JPH0347120A - Ｆｒ１２５７５６物質および／またはｆｒ１２５０３５物質を含有する血管新生阻害剤およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はＦＲ１２５７５６物質および／またはＦＲｌ
　２５０３５物質を有効成分として含有する血管新生阻
害剤に関するものである。

さらに、この発明はメタリジウム・アニソブリアｘ　（
Ｍａｔａｒｈｉｚｉｕｍ　ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ　）　
Ｆ−１８３０２のようなメタリジウム属に属し、かつＦ
Ｒ１２５７５６物質および／またはＦＲ１２５０３５物
質を産生じ得る菌を使用する醗酵法によるＦＲ１２５７
５６物質および／またはＦＲ１２５０３５物質の新規製
造法に関するものである。

醗酵法を以下詳細に説明する。

（１）菌 ＦＲ１２５７５６物質および／またはＦＲ１２５０３５
物質生産に使用する菌の詳細を以下説明する。

菌株Ｆ−１８３０２は日本国茨城県三和町で採取された
土壌試料から分離された。この菌は種々の培養培地上で
急速に生育し、淡黄色基質菌糸体およびオリーブ色の分
生子斑点よりなる集落を形成した。アナモルフは分生子
連型分生子柄上オリーブ色の丈の高い分生子柱よりなる
ものであった０分生子形成方法はフィアライド型（内生
出芽型）であった、テレオモルフ構造は形成されなかっ
た。

その形態学的特徴に基づいて、この菌株は糸状菌メタリ
ジウム属ソロキン（５ｏｒｏｋｉｎ　）　１８８３に属
すると考えられた。その菌学的特徴は下記のとおりであ
る。

種々の寒天培地上での培養上の特徴を第１表にまとめて
示す、バレイショデキストロース寒天上の培養物は急速
に生育し、２５℃、２週間後に直径５．０ｃｍに達した
。この集落表面は平らまたは隆起しており、フェルト状
または綿状で、しばしば気菌糸および黄白色およびオリ
ーブ褐色の斑点で覆われていた。裏面の色は明黄色であ
った０分生子構造が豊富に形成きれた。オートミール寒
天上の集落はさらに急速に生育し、同条件下に直径６．
０ｃｍに達した０表面は平面で粉末が多く、オリーブ色
であり、多くの透明な浸出液を産生じた。アナモルフ構
造が豊富に観察された。

形態学的特徴をバレイショデキストロース寒天およびト
ウモロコシ粉寒天上の培養物に基づいて決定した０分生
子柄は一般的に密に充填された集合体としてかなり密に
織り混じった菌糸凝集体上に生成した。これらは半巨大
系状で透明であり、平滑で隔膜があった。これらは輪生
のおびただしくかつ密な房毛様の分枝よりなるものであ
った。

分校は（４〜）６〜１０（〜１５）Ｘｌ、５〜２．５（
〜３）−の大きさであった。ワイアライド３−フ個の渦
巻きが各分枝の先端に形成きれた。フィアライドは透明
、平滑で円柱状ないしとっくり型であり、（６〜）７〜
１２（〜１５）Ｘｌ、５〜２．５（〜３）−であった、
長い求ｉ鎖に生成した分生子は円柱状塊に凝集していた
。それら分生子塊はオリーブ色で、直径２００〜４００
Ｐであり、高き５００（〜１０００）−までであった。

分生子は半透明ないし緑色で、平滑で１細胞であり、円
柱状ないし長円形で、通常両端が截頭形であり、２〜３
（〜３．５）Ｘ（４〜）５〜８（〜９）Ｐであった。栄
養菌糸は隔膜があり、透明、平滑で、分校していた。菌
糸細胞は円柱状ないし糸状で太キ１．５〜５（〜７）−
であった。厚膜胞子は無かった。

菌株Ｆ−１８３０２は１３°Ｃから３３℃までの温度範
囲で生育し、至適生育温度範囲は２６℃ないし２９℃で
あった。これらの温度試験結果はバレイショデキストロ
ース寒天上で測定された。この菌株はｐＨ２ないし１１
で生育し、ＹＭブロス（デイフコ）中至適生育はｐＨ８
ないし１０であった。

