JPH037244A

JPH037244A - Ｗｓ１１２８物質、その製造法およびそれを含有する医薬組成物

Info

Publication number: JPH037244A
Application number: JP9995290A
Authority: JP
Inventors: Masakuni Okuhara; 正國奥原; Toshio Goto; 後藤　俊男; Masami Ezaki; 江崎　正美; Yasuhiro Hori; 堀　康宏; Takuya Maemoto; 琢也前本
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1989-04-28
Filing date: 1990-04-16
Publication date: 1991-01-14
Also published as: GB8909798D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】この発明は、以下Ｗ５１１２８物質と呼称する生物学的
作用を有する新規化合物に関する。きらに詳細には、こ
の発明は抗菌作用および抗腫瘍作用を有する新規生物学
的活性ＷＳ１１２ｇ物質、その製造法およびそれを含有
する医薬組成物に関する。

この発明のＷ５１１２８物質はストレプトマイセス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃａｓ　）　ｓｐ、　１１２８株のよ
うなストレプトマイセス属に属するＷＳ１１２８物質産
生菌株の栄養培地中における醗酵により産生ずることが
できる。

この発明のＷＳ１１２８物質は下記式で示すことができ
る。

（式中、Ｒはプロピル基、ブチル基、３−メチルブチル
基またはペンチル基を意味する）。

Ｒがプロピル基、ブチル基、３−メチルブチル基または
ペンチル基を意味する場合、各化合物をそれツレＷＳ１
１２８Ａ物質、ＷＳ１１２８Ｂ物質、ＷＳ１１２８Ｃ物
質またはＷＳ１１２８Ｄ物質と命名する。

冒５１１２８物質の医薬として許容される塩類は常法、
例えばそれらを塩基で処理することにより製造すること
ができる。

好適な塩基としては、例えばナトリウム、カリウム等の
アルカリ金属、例えばマグネシウム、カルシウム等のア
ルカリ土類金属、それらの金属の水酸化物または炭酸塩
、例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシ阻
カリウム第三級ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシ
ド等が挙げられる。

ＷＳ１１２８物質の医薬として許容される塩類は前記塩
基との塩類である。　ＷＳ１１２８物質の塩類もまたこ
の発明の範囲内に包含される。

醗酵工程を以下詳細に説明する。

（１）菌ＷＳ１１２ｇ物質の産生に使用きれ得る菌は、ストレプ
トマイセス属に属するＷＳ１１２８物質産生菌株であり
、とりわけそれらの中でストレプトマイセスｓｐ、　１
１２８株が日本国福島県いわき市で採集きれた土壌試料
から新たに分離きれた。

新たに分離苗れたストレプトマイセスｓｐ、１１２８株
の凍結乾燥試料は工業技術院微生物工業技術研究所（日
本国３０５茨城県つくば南東１了目１−３）に微工研菌
寄ＢＰ−２３９８の寄託番号（寄託日：１９８９年４月
２４日）のもとに寄託されている。

新規讐５１１２８物質の産生け、単に説明のために掲げ
た明細書記載の特殊な菌の使用のみに限定されるもので
はない。自然変異菌株はもちろんのこと記載された菌か
らＸ線照射、紫外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トロー
Ｎ−ニトロソグアニジン、２−アミノプリン等による処
理によって産生され得る人為変異菌株を含めてＷＳ１１
２８物質を産生し得るいかなる変異菌株の使用もこの発
明に包含きれる。

ストレプトマイセスｓｐ、　１１２８株は下記形態学的
特徴、培養上の特徴、生物学的特徴および生理学的特徴
を有する。

形態学的特徴酵母−麦芽エキス寒天（ＩＳＰ培地第２番）およヒバレ
イショーデキストロース寒天上３０℃、２ないし４週間
生育した培養物について顕微鏡および走査電子顕微鏡を
用いて形態学的観察を行った。

菌株１１２８株の基底菌糸は良好に発育して不規則に分
枝したが、分断しなかった。

基底菌糸上の気菌子は直線状であり、まれに分枝した。

気菌糸は大部分分断して鎖当り胞子１０−５０個を有す
る胞子鎖を形成した。

胞子は平滑表面を有する円筒状（０，４ないし０．６×
１．３ないしＬｌｂｓ）を呈した。菌核粒、胞子嚢およ
び鞭毛胞子は観察されなかった。

そのほかもう一つの顕微鏡観察をトリプトン酵母エキス
プロス（ＩＳＰ培地第１番）中３０℃、４日間生育した
深部振とう培養物について行った。

多くの胞子状細胞が栄養菌糸上に球状ないし非望に単一
に形成きれた。

培養上の特徴および生理学的特徴菌株１１２８株の培養上の特徴および生理学的特徴を調
べるために使用した培地はシル−リング（Ｓｈｉｒｌｉ
ｎｇ）およびゴツトリープ（Ｇｏｔｔｌｆ、ａｂ）”な
らびにワクスマン（Ｗａｋｓｍａｎ　）　”にょっ−ｃ
　記載すれているものであった。各培養物を３０℃、２
ないし４週間インキュベートした。生育温度範囲は酵母
−麦芽エキス寒天上、温度勾配インキュベーター（アト
バンチツク東京社製）を使用して測定した。炭水化物の
資化はシャーリングおよびゴツトリーブ″１）の操作法
を使用して検討した。

