、
種々の変異処理、その他の常用手段で変異させることが
出来、このような変異株あるいは自然に得られる突然変
異株であっても、上記した分類学的性状との比較におい
て実質的に別種とするに足らず、しかも当該化合物を生
産する性質を有するものは、すべて本発明方法に利用し
得る。ＴＡＮ−１７４６生産菌の培養に用いられる培地
は該菌が利用し得る栄養源を含むものなら、液状でも固
状でもよいが、大量に処理するときは液体培地を用いる
のが適当である。培地には、当該生産菌が同化し得る炭
素源、窒素源、無機物質、微量栄養源等が適宜配合され
る。炭素源としては、たとえばグルコース、ラクトー
ス、シュークロース、マルトース、デキストリン、スタ
ーチ、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、油脂
類（例、大豆油、ラード油、チキン油など）、ｎ−パラ
フィン等が用いられる。窒素源としては、たとえば肉エ
キス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スティ
ープ・リカー、ペプトン、綿実粉、廃糖蜜、尿素、アン
モニウム塩類（例、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムなど）等が用
いられる。さらに、ナトリウム、カリウム、カルシウ
ム、マグネシウムなどを含む塩類、鉄、マンガン、亜
鉛、コバルト、ニッケルなどの金属塩類、リン酸、ホウ
酸などの塩類や酢酸、プロピオン酸などの有機酸の塩類
が適宜用いられる。その他、アミノ酸類（例、グルタミ
ン酸、アスパラギン酸、アラニン、リジン、メチオニ
ン、プロリンなど）、ペプチド類（例、ジペプチド、ト
リペプチドなど）、ビタミン類（例、Ｂ₁、Ｂ₂、ニコチ
ン酸、Ｂ₁₂、Ｃなど）、核酸類（例、プリン、ピリミジ
ン、その誘導体など）等を含有させてもよい。無機酸、
有機酸、アルカリ類、緩衝剤等を加えて培地のpＨを調
節する、あるいは消泡の目的で油脂類、界面活性剤等の
適量を添加しても差し支えない。例えば液体培養をする
場合、培地のpＨは中性付近、特にpＨ約５ないし８が好
ましい。培養温度は約２０℃ないし３０℃が好ましい。
培養時間は約４８時間ないし１６８時間が好ましい。

【００１２】培養物から目的とする化合物ＴＡＮ−１７
４６を採取する方法を以下に述べる。該化合物は中性脂
溶性物質であるため、この性質を利用する一般的手段を
採用すればよい。また、ＴＡＮ−１７４６は主として培
養濾液中に含まれるため、例えば次のような方法が採用
される。まず培養液に濾過補助剤を加えて、濾過あるい
は遠心分離によって菌体を除去する。得られた濾液をp
Ｈ約１．５ないし１０、好ましくはpＨ約３ないし８に
調整後、水と混和しない有機溶媒、例えばジクロロメタ
ン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、酢酸エチ
ル等のエステル類、メチルイソブチルケトン等のケトン
類あるいはブタノール等のアルコール類などを加え、Ｔ
ＡＮ−１７４６を抽出する。得られた有機溶媒層を希ア
ルカリ（例、水酸化カリウム，水酸化ナトリウム等のア
ルカリ金属水酸化物、炭酸水素ナトリウム，炭酸ナトリ
ウム等のアルカリ金属炭酸水素塩またはアルカリ金属炭
酸塩等）水、希酸（例、塩酸、クエン酸等）水、水等で
洗浄後、有機溶媒層を濃縮するとＴＡＮ−１７４６を含
有する粗物質が得られる。粗物質をさらに精製し、純粋
なＴＡＮ−１７４６を得るには周知の種々のクロマトグ
ラフィー法が有利に用いられる。担体としては例えばシ
リカゲル、結晶セルロース、吸着性樹脂（例、ダイヤイ
オンＨＰ−２０（三菱化成社製），セファデックスＬＨ
−２０（ファルマシア社製、スウエーデン）など）が用
いられ、これらは通常カラムクロマトグラフィー法で行
なわれる。カラムから活性物質を溶出する方法は担体の
種類により適宜選択されるが、適当な有機溶媒、たとえ
ばクロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水
素類、トルエン等の芳香族炭化水素類、酢酸エチル等の
エステル類、アセトン等のケトン類、メタノール等のア
ルコール類、ヘキサン等の炭化水素類などの単独あるい
はこれらの混合溶媒が、または、水と混和し得る有機溶
媒と水溶液たとえば水、前述の希アルカリ水、希酸性
水、緩衝液などとの混合溶媒が用いられる。さらに、化
合物を最終的に精製する場合に、分取用高速液体クロマ
トグラフィー（ＨＰＬＣ）法も有利に用いられる。担体
としては、例えばオクタデシルシラン（ＯＤＳ）系およ
びシリカゲル系のもの等が有利に用いられる。例えばＯ
ＤＳを使用する場合、ＹＭＣゲル（山村化学研究所製）
またはＴＳＫゲル（東洋曹達工業社製）などが用いら
れ、移動相としては、例えばメタノール等のアルコール
類またはアセトニトリル等のニトリル類と水または塩類
含有水溶液の混合物が有利に用いられる。