メタリジウム属の分類学的判定基準に従えば、菌株Ｆ−
１８３０２はメタリジウム・アニソプリアエ（メチニコ
フ）ソロキン１８８３に類似していた。また上記特徴は
例外なくラッチ１〉（Ｌａｔｃｈ）およびタロツク２）
（Ｔｕｌｌｏｃｈ　）のこの種についての記載と一致し
た。従ってこの発明の発明者等はこの菌株をメタリジウ
ム・アニソプリアエの一つの菌株と同定し、メタリジウ
ム・アニソプリアエＦ−１８３０２と命名した。

第１表、菌株Ｆ−１１３３０２の培養上の特徴略号Ｇ：
生育、集落の大きさを直径で測定Ｓ：集落表面 Ｒ；集落裏面 これらの特徴は２５℃、１４日間インキュベート後に観
察したものである０色の記載はメデューエ−３） ンΦハンドブンク・オプ・カラ　　　（Ｍｅｔｈｕｅｎ
Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｏ１ｏｕｒ）に基づいた。

引用文献 １）ラップ・ジー・ンーａｘム（Ｌａｔｃｈ、　Ｇ、　
Ｃ。

Ｈｌ）：メタリジウム・アニソプリアエ（メチユニコツ
）・ソロキン・ストレイン・イン・ニュージランド・ア
ンド・ゼア中ポジプル・ユース・フォー・フントローリ
ング・バスチ＾・−・インヒビチング・インセクツ［Ｍ
ａｔａｒｈｉｚｉｕｍ　ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ　（Ｍｅ
ｔｓｃｈｎｉｋｏｆｆ）Ｓｏｒｏｋｉｎ　５ｔｒａｉｎ
　ｉｎ　Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ
ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｕｓｅ　ｆｏｒ　ｃｏｎｔｒｏｌｌ
ｉｎｇ　ｐａｓｔｕｒｅ−４ｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　１ｎ
ｓｅｃｔｓ　］　、Ｎ’Ｚ、　Ｊ、　Ａｇｒｉｃ、Ｒｅ
ｓ、　。

第８巻、３ｇ４−３９６頁、１９６５年。

２）タロツク・エム（Ｔｕｌｌｏｃｈ、　Ｍ、　）　：
ザ・ジーナス会メタリジウム（Ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｍ
ｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）。

Ｔｒａｎｓ、　　Ｂｒ、　　ｍｙｃｏｌ、　　Ｓａｃ、
、　第６６巻、４０７−４１１頁、１９７６年。

３）コーネラップ・ニー　（Ｋｏｒｎａｒｕｐ、　Ａ、
　）およびワンシャー、ジエー・エイチ（讐ａｎｓｃｈ
ｅｒ＋　ＪＨｌ）：メチニーエン・ハンドブック・才プ
・カラー（Ｍａｔｈｕｅｎ　）ｌａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ
　Ｃｏ１ｏｕｒ）第３版、２５２頁、メチニーエン、ロ
ンドン（Ｍｅｔｈｕｅｎ。

Ｌｏｎｄｏｎ　）、１９８３年。

メタリジウム・アニソプリアエＦ−１８３０２は工業技
術院微生物工業技術研究所（日本国３０５茨城県つくば
南東１了目１−３）に微工研菌寄ＢＰ−２４２４の寄託
番号のもとに１９８９年５月１７日付で寄託されている
。

ＦＲ１２５７５６物質およびＦＲ１２５０３５物質の物
理化学的性質 ＦＲ１２５７５６物質およびＦＲ１２５０３５物質は下
記物理化学的性質を有する。

）　ＦＲ１２５７５６物質 外観：無色針状晶 性状：中性物質 融点：９７−９８℃ 分子式”　１６’２４０５ ２３゜ 比旋光度＝［α］　・−１０８°（Ｃ＝１．０．　ＣＨ
Ｃｌ３）ＦＡＢ　−ＭＳ　：　　ｍ／ｚ　　３１９　　
（Ｍ　　十　Ｎｇ）”分子量：２９６ 溶解性：クロロホルム、アセトン、メタノールに可溶 水に微溶 呈色反応：硫酸セリウム反応、沃素蒸気反応に陽性 ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反 応、モーリッシュ反応に陰性 薄層クロマトグラフィー（ｒＬｃ） 固定相　　　−鳳ＩＬ媒−Ｒｆ（ｌｉｔシリカゲル板　
　クロロホルム：メタ ＯＤＳ” 率シリカゲル板、 り社製） 車重逆相ＴＬＣ用シ ルク社製） ノール（１００：　１　）　　　　０．６９ヘキサン：
酢酸エチ ル（１：１）　　　　　０．５９ メタノール二本 （７０：３０）　　　　　　　０．１４キーゼルゲル６
０Ｆ２．　（Ｅ、メル ノカゲル板、ＲＰ（８Ｆ２５４ｓ（Ｅ、メ紫外吸収スペ
クトル： 入″′″″’　：　２８５　（ε＝４０）ａＸ 赤外吸収スペクトル： １４４０、　１３８０．　１３４０．　１３００．　１
２７０゜１２１０、　１１７０．　１１５０．　１１０
０．　１０２０゜１０００、９６０．９４０．９２０．
９１０　ａｍ−１１Ｈ核磁気共鳴スペクトル： （ＣＤＣｌ２．４００ＭＨｚ）δ　：　５．１６　（Ｉ
Ｈ，ｍ）、　４．２３（ＩＨ，ｓ）、　　３．５７　（
３Ｈ，ｓ）、　　３．１６　（１）！、ｓ）。