この研究で使用した色名はメチューエン・ハンドブック
・才ブ・カラ（Ｍａｔｈｕｅｎ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏ
ｆＣｏｌｏｕｒ　）　”）から取ツタ。

菌株１１２８株の培養上の特徴を第１表にまとめて示す
。

基底菌糸の生育は非常に平坦であり、しばしば寒天培地
中に浸透していた。基底菌糸の色は使用した多くの培地
上で暗紫色ないし黒青色であった。気菌糸の形成は一般
に不良であり、酵母−麦芽エキス寒天、ベネット寒天お
よびバレイショーデキストロース寒天上わずかに観察き
れた。気菌糸の色は白色であった。

気菌糸の色は白色であった。メラニン色素は産生きれな
かった。淡紫色の可溶性色素はベネット寒天上およびバ
レイショーデキストロース寒天上で産生きれた。菌糸中
および培地中の色素はｐＨによって変化しなかった。菌
株１１２８株の生理学的特徴を第２表にまとめて示す。

第２表、菌株１１２８株の生理学的特徴十：５Ｆ化するｍ：資化しない細胞化学細胞壁分析をベラカー等（Ｂ＠ａｋ＠ｒ　ａｔ　ａｔ）
”）（７）方法を用いて行い、全細胞分析をレジバリエ
ル等（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　ａｔ　ａｌ　）　”の
方法を用いて実施した。脂質組成をレジバリエル等（Ｌ
ｅｃｈａｖａｌｉｅｒ　ａｔａＬ）“６）の方法によっ
て定量した。グリフレート試験を内円等９７）の方法を
用いて実施した。

菌株１１２８株の細胞壁加水分解物はＬＬ−ジアミノピ
メリン酸、グリシンおよびガラクトースを含んでおり、
ＤＬ−ジアミノピメリン酸を痕跡程度含んでいた。全細
胞はガラクトースおよびアラビノースを含んでいた。燐
脂質はＰＩＩ型であることを示しており、細胞壁のアシ
ル型はアセチルであった。

菌株１１２８株の細胞壁型および全細胞糖パターンは既
知の型と同一ではなかった。しかしこの菌株の細胞壁型
は、ＬＬ−ジアミノピメリン酸が主として含まれていた
ので、■型に関連すると考えられた。

細胞化学の結果および形態学的特徴から、菌株１１２８
株はストレプトマイセス属に属するという＊８）のが妥当であると考えられた　、従って、この菌株はス
トレプトマイセス９ｐ、　１１２８株と命名きれた。

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イケーション・才ブ・エアロビック・アクチノマイシー
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Ｂａｌｔｉｍｏｒａ　）、１９７４年（２）　Ｗ５１１２ｇ物質ノ産生この発明のＷＳ１１２８物質は、例えばストレプトマイ
セスｓｐ、１１２８株のようなストレプトマイセス属に
属するＷＳ１１２８物質産生菌株を、同化し得る炭素源
および窒素源を含む栄養培地中、例えば振とう培養、深
部培養等の好気条件下に生育せしめる場合に産生される
。

栄養培地中の好ましい炭素源はグルコース、デンプン、
フルクトース、グリセリン等のような炭水化物である。

好ましい窒素源は肉粉、酵母エキス、ペプトン、グルテ
ン粉、綿実粉、大豆粉、コーン・ステイープ・リカー、
乾燥酵母、小麦胚芽、落花生粉、鶏肉−骨粉等、ならび
に例えば硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、燐酸ア
ンモニウム等のアンモニウム塩類、尿素、アミノ酸等の
ような無機および有機窒素化合物である。

炭素源および窒素源は組合わせて使用すると便利ではあ
るが、純度の低い物質も痕跡程度の生育因子およびかな
りの量の無機栄養素を含んでおり、使用に適しているの
で、それらを純粋な形で使用する必要はない。

所望の場合には培地に炭酸ナトリウムまたは炭酸カルシ
ウム、燐酸ナトリウムまたは燐酸カリウム、塩化ナトリ
ウムまたは塩化カリウム、沃化ナトリウムまたは沃化カ
リウム、マグネシウム塩類、銅塩類、コバルト塩類等の
ような無機塩類を添加してもよい。

必要に応じて、とりわけ培養培地が激しく発泡する場合
には、流動パラフィン、脂肪油、植物油、鉱油またはシ
リコーンのような消泡剤を加えてもよい。

他の生物学的作用物質の大量生産に使用される好ましい
方法の場合のような、Ｗ５１１２８物質の大量生産には
深部好気培養条件が好ましい。

少量産生にはフラスコ中復とう培養が行われる。

きらにまた、生育を大型タンク内で行う場合には、ＷＳ
１１２ｇ物質の生産工程における菌の生育遅延を回避す
るために、生′産タンクへの接種には菌の栄養細胞を使
用するのが望ましい、すなわち、まず比較的少量の培養
培地に菌の細胞を接種してその接種培地を培養すること
により菌の栄養細胞を生産し、次いで培養した栄養細胞
を大型タンクに移すのが望ましい。栄養細胞を生産する
培地はＷＳ１１２８物質の生産に利用きれる培地と実質
的に同じであるかまたは異なる。

