NO174432B - Fremgangsmaate for fremstilling av antitumor-aktive forbindelser, samt biologisk ren kultur av streptomyces hygroscopicus ATCC 53709 - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av antitumor-aktive forbindelser, samt biologisk ren kultur av streptomyces hygroscopicus ATCC 53709 Download PDFInfo
- Publication number
- NO174432B NO174432B NO890944A NO890944A NO174432B NO 174432 B NO174432 B NO 174432B NO 890944 A NO890944 A NO 890944A NO 890944 A NO890944 A NO 890944A NO 174432 B NO174432 B NO 174432B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- atcc
- streptomyces hygroscopicus
- strain
- culture
- procedure
- Prior art date
Links
- 241000187391 Streptomyces hygroscopicus Species 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title description 10
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 16
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000012345 acetylating agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 125000004674 methylcarbonyl group Chemical group CC(=O)* 0.000 claims 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 17
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 17
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 7
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 abstract description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 6
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 4
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 3
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- -1 iso-octanoyl Chemical group 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- ATUBIBZJAGAIBW-TXTWTNGRSA-N 9-methylstreptimidone Natural products CC=C/C(=C/C(C)C(=O)CC(O)CC1CC(=O)NC(=O)C1)/C ATUBIBZJAGAIBW-TXTWTNGRSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 125000006519 CCH3 Chemical group 0.000 description 2
- 101150041968 CDC13 gene Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 2
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATUBIBZJAGAIBW-WGEALTPQSA-N 4-[(2r,5s,6e,8z)-2-hydroxy-5,7-dimethyl-4-oxodeca-6,8-dienyl]piperidine-2,6-dione Chemical compound C\C=C/C(/C)=C/[C@H](C)C(=O)C[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 ATUBIBZJAGAIBW-WGEALTPQSA-N 0.000 description 1
- OEOIWYCWCDBOPA-UHFFFAOYSA-N 6-methyl-heptanoic acid Chemical compound CC(C)CCCCC(O)=O OEOIWYCWCDBOPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 244000056139 Brassica cretica Species 0.000 description 1
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 1
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001558929 Sclerotium <basidiomycota> Species 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 240000004584 Tamarindus indica Species 0.000 description 1
- 235000004298 Tamarindus indica Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N anthrone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC=CC=C3CC2=C1 RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000719 anti-leukaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 231100000050 cytotoxic potential Toxicity 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 238000002451 electron ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- UREBWPXBXRYXRJ-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;methanol Chemical compound OC.CCOC(C)=O UREBWPXBXRYXRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Natural products C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical compound C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D303/00—Compounds containing three-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D303/02—Compounds containing oxirane rings
- C07D303/36—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
- C12R2001/55—Streptomyces hygroscopicus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Epoxy Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling og utvinning av hittil ukjente antitumor-antibiotika.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer således et hittil ukjent fermenteringsprodukt betegnet BU-3862T (I) som har strukturen
Likeledes tilveiebringes diacetat- (II) og dihydro- (III) derivater av BU-3862T, som har de nedenfor viste strukturer.
Søkerne er ikke bekjent med antitumor-antibiotika,
som i struktur er beslektet med forbindelsene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse.
Fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved at den BU-3862T-produserende stamme Streptomyces hygroscopicus, P247-71, ATCC 53709; eller en variant eller en mutant derav som har S. hygroscopicus (ATCC 53709) stammens vesentlige egenskaper, dyrkes i et vandig næringsmedium inneholdende assimilerbare kilder av karbon og nitrogen under submerse aerobe betingelser, ved en temperatur på 20-
39 °C og pH på ca. 7, inntil en vesentlig mengde BU-3862T er fremstilt av organismen i dyrkningsmediet, og deretter utvinnes BU-3862T fra dyrkningsmediet, og eventuelt for fremstilling av diacetyl-BU-3862T av formel
hvori Ac er CH3C0-, omsettes BU-3862T i et inert organisk opp-løsningsmiddel med et acetyleringsmiddel, eller eventuelt for fremstilling av dihydro-BU-3862T av formel
underkastes BU-3862T katalytisk hydrogenering.
BU-3862T og dets diacetyl- og dihydroderivater utviser inhibitorisk aktivitet mot forsøksdyr-tumorsystemer, f.eks. Bl6-melanom hos mus. Fig. 1 viser det infrarøde absorpsjonsspektrum av BU-3862T (KBr). Fig. 2 viser det proton-magnetiske resonansspektrum av BU-3862T i CDC13 (400 MHz). Fig. 3 viser <13>C-NMR-spektret av BU-3862T i CDC13 (100 MHz).