３．０９　（１８，ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ）、　　２．９
０　（ＩＨ，ｔ。

Ｊ＝６．５）１ｚ）、　　２．７２　（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝
４．５Ｈｚ）、　　２．７１ないし２．５９　（２Ｈ，
ｍ）、　２．５２ないし２．３７　（２Ｈ，ｍ）、　　
２．１５　（１８，ｍ＞、　　１．７８　（３Ｈ。

ブロード　ｓ）、　　１．６６　　（３Ｈ，プローＦ　
　ｓ）、　　１．４２（ＬＨ，ｍ）、　　１．３８　（
３Ｈ，５）１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル： （ＣＤＣ１３，１００Ｍ）ｌｚ　）δ　：　２０６．６
　（ｓ）、　１３５．３　（ｓ）。

１１８．１　　（ｄ）、　　８６．１　　（ｄ）、　　
７８．６　（ｓ）、　　６０．６（ｓ）、　　６０．３
　　（ｓ）、　　５９．２　　（Ｑ）、　　５８．８　
　（ｄ）−５１，３（ｔ）、　　３６．７　（ｔ）、　
　３０．３　（ｔ）、　　２７．０（ｔ＞、　　２５．
７　（ｑ）、　　ｔｓ、ｏ　＜ｑ）、　　１４．４　（
ｑ）上記物理化学的性質から、ＦＲ１２５７５６物質は
、例えば、Ｈｅ１ｖ、　Ｃｈｉｌｌｌ、　Ａｃｔａ、第
５１巻、６号Ｌ３９５−１４０８頁、１９６８年に開示
されているオバリシン、すなわち、４−ヒドロキシ−５
−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−＞チル−２
−ブテニル）オキシラニルコー１−オキサスピロ［２，
５］オクタン−６−オンであることが確認きれた。

ＦＲ１２５７５６物質の化学構造は下記のとおりである
。

ｉ　）　ＦＲ１２５０３５物質 外観：無色針状晶 性状：中性物質 融点：６７−６８℃ 比旋光度：　Ｃａ　］２３ニー７３°＜ｃ＝ｔ、ｏ、　
Ｃ）ＩＣＩ　）３ 溶解性：クロロホルム、アセトン、メタノールに可溶 水に微溶 呈色反応：硫酸セリウム反応、沃素蒸気反応に陽性 ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反 応、モーリッシュ反応に陰性 紫外部吸収スペクトル： 末端吸収（メタノール中） 赤外吸収スペクトル： １４１０．１３ｇ０．１３００．１２７０，１２４０゜
１１６０．１１３０．１１００，１０７０．１０２０゜
９８０、９２０　ａｍ−１ １Ｈ核磁気共鳴スペクトル： （ＣＤＣ１３，４００ＭＨｚ　＞δ　：　５．１６　（
ＬＨ，ｍ）、　４．４０（ＩＨ，ｍ）、　　４．００　
　（ＩＨ，ブロード　ｇ）、　　３．５９　　（ＩＨ。

ブロード’　　ｓ）、　　３．５０　　（ＩＨ，ｄ、Ｊ
＝４Ｈｚ＞、　　３．４８（３Ｈ，ｓ）、　　２．９５
　（ＩＨ，ｄ、、Ｃ４，５Ｈｚ）、　　２．８７（１８
，ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）、　　２．５５　（ＩＨ，ｍ）
、　　２．５３（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ）、　　２
．３６　　（ＩＨ，ｍ）、　　２．１４（１８，ｍ）、
　　２．０２　（ＬＨ，ｍ）、　　１．７８　（ＩＨ，
ｍ）。

