JP2833181B2 - Ｆｒ９０１３７５物質およびその製造法 - Google Patents
Ｆｒ９０１３７５物質およびその製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 この発明は、以下FR901375物質と呼ぶところの、生物
活性を有する新規化合物に関する。より詳しくは、この
発明は、抗菌活性および抗腫瘍活性を有する新規で生物
活性のあるFR901375物質、その製造法およびそれを含有
してなる医薬組成物に関する。
活性を有する新規化合物に関する。より詳しくは、この
発明は、抗菌活性および抗腫瘍活性を有する新規で生物
活性のあるFR901375物質、その製造法およびそれを含有
してなる医薬組成物に関する。
この発明のFR901375物質は、シュードモナス・クロロ
ラフィスNo.2522のごとき、シュードモナス属に属するF
R901375物質生産菌株を栄養培地中で培養することによ
り生産できる。
ラフィスNo.2522のごとき、シュードモナス属に属するF
R901375物質生産菌株を栄養培地中で培養することによ
り生産できる。
この醗酵プロセスを以下に詳細に説明する。
（１）微生物 FR901375物質の生産に用いる微生物の詳細を以下に説
明する。
明する。
No.2522株の分類学的検討： No.2522株は、千葉県で採集された土壌試料から単離
された。
された。
この分類学的検討には、バージーズ・マニュアル・オ
ブ・システマティック・バクテリオロジー（第１巻）に
記載されている諸方法を主として採用した。
ブ・システマティック・バクテリオロジー（第１巻）に
記載されている諸方法を主として採用した。
（ｉ）形態上の特徴： No.2522株の形態観察を、栄養ブロスおよび寒天上で3
0℃で20時間培養した細胞について、光学顕微鏡および
電子顕微鏡により行った。
0℃で20時間培養した細胞について、光学顕微鏡および
電子顕微鏡により行った。
No.2522株はグラム陰性菌であり、極多毛性鞭毛によ
って運動性を示した。細胞の形は桿状で、大きさは約0.
7〜0.8×2.0〜2.5μｍであった。
って運動性を示した。細胞の形は桿状で、大きさは約0.
7〜0.8×2.0〜2.5μｍであった。
この菌株は、バクト・シュードモナス寒天Ｆ培地（デ
ィフコ製）上で拡散性の蛍光色素を産生した。この菌株
は、緑色の可溶性色素（クロロラフィン）を産生し、こ
れは、コロニー中およびその周囲の培地中に晶出した。
ィフコ製）上で拡散性の蛍光色素を産生した。この菌株
は、緑色の可溶性色素（クロロラフィン）を産生し、こ
れは、コロニー中およびその周囲の培地中に晶出した。
結果を第１表に示す。
（ii）生理学的特性： No.2522株の生理学的特性を第２表にまとめた。成育
温度域は３℃〜35℃であった。
温度域は３℃〜35℃であった。
No.2522株は、オキシダーゼ陽性、カタラーゼ陽性
で、Ｏ−Ｆテストは酸化性であった。この菌株は、ゼラ
チンおよびカゼインを加水分解した。デンプン加水分解
は陰性であった。Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、Ｄ
−フルクトース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンニトール
およびスクロースから酸性成が観察された。ラクトース
およびマルトースからは酸は生成しなかった。この菌株
は、Ｌ−アラビノースおよびソルビトールを利用しなか
った。
で、Ｏ−Ｆテストは酸化性であった。この菌株は、ゼラ
チンおよびカゼインを加水分解した。デンプン加水分解
は陰性であった。Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、Ｄ
−フルクトース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンニトール
およびスクロースから酸性成が観察された。ラクトース
およびマルトースからは酸は生成しなかった。この菌株
は、Ｌ−アラビノースおよびソルビトールを利用しなか
った。
（iii）同定 バージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・
バクテリオロジー（第１巻）に従い、No.2522株は、上
記の諸特性から、シュードモナス属に属すると考えられ
た。
バクテリオロジー（第１巻）に従い、No.2522株は、上
記の諸特性から、シュードモナス属に属すると考えられ
た。
バージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・
バクテリオロジー（第１巻）に記載されているシュード
モナス属諸種の特性を比較したのみ、より詳細な比較の