培養混合物の攪拌および通気は種々の方法で行ってよい
。攪拌はプロペラまたはこれと同様な機械的攪拌装置に
よって、醗酵器の回転または振とうによって、種々のポ
ンプ装置によってまたは滅菌空気の培地中通過によって
提供すればよい。

通気は醗酵混合物中の滅菌空気の通過によって行えばよ
い。

醗酵は通常的１０℃と４０℃との間の温度、好ましくは
２５℃ないし３５℃で、約１日間ないし１週間行われる
が、醗酵条件と規模とによって変化させてもよい。

醗酵が完了すれば、次いで培養プロスをＷＳ１１２８物
質の回収のために、生物学的作用物質の回収および精製
のために常用きれる種々の操作法、例えば、適切な溶媒
または数種の溶媒の混合物による溶媒抽出、クロマトグ
ラフィー、または適切な溶媒または数種の培養の混合物
から再結晶に付す。

この発明によれば、−船釣にはＷＳ１１２８物質はプロ
スの濾液および菌糸ケーキ中に見出される。

抽出物はＷ５１１２８物質を得るために、例えば、酢酸
エチル、アセトン、これらの溶媒の混合物を使用して常
法により処理され、また、例えば、抽出液は溶媒の蒸発
または蒸留により少量になるまで濃縮され、有効物質す
なわちＷ５１１２８物質を含む生成残渣は慣用の精製操
作法、例えばクロマトグラフィーまたは適切な溶媒また
は数種の溶媒の混合物からの再結晶により精製される。

（３）　ＷＳ１１２８物質の物理化学的性質前記醗酵方
法に従って得られたＷＳ１１２８物質は下記物理化学的
性質を有する。

ｉ）讐５１１２８Ａ物質外観：橙褐色粉末性質：酸性物質融点：　２３８−２４３°Ｃ（分解）分子式”　１７Ｈ１４０５ＦＡＢ　−ＨＲＭＳ　：実測値：　２９９．０９３１（
ＣエフＨ１４０５＋Ｈに必要な値：　２９９．０９１９
　）分子量＝２９８ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　２９９　（Ｍ＋Ｈ）”ｍ解性：
エタノール、メタノール、クロロホルム、酢酸エチルに
可溶水、ｎ−ヘキサンに不溶呈色反応：硫酸セリウム反応、硫酸反応、塩化第二鉄反
応、沃素蒸気反応に陽ニンヒドリン反応、エールリッヒ反応、ドラーゲンドルフ反応、モーリッシュ反応に陰性薄層クロマトグラフィーアセトン（１：１）０．５２ λメタノーＬ−ＨＣＩ　　（１゜ｇＥ　ｎ：ｆｆ１ａ！２２２　（４，３）２７１　（ｓｈ、４．２）２８７　（４，４）３１１　（ｓｈ、３．９）３４８　（３，５）４３３　（３，７）、シリカゲル板、キーゼルゲル６０Ｆ２５４（Ｅ、　　
メルク社製）＊＊Ｅ、メルク社製紫外部吸収スペクトル二 λ”′−Ｌ：（１ｏｇε）：ａｘ２２０　（４，３）２７０　（ｓｈ、４．２）２８６　（４，４＞３０９　（ｓｈ、４．０）３４７　（３，５＞４３４　（３，７）２３１　　（４，２）２６１　　（４，０）２６９　（ｓｈ、４．０）３１１　　（４，５）３８６　（３，６）５０５　（３，７）赤外吸収スペクトル；ＫＢｒ　　。

し。ａｘ、　３４００．　２９６０．　２９３０゜１６
３０、１６００．１５７０゜１４００、１３２０．１２６０゜１１６０、１１４０．１１１０゜１０００、９５０　ｃｍ〜１２ｇ６０゜１５００゜１２３０゜０８０１６６５゜１４６０゜１１８０゜１０２０゜１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：（ＣＤ３０Ｄ、４００ＭＨｚ）８　　　：　　７．３５　　（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ＞
、　　６．９６　　（ＬＨ，ｄ。

Ｊ−２Ｈｚ）、　　６．８３　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ
）、　　６．４３＜ＬＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ）、　　３．
０２　（２）１．＋ｎ）、　　１．５８（２Ｈ，ｍ）、
　０．９９　（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ）１３Ｃ核磁気共
鳴スペクトル：（ＣＤ３０Ｄ、１００ＭＨｚ＞８　　：　　１８９．４　　（Ｓ）、　　１８４．２　
（Ｓ＞、　　１６６．２　（Ｓ）。