１．７２　（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝０．５Ｈｚ＞、　　１．６
４　（３Ｈ，ｄ。

Ｊ＝０．５Ｈｚ＞、　　１．３２　（３Ｈ，ｓ）、　　
０．９５　（ＩＨ，ｍ）１３ｃ核磁気共鳴スペクトル： （ＣＤＣｌ２．１００ＭＨｚ）δ　Ｆ　１３５．３　（
！Ｉ）、　１１８．０　（ｄ）。

７８．７　（ｄ）、　　７８．５　（ｓ）、　　６５．
５　（ｄ）、　　６０．８（ｓ）、　　６０．５　（ｓ
）、　　５６．７　（Ｑ）、　　５５．６　（ｄ）。

５０．８　（ｔ）、　　２８．１　　（ｔ）、　　２６
．８　（ｔ）、　　２５．６（Ｑ）、　　２５．０　（
ｔ）、　　１７．９　（Ｑ）、　　１４．２　（ｑ）上
記試験結果を含む物理化学的性質から、ＦＲ１２５０３
５物質は同様にＨｅ１ｖ、　Ｃｈｉｌｌｌ、　Ａｃｔａ
第５１巻、６号、１３９５−１４０８頁、１９６８年に
開示されているオバリシンの水素化ホウ素ナトリウムに
よる還元によって製造きれる化合物、すなわち、５−メ
トキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブ
テニル）オキシラニル］−１−才キサスピロ［２，５］
オクタン−４，６−ジオールであることが確認された。

ＦＲ１２５０３５物質の化学構造は下記のとおりである
。

生 ＦＲ１２５７５６物質および／またはＦＲ１２５０３５
物質は、例えばメタリジウム・アニソプリアエＦ−１８
３０２のようなメタリジウム属に属し、かつＦＲ１２５
７５６物質および／またはＦＲ１２５０３５物質を産生
じ得る菌株を、同化し得る炭素源および窒素源を含む栄
養培地中、例えば振とう＠養、深部培養等の好気条件下
に生育せしめる場合に産生される。

栄養培地中の好ましい炭素源はグルコース、デンプン、
フルクトース、グリセリン等のような炭水化物である。

好ましい窒素源は酵母エキス、ペプトン、グルテン粉、
綿実粉、大豆粉、コーン・ステイープ・ツカ−１乾燥酵
母、小麦胚芽等はもちろんのこと、例えば硝酸アンモニ
ウム、硫酸アンモニウム、燐酸アンモニウム等のアンモ
ニウム塩類、尿素、アミノ酸等のような無機および有機
窒素化合物である。

炭素源および窒素源は組合わせて使用すると有利ではあ
るが、痕跡程度の生育因子およびかなりの量の無機栄養
素を含む純度の低い物質も使用に適しているので、それ
らを純粋な形で使用する必要はない。

所望の場合には、培地に炭酸ナトリウムまたは炭酸カル
シウム、燐酸ナトリウムまたは燐酸カリウム、塩化ナト
リウムまたは塩化カリウム、沃化ナトリウムまたは沃化
カリウム、マグネシウム塩類、銅塩類、亜鉛塩類、コバ
ルト塩類等のような無機塩類を添加してもよい。

必要な場合には、とりわけ培養培地が激しく発泡する場
合には、流動パラフィン、詣肪油、植物油、鉱油または
シリコーンのような消泡剤を加えてもよい。

他の生物学的作用物質の大量生産に使用される好ましい
方法の場合のように、ＦＲ１２５７５６物質および／ま
たはＦＲ１２５０３５物質の大量生産には深部好気培養
条件が望ましい。

少量生産の場合にはフラスコ中掘とう培養が行われる。

さらに、生育を大型タンク中で行う場合にはＲ１２５７
５６物質および／またはＦＲ１２５０３５物質の生産工
程における生育遅延を回避するまために、生産タンク内
における接種には菌の栄養細胞を使用するのが望ましい
、すなわち、まず比較的少量の培養培地に菌の細胞を接
種してその接種培地を培養することにより菌の栄養細胞
を生産し、次いで培養した栄養細胞を大型タンクに移す
のが望ましい、栄養細胞を生産する培地はＦＲ１２５７
５６物質および／またはＦＲ１２５０３５物質の生産に
利用する培地と実質的に同じであるかまたは興なる。