ために、シュードモナス・クロロラフィス・ギニャール
＆ソヴァジョー（Guignard and Sauvageau）1984を選択
した。
バクテリオロジー（第１巻）に記載されているシュード
モナス属諸種の特性を比較したのみ、より詳細な比較の
ために、シュードモナス・クロロラフィス・ギニャール
＆ソヴァジョー（Guignard and Sauvageau）1984を選択
した。
それゆえ、No.2522株をシュードモナス・クロロラフ
ィスと比較した。２種の培養の間に有意差は認められ
ず、No.2522株の諸性質はジュードモナス・クロロラフ
ィスと良好な一致を示した。
ィスと比較した。２種の培養の間に有意差は認められ
ず、No.2522株の諸性質はジュードモナス・クロロラフ
ィスと良好な一致を示した。
それゆえ、No.2522株はシュードモナス・クロロラフ
ィスであると同定した。
ィスであると同定した。
シュードモナス・クロロラフィスNo.2522の培養物
が、工業技術院微生物工業技術研究所（茨城県つくば市
東１丁目１−３）に寄託番号FERM−BP2572のもとに寄託
されている（寄託日:1989年８月29日）。
が、工業技術院微生物工業技術研究所（茨城県つくば市
東１丁目１−３）に寄託番号FERM−BP2572のもとに寄託
されている（寄託日:1989年８月29日）。
（２）FR901375物質の生産 この発明のFR901375物質は、シュードモナス属に属す
るFR901375物質生産株（たとえばシュードモナス・クロ
ロラフィスNo.2522）を、同化性の炭素源、窒素源を含
有する栄養培地中で好気的条件下に（たとえば振盪培
養、液内培養など）成育させるときに、生産される。
るFR901375物質生産株（たとえばシュードモナス・クロ
ロラフィスNo.2522）を、同化性の炭素源、窒素源を含
有する栄養培地中で好気的条件下に（たとえば振盪培
養、液内培養など）成育させるときに、生産される。
栄養培地中の好ましい炭素源は、グルコース、デンプ
ン、フルクトース、グリセリンなどの炭水化物である。
ン、フルクトース、グリセリンなどの炭水化物である。
好ましい窒素源は、ブイヨン、酵母エキス、ペプト
ン、グルテン粉、綿実粉、大豆粉、コーン・スティープ
リカー、乾燥酵母、小麦麦芽などならびにアンモニウム
塩（たとえば硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、燐
酸アンモニウムなど）、尿素、アミノ酸などの無機およ
び有機窒素化合物である。
ン、グルテン粉、綿実粉、大豆粉、コーン・スティープ
リカー、乾燥酵母、小麦麦芽などならびにアンモニウム
塩（たとえば硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、燐
酸アンモニウムなど）、尿素、アミノ酸などの無機およ
び有機窒素化合物である。
炭素源および窒素源は、組合せて用いるのが有利であ
るが、純粋な形で用いる必要はなく、微量の成長因子お
よび相当量の無機栄養素を含有する低純度の材料も使用
に適している。
るが、純粋な形で用いる必要はなく、微量の成長因子お
よび相当量の無機栄養素を含有する低純度の材料も使用
に適している。
培地には、所望により、炭酸ナトリウムもしくはカル
シウム、燐酸ナトリウムもしくはカリウム、塩化ナトリ
ウムもしくはカリウム、沃化ナトリウムもしくはカリウ
ム、マグネシウム塩類、銅塩類、コバルト塩類などの無
機塩類を添加してもよい。
シウム、燐酸ナトリウムもしくはカリウム、塩化ナトリ
ウムもしくはカリウム、沃化ナトリウムもしくはカリウ
ム、マグネシウム塩類、銅塩類、コバルト塩類などの無
機塩類を添加してもよい。
必要なときは、とくに培地が激しく泡立つときは、流
動パラフィン、脂肪油、植物油、鉱油、シリコーンなど
の消泡剤を添加してもよい。
動パラフィン、脂肪油、植物油、鉱油、シリコーンなど
の消泡剤を添加してもよい。
他の生物活性物質の大量生産に好ましく用いられる方
法の場合と同様に、FR901375物質の大量生産には、液内
（深部）培養条件が好ましい。
法の場合と同様に、FR901375物質の大量生産には、液内
（深部）培養条件が好ましい。
少量生産には、フラスコ中での振盪培養を用いる。
さらに、成育を大型タンク中で行うときには、FR9013
75物質生産プロセスにおける成育の遅れを避けるため
に、生産タンクへの接種に、当該細菌の栄養細胞を用い
るのが好ましい。従って、まず、比較的少量の培地に当
該細菌の細胞を接種し、該接種培地を培養して、当該細
菌の栄養細胞を生産し、つぎに、培養した栄養細胞を大
型タンクへ移すことが望ましい。栄養細胞を生産するた
めの培地は、FR901375物質の生産に用いる培地と実質的