BU-3862T-antibiotikumet fremstilles ved fermentering av den BU-3862T-produserende stamme Streptomyces hygroscopicus, P247-71, ATCC 53709.
Den BU-3862T-produserende stamme betegnet stamme P247-71 ble isolert fra en jordbunnsprøve oppsamlet nær roten av et tamarindtre ved Mt. Apo, Davao, Mindano, Filippinene. En biologisk ren kultur av denne stamme er deponert i The American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, og til-føyet til den permanente samling av mikroorganismer som ATCC 53709.
Resultatene av taksonomiske studier utført på stamme P247-71, viser at stammen hører til slekten Streptomyces og til artsgruppen Streptomyces hygroscopicus.
Stamme P247-71 har følgende egenskaper<*>.
Morfologi
Både substrat- og luftmycelier dannes. De er lange og med mange forgreininger og ikke fragmenterte i korte fila-menter. Kjeder av arthrosporer bæres av lufthyfene. Spore-kjeden og sporemorfologien er som følger: 1) spiralspore-kjeder med 2-8 dreininger, 2) monopodielt forgrenede sporo-forer, 3) sporer, oval- eller tønneformede (0/5 til 0,7 ganger 0,5 til 1,2 m) , og 4) sporeornamentering,, rynket eller glatt.
Sporehus, bevegelig spore og sclerotium er ikke observert.
Dyrkningsmessige og fysiologiske karakteristika
Stamme P247-71 vokser godt i de fleste deskriptive medier. Grått luftmycelium med hygroskopiske sorte flekker ble observert på ISP-agarmedier med unntak av ISP-medium nr. 6. Hvitt til blekt gulaktig-grått luftmycelium dannes på Czapek's sucrosenitrat-agar. Substratmyceliet er farge-løst eller gulaktig-brunt til gråaktig-gult. Det dannes ikke melanin og andre diffusbare pigmenter. De fleste sukker-arter utnyttes med hensyn til vekst. De dyrkningsmessige og fysiologiske karakteristika vises i henhold til tabell 1
og 2.
De morfologiske, dyrkningsmessige og fysiologiske karakteristika av stamme P247-71 viser at stammen hører til slekten Streptomyces. Ifølge beskrivelsen av ^"Pridham,
T.G. og H.D. Tresner: Genus Streptomyces Waksman, og Henrici, 1943, p. 748-829. R.E. Buchanan og N.E. Gibbson (ed.) 1974. The Williams & Wilkins Co. Baltimore, oppsummeres de vesentlige karakteristika av stammen som følger: 1) grått luftmycelium, 2) spiralsporekjede, 3) manglende melanoid og 4) glatt sporeveggornamentering. Den hygroskopiske forandring av sporedannet luftmycelium er en spesifikk egenskap hos stammen. De vesentlige karakteristika samt de viste karakteristika i tabell 1 og 2 for stamme P247-71 plasserer den i Streptomyces hygroscopicus.
Det skal forstås at den foreliggende oppfinnelse ikke begrenses til anvendelse av den ovenfor beskrevne særlig foretrukne stamme P247-71 eller til organismer som fullt ut svarer til ovenstående beskrivelser. Det er særlig hensikten å inokulere andre BU-3862T-produserende varianter eller mutanter av organismen som har S. hygroscopicus (ATCC 53709) stammens vesentlige egenskaper og som kan fremstilles på kon-vensjonell måte som ved røntgenbestråling, ultrafiolett be-stråling, behandling med sennepsgasser, utsettelse for fager og lignende.
Fremstilling av BU- 3862T
BU-3862T kan fremstilles ved dyrkning av den BU-3862T-produserende stamme av Streptomyces hygroscopicus, P247-71 (ATCC 53709) eller en variant eller mutant derav som har den deponerte stammes vesentlige egenskaper under submerse aerobe betingelser i et vandig medium. Organismen dyrkes i et næringsmedium inneholdende en assimilerbar karbonkilde, f.eks. glycerol, D-ribose, L-rhamnose, D-glucose, D-fructose, sucrose, lactose, melibiose, D-mannitol eller oppløselig stiv-else. Næringsmediet bør også inneholde en assimilerbar nitro-genkilde som fiskemel, pepton, soyabønnemel, jordnøttmel, bomullsfrømel eller maisstøpevæske. Uorganiske næringssalter kan også inkorporeres i mediet. Slike salter kan omfatte et hvilket som helst av de vanlige salter som er i stand til å tilveiebringe natrium, kalium, ammonium, calsium, fosfat, sulfat, klorid, bromid, nitrat, karbonat eller lignende ioner.