培養混合物の攪拌および通気は種々の方法で行えばよい
、攪拌はプロペラまたはこれと同様な機械的攪拌装置、
醗酵器の回転または振とう、種々のポンプ装置または培
地中の滅菌空気の通過によって提供すればよい１通気は
醗酵混合物中の滅菌空気の通過によって行えばよい。

醗酵は通常的１０℃と４０℃との間の温度、好ましくは
２０℃ないし３０℃の温度において約５０時間ないし１
５０時間行われるが、この醗酵時間は醗酵条件および規
模に従って変化させてもよい。

醗酵が完了すればＦＲＬ２５７５６Ｒ１２５７５６物質
ＦＲ１２５０３５物質の回収のために培養ブロスを生物
学的作用物質の回収および精製に常用きれる種々の操作
法、例えば適切な溶媒または幾つかの溶媒の混合物によ
る溶媒抽出、クロマトグラフィー、または適切な溶媒ま
たは幾つかの溶媒の混合物からの再結晶に付す。

この発明によれば、　ＦＲ１２５７５６物質および／ま
たはＦＲ１２５０３５物質は一般的に菌の細胞中ならび
に濾過したブロス中に見出される。すなわち、全培養ブ
ロスを直接ＦＲ１２５７５６物質および／またはＲ１２
５０３５物質の分離操作、例えばアセトン、酢酸エチル
等のような適切な溶媒、これらの溶媒の混合物等を使用
する抽出操作に付す。

抽出液は、例えば抽出液を溶媒の留去または蒸留によっ
て少量に濃縮し、有効物質すなわちＲ１２５７５６物質
および／またはＦＲ１２５０３５物質を含む残渣を、例
えばクロマトグラフィーまたは適切な溶媒または幾つか
の溶媒の混合物からの再結晶のような慣用の精製操作に
よって精製するような、Ｒ１２５７５６物質および／ま
たはＦＲ１２５０３５物質を提供する常法ｔこよって処
理される。

ＦＲ１２５７５６物質およびＦＲ１２５０３５物質の生
物学的性質ＦＲ１２５７５６物質およびＦＲＬ２５０３
５Ｒ１２５０３５物質作用を示すために、若干の試験結
果を以下に説明する。

Ｋ盈］　内皮細胞に対するＦＲ１２５７５６物質および
Ｒ１２５０３５物質の管内生育阻害 ヒト謄帯静脈からの内皮細胞（以下ＨＬＩＶＥＣと略称
）を実験に使用した。

ＨＵＶＥＣ（’７　ｚ４当すＪ１！ｌｆｇｓ数２　ＸＬ
Ｏ３Ｍｌ）　ヲ予１：Ｉ）ヒトフィブロネクチンを塗布
した９６ウエルのマイクロタイタープレートに入れ、１
５％ＦＢＳ、　ＥＣＧＳ（内皮細胞生育補充液）１００
ｘ／ｍｕおよびヘパリン１０４　／　ｍＱを補充したＭ
ＣＤＢ１５１培地と共に、ＦＲ１２５７５６物質または
ＦＲ１２５０３５物質の存在下、３７℃で空気中５％Ｃ
Ｏ２の雰囲気中５日間インキユヘートした。

実験終了時にＨＬＩＶＥＣの生育率をＭＭＴ　［臭化３
−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２゜５
−’、；フェニルテトラゾリウム、シグマ社製コ法に従
って測定した。

ＦＲ１２５７５６物質およびＦＲ１２５０３５物質はＨ
ＵＶＥＣノ増殖を阻害した。

＊アール・エル・ルベン（Ｒ，Ｌ、　Ｒｕｂｅｎ　）お
よびアール・エイチ・ノイバウア−（Ｒ，ＨＮｅｕｂａ
ｕｅｒ　）　：セミオートメーテッド・コロリメトリ／
り・アンセイ・フォー・イン・ヴイトロ・スクリーニン
グ・オブ・アンチキャンサー・フンバウンズ（Ｓｅｍ１
　ａｕｔｏｍａｔｅｄ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃａｓ
ｓａｙ　ｆｏｒ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｃｒｅｅｎｉｎ
ｇ　ｏｆ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　
）　：　Ｃａｎｃａｒ　Ｔｒｅａｔｍａｎｔ　Ｒｅｐｏ
ｒｔｓ第７１巻、１２号、１１４１−１１４９頁、１９
８７年。

ｚｊ１１朱 ＩＣ５ｏ値（ｓ／ｍＱ　） ＦＲ１２５７５６物質　　　　２．３　Ｘ　１Ｏ−３Ｆ
Ｒ１２５０３５物質　　　　２．Ｉ　Ｘ　１０−’に慧
２　　ＦＲ１２５０３５物質の抗Ｉ！瘍作用ＦＲ１２５
０３５物質の抗１ｍ瘍作用をマウスの実験腫瘍系で測定
した。

マウス線維肉腫メスＡを生後８３１ｑ齢のＢａ１ｂ／ｃ
系雌マウスに接種体大きさマウス当り細胞数１×１０５
ｍで皮肉移植した。！瘍細塘接種２４時間後、各投与量
段階のＦＲ１２５０３５物質をマウスに静脈内投与した
。処置はＷ１瘍接種後１．２．３．４日目および７．８
．９．１００日目１日１回とした。対照動物には生理食
塩水溶液を静脈内投与した。注射容量はすべての実験で
０．２１１１１１であった。５匹のマウスを各実験群に
使用した。

接種１４４日目腫瘍重量を、腫瘍の長さおよび幅のカリ
パス測定から誘導して下記式により計算した。

腫瘍重量（ｍｇ　）　−／２Ｘ　ａ　ｘ　ｂ　”（式中
、ｒａ、は長きを、ｒｂ、は幅をそれそぞれｍで表わす
）。

試験結果 なしく対照）　　　　　　８４６．３±１６０．２３、
３　　　　　　　　　　　　　４８６．６　　±　４６
．９１０　　　　　　　　　　　　　　　４４２、９　
　±　１４６．８３３　　　　　　　　　　　　　　３
２７．４　±　１０４．９（平均上ｓ、Ｅ、＋ｎ−５） 上記生物学的試験結果から、ＦＲＬ２５７５６Ｒ１２５
０５物質５０３５物質は血管新生阻害作用を有し、従っ
て例えば固形癌のような腫瘍、慢性関節リウマチ、糖尿
病性網膜症、未熟児網膜症、老人性円板状黄斑変性症、
乾せん等の治療に使用することができる。

この発明の医薬組成物は、例えば、外用適用、経口適用
または非経口適用に適した有機もしくは無機担体または
賦形剤と混合して、ＦＲ１２５７５６物質および／また
はＦＲ１２５０３５物質を有効成分として含有する固体
、半固体または液体の形で医薬製剤の形として使用する
ことができる。有効成分は、例えば錠剤、ペレット、カ
プセル、坐剤、溶液、エマルジョン、懸瀾液およびその
他の使用に適したあらゆる形態用の通常の無毒性の医薬
として許容される担体と混合すればよい。また必要に応
じてさらに、助剤、安定剤、増粘剤、着色剤および芳香
剤を使用してもよい、　ＦＲ１２５７５６物質および／
またはＦＲ１２５０３５物質は医薬組成物中に疾患の経
過または条件に対して所望の抗腫瘍効果を発揮するのに
十分な量含有されていればよい。

組成物を人に適用するには、静脈内投与、筋肉内投与ま
たは経口投与により適用するのが好ましい、　ＦＲＬ２
５７５６物質および／またはＦＲ１２５０３５物質の治
療有効投与量は治療すべき各個々の患者の年齢および条
件によって変化するが、静脈内投与の場合人の体重−当
りＦＲ１２５７５６物質および／またはＲ１２５０３５
物質１日投与量０．０１−１１００ｎ、筋肉内投与の場
合人の体重−当りＦＲ１２５７５６物質および／または
ＦＲ１２５０３５Ｒ１２５０３５物質　Ｏｌ−１００ｍ
ｇ、経口投与の場合人の体重−当りＦＲ１２５７５６物
質および／またはＦＲ１２５０３５Ｒ１２５０３５物質
　１−１００ｍｇが一般的に腫瘍治療に投与される。