に同じてあっても異なっていてもよい。
75物質生産プロセスにおける成育の遅れを避けるため
に、生産タンクへの接種に、当該細菌の栄養細胞を用い
るのが好ましい。従って、まず、比較的少量の培地に当
該細菌の細胞を接種し、該接種培地を培養して、当該細
菌の栄養細胞を生産し、つぎに、培養した栄養細胞を大
型タンクへ移すことが望ましい。栄養細胞を生産するた
めの培地は、FR901375物質の生産に用いる培地と実質的
に同じてあっても異なっていてもよい。
培養混合物の撹拌および通気は、種々の方法により実
施できる。撹拌は、プロペラまたはこれと類似の機械的
撹拌装置によって、醗酵槽の回転または振盪によって、
種々のポンプ装置によって、または培地に無菌空気を通
すことによって、行うことができる。通気は、醗酵混合
物に無菌空気を通すことによって実施できる。
施できる。撹拌は、プロペラまたはこれと類似の機械的
撹拌装置によって、醗酵槽の回転または振盪によって、
種々のポンプ装置によって、または培地に無菌空気を通
すことによって、行うことができる。通気は、醗酵混合
物に無菌空気を通すことによって実施できる。
醗酵は、通常、約15℃〜35℃の間の温度で、約15〜50
時間にわたって行われ、これらは醗酵条件および規模に
応じて変えればよい。
時間にわたって行われ、これらは醗酵条件および規模に
応じて変えればよい。
醗酵完了後、培養液を、生物活性物質の回収、精製に
慣用されている種々の工程、たとえば適当に溶媒または
何種類かの溶媒の混合物を用いての溶媒抽出、クロマト
グラフィーあるいは適当な溶媒または何種類かの溶媒の
混合物からの再結晶に付して、FR901375物質を回収す
る。
慣用されている種々の工程、たとえば適当に溶媒または
何種類かの溶媒の混合物を用いての溶媒抽出、クロマト
グラフィーあるいは適当な溶媒または何種類かの溶媒の
混合物からの再結晶に付して、FR901375物質を回収す
る。
この発明に従えば、一般に、FR901375物質は、主とし
て細菌の細胞内に見出される。しかし、濾液もFR901375
物質を含有する。従って、培養液全体を、たとえば熱
水、アセトン、酢酸エチルあるいはこれらの溶媒の混合
物などの適当な溶媒を用いて抽出によるFR901375物質単
離工程に直接付すのが好ましい。
て細菌の細胞内に見出される。しかし、濾液もFR901375
物質を含有する。従って、培養液全体を、たとえば熱
水、アセトン、酢酸エチルあるいはこれらの溶媒の混合
物などの適当な溶媒を用いて抽出によるFR901375物質単
離工程に直接付すのが好ましい。
抽出液を常法により処理して、FR901375物質を得る。
たとえば、抽出液を少量になるまで蒸発または蒸留して
濃縮し、生じた活性物（すなわちFR901375物質）含有残
留物を、慣用の精製法、たとえばクロマトグラフィーあ
るいは適当な溶媒または何種類かの溶媒の混合物からの
再結晶によって、精製する。
たとえば、抽出液を少量になるまで蒸発または蒸留して
濃縮し、生じた活性物（すなわちFR901375物質）含有残
留物を、慣用の精製法、たとえばクロマトグラフィーあ
るいは適当な溶媒または何種類かの溶媒の混合物からの
再結晶によって、精製する。
（３）FR901375物質の物理化学的性質： 上記醗酵法に従って得られたFR901375物質は、次の物
理化学的性質をもつ。
理化学的性質をもつ。
外観：無色プリズム晶 酸性、中性、塩基性の別：中性物質 融点:222〜226℃（分解） 比旋光度：▲［α］21 D▼：−25.3゜（ｃ＝1.0,CHCl3） 分子式:C24H38N4O7S2 元素分析値 C24H38N4O7S2としての計算値:C,51.59;H,6.86;N,10.03:
S,11.48（％） 実測値:C,50.69;H,6.78;H,9.73;S,11.47（％） 分子量： 558 FAB−MS m/z559（Ｍ＋Ｈ）＋ 高分解能FAB−MASS 559.2270 （C24H38N4O7S2としての計算値:559.2260） 溶解性： 可溶：クロロホルム、酢酸エチル 僅溶：メタノール、アセトン 不溶：水、ヘキサン 呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、沃素蒸気反応 陰性：ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反応、エールリ
ッヒ反応、モーリッシュ反応 薄層クロマトグラフィー： 紫外吸収スペクトル： 末端吸収（メタノール中） 1H核磁気共鳴スペクトル： ［CD3OD,400MHz］ δ:5.87（1H,m）,5.68（1H,broad d,J＝16Hz）,5.60（1
H,broad）,4.69（1H,t,J＝5.5Hz）,4.43（1H,d,J＝2.5H
z）,4.33（1H,dq,J＝2.5and6.5Hz）,4.02（1H,d,J＝8.5
Hz）,3.56（1H,d,J＝9.5Hz）,3.38（2H,d,J＝5.5Hz）,
2.95（2H,m）,2.87（1H,dd,J＝6.5and14Hz）,2.62（1H,
dd,J＝7and14Hz）,2.61（2H,m）,2.45（1H,m）,2.09（1
H,m）,1.17（3H,d,J＝6.5Hz）,1.03（3H,d,J＝6.5Hz）,
1.01（3H,d,J＝6.5Hz）,0.99（3H,d,J＝6.5Hz）,0.98
（3H,d,J＝6.5Hz）ppm13 C核磁気共鳴スペクトル： （CD3OD,100MHz） δ:175.27（ｓ）,174.40（ｓ）,172.37（ｓ）,171.87
（ｓ）,170.37（ｓ）,133.76（ｄ）,127.37（ｄ）,71.3
5（ｄ）,68.39（ｄ）,66.48（ｄ）,62.03（ｄ）,60.08
（ｄ）,55.01（ｄ）,41.71（ｔ）,40.42（ｔ）,38.38
（ｔ）,34.63（ｔ）,31.47（ｄ）,29.32（ｄ）,20.26
（ｑ）,20.19（ｑ）,19.93（ｑ）,19.86（ｑ）,19.08
（ｑ）ppm 上記の物理化学的性質から、FR901375物質は次の化学
式をもつことが証明された： （４）FR901375物質の生物学的性質： FR901375物質の生物活性を示す例として、以下に若干
の生物学的データを説明する。
S,11.48（％） 実測値:C,50.69;H,6.78;H,9.73;S,11.47（％） 分子量： 558 FAB−MS m/z559（Ｍ＋Ｈ）＋ 高分解能FAB−MASS 559.2270 （C24H38N4O7S2としての計算値:559.2260） 溶解性： 可溶：クロロホルム、酢酸エチル 僅溶：メタノール、アセトン 不溶：水、ヘキサン 呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、沃素蒸気反応 陰性：ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反応、エールリ
ッヒ反応、モーリッシュ反応 薄層クロマトグラフィー： 紫外吸収スペクトル： 末端吸収（メタノール中） 1H核磁気共鳴スペクトル： ［CD3OD,400MHz］ δ:5.87（1H,m）,5.68（1H,broad d,J＝16Hz）,5.60（1
H,broad）,4.69（1H,t,J＝5.5Hz）,4.43（1H,d,J＝2.5H
z）,4.33（1H,dq,J＝2.5and6.5Hz）,4.02（1H,d,J＝8.5
Hz）,3.56（1H,d,J＝9.5Hz）,3.38（2H,d,J＝5.5Hz）,
2.95（2H,m）,2.87（1H,dd,J＝6.5and14Hz）,2.62（1H,
dd,J＝7and14Hz）,2.61（2H,m）,2.45（1H,m）,2.09（1
H,m）,1.17（3H,d,J＝6.5Hz）,1.03（3H,d,J＝6.5Hz）,
1.01（3H,d,J＝6.5Hz）,0.99（3H,d,J＝6.5Hz）,0.98
（3H,d,J＝6.5Hz）ppm13 C核磁気共鳴スペクトル： （CD3OD,100MHz） δ:175.27（ｓ）,174.40（ｓ）,172.37（ｓ）,171.87
（ｓ）,170.37（ｓ）,133.76（ｄ）,127.37（ｄ）,71.3
5（ｄ）,68.39（ｄ）,66.48（ｄ）,62.03（ｄ）,60.08
（ｄ）,55.01（ｄ）,41.71（ｔ）,40.42（ｔ）,38.38
（ｔ）,34.63（ｔ）,31.47（ｄ）,29.32（ｄ）,20.26
（ｑ）,20.19（ｑ）,19.93（ｑ）,19.86（ｑ）,19.08
（ｑ）ppm 上記の物理化学的性質から、FR901375物質は次の化学
式をもつことが証明された： （４）FR901375物質の生物学的性質： FR901375物質の生物活性を示す例として、以下に若干
の生物学的データを説明する。
試験例１ FR901375物質の抗菌活性： FR901375物質の抗菌活性を、サブロー培地中、寒天希
釈法により求めた。
釈法により求めた。
最小発育阻止濃度（MIC）を、25℃で48時間のインキ
ュベーションののち、μg/mlで表わす。結果を第３表に
示す。
ュベーションののち、μg/mlで表わす。結果を第３表に
示す。
試験例２ インビトロでのFR901375物質によるヒト腫瘍細胞増殖の
阻害 10％ウシ胎児血清、ペニシリン（50単位/ml）および
ストレプトマイシン（50μg/ml）を加えたダルベッコの
最小必須培地100μ中の４×103個の腫瘍細胞を各ウエ
ルに含むマイクロタイタープレートを用いて、細胞毒性