１６５．２　（ｓ）、　　１６３．０　（ｓ）、　　１
５１．２　（ｓ）。

１３８．６　（ｓ）、　　１３５．８　（Ｓ）、　　１
２５．０　（ｄ）。

１２３．８　＜ｓ）、　　１１３．４　（ｄ）、　　１
１１．８　（ｓ）。

１０９．３　（ｄ）、　　１０８．１　　（ｄ）、　　
３９．１　　（ｔ）。

２５．０　（ｔ＞、　　１４．６　（Ｑ＞上記試験結果
を含む物理化学的性質から、応１１２８Ａ物質は下記化
学式を有すると推定きれる。

（１，３，６−ドリヒドコキシー８−プロピル−９，１
０−アントラセンジオン）ｉ）讐５１１２８Ｂ物質外観：橙色粉末性質：酸性物質融点：　２５０−２５５℃（分解）元素分析：実ｍＭ　：　Ｃ，６８，３５，Ｈ，５，２０（Ｘ）Ｃ１
８Ｈ１６ｏ５として計算値：　Ｃ，６９，２２，）１．５．１６　（％）分
子式：Ｃ工８Ｈ１６０５ＦＡＢ−ＨＲＭＳ　：実測値：　３１３．１０９２（Ｃ
１ｓＨｔ６０５”Ｈ＋：必要な値：　３１３．１０７６
分子量：３１２ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　３１３　（Ｍ＋Ｈビｍｓ性：エ
タノール、メタノール、クロロホルム、酢酸エチルに可
溶水、ｎ−ヘキサンに不溶呈色反応：硫酸セリウム反応、硫酸反応、塩化第二鉄反
応、沃素蒸気反応に陽性ニンヒドリン反応、エールリッヒ反応、ドラーゲンドルフ反応、モーリッシュ反応に陰性薄１クロマトグラフィーニー」旧ＬＬ−一　　　展開溶媒　　　Ｒｆ値シリカゲル
板＊　　ｎ−ヘキサン −アセトン（１：１）　　　　　　０．５３紫外部吸収スペクトル：メタノール＾　　　　（ｌｏｇε）：ａｘ２１８　　（４，４）２６９　（ｓｈ、４．３）２８５　　（４，５＞３０６　（ｓｈ、４．２）３４７　（３，６）４３３　（３，７）＾メタノールーＨＣ１（１゜８ε　〉　１ｆｌａＸ２１９　（４，４）２７０　　（ｓｈ、４．３）２８５　　（４，５）３ＬＯ（ｓｈ、４．（１）３４７　（３，６）４３３　　（３，８）９シリカゲＪし板、キーゼルゲル６０Ｆ２５゜（Ｅ、　
　メルク社製）＊＊Ｅ、　メルク社製２３０　　（４，３）２５９　（４，１）２６Ｂ　（ｓｈ、　４．１＞３１０　　（４，６）３８５　（３，７）５０３　　（３，８）赤外吸収スペクトル：＋ｉ　ＫＢｒ　：　　３４００．　２９６０．　２９３
０．　２８６０．　１６６５゜ａｘ１６３０、１６００．１５７０．１５００．１４８０゜
１４６０、１４００．１３３０．１３１０．１２８０゜
１２６０、１２４０．１２００．１１６０．　Ｈ２Ｏ。

１１１０、１０８０．１０２０．９８０．９００　ａｍ
−１１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：（ＣＤ３０Ｄ、　４００ＭＨｚ） δ　：　　７．４０　　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ＞、　
　７．ＯＬ　　（ＩＨ，ｄ。

Ｊ＝２Ｈｚ＞、　　６．８５　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ
）、　　６．４６（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ）、　　３．
０９　　（２Ｈ，ｍ）、　　１．５５（２Ｈ，ｍ）、　
　１４５　（２Ｈ，ｍ）、　　０．９６　　（３）１．
ｔ。

Ｊ＝６Ｈｚ＞１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：（ＣＤ３０Ｄ、　１００ＭＨｚ＞ δ　：　　１８８．９　　（ｓ）、１８４．０　　（ｓ
）、１６５．９　　（ｓ）。