Fremstilling av BU-3862T kan skje ved en hvilket som helst temperatur som kan bidra til en tilfredsstillende vekst av organismen, f.eks. 20 °C til 39 °C, og utføres hensikts-messig ved en temperatur på tilnærmet 28 °C.
Fermenteringen kan utføres i kolber eller i labora-torie- eller industrifermentorer av forskjellig^ størrelse. Ved anvendelse av tankfermentering er det ønskelig å frem-stille et vegetativt inokulum i en næringsvækse ved å inokulerer en liten mengde dyrkningsmedium med en substrat-eller jorbunnskultur eller en lyofilisert kultur av organismen. Etter erholdelse av et aktivt inokulum på denne måte over-føres det aseptisk til fermenteringstankmediet med henblikk på fremstilling av BU-3862T i stor målestokk. Mediet, i hvilket det vegetative inokulum fremstilles, kan være det samme som eller forskjellig fra det som utnyttes i tanken,
når det bare oppnås en god vekst av den produserende organisme.
Vanligvis oppnås optimal fremstilling av BU-3862T etter inkubasjonsperioder på tilnærmet fire dager.
BU-3862T kan utvinnes fra dyrkningsmediet og isoleres
i en vesentlig ren form ved konvensjonelle fremgangsmåter for oppløsningsmiddelekstraksjon og kromatografi. Eksempel 2
i det følgende viser en egnet fremgangsmåte for isolering og rensing.
Diacetatderivatet (II) av BU-3862T kan fremstilles ved omsetning av BU-3862T med et konvensjonelt acetyleringsmiddel som eddiksyreanhydrid i et inert organisk oppløsnings-middel. En typisk fremgangsmåte vises i eksempel 3 nedenunder. Dihydroderivatet (III) av BU-3862T kan fremstilles ved katalytisk hydrogenering av BU-3862T som vist i eksempel 4.
BU-3862T ble erholdt som et fargeløst klebrig fast stoff. Det var lett oppløselig i dimethylsulfoksyd, dimethyl-formamid, metanol, ethanol, ethylacetat og kloroform, men praktisk talt uoppløselig i vann, benzen og andre organiske oppløsningsmidler.
BU-3862T utviste positiv reaksjon overfor jod, ammon-iummolybdat-svovelsyre (AMS) og Rydon-Smith reagenser, mens det var negativt i ninhydrin-, anthron- og ferrikloridtester. De fysisk-kjemiske egenskaper av BU-3862T utviste ikke karak-1 13
teristisk UV-absorpsjon. IR, H-NMR og C-NMR spektrene av BU-3862T er vist i henholdsvis fig. 1, 2 og 3.
Strukturelle studier av BU- 3862T
BU-3862T utviser sterke absorpsjoner ved 3300 (hydroksy), 1720 (carbonyl), 1650 og 1530 cm"<1> (amid) i IR-spektret, noe som indikerer en peptidstruktur for antibioti-13
kumet. C-NMR-spektret viste 2 0 karbonatomer som ble identifisert som to C-CH3, én = C-CH3, åtte - CH2, tre -CH, én >C<, én > C=CH^ og tre -C=0 karbonatomer. De molekylære formel for
BU-3862T ble fastslått til å være Cor,Ho/)Nn0, basert på mikro-+20 34 Z 6 ^3
analyse, massespektrale data (M+H) : m/z 399) og C-NMR spektralanalyse. 34 protoner ble observert i ''"H-NMR-spektret. De to dublettprotoner (cf 7,03 & 6,48 ppm, i CDC13) som for-svant litt etter litt ved tilsetning av tungtvann, ble henført til to -NH-CO-grupper. De to brede singlet-protoner
(<T4,83 & 4,79) og AB-type dublettprotonene (cf 3,35 & 3,12, J:5,0 Hz) ble henført til henholdsvis exomethylen
(-(CHj)-C=CH2) og epoxyd (
) protoner. Posisjonene for
disse protoner ble bestemt ved H- H COSY-eksperimenter som førte til de delvise strukturer som er vist nedenunder. Ytterligere sammenhenger mellom de delvise strukturer ble bestemt ved <13>C-<1>H COSY- og <13>C-<1>H long range COSY-eksperimenter. De ble analysert som vist nedenunder, og således ble den totale struktur for BU-3862T bestemt. Ytterligere bevis for strukturen ble tilveiebragt ved dets massespektrum og ved nedbrytningseksperimenter. EI-MS-spektret utviste tallrike fragment-ioner ved m/z 127 (iso-octanoyl), 214 (iso-octanoyl) og 325 (iso-octanoyl-seryl-4,5-didehydroleucyl) som under-støttet strukturen. Ved syrehydrolyse ga BU-3862T en aminosyre og en fettsyre. Den isolerte aminosyre ble identifisert som L-serin ved HPLC, og fettsyren som iso-octansyre ved gass-kromatografi av dens methylrester. BU-3862T gav diacetatderivatet ved behandling med eddiksyreanhydri i pyridin. Ved hydrogenering over palladium-karbon gav BU-3862T to reduksjons-produkter, dihydro-BU-3862T og tetrahydro-BU-3862T, hvis strukturen ble bestemt på basis av deres spektrale data. Diacetat- og dihydroforbindelsen bibeholdt den biologiske aktivitet, men tetrahydroderivatet var fri for denne aktivitet.
Bt3-3862T kan benevnes 1,2-epoxy-2-hydroxymethyl-4-(N-isooctanyl-L-serylamino)-6-methyl-hept-6-en-3-on og er et unikt peptid inneholdende en epoxyd- og en exomethylengruppe.
Delvise strukturer av BU- 3862T
Biologisk aktivitet av BU- 3862T
BU-3862T og diacetyl-, dihydro- og tetrahydro-BU-3862T ble testet for in vitro cytotoksisitet overfor flere murine og humane tumor cellelinjer og/eller for in vivo antitumoraktivitet i mus. Mitomycin C ble anvendt som refe-ranseforbindelse i både in vitro og in vivo eksperimenter. B16-F10 (murin melanom), P388 (murin leukemi), L1210 (murin leukemi) og Moser-celler (human colorectal carcinom) ble dyrket til den logaritmiske fase i beriket Eagle's minimal essentiel medium (MEM) supplert med kalvefosterserum. (FCS, 10 %) og kanamycin (60 mcg/ml) og HCT-116 (human colon-carcinom) celler i Maccoy's 54 medium supplert med FCS (10 %), penicilling (100 u/ml) og streptomycin (100 mcg/ml) høstet og inokulert i brønner av 96- eller 24-brønners vevskulturplater med testmateriale i konsentrasjoner på henholdsvis 1,5 x 10 5, 1,2 x IO<4>, 1,2 x IO<4>, 2,5 x 10<5> og 3,0 x IO<5> celler/ml. De ble inkubert ved 37 °C i en fuktet atmosfære med 5 % CG^ og 95 % luft i 72 timer. De cytotoksiske aktiviteter overfor B16-F10, Moser og HCT-116 celler ble bestemt colorimetrisk ved 540 nm etter farging av levedyktige celler med 0,006 % nøytral rød oppløsning. På den annen side ble de cytotoksiske aktiviteter overfor P388 og L1210 celler bestemt ved telling av antallet levedyktige celler. Resultatene er oppsummert i tabell 4. Sammenlignet med mitomycin C utviste BU-3862T langt krafigere cytotoksisitet overfor både murine og humane celler. Styrken var tilnærmet 50-120 ganger større enn for mitomycin C uttrykt i IC^Q-verdier. Diacetyl- og dihydroderivatene utviste også ekvivalent kraftige cytotoksiske potensialer overfor både murine og humane celler tilsvarende tilnærmet halvparten av de tilsvarende for BU-3862T. På den annen side var tetrahydroderivatet signifikant mindre aktivt enn ovenstående for-bindelser .
Inhibitoriske virkninger av BU-3862T på syntese av makromolekyler (DNA, RNA og protein) ble bestemt i dyrkede B16-F10 melanomceller. B16-F10 celler (10 <5>celler/ml) ble inkubert med BU-3862T ved 37 °C i 3,5 timer (for DNA-syntese) eller 4 timer (for RNA- og proteinsyntese). Isotopmerket for-3 14 3
løper, H-thymidin, C-uridin eller H-leucin ble tilsatt
til den dyrkede blanding som ble inkubert ytterligere i 30 minutter (for DNA-syntese) eller 60 minutter (for RNA- og proteinsyntese). Etter vasking med avkjølt 5 % trikloreddik-syreoppløsning ble den inkorporerte radioaktivitet i den syre-uoppløselige fraksjon av tumorcellene bestemt i den veske-scintillasjonsteller. Som vist i tabell 5 inhiberte BU-3862T både DNA- og proteinsyntesen på samme måte, og virkningen var over 100 ganger større enn for RNA-syntesen uttrykt i IC50Q-verdier.
In vivo antitumor-aktiviteter hos BU-3862T og diacetyl-og dihydroderivatene ble bestemt i tumorbærende BDF^- eller CDF^-mus. BDF^-mus av hannkjønn ble inokulert intraperitonealt med 0,5 ml 10 % melanotisk melanom B16 brei, og CDF^-mus av hunnkjønn ble på samme måte inokulert intraperitonealt med 0,4 ml fortynnet ascites-væske inneholdende 10 5 lymfoide leukemiceller L1210 eller 10 lymfocytiske leukemiceller P388. Testforbindelser ble administrert intraperitonealt til musene ved hjelp av følgende fire forskjellige behandlingsskjemaer; én gang daglig på dag 1, 2 og 3 (QD x 3), på dag 1, 4 og 7 (Q3D x 3) , på dag 1, 5 og 9 (Q4D x 3) og på dag 1-9 (QD x 9) . Som vist i tabell 6 utviste BU-3862T en fremragende tera-peutisk virkning overfor B16 melanom. Ved administrering etter Q4D x 3 behandlingsskjemaet var virkningen (minimal effektiv dose) av BU-38 6 2T den samme som for mitomycin C. Denne forbindelse utviste bedre antitumoraktivitet og bredere tera-peutisk rekkevidde ved mellomliggende doserinsskjema
(Q4D x 3) enn ved det etterfølgende doseringsskjerna (QD x 9) uttrykkt i henholdsvis maksimum T/C-verdi og kjemoterapeutisk indeks (forhold mellom optimal dose og minimal effektiv dose). Både diacetyl- og dihydroderivatene utviste likeledes signifikant anti-Bl6 melanomaktivitet ved Q4D x 3 behandlingsskjemaet, men var tilnærmet 10 ganger mindre aktive enn raor-forbindelsen uttrykt i minimal effektiv dose som vist i tabell 7. På den annen side var de antileukemiske aktiviteter av BU-3862T temmelig svake. Denne forbindelse utviste moderat antitumor-aktivitet overfor Ll210-leukemi med maksimum T/C-verdi på 145 % og utviste ingen signifikant forlengelse av livslengde hos P38 8 leukemibærende mus ved de testede doser (tabell 8 og 9).
Som de ovenfor viste data indikerer, er BU-3862T og dets dihydro- og diacetylderivater nyttige som antitumor-midler for inhibering av maligne pattedyrtumorer som B16-melanom.
For anvendelse som et antitumormiddel kan optimale doseringer av BU-3862T eller dets dihydro- eller diacetylderivater til en gitt pattedyrsvert lett fastslås av fag-mannen. Det vil selvsagt kunne innsees at den aktuelle dose av anvendt forbindelse vil variere i henhold til det spesi-fikke formulerte preparat, anvendelsesmetoden og den spesi-fikke situs, vert og sykdom som behandles. Mange faktorer
som modifiserer legemidlets virkning vil bli tatt i betraktn-ing, herunder alder, vekt, kjønn, kost, administreringstids-punkt, administreringsmåte, utskillelseshastighet, pasientens tilstand, legemiddelkombinasjoner, reaksjonssensitiviteter og sykdommens alvor.
De følgende eksempler anføres som belysning av foreliggende oppfinnelse.
EKSEMPEL 1
Fermentering av BU- 3862T
Et veldyrket agarsubstrat av Streptomyces hygroscopicus, stamme nr. P247-71, ble anvendt til inokulering av et vegetativt medium bestående av 3 % soyabønnemel (Nikko Seiyu), 0,5 % Farmamediå (Traders, USA), 3 % glucose, 0,1 % gjær-ekstrakt (Oriental) og 0,3 % CaC03, idet pH ble justert til 7,0 før sterilisering. Det vegetative medium ble inkubert ved 28 i fire dager i et rotasjonsristeapparat (200 rpm) og 5 ml av veksten ble overført til en 500 ml Erlenmeyer^ kolbe inneholdende 100 ml av fermenteringmediet med samme sammensetning som det vegetative medium. Fermenteringen ble utført ved 2 8 Ci fire til fem dager under omristing i rotasjonsristeapparatet.
Antitumor-antibiotikum-produksjonen i fermenterings-næringsvesken ble bestemt ved in vitro cytotoksisk aktivitet overfor B16 melanomceller. Fermenteringen ble også utført i en tankfermentor. En 2-liters posjon av den vegetative kultur ved kolbefermenteringen ble overført til en 200-liters tankfermentor inneholdende 120 liter av fermenteringsmediet. Fermenteringen ble utført ved 28 °C under omristing ved 250 rpm og gjennomluftingshastighet på 120 liter pr. minutt. Det antitumor-an.tibiotiske nivå nådde et maksimum på 50 mikrogram/ ml etter tilnærmet 90 timers fermentering.
EKSEMPEL 2
Isolering og rensing av BU- 3862T
Fermenteringsnæringsv sken (23 liter, pH 7,4) erholdt ved den allmene fremgangsmåte ifølge eksempel 1 ble adskilt i mycel-filterkake og supernatant ved anvendelse av en Sharpless-type sentrifuge (Kokusan nr. 4A). Mycel-filterkaken ble ekstrahert med metanol (6 liter). Etter fjerning av de uoppløselige produkter ved filtrering ble den metanoliske ekstrakt konsentrert i vakuum til en vandig oppløsning. Denne vandige oppløsning og supernatanten av fermenteringsnærings-væsken ble kombinert og ekstrahert med ethylacetat (20 liter). Ekstrakten ble inndampet til tørrhet i vakuum for å erholde 21,1 g rått antibiotisk kompleks. Dette rå faste stoff ble overført til en søyle av silicagel (04,0 x 75 cm), som på forhånd var vasket med methylenklorid, og ble utviklet ved hjelp av en methylenklorid-metanolblanding med trinnvis øking av metanolkonsentrasjonen (2-10 % vol/vol). Eluerings-midlet ble overvåket ved cytotoksisitet overfor B16-melanom og fargereaksjon med jod på en TLC-plate. De første jod-positive fraksjoner eluert med 2 % metanol ble oppsamlet og ytterligere renset ved Sephadeks LH-20-kromatografi. Den rensede komponent ble identifisert som 9-methylstreptimidon Saito, N.; F. Kitame, M. Kikuchi og N. Ishida: Studies on a new antiviral antibiotic, 9-methylstreptimidone. 1. Fysisk-kjemiske og biologiske egenskaper. J. Antibiotics 27: 206-214, 1974, på basis av dens spektrale data. De andre jod-positive fraksjoner eluert med 5 % metanol ble oppsamlet og inndampet i vakuum for å erholde semi-rent fast stoff av BU-3862T. Dette ble ytterligere kromatografert på silicagel under anvendelse av ethylacetat-metanolblanding. Eluering med blandingen i forholdet 50:1 vol/vol ga aktive fraksjoner som utviste sterk cytotoksisitet overfor B16-melanom. Etter konsentrering i vakuum ble bunnfallet ytterligere renset ved Sephadeks LH-20-kromatografi med metanoleluering for å erholde et homogent fast stoff av BU-3862T (341 mg).
EKSEMPEL 3
Fremstilling av diacetyl- BU- 3862T
BU-3862T (10 mg) ble omrørt med eddiksyreanhydrid
(0,1 ml) og tørr pyridin (0,5 ml) i 18 timer ved romtempera-tur. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med ethylacetat (10 ml) og oppløsningen ble vasket med fortynnet HC1 (10 ml) og deretter vann (10 ml). Den organiske oppløsning ble tørket over Na2SO^ og inndampet i vakuum for å erholde oljeaktig diacetyl-BU-3862T (13 mg). Fysisk-kjemiske egenskaper er anført i tabell 9 og 10 i det følgende.
EKSEMPEL 4
Fremstilling av dihydro- og tetrahydrc— BU- 38 62T
BU-3862T (30 mg) oppløst i metanol (10 ml) ble hydro-genert under atmosfærisk trykk i nærvær av 20 % Pd/C (15 mg) i 20 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert, og filtratet ble inndampet under redusert trykk for å erholde en blanding av to hydrogeneringsprodukter (27 mg). De ble atskilt ved preparativ TLC (Si02, CH2Cl2,-MeOH=9:1 vol/vol) og renset ved Sephadeks LH-20-kromatografti for å erholde dihydro-(13,4 mg) og tetrahydro-BU-3862T (4,7 mg). Fysisk-kjemiske egenskaper er vist i tabell 9 og 10 ovenfor.