以下実施例に従ってこの発明をさらに詳細に説明する。

実施例１ 醗酵 可溶性デンプン（２％）、トウモロコシデンプン（１％
）、グリセリン（１％）、綿実粉（１％）、乾燥酵母（
１％）、コーン・ステイープ・ツカ−（１％）、ペプト
ン（０，５％）、トタウィーン８０（デイフコ・ラボラ
トリーズ製）（０，１％）およびＣａＣＯ３（０，２％
）を含む種子培養培地（ｐＨ６，０）　（ｓｏｍＱ）を
２５０ｍＱ　エルレンマイヤーフラス＝を中に注ぎ、１
２０℃、３０分間滅菌する。メタリジウム・アニソプリ
アエＦ−１８３０２の斜面培養物１白金耳を培地に接種
し、回転振とう器上２５０ｒｐｍで５℃、９６時間培養
する。

大規模醗酵操作を３（Ｒジャー醗酵器中で行う。

可溶性デンプン（１％）、トウモロコシデンプン（１％
）、グルコース（０，５％）、綿実粉（１％）、乾燥酵
＃（０，２％）、コーン・ステイープ・リカー（０，２
％）、ＣａＣ０３（０，２％）およびｚｎＳｏ４・７Ｈ
２０（０００１％）を含む培養培地（２０７りをジャー
中に注ぎ１２０℃、３０分滅菌する。上記で得られる種
子培養物を培地に接種し、２０！／分の通気下および１
５０ｒｐｍの攪拌下に２５℃、１２０時間培養する。

培養ブロスをアセトン２０ｊ２で希釈し、室温で６０分
間インキユヘートする。抽出液をケイ凍土を用いて濾過
し、次いで減圧下に濃縮乾固する。粉末をシリカゲル６
０　（７０−２３０メツシユ、Ｅ、メルり社製）と混合
し、ｚｏｏｍｕシリカゲルクロマトグラフィーカラム（
シリカゲル６０を使用）に適用する。ｎ−ヘキサン６０
０　ｍＱで展開後、カラムをｎ　−ヘキサン−酢酸エチ
ル（１：　１　）６００ｆｆｌＱ、次いで酢酸エチル６
００１Ｑで溶出する。

ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶出した活性画
分を５１１１１１賽に減圧濃縮し、１５０−シリカゲル
りロマトグラフィー力ラム（シリカゲル６０）に適用す
る。カラムをジクロロメタン−酢酸エチル（に１）５ｏ
ｏｍｕで洗浄する。溶出液を濃縮して、ＦＲ１２５７５
６物質（８０ｍｇ　）を結晶として得る。

さらに、酢酸エチルで溶出した活性画分を５戚容に減圧
濃縮してｔｓｏｍｎシリカゲルクロマトグラフィーカラ
ムに適用する。カラムをジクロロエタン５００ＩＱＱお
よびジクロロエタン−クロロホルム（１：　１）６００
＋１１１１で洗浄し、次いでジクロロエタン−クロロホ
ルム（１：　２　）２５００−で溶出する。

活性画分を濃縮して、ＦＲ１２５０３５物質を（５０ｍ
ｇ）を結晶として得る。

火ＪＬｆ江至 ＦＲ１２５０３５物質　　　　　　　　　　　　　１０
００　ｇラクトース　　　　　　　　　　　　　　１１
９０ｇ低置換度ヒドロキシプロピル セルロース　　　　　　　　　　　　　　２５０ｇポリ
ビニルとロリドン　　　　　　　　　　５０ｇステアリ
ン酸マグネシウム　　　　　　　１０ｇ上記成分を常法
により混合し、打錠して、１錠中にＦＲ１２５０３５Ｒ
１２５０３５物質１００剤１０．０００錠を得る。

次いでこの錠剤を常法によりフィルムコーティングし、 フィルムコート錠を得る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）有効成分として、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物であるＦＲ１２５７５６物質および／
   または、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物であるＦＲ１２５０３５物質を含有す
   る血管新生阻害剤。 ２）メタリジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）属に属し
   かつ、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物であるＦＲ１２５７５６物質および／
   または、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物であるＦＲ１２５０３５物質を産生し
   得る菌株を水性栄養培地中好気条件下に培養し、ＦＲ１
   ２５７５６物質および／またはＦＲ１２５０３５物質を
   回収することを特徴とするＦＲ１２５７５６物質および
   ／またはＦＲ１２５０３５物質の製造法。 ３）メタリジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）の菌株が
   メタリジウム・アニソプリアエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕ
   ｍａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）Ｆ−１８３０２（微工研菌寄
   ＢＰ−２４２４）である請求項２）記載の製造法。 ４）メタリジウム、アニソプリアエ （Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）Ｆ−
   １８３０２（徽工研薗寄ＢＰ−２４２４）の生物学的純
   粋菌株。