１６４．８　（ｓ）、　　１６２．６　（Ｓ）、　　１
５１．２　（ｓ）。

１３８．２　（ｓ）、　　１３５．４　　（ｓ＞、　　
１２４．５　（ｄ）。

１２３．６　（ｓ）、　　１１３．３　＜ｄ＞、　　１
１１．７　（ｓ）。

１０９．３　（ｄ）、　ｔ０８．ｔ　（ｄ）、　３６．
７　（ｔ）。

３３．７　（ｔ）、　２４．０　（ｔ）、　１４．４　
（Ｑ＞上記試験結果を含む物理化学的性質から、Ｗ５１
１２８Ｂ物質は下記化学式を有すると推定される。

す（１−ブチル−３，６，８−ｈリヒドロキシ−９，１０
−アントラセンジオン）（以下余白）ｉ）讐５１１２８Ｃ物質外１５１：橙色粉末性質；酸性物質融点：　２４０−２４５℃ 分子式：Ｃ工ＱＨ１８０５ＦＡＢ−）ＩＲＭＳ　：実測値：　３２７．１２１６（
Ｃ１９Ｈ１８０５”Ｈに必要な値：　３２７．１２３２
）分子量：３２６ＦＡＢ−ＭＳ　　ｍ／ｚ　　３２７　　（Ｍ＋Ｈビ溶解
性：エタノール、メタノール、クロロホルム、酢酸エチ
ルに可溶水、ｎ−ヘキサンに不溶呈色反応：硫酸セリウム反応、硫酸反応、塩化第二鉄反
応、沃素蒸気反応に陽性ニンヒドリン反応、エールリッヒ反応、ドラーゲンドルフ反応、モーブツシュ反応に陰性薄層クロマトグラフィー− 固定相　　　　−居ＩＢＭ？蔓膓−Ｒｆ値シリカゲル板
１１　　　ｎ−ヘキサン −アセトン（１：１）９シリカゲル板、キーゼルゲル６０Ｆ２５゜（Ｅ、　　
メルク社製）＄＊Ｅ、メルク社製紫外部吸収３ベクトル：メタノール λ　　　　（１０ｇε）− ａｘ２１７　　（４，５）２６５　（ｓｈ、４．４）２８４　（４，６＞３０７　　（ｓｈ、４．２）３４３　（３，７）４３２　（３，８）入メ“ノーｘ−ＨＣＩ　　（１゜８ε　）　・ｆｌａｘ２１ｇ　（４，５）２６６　（ｓｈ、４．４＞２８４　＜４．６）３０８　（ｓｈ、４．１＞３４４　　（３，７）０．５５４３０　　（３，９）２２９　　（４，４＞２５８　　（４，２＞２６６　（ｓｈ、４．２）３０９　（４，７）３８４　（３，１１１＞５０２　（３，８）赤外吸収スペクトル：ｖ　ＫＢ”　　：　　３４００．　２９６０．　２９３
０．　２ｇ６０．　１６６０゜ａｘ１６３０、１６００．１５７０．１５００．１４６０゜
１４００、１３６０．１３２０．１２６０．１２４０゜
１１８０、１１６０．１１４０．１０８０．１０２０゜
９９０、９００　ｃｍ−１１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：（ＣＤ３０Ｄ、　４００Ｍ）ＩＺ）Ｓ　　：　　７．３１　　（１）１．ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ＞
、　　６．９４　（ＬＨ，ｄ。

Ｊ＝２Ｈｚ）、　６．７８　（ＬＨ，ｄＪ＝２Ｈｚ＞、
　６．４１（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ＞、　　２．９９　
（２Ｈ，ｍ）、　　１．６５（ＩＨ，ｍ）、　　１．３
９　（２Ｈ，ｍ＞、　　０．９６　（６Ｈ，ｄ。

Ｊ＝６Ｈｚ）１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：（ＣＤ３０Ｄ、ＬＯＯＭＨｚ） δ　：　　１８９．２　（ｓ）、　　１８４．１　（ｓ
）、　　１６６．２　（ｓ）。

１６５．２　　（ｓ）、　　１６３．０　　（ｓ）、　
　１５１．８　　（ｓ）。

１３８．６　（ｓ）、　　１３５．７　（ｓ）、　　１
２４．９　（ｄ）。

１２４．８　（ｓ）、　　１１３．４　（ｄ）、　　１
１１８　（Ｓ）。

１０９．３　（ｄ）、　　１０８．２　（ｄ）、　　４
１．２　（ｔ）３５．１　　（ｔ）、　　２９．７　（
ｄ）、　　２２．９　（（り。

２２．９　（Ｑ＞上記試験結果を含む物理化学的性質から、ＷＳ１１２８
Ｃ物質は下記化学式を有すると推定される。

［１，３，６−ドリヒドロキシー８−（３−メチルブチ
ル）−９，１０−アントラセンジオンコｉｖ　）　ＷＳ
１１２８Ｄ物質外観：橙黄色粉末性質：酸性物質融点：　２３７−２４２℃ 分子式：Ｃ１９Ｈ１８０゜ＦＡＢ−ＨＲＭＳ　：実測値：　３２７．１２１６（Ｃ
１９Ｈ１８ｏ５＋Ｈに必要な値：　３２７．１２３２）
分子量＝３２６ＦＡＢ−ＭＳ　　ｍ／ｚ　　３２７　　（Ｍ＋Ｈ）”ｍ
ａ性：エタノール、メタノール、クロロホルム、酢酸エ
チルに可溶水、ｎ−ヘキサンに不溶呈色反応：！ａ！セリウム反応、硫酸反応、塩化第二鉄
反応、沃素蒸気反応に陽性ニンヒドリン反応、エールリッヒ反応、ドラーゲンドルフ反応、モーリッシュ反応に陰性薄層クロマトグラフィｍ：固定相　　　−」１町劃菟− シリカゲル板０　　ｎ−ヘキサン −アセトン（１：　　１）Ｒｆ値０．５５４シリカゲル板、キーゼルゲル６０Ｆ２５４（Ｅ、メル
ク社製）０Ｅ、メルク社製紫外部吸収スペクトル：メタノール λ　　　　（ｌｏｇε）：ａｘ２１９　　（４，５ン２７０　　（ｓｈ、４．４）２８６　（４，６）３０９　（ｓｈ、４．２）３４２　（３，７）４３６　（３，８） λ”／−４−ＨＣＩ　（１゜８ε）・ｆｌａＸ２１９　（４，５）２６９　（ｓｈ、４．４）（４，６＞（ｓｈ、　４．　Ｌ　＞（３，７）（３，８）２２９　（４，４）２５８　　（４，２）２６５　　（４，２＞３０９　　（４，７＞３８３　　（３，８）５０１　　（３，９）赤外吸収スペクトル：ｖＫＢ’　：　３４００．２９６０．２９４０．２８６
０．１６６０゜ａｘ１６３０、１６００．１５７０．１５００．１４６０゜
１４００、１３２０．１２６０．１２４０．１１８０゜
１１６０、１１４０．１０８０．１０２０．９９０゜９
６０、９００　ａｍ−１１Ｈ核磁気共鳴スペクトル：（ＣＤ３０Ｄ、　４００ＭＨｚ＞ δ　：　　７．３３　（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ）、　　
６．９５　（ＬＨ，ｄ。

に２Ｈｚ＞、　　６．８０　（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ）
、　　６．４２（ＩＨ，ｄｊ＝２Ｈｚ＞、　　３．ＯＬ
　＜２Ｈ，ｍ）、　　１．５５（２８，ｍ＞、　　１．
３８　（４Ｈ，ｍ）、　　０．９２　（３Ｈ，ｔ。

Ｊ”６Ｈｚ）１３ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３０Ｄ、　１００ＭＨｚ）８　　　：　　１８９．３　　＜ｓ）、　　　１８４．
２　　＜ｓ＞、　　　１６６．２　　（ｓ）。

１６５．２　（ｓ）、　　１６３．０　（ｓ＞、　　１
５１．５　（ｓ）。

１２３．８　（ｓ）、　　１１３．４　（ｄ）、　　１
１１．８　（ｓ）。

１０９．３　　（ｄ）、　　　１０８．１　　（ｄ）、
　　　３７．０　　（ｔ）。

３３．３　＜ｔ）、　　３１．６　（ｔ）、　　２３．
５　（ｔ＞。

１４．４　（ｑ＞上記試験結果を含む物理化学的性質から、ｗ５１１２８
Ｄ物質は下記化学式を有すると推定される。

（１，３，６−）リヒドロキシー８−ペンチル−９，１
０−アントラセンジオン）（４）　ＷＳ１１２８物質の生物学的性質ＷＳ　１１２
８物質の生物学的作用を示すための例として、幾つかの
生物学的試験結果を以下に説明する１）抗菌作用ＷＳ　１１２ｇ物質はぶどう球菌属、バチルス属等のよ
うなダラム陽性菌に対して抗菌作用を有することが見出
された。

すなわち、ＷＳ１１２８物質は人または動物のそのよう
な細菌感染症の治療に有用である。

を監ユ最小阻止濃度（ＭＩＣ）管内抗菌作用を抗菌試験用栄養寒天および抗真菌試験用
サブロー寒天を用いて、３０℃、２４時間インキュベー
トすることにより、通常の系列寒天希釈法によって測定
した。　ＭＩＣ値は菌の生育を阻止するＷＳ１１２８物
質の最／ＪＳ濃度として表わした。結果を第３表に示す
。

第３表、　ＷＳ１１２８物質の抗菌作用スタヒロコ雫カ
ス　アウレウス（Ｓｅａ　ｈ　１ｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）ＦＤＡ２０９Ｐ　　　　１０　　　１０
　　　３．２３．２バチルス　ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ＞ＡＴＣＣ６６３３１０１０１０１０２）抗腫瘍作用讐５１１２８物質は肺腺癌、乳腺癌等のような腺癌に対
して抗腫瘍作用を有することが見出きれた。

すなわち、Ｗ５１１２８物質は大または動物の腺癌のよ
うな腫瘍の手助または治療に有用である。

Ｋ監１管内におけるヒト肺腺癌Ａ３４９細胞生育の抑制御０％
ウシ胎仔血清、ペニシリン（５０単位／ｍＱ）およびス
トレプトマイシン（５０）ＩＥ／Ｉｄ　）を補充したダ
ルベツコの最小必須培地１０ｆ）ｄ中Ａ３４９細胞５×
１０３個を含む各ウェルを備えたマイクロタイター・プ
レート中で細胞毒性試験を行なった。

ＭＴＴ［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル
）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム・臭化物、シグ
マ社］を燐酸塩緩衝溶液に５ｍｇ／ｍＱ、の濃度で溶解
し、濾過して滅菌し、少量の不溶残渣を除去した。Ａ３
４９細胞の培養終了後、このＭＴＴ溶液（培地１００−
当り１０所）を検定のウェルすべてに加え、さらにプレ
ートを３７°Ｃ，４時間インキュベートした。酸−イツ
ブロバノール（インプロパツール中０．０４ＮＨＣ１１
００４）をすべてのウェルに加え、十分に混合して暗青
色の結晶を溶解した。結晶がすべて溶解した後、プレー
トを２−波長マイクロプレート・フォトメーター（ＭＴ
Ｐ−１００型、コロナｔｍ社、日本国勝田市）により５
５０ｎｍ、比較波長６３０ｒ＋ｍで読み取った。各ＷＳ
１１２８物質をダルベツコの最小必須培地に溶解、希釈
し、培養物に加えて終濃度３０＜／ｒｄまたはそれ以下
を得た。試験結果を第４表に示す。

第４表、讐５１１２８物質のヒト肺腺癌Ａ３４９細胞生
育に対する効果ＩＣ５ｏ（＜／戚）担？　　ＷＳ１１２８Ａ　　ＷＳ１１２８Ｂ　　ＷＳ１
１２８ＣＷＳＬ１２８ＤＡ５４９　　　　１８　　．９
．５　　　　　６．２　　　　　８．３試験３管内におけるヒト乳腺癌ＭＣＦ−７細胞生育の抑制御０
％ウシ胎仔血清、ペニシリン（５０単位／誠）およびス
トレプトマイシン（５０Ｘ　／　ｍ１１　）を補充した
ダルベツコ最小必須培地１００鴻中ＭＣＦ−７細胞５Ｘ
１０３個を含む各ウェルを備えたマイクロタイター・プ
レート中で細胞毒性試験を行った。細胞を二酸化炭素５
％および空気９５％の加湿雰囲気中３７℃で４日間イン
キュベートし、比色ＭＴＴ定量法を試験２に記載したよ
うに行った。冒５１１２８物質をダルベツコ最小必須培
地に溶解、希釈し、培養物に加えて終濃度３０Ｐｑ、／
ｍＱまたはそれ以下を得た。

結果を第５表に示す。

第５表、　ＷＳ１１２８物質のヒト乳腺癌ＭＣＦ−７細
胞生育に対する効果ＩＣ５ｏ（（／ｌｌ１１）！Ｌ！ＩＡＷＳ１１２８Ａ　　ＷＳ１１２８Ｂ　　ＷＳ
１１２８ＣＷＳ１１２８ＤＭＣＦ−７２，６５，１４，
４５，７試験結果からＷＳ１１２ｇ物質が生物学的作用を有する
ことが実際に示された。

（５）　ＷＳ１１２８物質を含有する医薬組成物この発
明の医薬組成物は、例えば、外用投与、経口投与または
非経口投与に適した有機もしくは無機担体または賦形剤
と混合して、讐５１１２８物質を有効成分として含有す
る固体状、半固体状または液状の医薬製剤の形として使
用することができる。有効成分は、例えば錠剤、ペレッ
ト、カプセル、半開、溶液、エマルジョン、懸濁液およ
びその他の使用に適したあらゆる形のための通常の無毒
性の医薬として許容される担体と混合すればよい、また
必要に応じてさらに、助剤、安定剤、増粘剤、着色剤お
よび芳香剤を使用してもよい。ｗ５１１２８物質は医薬
組成物中に疾患の過程または条件に対して所望の腫瘍効
果を発揮するのに十分な量含まれていればよい。

組成物を人に適用するのには、静脈内投与、筋肉内投与
または経口投与によって組成物を適用するのが好ましい
。ＷＳ１１２８物質の薬物療法のための有効投与量は治
療すべき各個の患者の年齢および条件によって変化する
が、静脈内投与の場合には人の体重―当りＷ５１１２ｇ
５１１２ｇ物質０．１−１００ｍｇ、筋肉内投与の場合
には人の体重稗当りＷＳ　１１２８物質１日投与量０．
１−１００ｍｇ、経口投与の場合には人の体重檀当り讐
５１１２８物質１日投与量０．１−１１００１Ｔ１が一
般的に腫瘍治療のために投与きれる。

以下実施例に従ってこの発明をさらに詳細に説明する。

Ｘ轟■ユ醗酵グルコース（１％）、変性テンブン（１％）、肉粉（０
，３％）、乾燥酵母エキス（０，５％）、バクトドリプ
トン（カゼインの膵液消化物、デイフッ・ラボラトリー
ズ）（０，５％）および炭酸カルシラム（０，２％）を
含むｐＨ７，０の培養培地（１６０ｍＱ　）ヲ５００Ｉ
ＩＱフラスコ４個それぞれに注ぎ、１２０℃、３０分間
滅菌する。ストレプトマイセスｓｐ、　１１２８株の斜
面培養物１白金耳を各培地に接種し、３０℃で行程７．
５ｃｍの回転振とう機上２２０ｒｐｍで４日間培養する
。この培養物を予め１２０°Ｃ１３０分間滅菌した変性
デンプン（１％）、グリセリン（２％）、落花生粉（１
％）、鶏肉−骨粉（１％）、炭酸カルシウム（０，２％
）、アデカノール（ＬＧ１０９、旭電化工業社）（０，
０５％）およびシリコーン（ＫＭ−７０、信越化学工業
社）（０，０５％）を含む３０！ジ〜−醗酵型中の培地
（２０１に接種し、３０℃、２０！／分の通気下および
２００ｒｐＬ１１の攪拌下に４日間培養する。