【００１３】以下に、後述する実施例１で得られたＴＡ
Ｎ−１７４６の物理化学的性状を示す。 (１)外観：白色粉末 (２)比旋光度：−６８℃ （c 0.50、メタノール、２２
℃） (３)分子量：５２８ Ｍ⁺ （ＥＩ−マススペクトル） (４)元素分析値：（％） 実測値；C, 63.23; H, 7.76; N, 10.61 計算値；C, 63.62; H, 7.63; N, 10.60 (５)分子式：Ｃ₂₈Ｈ₄₀Ｎ₄Ｏ₆ (６)紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中， 極大値：２３５nm（ε３，９００） (７)赤外線吸収(ＩＲ)スペクトル：ＫＢr錠剤中,主な吸
収を示す(波数，cm-¹)。 〔図１〕3460, 3310, 2980, 2940, 2860, 1680, 1630,
1530, 1430 (８)¹³Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５MHz,
重クロロホルム中，δppm 〔図２〕212.4 (s), 175.6 (s), 174.3 (s), 172.9
(s), 171.9 (s), 137.0 (s),129.1 (d) x2, 128.6 (d)
x2, 126.7 (d), 72.6 (d), 58.8 (s), 57.8 (d),54.3
(d), 53.4 (d), 47.0 (t), 37.3 (t), 35.8 (t), 28.8
(t), 28.8(t),26.5 (q), 25.2 (t), 25.0 (t), 24.8
(t), 23.6 (q), 23.3 (t), 19.9 (q) （ただし、ｓはシングレット，ｄはダブレット，ｔはト
リプレット，ｑはカルテットをそれぞれ示す。） (９)呈色反応： 陽性；リンモリブデン酸、過マンガン酸カリウム反応 陰性；坂口、エールリッヒ反応 (10)高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）： 担体；YMC-Pack A-312, ODS 移動相；４０％アセトニトリル／０．０１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ６．３） 流速；２ｍｌ／分 検出法；２１４nm 溶出時間；５．７分 (11)薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）： 担体；シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製、ドイツ） 展開溶媒；クロロホルム：メタノール（４９：１） Ｒf値；０．３０ (12)性質：中性脂溶性物質