試験を行った。それらの細胞を37℃で４日間インキュベ
ートし、モスマン（Mosmann）が記載している方法（J.I
mmunol.Methods,65,55〜63,1983）に従って、比色MTT
［３−（4,5−ジメチルチアゾール−２−イル）−2,5−
ジフェニルテトラゾリウム・ブロミド］アッセイを行っ
た。MTTを燐酸緩衝液（PBS）に5mg/ml濃度に溶解し、濾
過減菌して、同時に少量の不溶物を除去した、ヒト腫瘍
細胞の培養を終えたのち、このMTT溶液（培地100μ当
り10μ）を全てのアッセイウエルに加え、プレートを
さらに37℃で４時間インキュベートした。酸性イソプロ
パノール（イソプロパノール中0.04N HCl100μ）を
全てのウエルに加え、よく混合して、暗青色の結晶を溶
解させた。結晶が全て溶解したのち、２波長マイクロプ
レート光度計（MTP−22型；コロナ電気株式会社、勝田
市）を用い、参照波長を660nmとして、550nmでプレート
の読取りを行った。この発明の目的化合物は、メタノー
ルに溶解し、ダルベッコの最小必要培地で希釈して、最
終濃度１μg/ml以下となるように培養物に添加した。結
果を第４表に示す。
阻害 10％ウシ胎児血清、ペニシリン（50単位/ml）および
ストレプトマイシン（50μg/ml）を加えたダルベッコの
最小必須培地100μ中の４×103個の腫瘍細胞を各ウエ
ルに含むマイクロタイタープレートを用いて、細胞毒性
試験を行った。それらの細胞を37℃で４日間インキュベ
ートし、モスマン（Mosmann）が記載している方法（J.I
mmunol.Methods,65,55〜63,1983）に従って、比色MTT
［３−（4,5−ジメチルチアゾール−２−イル）−2,5−
ジフェニルテトラゾリウム・ブロミド］アッセイを行っ
た。MTTを燐酸緩衝液（PBS）に5mg/ml濃度に溶解し、濾
過減菌して、同時に少量の不溶物を除去した、ヒト腫瘍
細胞の培養を終えたのち、このMTT溶液（培地100μ当
り10μ）を全てのアッセイウエルに加え、プレートを
さらに37℃で４時間インキュベートした。酸性イソプロ
パノール（イソプロパノール中0.04N HCl100μ）を
全てのウエルに加え、よく混合して、暗青色の結晶を溶
解させた。結晶が全て溶解したのち、２波長マイクロプ
レート光度計（MTP−22型；コロナ電気株式会社、勝田
市）を用い、参照波長を660nmとして、550nmでプレート
の読取りを行った。この発明の目的化合物は、メタノー
ルに溶解し、ダルベッコの最小必要培地で希釈して、最
終濃度１μg/ml以下となるように培養物に添加した。結
果を第４表に示す。
試験例３ P388マウス白血病に対するFR901375物質の抗腫瘍活性 マウス腫瘍系で、FR901375物質の抗腫瘍活性を求め
た。P338白血病細胞（１×106個）をBDF1マウス（雌
性、７週令）、の腹腔内に移植した。腫瘍細胞接種から
24時間後に、FR901375物質を腹腔内投与した。FR901375
物質の腹腔内投与をもう３日間、１日１回の頻度で継続
した。FR901375物質は、0.5％メチルセルロース含有食
塩液に懸濁させた。対照マウスには、0.5％メチルセル
ロース含有食塩液を腹腔内投与した。
た。P338白血病細胞（１×106個）をBDF1マウス（雌
性、７週令）、の腹腔内に移植した。腫瘍細胞接種から
24時間後に、FR901375物質を腹腔内投与した。FR901375
物質の腹腔内投与をもう３日間、１日１回の頻度で継続
した。FR901375物質は、0.5％メチルセルロース含有食
塩液に懸濁させた。対照マウスには、0.5％メチルセル
ロース含有食塩液を腹腔内投与した。
結果を第５表に示す。抗腫瘍活性は、各群の平均生存
時間として、また平均生存時間のT/C％（100×処置群／
対照群）として表わした。
時間として、また平均生存時間のT/C％（100×処置群／
対照群）として表わした。
試験例４ FR901375物質の急性毒性 BDF1マウスに腹腔内注射したときのFR901375物質の急
性毒性は、5.6mg/kgであった。
性毒性は、5.6mg/kgであった。
上記試験の結果から、FR901375物質が生物活性をもつ
ことが認識される。
ことが認識される。
（５）FR901375物質を含有してなる医薬組成物 この発明の医薬組成物は、外用、経口投与または非経
口投与に適した有機または無機の担体または賦形剤との
混合物の形で、有効成分としてのFR901375物質を有含有
するところの、たとえば液状、半固体または固体の形態
の医薬製剤の形で使用できる。該有効成分は、たとえ
ば、錠剤、ペレット、カプセル、坐剤、液剤、乳剤、懸
濁剤、その他使用に適した剤型とするための通常の無毒
性で医薬として許容しうる担体と配合することができ
る。必要ならば、さらに、佐剤、安定剤、増粘剤、着色
剤、香料を用いてもよい。FR901375物質は、該医薬組成
物中に、疾患の過程または状態に対して所望の抗腫瘍作
用を奏するのに十分な量を含有させればよい。
口投与に適した有機または無機の担体または賦形剤との
混合物の形で、有効成分としてのFR901375物質を有含有
するところの、たとえば液状、半固体または固体の形態
の医薬製剤の形で使用できる。該有効成分は、たとえ
ば、錠剤、ペレット、カプセル、坐剤、液剤、乳剤、懸
濁剤、その他使用に適した剤型とするための通常の無毒
性で医薬として許容しうる担体と配合することができ
る。必要ならば、さらに、佐剤、安定剤、増粘剤、着色
剤、香料を用いてもよい。FR901375物質は、該医薬組成
物中に、疾患の過程または状態に対して所望の抗腫瘍作
用を奏するのに十分な量を含有させればよい。
該組成物をヒトに適用する場合には、静脈内、筋肉内
または経口投与によるのが好ましい。治療に有効なFR90
1375物質の用量は、処置すべき各個の患者の年令、状態
によって変化し、またそれら存在するが、腫瘍処置のた
めには、一般には、静脈内投与の場合でヒト体重1kg当
りFR901375物質0.1〜100mgの一日量が、筋肉内投与の場
合でヒト体重1kg当りFR901375物質0.1〜100mgの一日量
が、経口投与の場合でヒト体重1kg当りFR901375物質0.1
〜100mgの一日量が、それぞれ投与される。
または経口投与によるのが好ましい。治療に有効なFR90
1375物質の用量は、処置すべき各個の患者の年令、状態
によって変化し、またそれら存在するが、腫瘍処置のた
めには、一般には、静脈内投与の場合でヒト体重1kg当
りFR901375物質0.1〜100mgの一日量が、筋肉内投与の場
合でヒト体重1kg当りFR901375物質0.1〜100mgの一日量
が、経口投与の場合でヒト体重1kg当りFR901375物質0.1
〜100mgの一日量が、それぞれ投与される。
（６）実施例： 以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するために
示したものである。
示したものである。
実施例１ 10本の500ml三角フラスコの各々に、グルコース（１
％）およびブイヨン（１％）を含有する培地（160ml）
を注入し、120℃で30分間減菌処理した。シュードモナ
ス・クロロラフィスNo.2522の斜面培養１白金耳を各培
地に接種し、回転振盪機上で30℃で24時間培養した。得
られた培養物を、グルコース（１％）、グリセリン（２
％）、ブイヨン（0.5％）、大豆粉（１％）、（NH4）2S
O4（0.1％）、コーンスティープリカー（１％）、MgSO4
・7H2O（0.1％）、炭酸カルシウム（0.2％）、アデカノ
ール（消泡剤、商標、旭電化工業製）（0.05％）を含有
する培地（17リットル）を５本の30リットルジャーファ
ーメンターの各々に入れて前もって120℃で30分間減菌
したものに、接種し、20リットル／分の通気および200r
pmの撹拌下に30℃で48時間培養した。
％）およびブイヨン（１％）を含有する培地（160ml）
を注入し、120℃で30分間減菌処理した。シュードモナ
ス・クロロラフィスNo.2522の斜面培養１白金耳を各培
地に接種し、回転振盪機上で30℃で24時間培養した。得
られた培養物を、グルコース（１％）、グリセリン（２
％）、ブイヨン（0.5％）、大豆粉（１％）、（NH4）2S
O4（0.1％）、コーンスティープリカー（１％）、MgSO4
・7H2O（0.1％）、炭酸カルシウム（0.2％）、アデカノ
ール（消泡剤、商標、旭電化工業製）（0.05％）を含有
する培地（17リットル）を５本の30リットルジャーファ
ーメンターの各々に入れて前もって120℃で30分間減菌
したものに、接種し、20リットル／分の通気および200r
pmの撹拌下に30℃で48時間培養した。
単離および精製： 培養終結後、培養液（75リットル）を同体積のアセト
ンと混合した。この混合物を、珪藻土（3kg）を使用し
て濾過した、濾液（150リットル）を減圧下に蒸発させ
て体積を90リットルとし、6N HClでpH4.0に調整し、酢
酸エチル90リットルで抽出した。この抽出操作を２回行
い、抽出液を合せた。酢酸エチル抽出液を減圧下に濃縮
して体積を2.0リットルとした。無水硫酸ナトリウムで
脱水後、酢酸エチル溶液をシリカゲル（シリカゲル60、
70〜230メッシュ、Ｅ・メルク社製）500mlと混合し、こ
の混合物を減圧下に蒸発させた。溶媒蒸発後、得られた
粉末を、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（1:1v/v）を用いて
充填した同じシリカゲル（1.0リットル）によるカラム
クロマトグラフィーに付した。ｎ−ヘキサン−酢酸エチ
ル（1:1v/v、45リットル）で洗ったのち、酢酸エチル
（4.5リットル）および酢酸エチル−アセトン（1:1v/
v、4.5リットル）により溶出を行った。目的化合物含有
画分を合わせて、減圧下に濃縮して、油状の残留物を得
た。その油状残留物をシリカゲル60（70〜230メッシ
ュ）と混合し、この混合物をエタノール（20ml）中にス
ラリー化した。溶媒蒸発後、得られた乾燥粉末を、クロ
ロホルムを用いて事前に充填したシリカゲル60（70〜23
0メッシュ、400ml）でのカラムクロマトグラフィーに付
した。カラムを、クロロホルム（１リットル）およびク
ロロホルムとメタノールとの混合物（100:1v/v、1.5リ
ットル;80:1v/v、1.5リットル）を用いて展開した。ク
ロロホルムとメタノールとの混合物（100:1および80:
1）により目的化合物を溶出した。目的化合物含有画分
を合わせ、減圧下に濃縮して、油状残留物を得た。油状
残留物をODSゲル（60〜200メッシュ、山村化学研究所）
20mlと混合し、この混合物をエタノール中にスラリー化
した。溶媒を蒸発させたのち、得られた乾燥粉末を、40
％含水メタノールを用いて事前充填した同じODSゲル（3
0ml）でのカラムクロマトグラフィーに付した。40％含
水メタノール200mlで洗ったのち、含水メタノール（50
％、200ml;60％、200ml）により溶出を行った。目的化
合物含有画分が合せ、減圧下に濃縮して、白色粉末状の
FR901375物質（206.6mg）を得た。この粉末を熱アセト
ンに溶解した。その溶液を−20℃に保持して、精製され
たFR901375物質（178mg）を無色の結晶として得た。
ンと混合した。この混合物を、珪藻土（3kg）を使用し
て濾過した、濾液（150リットル）を減圧下に蒸発させ
て体積を90リットルとし、6N HClでpH4.0に調整し、酢
酸エチル90リットルで抽出した。この抽出操作を２回行
い、抽出液を合せた。酢酸エチル抽出液を減圧下に濃縮
して体積を2.0リットルとした。無水硫酸ナトリウムで
脱水後、酢酸エチル溶液をシリカゲル（シリカゲル60、
70〜230メッシュ、Ｅ・メルク社製）500mlと混合し、こ
の混合物を減圧下に蒸発させた。溶媒蒸発後、得られた
粉末を、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（1:1v/v）を用いて
充填した同じシリカゲル（1.0リットル）によるカラム
クロマトグラフィーに付した。ｎ−ヘキサン−酢酸エチ
ル（1:1v/v、45リットル）で洗ったのち、酢酸エチル
（4.5リットル）および酢酸エチル−アセトン（1:1v/
v、4.5リットル）により溶出を行った。目的化合物含有
画分を合わせて、減圧下に濃縮して、油状の残留物を得
た。その油状残留物をシリカゲル60（70〜230メッシ
ュ）と混合し、この混合物をエタノール（20ml）中にス
ラリー化した。溶媒蒸発後、得られた乾燥粉末を、クロ
ロホルムを用いて事前に充填したシリカゲル60（70〜23
0メッシュ、400ml）でのカラムクロマトグラフィーに付
した。カラムを、クロロホルム（１リットル）およびク
ロロホルムとメタノールとの混合物（100:1v/v、1.5リ
ットル;80:1v/v、1.5リットル）を用いて展開した。ク
ロロホルムとメタノールとの混合物（100:1および80:
1）により目的化合物を溶出した。目的化合物含有画分
を合わせ、減圧下に濃縮して、油状残留物を得た。油状
残留物をODSゲル（60〜200メッシュ、山村化学研究所）
20mlと混合し、この混合物をエタノール中にスラリー化
した。溶媒を蒸発させたのち、得られた乾燥粉末を、40
％含水メタノールを用いて事前充填した同じODSゲル（3
0ml）でのカラムクロマトグラフィーに付した。40％含
水メタノール200mlで洗ったのち、含水メタノール（50
％、200ml;60％、200ml）により溶出を行った。目的化
合物含有画分が合せ、減圧下に濃縮して、白色粉末状の
FR901375物質（206.6mg）を得た。この粉末を熱アセト
ンに溶解した。その溶液を−20℃に保持して、精製され
たFR901375物質（178mg）を無色の結晶として得た。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:38） (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07K 14/21 C12P 21/00 - 21/02 A61K 38/00 - 38/58
Claims (1)
- 【請求項１】次式で表わされるFR901375物質：
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8920304.6 | 1989-09-08 | ||
| GB898920304A GB8920304D0 (en) | 1989-09-08 | 1989-09-08 | Fr901375 substance and preparation thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03141296A JPH03141296A (ja) | 1991-06-17 |
| JP2833181B2 true JP2833181B2 (ja) | 1998-12-09 |
Family
ID=10662729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2235251A Expired - Fee Related JP2833181B2 (ja) | 1989-09-08 | 1990-09-04 | Ｆｒ９０１３７５物質およびその製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2833181B2 (ja) |
| GB (1) | GB8920304D0 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020123242A1 (en) | 2018-12-14 | 2020-06-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Biologicals and their use in plants |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8148102B2 (en) | 2007-02-08 | 2012-04-03 | Uwm Research Foundation, Inc. | Sequences for FK228 biosynthesis and methods of synthesizing FK228 and FK228 analogs |
| WO2010009334A1 (en) | 2008-07-17 | 2010-01-21 | Colorado State University Research Foundation | Method for preparing largazole analogs and uses thereof |
| CA2800958C (en) | 2010-05-27 | 2018-09-04 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Macrocyclic compounds useful as inhibitors of histone deacetylases |
| AU2016230008B2 (en) | 2015-03-06 | 2020-08-27 | Colorado State University Research Foundation | Synthesis and utility of new capgroup largazole analogs |
| AU2016229324B2 (en) | 2015-03-06 | 2020-01-16 | Colorado State University Research Foundation | Method for preparing largazole analogs and uses thereof |
-
1989
- 1989-09-08 GB GB898920304A patent/GB8920304D0/en active Pending
-
1990
- 1990-09-04 JP JP2235251A patent/JP2833181B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020123242A1 (en) | 2018-12-14 | 2020-06-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Biologicals and their use in plants |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB8920304D0 (en) | 1989-10-25 |
| JPH03141296A (ja) | 1991-06-17 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |