KR100224476B1 - 신균주 곰팡이 슈달레세리아 속 mt60109(kctc 8804p)와 포스포리파제 c 활성저해용 조성물 - Google Patents

신균주 곰팡이 슈달레세리아 속 mt60109(kctc 8804p)와 포스포리파제 c 활성저해용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신균주 곰팡이 슈탈레세리아 속(Pseudallescheria sp.) MT60109(KCTC 8804P)와 포스포리파제 C 활성저해용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 세포내 신호전달과정이 중요효소인 포스포리파제(Phospholipase C)의 활성을 저해하여 세포의 이상신호 전달과정을 억제할 수 있는 물질을 생산하는 신규 곰팡이 균주 슈달레세리아 속 MT60109와, 이 균주의 배양액으로부터 분리 정제된 신규 화합물 티엘라빈 F(thielavin F)를 유효성분으로 함유한 포스포리파제 C 활성저해용 조성물에 관한 것이다.

Description

신균주 곰팡이 슈달레세리아 속 MT60109(KCTC 8804P)와 포스포리파제 C 활성저해용 조성물
본 발명은 균주 곰팡이 슈달레세리아 속(Pseudallescheria sp.) MT60109(KCTC 8804P)의 포스포리파제 C 활성저해용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 세포내 신호전달과졍의 중요효소인 포스포리파제 C(Phospholipase C)의 활성을 저해하여 세포의 이상신호 전달과정을 억제할 수 있는 물질을 생산하는 신규 곰팡이 균주 슈달레세리아 속 MT60l09와, 이 균주 배양액으로부터 정제된 다음 화학식 1로 표시되는 신규화합물 티엘라빈 F(thielavin F)를 유효성분으로 함유한 포스포로 함유한 포스포리파제 C 활성저해용 조성물에 관한 것이다.
포스포리파제 C(phospholipase C)는 혈소판 유래 성장인자(platelet-derived growth factor, PDGF), 표피성장인자(eqidermal growth factor, EGF) 등의 세포성장인자(growth factor)나 바소프레신(vasopressin), 안기오텐신(angiotensin) 등의자극인자가 세포막에 존재하는 각각의 수용체에 결합하므로써 활성화되고, 활성화된 포스포리파제 C는 궁극적으로 세포의 성장과 분화룔 일으킨다. 이러한 포스포리파제 C의 한 종류인 포스포리파제 Cγ를 미세조작에 의하여 NIH3T3 세포주에 주입해주거나[proc. Nat1. Acad. Sci. 86, 3659∼3663 (1989)], 또는 이의 유전자를 증폭 발현시켜주면[science, 248, 607∼610 (l990)] 그에 따른 세포분열이 활성화된다. 또한, 폐암 및 유방암 조직의 세포에서도 포스포리파제 C 효소의 발현량이 증가되었다고 보고[proc. Nat1. Acad. Sci. 88, 10435∼l0439 (1991)]도 제시되고 있다.
또한, 포스포리파제 C는 세포막에 존재하는 IgM 수용체, T세포 항원 수용체, IgE. 수용체(FcεRI) 또는 IgG 수용체(FcγRI과 FcγRII) 등과 같은 면역체계를 이루는 수용체에서도 비 수용제형 단백질 티로신 키나제에 의하여 활성화 되는 것으로 알려져 있다[Proc. Nat1. Acad. Sci. 87, 424∼428(l990), Cell, 57, 1101∼1l07 (1989)]
따라서, 포스포리파제 C의 저해물질이 새로운 신호전달과정의 이상에 의하여 발생하는 면역질환. 항암제로의 가능성이 제시되어 최근에 포스포리파제 C 저해물질을 찾으려는 연구가 진행되고 있다. 포스포리파제 C 저해물질로는 이미 비나크산톤 (vinakanthone)[Terrahed. Lett., 32, 4737~4740 (1991)]. 칼로포로시드(caloporoside)[J. Antibiotics, 47. 1188∼1194 (1994)], 히스피도스페르미딘(hispidosermidin)[J. Antibioics, 47, 1~15 (1994)] 등이 보고되고 있으나, 이들은 단순히 세포로부터 분리한 포스포리파제 Cdml 활성저해만을 보고하고 있을 뿐이다.