【００１４】以上のデータおよびＮＭＲスペクトルの詳
細な検討により、ＴＡＮ−１７４６の構造は下式に示す
とおりであることが判明した。

【化３】 一般式（I）で表される化合物は、例えば、ＴＡＮ−１
７４６を、アシル化反応に付すことにより製造すること
ができる。

【００１５】本反応に用いられるアシル化剤としては、
例えば前記のアシル基を誘導する有機カルボン酸または
その反応性誘導体が用いられる。カルボン酸の反応性誘
導体としては、例えば常法に従って製造することができ
る酸ハライド、酸無水物、活性アミド、活性エステル、
活性チオエステル等が用いられる。このような反応性誘
導体を具体的に述べると次のとおりである。 １）酸ハライド：例えば酸クロリド、酸ブロミド等が用
いられる。 ２）酸無水物：例えば対称型酸無水物、モノＣ_1-6アル
キル炭酸混合無水物、脂肪族カルボン酸（例、酢酸、ピ
バル酸、吉草酸、イソ吉草酸、トリクロル酢酸等）から
なる混合酸無水物、芳香族カルボン酸（例、安息香酸
等）からなる混合酸無水物等が用いられる。対称型酸無
水物としては、例えば無水酢酸、無水プロピオン酸、無
水ブタン酸等のＣ_1-6アルキルカルボン酸無水物などが
あげられる。 ３）活性アミド：例えばピラゾール、イミダゾール、４
−置換イミダゾール、ジメチルピラゾール、ベンゾトリ
アゾール等とのアミドが用いられる。 ４）活性エステル：例えばメトキシメチルエステル、１
−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル、Ｎ−ヒドロ
キシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド
エステル、４−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニ
トロフェニルエステル、トリクロロフェニルエステル、
プロパルギルエステル、ペンタクロロフェニルエステル
等のエステルのほか、１−ヒドロキシ−１Ｈ−２−ピリ
ドン、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシ
フタルイミド等とのエステル等が用いられる。 ５）活性チオエステル：例えば２−ピリジルチオール、
２−ベンゾチアゾリルチオールなどの複素環チオール等
とのチオエステル等が用いられる。以上のような各種反
応性誘導体は、カルボン酸の種類によって適宜選択され
る。

【００１６】前記のアシル化剤は、原料化合物ＴＡＮ−
１７４６ １モルに対し、例えば約１モル以上使用で
き、約１ないし３０モル程度が好ましい。本反応は反応
を阻害しない溶媒中、あるいは溶媒の非存在下に行われ
る。反応を阻害しない溶媒としては、例えばアセトン等
のケトン類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、
ジオキサン等のエーテル類；酢酸、プロピオン酸等のカ
ルボン酸類；アセトニトリル等のニトリル類；ベンゼ
ン、トルエン、キシレン等の炭化水素類；ジクロロメタ
ン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン等のハロゲ
ン化炭化水素類；酢酸エチル等のエステル類；ジメチル
ホルムアミド、ジメチルアセトアミド等のアミド類；ト
リエチルアミン、トリブチルアミン、Ｎ−メチルモルホ
リン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリ
ン等の三級アミン；ピリジン、ピコリン、ルチジン、コ
リジン等のピリジン類等が用いられる。これらは一種の
みで、または二種以上適当な割合で混合して用いてもよ
い。

【００１７】本アシル化反応は、原料化合物のアシル化
を促進しうる触媒を用いることによりさらに有利に進行
する。該触媒としては、例えば塩基触媒、酸触媒が用い
られる。塩基触媒としては、例えば三級アミン〔例、ト
リエチルアミンのような脂肪族三級アミン、ピリジン、
α−、β−またはγ−ピコリン、２，６−ルチジン、４
−ジメチルアミノピリジン、４−（１−ピロリジニル）
ピリジン、ジメチルアニリン、ジエチルアニリンのよう
な芳香族三級アミン等〕、ハロゲン化アルカリ金属
（例、フッ化カリウム、無水ヨウ化リチウム等）、有機
酸塩（例、酢酸ナトリウム）などが用いられる。酸触媒
としては、例えばルイス酸（例、無水塩化亜鉛、無水塩
化アルミニウム（ＡlＣl₃）、四塩化チタン（ＴiＣ
l₄）、四塩化錫（ＳnＣl₄）、五塩化アンチモン、塩化
コバルト、塩化第二銅、三フッ化ホウ素エーテラート
等）、無機強酸（例、硫酸、過塩素酸、塩化水素、臭化
水素等）、有機強酸（例、ベンゼンスルホン酸、ｐ−ト
ルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢
酸、カンファースルホン酸等）、酸性イオン交換樹脂
（例、ポリスチレンスルホン酸等）などが用いられる。
上記の触媒としてはカンファースルホン酸、ピリジン、
４−ジメチルアミノピリジンなどが好ましい。触媒の使
用量は原料化合物のカルボン酸によるアシル化を促進し
得る触媒量程度でよく、通常原料化合物１モルに対して
約０．００１ないし１０モル、好ましくは約０．００１
ないし１モルである。反応温度は特に限定されないが、
通常約−３０ないし１００℃、好ましくは約１０ないし
５０℃である。反応時間は数分ないし数十時間程度（例
えば約５分ないし３０時間等）である。かくして得られ
る目的化合物（I）またはその塩は、自体公知の手段、
例えば濃縮、転溶、溶媒抽出、凍結乾燥、結晶化、再結
晶、分留、クロマトグラフィーなどにより単離精製する
ことができる。

【００１８】以下に、実施例１で得られたＴＡＮ−１７
４６の生物活性について述べる。 実験例１ ＴＡＮ−１７４６のマウスおよびヒト腫瘍細胞に対する
増殖阻害作用 腫瘍細胞として、Ｂ１６メラノーマ（melanoma)（財団
法人 がん研究振興財団リサーチ・リソース バンクよ
り入手）、Ｐ８１５マストサイトーマ（mastocytoma)
（アメリカン タイプ カルチャー コレクション〔Am
erican Type Culture Collection （ATCC）〕より入
手）、ＨeＬa−Ｓ３ エピテロイド・カルシノーマ（epi
theloid carcinoma)（財団法人 発酵研究所（ＩＦＯ）
より入手）、およびＧ３６１ マリグナント・メラノー
マ（malignant melanoma)（財団法人発酵研究所（ＩＦ
Ｏ）より入手）を使用した。５μＭ ２−メルカプトエ
タノール、２mＭ Ｌ−グルタミン、２０μg/mlゲンタ
ミシン（フロー・ラボラトリーズ社製、スコットラン
ド）、１０％（容量／容量）牛胎児血清〔ウイッタカー
・エム・エー・バイオプロダクツ社（以下ＭＡＢと略
記）製、米国〕および上記の各腫瘍細胞２×１０⁴／ml
（Ｂ１６のみ５×１０⁴／ml）ずつを含む各イーグルＭ
ＥＭ培地〔ＭＡＢ製；Ｐ−８１５とＥＬ−４の場合はＲ
ＰＭＩ １６４０培地（ＭＡＢ製）〕に、ＴＡＮ−１７
４６を適宜加え、３７℃、５％（容量／容量）炭酸ガス
下で３日間培養した後、ＭＴＴ還元法〔多田ら、ジャー
ナル・オブ・イムノロジカル・メソーズ（Journal of I
mmunological Methods）第９３巻、１５７頁、１９８６
年〕に従って各腫瘍細胞の増殖を測定した。各腫瘍細胞
に対するＴＡＮ−１７４６の５０％阻害濃度 (ng/ml)の
測定結果を〔表１〕に示す。

【００１９】

【表１】 〔表１〕に示したように、ＴＡＮ−１７４６は、各種の
腫瘍細胞に対して増殖抑制作用を示した。

【００２０】実験例２ ＴＡＮ−１７４６のマウスＮＩＨ３Ｔ３正常細胞および
ガン化ＮＩＨ３Ｔ３細胞に対する増殖阻害作用 マウスＮＩＨ３Ｔ３正常細胞（ＩＦＯより入手）および
活性型ｅｒｂＢ２〔ネイチャー（Nature）第３１９巻，
２２６頁（１９８６）およびネイチャー（Nature）第３
１９巻，２３０頁（１９８６）〕、ｓｒｃ〔ジャーナル
オブ バイロロジー（J. Virology）第３６巻，５０
頁（１９８０）〕またはＨａ−ｒａｓ〔セル（Cell）第
２９巻，１６１頁（１９８２）〕の各ガン遺伝子でそれ
ぞれ形質転換したマウスＮＩＨ３Ｔ３細胞を、２×１０
⁴／ウエル（ｒａｓで形質転換したマウスＮＩＨ３Ｔ３
細胞のみ５×１０³／ウエル）となるように９６穴プレ
ートに播種した。これらの細胞を１００μｇ／ｍｌカナ
マイシン（フロー・ラボラトリーズ社製、スコットラン
ド）および１０％（容量／容量）牛胎児血清（ウイッタ
カー・エム・エーバイオプロダクト社製、米国）を含む
ダルベッコＭＥＭ培地（フローラボラトリー社製）で一
晩培養した。ＴＡＮ−１７４６を該培地に適宜加え、３
７℃、５％（容量／容量）炭酸ガス下で３日間培養した
後、実験例１と同様にＭＴＴ還元法に従って各細胞の増
殖を測定した。各細胞に対するＴＡＮ−１７４６の５０
％阻害濃度 (μg/ml）の測定結果を〔表２〕に示す。