分離および精製培養完了後、ケイ藻土（４ｋｇ）をジャー醗酵器の培養
ブロスに加えて混合物を濾過する。濾液（６０り）を６
Ｎ−ＭＣＩでｐＨ４，０に調整し、酢酸エチル（６０ｐ
、）で抽出する。抽出操作を２回行い、抽出液を合わせ
る。菌糸ケーキをアセトン６０ｆｆｉで抽出し、抽出液
６ＯＮを得る。抽出液を５２容まで減圧濃縮して６Ｎ−
ＨＣＩでｐＨ４，０に調整し、酢９エチル５！で抽出す
る。抽出操作を２回行ない、抽出液を合わせる。ｌｅｔ
液および菌糸ケーキからの酢酸エチル抽出液を合わせて
１！容まで減圧濃縮する。無水硫酸ナトリウムで脱水後
、酢酸エチル溶液をさらに減圧濃縮して油状残渣をシリ
カゲル６０（７０−２３０メツシユ、Ｅ、メルク社製：
Ｎｓｏｍｉと混合し、この混合物を酢酸エチル中でスラ
リーとする。溶媒を留去後、残る乾燥粉末を予めｎ−ヘ
キサンで充填したシリカゲル６０　（４５０ｍＱ　）の
カラムを使用するカラムクロマトグラフィーに付す。カ
ラムをｎ−ヘキサン（ｉｎり、ｎ−ヘキサン−酢酸エチ
ル（９：１．１ｊ２）、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（４
：１．１４２）およびｎ−ヘキサン−酢酸エチル（２：
１．１１２）で展開する。ＷＳ　１１２８物質はｎ−ヘ
キサン−酢酸エチル（４：１）およびｎ−ヘキサン−酢
酸エチル（２：１）で溶出される。　ＷＳ１１２８物質
を含む画分を合わせ、減圧濃縮して油状残渣を得る。油
状残渣をｎ−ヘキサンとアセトンとの混液（４：１）３
０ｍＱに溶解し、同溶媒系で充填したシリカゲル６０（
５００ｍ１ｌ　）のカラムクロマトグラフィーに付す、
カラムをｎ−ヘキサン−アセトン（４Ｈ１）１７βで洗
浄し、次いで同溶媒０８！で溶出する。目的化合物を含
む画分を合わせ、減圧濃縮して油状残渣を得る。油状残
渣を０ＤＳ（６０Ａ、６０／　２００メツシユ、ＹＭＣ
社）　５０ｍＱと混合し、この混合物をメタノール中で
スラリーとする。溶媒を留去後、残る乾燥粉末を予じめ
８０％メタノール水溶液で充填した０ＤＳ（４ｓｏｍｕ
　）のカラムクロマトグラフィーにｆ寸す、８０％メタ
ノール水溶液３５ＱｍＱでカラムを洗浄した後、ＷＳ１
１２８Ａ物質およびＷＳ１１２８Ｂ物質の混合物を８０
％メタノール水溶液８５０ｍで溶出し、次いでＷＳ１１
２８Ｂ物質を８０％メタ／−ル水溶液６００ｍＱＴ？Ｉ
出Ｌ／、次ニＷＳ１１２８　Ｂ物質、ＷＳ１１２８Ｃ物
質およびＷＳ１１２８Ｄ物質の混合物を８０％メタノー
ル水溶液１６００−で溶出する。この混合物をＯＤＳを
予じめ充填したカラム（Ｄ−ＯＤＳ−１５−Ｂ、　　５
−１５　１２０Ａ　　ＯＤＳ、　３０Ｘ２５０ｍｍ、　
ＹＭＣ社）を用い、０．１％トリフルオロ酢酸を含む６
０％アセトニトリルにより９．　Ｍｌ　７分の流量で高
性能液体クロマトグラフィーによって効果的に分離する
。ＷＳ１１２８Ａ物質、冒５１１２８Ｂ物質、冒５１１
２８Ｃ物質およびＷＳ１１２８Ｄ物質の保持時間はそれ
ぞれ８分、１１分、１５分および１６分である。結局Ｗ
Ｓ１１２８Ａ物質３４ｍｇ、　ＷＳ１１２８　Ｂ物質４
９３ｍｇ、　ＷＳ１１２８Ｃ物質３９ｍｇおよびＷＳ１
１２８Ｄ物質３３ｍｇを橙色粉末として得る。

Claims

【特許請求の範囲】１）下記式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒはプロピル基、ブチル基、３−メチルブチル
基またはペンチル基を意味する）で示されるＷＳ１１２
８物質および医薬として許容されるその塩類。２）ＷＳ１１２８物質を産生し得るストレプトマイセス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株を水性栄
養培地中好気条件下に培養し、ＷＳ１１２８物質を回収
することを特徴とするＷＳ１１２８物質の産生法。３）ストレプトマイセスの菌株がストレプトマイセスｓ
ｐ．１１２８株（微工研菌寄ＢＰ−２３９８）である特
許請求の範囲第２項記載の産生法。４）ストレプトマイセスｓｐ．１１２８株（微工研菌寄
ＢＰ−２３９８）の生物学的純粋培養物。５）有効成分として下記式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒはプロピル基、ブチル基、３−メチルブチル
基またはペンチル基を意味する）で示されるＷＳ１１２
８物質および無毒性の医薬として許容される担体または
賦形剤を含有する医薬組成物。