따라서, 소량으로서 세포로부터 분리한 포스포리파제 C의 저해활성 뿐만 아니라 세포내에서도 이들에 대한 저해활성을 보이는 새로운 물질의 개발이 절실히 요구되고 있다.
한편, 티엘라빈 A, B, C는 일본 산쿄사(Sankyo Co.)에서 차음으로 티엘라비아 테리콜라(Thielavia terricola) 균주로부터 분리하였다. [J. Antibiotics, 36, 599~600 (19830]. 티엘라빈 D, E는 일본의 시오노기사(Shionogi co.)에서 티엘라비아 테리콜라 RF-143(Thielavia terricola RF-143) 균주로부터 분리 보고하였다[J. Antibiotis, 48, l06~112 (1995)][일본특허공개 제92-117346호. 제92-117346호. 제92-159251호, 제92-159252호]. 또한 PS-990은 교와 하코 코규사(kyowa Hakko Kogyo co.)에서 아크레모니윰 속(Acremonium sp.)로으로부터 분리 보고하였다[J. Antibiotics, 47, 1175~1181 {1995)].
그러나, 본 발명에서 분리학 티엘라빈 F는 상기 티엘라빈 유도체와 유사한 살리실산(sallicylic acid) 유도체로서, 티엘라빈 유도체중 티 엘라빈 E와 가장 유사한 모습을 보이나 프로톤 핵자기 공명 스펙트럼(1H-NMR) 비교결과 티엘라빈 E와는 다른 것으로 판단되었다.
본 발명자들은 세포내 포스포리파제 C에 대하여 강한 저해활성을 나타내는 물질을 개발하기 위하여 오랜동안 연구를 수행하였다. 그 결과, 토양으로부터 슈달레세리아 속(Pseudeallescheria sp.) MT60109 균주를 선별하고, 이 균주의 배양액으로부터 포스포리파제 C를 저해하는 신규 화합물(티엘라빈 F)를 분리, 추출하고 이 화합물이 포스포리파제 C 저해활성 효과가 있음을 알게됨으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 토양으로부터 분리한 신규 곰팡이 균주 슈달레세리아 속(Pseudallescheria sp.) MT60109(KCTC 8804P)와 이러한 신균주 배양액으로부터 분리, 추출한 티엘라빈 F가 유효성분으로 함유된 포스포리파제 C 저해활성 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.
제1도는 중수소클로로포름(CDCl3)용액에서 티엘라빈 F의1H-NMR 스펙트럼을 나타낸 것이고,
제2도는 중수소메탄올(MeOD) 용액에서 티엘라빈 F의1H-NMR 스펙트럼을 나타낸 것이고,
제3도는 중수소메탄올(MeOD) 용액에서 티엘라빈 F의13H-NMR 스펙트럼을 나타낸 것이고,
제4도는 중수소메탄올(MeOD) 용액에서 티엘라빈 F의 HMBC 스펙트럼을 나타낸 것이고,
제5도는 티엘라빈 F의 전자충돌 질량분석 스펙트럼(El-Mass)을 나타낸 것이다.
본 발명은 슈달레세리아 속(Pseudallescheria sp.) MT60109(KCTC 8804P) 를 그 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 다음 화학식 1로 표시되는 티엘라빈 F를 유효성분으로 함유하는 포스포리파제 C 활성저해용 조성물을 그 특징으로 한다.
Figure kpo00002
본 발명에 따른 신균주 곰팡이 슈달레세리아 속 MT60109의 분리 및 동정과정은 다음과 같다.
[신규 미생물의 분리]
멸균 생리식염수 10㎖에 풍건에 토양시료 1g을 넣고 30분 동안 교반한 다음, 10-2~10-4배로 희석하여 0.1㎖을 포테이토 텍스트로스 아가(potato dextrose agar) 배자에 도달한 후, 25℃에서 7~10일간 배양하여 나타난 집락을 순수 분리하였다.
[신규 미생물의 동정]
1) 형태 및 배양학적 특성
MT60109는 전형적인 곰팡이의 특성을 보이는 균주로서 형태 및 배양학적 특성은 다음 표 1과 같다.
Figure kpo00003
2) 생리학적 특성
MT60109의 성장은 7일때 최고치에 다다르며, 티엘라빈 F의 생산은 6일 배양시 극대화 되었다. 티엘라빈 F의 생산 최적온도는 25℃가 되며, pH 7.0에서 배양이 시작되었을 때 6일 후 약염기성인 pH 8.5~9.0으로 변하였다.
티엘라빈 F의 생산조건은 0.5 vvm, 교반속도 200 rpm, 온도 25℃의 배양조건이 필수적이다.
3) 신균주 미생물 곰팡이 MT60109의 동정 및 명령
형태적, 배양학적 및 생리적 특성을 분석한 결과, 본 발명에서 분리된 MT60109 균주가 곰팡이에 속하는 미생물임을 문헌[Medically Important Fungi. 1995, ASM press, Washington D. C.; Compenium of Soil Fungi, 1980, Academic Press, London]에 의해 확인할 수 있었다. 이상의 특성을 근거로하여 MT60109 균주로 명명하고, 1997년 6월 5일부터 대한민국 특허균주 기탁기관인 한국과학기술 연구원 생명공학연구소내 유전자은행에 기탁하여 수탁번호 KCTC 8804P를 부여받았다.
[신균주 미생물의 배양]
슈달레세리아 속 MT60109를 배양하기 위해, 통상적으로 미생물이 이용하는 영양원을 함유하는 배지를 준비한다. 즉, 영양원으로 탄소원은 포도당, 과당등을 사용하며, 질소원으로 펩톤, 트립톤 등을 사용한다. 기타 필요에 따라서 황산 마그네슘 및 기타 무기염류를 첨가하는 것이 바람직하다. 그리고, 배양방법으로는 23~28℃ 부근의 호기적인 조건하에서 액침 배양법이 적당하다.
이를 구체적으로 살펴보면, 종배지 및 생산배지로서 이스트 엑기스(0.3%), 말트 엑기스(0.3%), 펩톤(0.5%), 포도당(1%)이 함유된 배지를 사용한다. 1ℓ의 삼각플라스크 3개의 각각 200㎖씩 분주한 종배지를 121℃에서 20분간 살균한 후, 사면배양한 MT60109 균주를 백금이로 접종하고, 25℃에서 3일간 진탕배양하여 배양기의 종배양으로 한다. 121℃에서 1시간 살균한 생산배지(10ℓ)를 함유한 15ℓ 배양기(fermentor)에 강기의 공 배양액 600㎖를 섭송한 뒤, 25℃에서 300 rpm의 속도로 교반과 함께 통기하의 호기적 조건에서 7일간 배양한다.
[슈달레세리아 속 MT60109로부터 티엘라빈 F의 분리 및 정제]
슈달레세리아 속(Pseudallescheria sp.) MT60109의 배양액을 부탄올 용매로 추출하고, 수득된 추출액으로부터 감압 건조기를 이용하여 감압증발으로 농축한뒤, 흡착 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피 및 고압 액체 크로마토그래피를 이용한 정제방법에 의해 상기 화학식 1로 표시되는 티엘라빈 F를 분리 정제하였다.
분리 정제된 티엘라빈 F는 흰색 분말로서, 메탄올, 아세톤 등의 유기용매에는 잘 용해되나 물에는 녹지 않았다. 그리고, 티엘라빈 F의 구조 분석 결과는 다음 표 2에 나타내었다.
Figure kpo00004
상기 표 2의 결과에서 알 수 있듯이, 적외선 분광광도 스펙트럼(IR)에서는 2796~3052 ㎝-1근처에서 카부실신(carboxylic acid)의 하이르콕시(OH) 신축신공과, 1731 ㎝-1에서 에스테르(ester), 1,151 ㎝-1에서 에테르(ether)의 신축운동에 기인한 피크를 확인하였다. 자외선 분광광도 브펙트럼(UV)에서는 277㎚와 310㎚에서 최대 흡수파장을 확인하였으며, 알카리 용액에서는 241㎚와 315㎚로 흡수파장의 이동이 관찰되었다. 고속 원자충돌 질량분석 스펙트럼(FAB-Mass)에서는 티엘라빈 F의 분자량을 552로 확인하였다.
양성자 공명 스펙트럼(-1H-NMR)에서는 2.1~2.8 ppm 사이에서 7개의 메틸기(CH2), 3.9~4.1 ppm 사이에서 2개의 메톡시기(OCH3), 6.0~7.0 ppm 사이에서 방향족 환에 기인한 두 개의 양성자(H)의 피크를 확인할 수 있었다[도 1과 도 2 참조].
또한 탄소 핵자기공명 스펙트럼(13C-NMR)에서는 8.0~26.0 ppm에서 7개의 메틸피크, 62 ppm 근처에서 2개의 메톡시 피크, 112.52와 112.41 ppm에서 2개의 방향족 환에 기인한 탄소 피크와 103~171 ppm 사이에서 20개의 4급 탄소를 확인할수 있었다[도 3 참조]. 그리고, 각 치환기의 위치는 HMBC 스펙트럼을 이용하여 결정하였다[도 4 참조].
또한, 본 발명에 따른 신규 화합물 티엘라빈 F에서 각 환의 위치결정은 티엘라빈 C와 티엘라빈 F의 전자충돌 질량분석 스펙트럼(EI-Mass) 결과에 의한 질량 부서짐 형태로부터 결정하였다.
지금까지 보고된바에 의하면 티엘라빈 A, B, C, D, E와 PS-990의 구조는 티엘라빈 B와 C의 분해물인 데스펩타이드(despeptides)를 X-ray 결정구조로 확인한 뒤 절대구조를 결정하고 나머지 화합물은1H-NMR과13C-NMR을 비교 분석하여 신규 여부를 결정하였다. 그러나, 본 발명자들은 슈달레세리아 속 MT60109 균주로부터 티엘라빈 C와 신규 화합물 티엘라빈 F 화합물을 분리하고, 이의 구조를1H-NMR과13C-NMR, HMBC 실험 및 EI-Mass의 질량 부서짐 형태(fragmentation pattern)로부터 확인하였는 바, 이와 같이 화합물들의 양성자(H)와 탄소(C)의 정확한 해석에 의한 구조결정은 처음이다.
티엘라빈 C는 분자량 566의 공지화합물로서 이의 정확한 구조는 다음 화학식 2에 나타낸 바와 같이 A환, B환 및 C환이 차례로 결합되어 있다.
Figure kpo00005
상기 화학식 2로 표시되는 티엘라빈 C에 대한 전자충돌 질량분석 스펙트럼(EI-Mass)에 의해 α-분해(α-Cleavage) 피크인 357 피크와 209 피크를 확인하였다. 357 피크는 티엘라빈 C의 A환과 B환이 결합된 형태에서 관측되는 피크이며, 또한 이로부터 생성된 B환의 분해물에 해당하는 192 피크를 확인하였다.
이와 같은 결과를 토대로하여 본 발명에 따른 티엘라빈 F를 구성하는 각 환의 위치를 결정하였다. 티엘라빈 F에 대한 전자충돌 질량분석 스펙트럼(EI-Mass)에서는 A환과 B환이 결합된 형태에서 관측되는 357 피크와, 메틸기가 탈착된 C환에 해당하는 195 피크를 확인하였다[도 5참조]. 따라서, 본 발명에 따른 티엘라빈 F의 구조 해석 결과는 다음 화학식 3으로 표시된다.
Figure kpo00006
[포스포리파제 C 활성저해용 조성물]
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 티엘라빈 F를 유효성분으로 함유하는 포스포리파제 C 활성저해용 조성물을 포함한다.
즉, 신균주 슈달레세리아 속 MT60109로부터 분리 정제된 상기 화학식 1로 표시되는 티엘라빈 F가 포스포리파제 C에 대한 저해활성을 갖는 것을 처음으로 알아내고, 이를 유효성분으로 함유하는 포스포리파제 C의 활성저해용 조성물을 개발하였다.
본 발명에 따른 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 유효성분 이외에도 해당기술분야에서 통상의 지식을 가진 전문가라면 용이하게 알 수 있는 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 무형제를 사용하여 정제, 산제, 과립, 캅셀제, 현탁액, 유화액 또는 비경구 투여용의 단위투여형 또는 수회 투여형 제제로 제형화하여 사용할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 유효성분의 유효투입량은 환자의 나이, 신체적 조건, 몸무게 등에 의해 다양해질 수 있지만, 일반적으로 1~10 ㎎/㎏(몸무게)/1일 범위내에서 투여된다. 그리고, 1일 유효투입량 범위내에서 하루에 한 번 또는 하루에 여러번 나누어 투입한다.
이하 본 발명을 실시예에 의해 더욱 상세히 설명하는 바, 본 발명이 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1 : 티엘라빈 F의 분리 및 정제]
신균주 슈달레세리아 속 MT60109의 배양액을 5,000 rpm에서 원심분리하여 배양 상동액과 균체 침전물로 나누었다. 우선, 배양 상등액을 디아이온 에치피 -20(Diaion HP-20)에 흡착시킨 다음 30% 메탄올로 세척하였다. 아세톤을 사용하여 흡착물질을 용출시킨 뒤 균체 침전물의 아세톤 추출액과 합하여 농축하였다. 그런다음, 농축액을 소량의 물에 녹여 부탄올로 추출한 뒤 추출물을 농축하고 실리카겔에 흡착시켜 클로로포름/메탄올(10/1)을 전개용매로하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피하였다. 포스포리파제 C 저해활성이 강한 분획을 모아 농축시킨 후, 50% 메탄올을 전개용매로 로바(Lobar) RP-18 칼럼 크로마토그래피 하였다.
이때 활성물질과 물리적 성상이 비슷한 물질들을 제거하기 위하여 클로로포름/n-헥산/메탄올(2/3/1) 혼합용액을 사용하여 세파덱스(Sephadex) LH-20 칼럼 크로마토그래피를 실시하였다. 분리된 분획들중 활성분획을 모아 농축한 뒤 고압 액체 크로마토그래피(칼럼,
Figure kpo00007
ODS-AM, Φ6.0㎜×250㎜, 용매 : 0.01% 트리플루오로아세트산(TFA)을 함유한 50% 메탄올, 유속 : 2 ㎖/분, 검출 : 254 ㎚)를 실시하여 체류시간 21분 대에서 티엘라빈 F를 순수 분리하고, 용매를 감압 건조기로 제거하여 백색 분말을 수득하였다.
[실시예 2 : 포스포리파제 C 저해활성 측성]
20μCi의 [3H]-포스파티딜이노시톨(Pl, 아머삼사)이 포함된 50μM 포스파티딜이노시톨, 1 mM 이지티에이(EGTA), 3 mM 염화칼슘(CaCl2), 50mM 헤페스(HEPES : pH 7.0) 및 0.1% 데옥시콜레이트나트륨(sodium deoxycholate)으로 구성된 반응액(185 ㎕)에 효소액(5 ㎕)과 검정시료(10 ㎕)를 첨가한 다음, 37℃에서 10분간 반응시킨 후 클로로포름/메탄올(2/1) 혼합용액 1㎖을 넣어 반응을 중지시켰다. 이후 원심분리하여 상동액충의 방사능(radioactivity)을 측정하였다.
또한, 분리된 티엘라빈 F의 포스포리파제 C 저해활성 정도를 측정하였다. 이때, 포스포리파제 C는 소의 작은 뇌로부터 정제하여 사용하였다[과기처 연구보고서, 세포반응의 신호전달조절 선도물질의 탐색기술개발(1993)]. 효소 저해율은 다음 수학식 1과 같이 계산하였으며, IC50값은 효소활성의 저해율이 50%에 달하는 저해제의 농도로 결정하였다. 그 결과, 티엘라빈 F의 포스포리파제 C 효소의 환성을 50% 저해하는 농도(IC50)는 11㎍/㎖ 이었으며, 물 농도로 계산하면 20 μM이었다.
Figure kpo00008
상기 수학식 1에서 :
A는 저해제를 넣지 않고 반응시킨 후의 방사농이고, B는 효소액을 넣지 않고 반응시킨 후의 방사농이고, C는 저해제를 넣고 반응시킨 후의 방사능이다.
[실시예 3 : 세포 내에서의 신호전달과정의 저해활성 측정]
티엘라빈 F의 세포내에서 신호전달과정의 저해활성은 NIH3T3γ1 세포주를 사용하여 세포내 총 이노시를 포스페이트(inositol phosphate total, IPt)양을 측정함으로써 결정하였다.
즉, 이노시를(inositol)을 제거한 디엠이엠(DMEM) 배지에 6×105세포/㎖의 NIH3T3γ1 세포주를 접종하고, 24시간 동안 1μCi의 마이오-[2-3H]-이노시톨과 함께 배양하였다. 이렇게 배양한 세포주를 인산완충생리식염수(phosphate Buffer Saline, PBS)로 세척한 뒤 15분 동안 배양을 계속하였다. 그런 다음, 여기에 검정시료를 5 ㎕를 첨가한 뒤 20분 동안 계속 배양하였고, 그런 다음 혈소판 유래성장인자(PDGF)로 30분 동안 자극하였다. 이렇게 자극된 세포주를 5% 과염소산을 사용하여 반응을 중지시킨 뒤, 세포내의 이노시톨 포스페이트를 추출하였다. 추출된 이노시를 포스페이트를 음이온 교환칼럼(Biorad AG 1X-8)을 사용하여 흡착시킨 뒤, 증류수 10 ㎖로 세척하고 5mM 사붕산나트륨(sodium tetraborate)과 60 mM 포름산암모늄(ammonium formate)용액 10 ㎖를 사용하여 다시 세척하였다. 마지막으로 1 M 포름산암모늄과 0.1 M 포름산을 사용하여 이노시톨 포스페이트를 용출시킨 뒤 방사능을 측정하였다. 이때, 저해율은 상기 수학식 1의 저해율 계산방법에 따라 행하였다.
분리된 티엘라빈 F를 NIH3T3γ1 세포주를 사용하여 혈소판 유리성장인자(PDGF) 자극에 의한 이노시톨포스페이트(IPt) 생성을 확인하는 방법으로 세포내 신호 전달과정의 저해정도를 측정한 결과, 11 ㎕/㎖의 농도에서 IC50값을 보여 주었으며, 이를 몰 농도로 계산하면 20 μM이었다.
[실시예 4 : 정제의 제조]
티엘라빈 F 10g
락토스 70g
결정성 셀룰로오스 15g
마그네슘 스테아레이트 5g
총량 100g
상기에서 나열된 성분들을 잘게 부숴 혼합한 후, 직타법(direct tableting method)에 의해 정제를 제조하였다. 각 정제의 총량은 100 ㎎이었고, 그 중 유효성분(티엘라빈 F)의 함량은 10 ㎎이었다.
[실시예 5 : 분말제의 제조]
티엘라빈 F 10g
옥수수전분 50g
카르복시 셀룰로오스 15g
총량 100g
상기에서 나열된 성분들을 잘게 부숴 혼합하여 분말을 제조하였다. 5번 경질캡슐에 분말 100㎎을 넣어 캡슐제를 제조하였다.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 신균주 곰팡이 슈달레세리아 속(Pseudallescheria sp.) MT60109 배양액으로부터 분리 정제된 신규 화합물 티엘라빈 F는 포스포리파제 C의 활성을 저해하는 작용이 우수하므로 신호전달과정의 이상에 의하여 발생하는 질환(예를들면, 암, 면역질환, 염증 등)들의 치료제의 유효성분으로 유용하다.

Claims (4)

  1. 신규 곰팡이 슈달레세리아 속(Pseudallescheria sp.) MT60109(KCTC 8804P).
  2. 다음 화학식 1로 표시되는 티엘라빈 F.
    화학식 1
    Figure kpo00009
  3. 다음 화학식 1로 표시되는 티엘라빈 F가 유효성분으로 함유된 것임을 특징으로 하는 포스포리파제 C 활성저해용 조성물.
    화학식 1
    Figure kpo00010
  4. 다음 화학식 1로 표시되는 티엘라빈 F를 유효성분으로 하는 것을 특징으로 하는 포스포리파제 C 활성저해제.
    화학식 1
    Figure kpo00011
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR100383215B1 (ko) * 2000-09-25 2003-05-12 한국생명공학연구원 신균주 ｍｔ90049(ｋｃｔｃ 18043ｐ)와 이 균주로부터생산된 신규 화합물과 신규 화합물의 용도

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