【表２】 〔表２〕に示したように、ＴＡＮ−１７４６は、ＮＩＨ
３Ｔ３正常細胞に比べ、ガン化細胞に対して強い増殖抑
制作用を示した。さらに顕微鏡観察においてＴＡＮ−１
７４６はがん化細胞の形態を正常に復帰する活性が認め
られた。

【００２１】実験例３ マウス腫瘍細胞Ｍ５０７６をマウスの静脈内に移植し、
これにＴＡＮ−１７４６を腹腔内投与した。ＴＡＮ−１
７４６ ２５mg／kgの投与量で腫瘍の増殖は有意に抑制
された。 実験例４ ＴＡＮ−１７４６をマウスに２００mg／kg腹腔内投与し
たところ、死亡例は認められなかった。

【００２２】本発明の化合物は、イン・ビトロ（in vit
ro）およびイン・ビボ（in vivo）試験で抗腫瘍作用を
示し、低毒性で、ヒトや哺乳動物（例、ラット，マウ
ス，サル，イヌ，ウマ，ウシ等）の悪性腫瘍の治療に用
いることができる。該悪性腫瘍としては、例えば上皮性
悪性腫瘍（例、大腸がん，肺がん，胃がん，肝がん，偏
平上皮がん等）、非上皮性悪性腫瘍（例、細網肉腫，骨
肉腫，リンパ肉腫等)、混合性悪性腫瘍（例、副腎腫瘍
等）等が挙げられる。本発明の化合物またはその塩を有
効成分とする抗腫瘍剤は、一般式（I）で表される化合
物またはその塩を常法に従い薬理学的に許容される担体
と混合することにより得られる。本剤は、非経口剤また
は経口剤として投与することができる。非経口剤として
は、例えば注射剤、点滴剤、外用剤（例、経鼻投与製
剤，経皮製剤など）、座剤（例、直腸座剤，膣座剤な
ど）等が、経口剤として、例えばカプセル剤、錠剤、シ
ロップ剤、散剤および顆粒剤があげられる。これらの製
剤は、製剤工程において通常一般に用いられる自体公知
の方法により製造することができる。たとえば、化合物
（I）またはその塩を分散剤（例、ツイーン(Tween)８０
（アトラスパウダー社製、米国）、ＨＣＯ ６０（日光
ケミカルズ製）ポリエチレングリコール、カルボキシメ
チルセルロース、アルギン酸ナトリウムなど）、保存剤
（例、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルア
ルコール、クロロブタノールなど）、等張化剤（例、塩
化ナトリウム、グリセリン、ソルビトール、ブドウ糖な
ど）などと共に水性注射剤に、あるいはオリーブ油、ゴ
マ油、ラッカセイ油、綿実面、コーン油などの植物油、
プロピレングリコールなどに溶解、懸濁あるいは乳化し
て油性注射剤に成形し、注射剤とすることができる。

【００２３】たとえば外用剤とするには、自体公知の方
法に従い、本発明の化合物（I）またはその塩を固状、
半固状または液状の外用投与剤とすることができる。た
とえば、上記固状のものとしては、化合物（I）または
その塩をそのまま、あるいは賦形剤（例、グリコール、
マンニトール、デンプン、微結晶セルロースなど）、増
粘剤（例、天然ガム類、セルロース誘導体、アクリル酸
重合体など）などを添加、混合して粉状の組成物とす
る。上記液状のものとしては、注射剤の場合と同様で、
油性あるいは水性懸濁剤とする。半固状の場合は、水性
または油性のゲル剤、あるいは軟膏状のものがよい。ま
た、これらはいずれも、pＨ調節剤（例、炭酸、リン
酸、クエン酸、塩酸、水酸化ナトリウムなど）、防腐剤
（例、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノー
ル、塩化ベンザルコニウムなど）などを加えてもよい。
たとえば坐剤とするには、自体公知の方法にしたがい、
本発明の化合物（I）またはその塩を油性または水性の
固状、半固状あるいは液状の坐剤とすることができる。
上記坐剤に用いる油性基剤としては、たとえば高級脂肪
酸のグリセリド〔例、カカオ脂、ウイテプゾル類（ダイ
ナマイトノーベル社製）など〕、中級脂肪酸〔例、ミグ
リオール類（ダイナマイトノーベル社製）など〕、ある
いは植物油（例、ゴマ油、大豆油、綿実油など）などが
挙げられる。また、水性基剤としては、たとえばポリエ
チレングリコール類、プロピレングリコール、水性ゲル
基剤としては、たとえば天然ガム類、セルロース誘導
体、ビニール重合体、アクリル酸重合体などが挙げられ
る。

【００２４】たとえば経口投与製剤にするには、自体公
知の方法に従い、本発明の化合物（I）またはその塩を
たとえば賦形剤（例、乳糖、白糖、デンプンなど）、崩
壊剤（例、デンプン、炭酸カルシウムなど）、結合剤
（例、デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセル
ロース、ポリビニールピロリドン、ヒドロキシプロピル
セルロースなど）または滑沢剤（例、タルク、ステアリ
ン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール６０００な
ど）などを添加して圧縮成形し、次いで必要により、味
のマスキング、直溶性あるいは持続性の目的のため自体
公知の方法でコーティングすることにより経口投与製剤
とすることができる。そのコーティング剤としては、例
えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセル
ロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロ
ピルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、ツイ
ーン８０、ブルロニックＦ６８、セルロースアセテート
フタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタ
レート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシ
ネート、オイドラギット（ローム社製、西ドイツ，メタ
アクリル酸・アクリル酸共重合）および酸化チタン，ベ
ンガラ等の色素が用いられる。本発明の抗腫瘍剤をヒト
に用いる場合の投与量は対象の疾患、投与経路、治療す
る患者個々の年齢及び疾病の程度によって変動し得る
が、通常、有効成分（化合物（I）の含量）として、１
日成人（体重５０kg）１人当たり約１０mgないし２ｇ、
とりわけ約２０mgないし１ｇを疾患の治療に用いるのが
好ましい。本発明の製剤は、１日１ないし３回に分けて
投与することができる。

【００２５】以下実施例によって本発明の内容をさらに
具体的に説明するが、これによって本発明が限定される
ものではない。なお、培地におけるパーセントは、とく
に断りのない限り重量／容量パーセント（％）を表す。 実施例１ ポテトデキストロースアガー斜面寒天培地に培養したバ
ーティシリウム・クラミドスポリウム ＦＬ−３６５８
１株を２Ｌ容坂口フラスコ内のグルコース２％、マルト
ース３％、生大豆粉１．５％、コーンスティープ・リカ
ー１％、ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．３％お
よび塩化ナトリウム０．３％を含む５００mlの種培地
（ｐＨ６．０）に接種し、２８℃、４８時間往復振盪機
上で培養し、種培養液を得た。この種培養液１リットル
を２００リットル容ステンレス・スチール・タンク内
の、グリセリン１％、マルトース３％、綿実粉２％、コ
ーン・スティープ・リカー１％、ビール酵母０．５％、
沈降性炭酸カルシウム０．５％を含む１２０リットルの
主培地（ｐＨ６．５）に移植し、２８℃、通気１２０リ
ットル／分、撹拌１６０回転／分、内圧１kg／cm²の条
件で６日間培養し、主培養液を得た。得られた主培養液
１０８リットルを、濾過補助剤（ラジオライト６０
０、昭和化学工業社製）を用いて濾過した。濾液 ９０
リットルのｐＨを７．０に調整後、酢酸エチル ９０リ
ットルで抽出した。有機層を０．０１Ｎ塩酸 ２８リッ
トル、２％炭酸水素ナトリウム水溶液 ２７リットルお
よび水 ２６リットルで順次洗浄後、濃縮乾固した。得
られた油状物にヘキサン ５００mlを加え、生じた析出
物を濾取してＴＡＮ−１７４６の粗粉末（８８９mg）を
得た。 得られた粗粉末をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー ５０ml（キーゼルゲル６０，７０〜２３０メ
ッシュ，メルク社製，ドイツ）に付し、酢酸エチル：ヘ
キサン〔５：５（２００ml）、７：３（１５０ml）〕で
洗浄後、酢酸エチル：ヘキサン〔９：１（２５０m
l）〕、酢酸エチル（５０ml）で順次溶出した。溶出液
を濃縮乾固して得られた粉末（３１５mg）を、分取ＨＰ
ＬＣ〔カラム；YMC-Pack, D-ODS-5(S-5 120A), 移動
相；３３％アセトニトリル／０．０２Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．３），流速；１０ml／分〕に付した。分析用
ＨＰＬＣで単一ピークを与える画分を集めて濃縮し、ｐ
Ｈを６．３に調整後、酢酸エチルで抽出した。有機層を
水洗して硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固したとこ
ろ、ＴＡＮ−１７４６の白色粉末（１９９mg）が得られ
た。

【００２６】製剤例１ 実施例１で得られたＴＡＮ−１７４６を用いて、下記に
示す処方の全成分を常法にしたがって混和し、ゼラチン
カプセルに充填し、カプセル１個当たり、３０ｍｇのＴ
ＡＮ−１７４６を含有するカプセル剤を製造した。 ＴＡＮ−１７４６ ３０ｍｇ 乳糖 １００ｍｇ コーンスターチ ４０ｍｇ ステアリン酸マグネシウム １０ｍｇ ─────────────────────────
── 合 計 １８０ｍｇ 製剤例２ 実施例１で得られたＴＡＮ−１７４６およびステアリン
酸マグネシウムを常法にしたがって可溶性デンプンの水
溶液で顆粒化し、乾燥後、乳糖およびコーンスターチと
混合した。混合物を圧縮成型し、下記に示す処方の錠剤
を製造した。 ＴＡＮ−１７４６ ３０ｍｇ 乳糖 ６５ｍｇ コーンスターチ ３０ｍｇ 可溶性デンプン ３５ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ２０ｍｇ ─────────────────────────
── 合 計 １８０ｍｇ 製剤例３ 実施例１で得られたＴＡＮ−１７４６を３０％（ｗ／
ｖ）ポリエチレングリコール４００を含む生理食塩水に
溶解してＴＡＮ−１７４６の０．０５％溶液を調製し、
滅菌濾過して、バイアルに３０ｍｌずつ分注した。バイ
アル１個当たり、１５ｍｇのＴＡＮ−１７４６を含有す
る静注剤を製造した。

【００２７】

【発明の効果】本発明の化合物は優れた抗腫瘍作用を示
し、ヒトや哺乳動物の悪性腫瘍の治療に用いることがで
きる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＴＡＮ−１７４６の赤外線吸収（ＩＲ）スペク
トル

【図２】ＴＡＮ−１７４６の¹³Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）
スペクトル

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01）

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式 【化１】 （式中、Ｒはアシル化されていてもよい水酸基を示す）
   で表される化合物またはその塩。
2. 【請求項２】Ｒが水酸基である請求項１記載の化合物Ｔ
   ＡＮ−１７４６。
3. 【請求項３】バーティシリウム属に属し、化合物ＴＡＮ
   −１７４６を生産する能力を有する微生物を培地に培養
   し、培養物中に化合物ＴＡＮ−１７４６を生成蓄積せし
   め、これを採取することを特徴とする化合物ＴＡＮ−１
   ７４６の製造法。
4. 【請求項４】請求項１記載の化合物またはその塩を含有
   してなる抗腫瘍剤。
5. 【請求項５】化合物がＴＡＮ−１７４６である請求項４
   記載の抗腫瘍剤。