Claims (2)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av BU-3862T av formel
karakterisert ved at den BU-3862T-produserende stamme Streptomyces hygroscopicus, P247-71, ATCC 53709; eller en variant eller en mutant derav som har S. hygroscopicus (ATCC 53709) stammens vesentlige egenskaper, dyrkes i et vandig næringsmedium inneholdende assimilerbare kilder av karbon og nitrogen under submerse aerobe betingelser, ved en temperatur på 20-39 "C og pH på ca. 7, inntil en vesentlig mengde BU-3862T er fremstilt av organismen i dyrkningsmediet, og deretter utvinnes BU-3862T fra dyrkningsmediet, og eventuelt for fremstilling av diacetyl-BU-3862T av formel
hvori Ac er CH3CO-, omsettes BU-3862T i et inert organisk opp-løsningsmiddel med et acetyleringsmiddel, eller eventuelt for fremstilling av dihydro-BU-3862T av formel
underkastes BU-3862T katalytisk hydrogenering.
2. Biologisk ren kultur,
karakterisert ved at mikroorganismen er Streptomyces hygroscopicus ATCC 53709, hvilken kultur er i stand til å produsere BU-3862T i en utvinnelig mengde ved dyrkning i et vandig næringsmedium inneholdende assimilerbare kilder av karbon og nitrogen.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/165,337 US4912133A (en) | 1988-03-07 | 1988-03-07 | BU-3862T antitumor antibiotic |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO890944D0 NO890944D0 (no) | 1989-03-06 |
| NO890944L NO890944L (no) | 1989-09-08 |
| NO174432B true NO174432B (no) | 1994-01-24 |
| NO174432C NO174432C (no) | 1998-06-09 |
Family
ID=22598495
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO890944A NO174432C (no) | 1988-03-07 | 1989-03-06 | FremgangsmÕte for fremstilling av antitumor-aktive forbindelser, samt biologisk ren kultur av streptomyces hygroscopicus ATCC 53709 |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4912133A (no) |
| EP (1) | EP0332080B1 (no) |
| JP (1) | JP2821756B2 (no) |
| KR (1) | KR960016206B1 (no) |
| AT (1) | ATE76406T1 (no) |
| AU (1) | AU618790B2 (no) |
| CA (1) | CA1338184C (no) |
| DE (1) | DE68901552D1 (no) |
| DK (1) | DK173937B1 (no) |
| ES (1) | ES2036729T3 (no) |
| FI (1) | FI90991C (no) |
| GR (1) | GR3004756T3 (no) |
| IE (1) | IE62211B1 (no) |
| IL (1) | IL89477A (no) |
| NO (1) | NO174432C (no) |
| PT (1) | PT89917B (no) |
| ZA (1) | ZA891695B (no) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5071957A (en) * | 1989-08-04 | 1991-12-10 | Bristol-Myers Company | Antibiotic BU-4061T |
| US7524883B2 (en) | 2002-01-08 | 2009-04-28 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Eponemycin and epoxomicin analogs and uses thereof |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4474800A (en) * | 1980-05-13 | 1984-10-02 | Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. | Epoxysuccinyl amino acid derivatives |
| JPS5865287A (ja) * | 1981-10-14 | 1983-04-18 | Nippon Chemiphar Co Ltd | ベーターアミノアルコール誘導体と，心筋梗塞の予防および治療剤 |
| JPS58116412A (ja) * | 1981-12-29 | 1983-07-11 | Taisho Pharmaceut Co Ltd | 直腸投与製剤 |
| JPS608223A (ja) * | 1983-06-28 | 1985-01-17 | Taisho Pharmaceut Co Ltd | 抗アレルギ−剤 |
-
1988
- 1988-03-07 US US07/165,337 patent/US4912133A/en not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-03-02 FI FI891001A patent/FI90991C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-03-03 DE DE8989103764T patent/DE68901552D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-03-03 CA CA000592703A patent/CA1338184C/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-03-03 AT AT89103764T patent/ATE76406T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-03-03 EP EP89103764A patent/EP0332080B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-03-03 ES ES198989103764T patent/ES2036729T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-03-03 IL IL8947789A patent/IL89477A/en unknown
- 1989-03-06 IE IE72489A patent/IE62211B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-03-06 AU AU31041/89A patent/AU618790B2/en not_active Expired
- 1989-03-06 DK DK198901071A patent/DK173937B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-03-06 NO NO890944A patent/NO174432C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-03-06 ZA ZA891695A patent/ZA891695B/xx unknown
- 1989-03-06 PT PT89917A patent/PT89917B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-03-07 KR KR1019890002806A patent/KR960016206B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-03-07 JP JP1053081A patent/JP2821756B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-05-29 GR GR920400556T patent/GR3004756T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE890724L (en) | 1989-09-07 |
| PT89917A (pt) | 1989-11-10 |
| AU618790B2 (en) | 1992-01-09 |
| DK173937B1 (da) | 2002-02-25 |
| EP0332080B1 (en) | 1992-05-20 |
| NO890944D0 (no) | 1989-03-06 |
| EP0332080A1 (en) | 1989-09-13 |
| DE68901552D1 (de) | 1992-06-25 |
| IL89477A (en) | 1994-11-28 |
| US4912133A (en) | 1990-03-27 |
| JP2821756B2 (ja) | 1998-11-05 |
| ES2036729T3 (es) | 1993-06-01 |
| FI90991B (fi) | 1994-01-14 |
| FI90991C (fi) | 1994-04-25 |
| NO174432C (no) | 1998-06-09 |
| ZA891695B (en) | 1989-11-29 |
| KR890014102A (ko) | 1989-10-21 |
| CA1338184C (en) | 1996-03-26 |
| ATE76406T1 (de) | 1992-06-15 |
| FI891001A (fi) | 1989-09-08 |
| PT89917B (pt) | 1994-05-31 |
| JPH0272167A (ja) | 1990-03-12 |
| DK107189A (da) | 1989-09-08 |
| FI891001A0 (fi) | 1989-03-02 |
| KR960016206B1 (ko) | 1996-12-06 |
| IE62211B1 (en) | 1995-01-11 |
| GR3004756T3 (no) | 1993-04-28 |
| AU3104189A (en) | 1989-09-07 |
| DK107189D0 (da) | 1989-03-06 |
| NO890944L (no) | 1989-09-08 |
| IL89477A0 (en) | 1989-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH05292948A (ja) | 新規な大環状ラクトンおよびその生産菌 | |
| KR0135600B1 (ko) | 항암 항생물질 mi43-37f11, 그 제조방법 및 그 용도 | |
| JPS6365679B2 (no) | ||
| EP0350623A2 (en) | BU-3420T antitumor antibiotic | |
| NO174432B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av antitumor-aktive forbindelser, samt biologisk ren kultur av streptomyces hygroscopicus ATCC 53709 | |
| FI69099C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av farmaceutiskt aktiv kijanimicin | |
| IL153679A (en) | History of polycyclic xanthone and pharmaceutical preparations containing them | |
| EP0322748B1 (en) | Antibiotic NK86-0279, process for production of the same and application of the same | |
| Kondo et al. | The Conversion of Deoxypodophyl-lotoxin to Epipodophyllotoxin by Penicillium F-0543 | |
| US5002959A (en) | BU-4146T antibiotic | |
| US4833079A (en) | Process for producing 3,7-dihydroxytropolone and antitumor use thereof | |
| US5093248A (en) | BU-3862T antitumor antibiotic | |
| EP0408336B1 (en) | Antitumor antibiotic BU-3285T | |
| JPH0578322A (ja) | 新規抗生物質ｓｆ２７３８物質及びその製造法並びに制癌剤 | |
| KR100224476B1 (ko) | 신균주 곰팡이 슈달레세리아 속 mt60109(kctc 8804p)와 포스포리파제 c 활성저해용 조성물 | |
| KR0145942B1 (ko) | 신규 항암제 조성물 | |
| JP4495817B2 (ja) | 制癌性抗生物質チアジノトリエノマイシンｆ及びｇと抗生物質ベンズオキサゾマイシン | |
| JP2856379B2 (ja) | 蛋白質脱リン酸化酵素阻害剤及び抗腫瘍剤 | |
| JPH0585998A (ja) | 新規化合物ｃａ３９‐ａおよびｃａ３９‐ｂ、ならびにその使用および製造 | |
| EP0205308A2 (en) | Scytophycins | |
| JPH02221292A (ja) | 新規物質０２―３、その使用および製造 | |
| JPH04210676A (ja) | 抗腫瘍性物質ｂｅ−１８５９１ | |
| JPH02286683A (ja) | 新規物質ｄｔ１３６およびその製造 | |
| JPH09208585A (ja) | 新規生理活性物質ｑｍ１６−ａ、その使用および製造法 | |
| JP2008007454A (ja) | 医薬組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |