JPH0763356B2 - 新種トリポクラディウム・バリウム、及びそれを利用するサイクロスポリン系抗生物質の生産方法 - Google Patents
新種トリポクラディウム・バリウム、及びそれを利用するサイクロスポリン系抗生物質の生産方法Info
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Description
好気発酵によるサイクロスポリン複合体、あるいはその
構成単位であるサイクロスポリンA、サイクロスポリン
B、またはサイクロスポリンCの微生物学的製造方法に
関する。
性、無極性のオリゴペプチドであって、アミノ酸部分の
多少の相違によって、いくつかの種類に分けられる。
Bが、当初トリコデルマ・ポリスポールム[Trichoderm
a polysporum,リンク・エクス・ペルソーニア(Link ex
pers.)リファイ(Rifai)]として同定された真菌の
一種(NRRL 8044)の培地から、リュッガー(Ruegger)
らによって単離され[ヘルベチア・キミカ・アクタ(He
lv.Chim.Acta)、59巻(1976年)1075ページ]、サイク
ロスポリンB、D、EおよびGは、トラバー(Traber)
らによって単離された[ヘルベチア・キミカ・アクタ、
60巻(1977年)1568ページ]。
ィウム・インフラーツム、ガムズ(Tolypocladium infl
atum,Gams)として文献中に記載されることとなった。
類の異なるサイクロスポリン系抗生物質が知られている
[ヘルベチア・キミカ・アクタ、70巻(1987年)13ペー
ジ]。これらの構成単位の中では、選択的免疫抑制作用
を有するサイクロスポリンAが、最も重要な物質とされ
ている。
質として知られるようになり、その強力な免疫抑制作用
は、その後認められたに過ぎない[ボレル(J.F.Bore
l)ら:イミュノロジー(Immunology)、32巻(1977
年)1017ページ]。
疫抑制剤であることは、一連のインビトロおよびインビ
ボの検定試験によって確認されている。
疫反応の両者を阻害する。その作用機序の研究によれ
ば、これはインターロイキン2の合成とともに、T細胞
の増殖をも阻害するからである。
用は、1978年に報告された。最初に用いられたのは、腎
臓移植[カルネ(R.J.Calne)ら、ランセット(Lance
t)、1978年度第2号1323ページ]、および骨髄移植
[パウルズ(R.L.Powles)ら、ランセット、1978年度第
2号1327ページ]においてであった。
に際しては、サイクロスポリンAの投与によって、その
臓器あるいは骨髄の拒絶反応を抑制することができる。
更に、いくつかの自己免疫疾患(葡萄膜炎、リウマチ様
関節炎、乾癬、および筋無力症)の治療においても、投
与効果を発揮する。
ン複合体の製造に用いられている。すなわち、シリンド
ロカルポン・ルーシヅム(Cylindro-carpon lucidum Bo
oth)、NRRL 5760(スイス国特許第589,716号明細
書);トリポクラディウム・インフラーツム、NRRL 804
4((初期の分類によればトリコデルマ・ポリスポール
ム)(スイス国特許第603,790号明細書)、ビセット(B
isett)(1983年)によれば、トリポクラディウム・イ
ンフラーツム(1971年)は、新組合せトリポクラディウ
ム・ニベウム(ロストラップ(Rostrup))と同じもの
である。);およびフサリウム・ソラニ(Fusarium sol
ani)、MCI-1549、MCI-1550(特開昭57-63093号明細
書)。
いて発酵生産を実施した場合、発酵期間を短縮するこ
と、サイクロスポリン系抗生物質を高水準で生産するこ
と、単離生産量を高くすることができないことである。
も有利な条件で、より高濃度のサイクロスポリン系抗生
物質複合体、あるいはその構成単位を生産する微生物の
菌株の発見に重点が置かれた。
とにより、トリポクラディウム属の一菌株が、サイクロ
スポリン系抗生物質複合体の生合成能を有することが発
見された。発明者らがCY-93と命名したこの微生物は、
分類学的調査からは、従来のサイクロスポリン複合体生
産真菌種のいずれとも同定することができなかった。し
たがって、この新種トリポクラディウム・バリウム(To
lypocladium varium)CY/93株は、種段階で分化したト
リポクラディウム属の新分類群である。
トリポクラディウム種のコロニーが、ブドウ糖、ペプト
ン、及び麦芽エキス−酵母エキスを含む培地に、無色、
或いは黄灰色のコロニーを形成するのに反し、暗濃−灰
黒色コロニーを形成する新種トリポクラディウム・バリ
ウムCY/93に関する。
ハンガリー国ブダペスト市所在のナショナル・コレクシ
ョン・オブ・アグリカルチュラル・アンド・インダスト
リアル・マイクロオーガニスムスに受託番号NCAIM
(P)F001005の下に寄託されている。
サイクロスポリン、或いはサイクロスポリンA、サイク
ロスポリンB,及びサイクロスポリンCからなるサイクロ
スポリン系複合体抗生物質を生合成する糸状菌菌株を、
炭素源、及び窒素源、並びに無機塩類を含む栄養培地で
好気性発酵すること、及び生成物を単離することにより
前記抗生物質を生産する方法であって、サイクロスポリ
ン、或いはサイクロスポリン系複合体抗生物質を生合成
する新種トリポクラディウム・バリウム糸状菌種の一菌
株を、炭素源、有機及び無機窒素源、並びに無機塩類を
含む栄養培地で、25〜30℃の好気条件下で培養するこ
と、そして希望するならば、生産されたサイクロスポリ
ン、或いはサイクロスポリン系複合体抗生物質を単離
し、精製することからなるサイクロスポリン、或いはサ
イクロスポリン系複合体抗生物質を微生物生産する方法
に関する。この方法において、本発明の新種トリポクラ
ディウム・バリウムCY/93を使用すると、発酵期間が短
く、サイクロスポリン系抗生物質の生産量が高水準であ
り、単離生産量も高いという効果を得る。この発明の一
態様において、発酵は、ペプトン、硫酸アンモニウム、
またはトリプトンを窒素源として、そしてブドウ糖、麦
芽糖、或いはソルビトールを炭素源として含有する培地
で行なはれる。発酵させたブロスには、主産物としての
サイクロスポリンAの他、少量のサイクロスポリンB、
およびサイクロスポリンCも含まれる。
と比較した、真菌のこの新種の分類学的特徴は、次の通
りである。
によって、土壌中の叢生不完全菌目の新しい属として最
初に記載された。その特徴的な性状は、遅い成長速度、
枕状の白いコロニー、短い側枝上に部分的に発生し、大
きく膨大した基部と繊維状のしばしば折れ曲がった頸部
とを有し、一個の単細胞分生子へと続く末端生および側
生の小梗である。
オデス(T.geodes)、トリポクラディウム・シリンドロ
スポルム(T.cylindrosporum)、およびトリポクラディ
ウム・インフラーツム(T.inflatum)の3新種がガムズ
によって区分された。
壌臭があることが知られているが、新種トリポクラディ
ウム・バリウムCY/93株は、これを完全に欠いている。
更に、トリポクラディウム・ゲオデスの担子細胞は、新
種トリポクラディウム・バリウムCY/93株のそれよりも
明らかに細い。トリポクラディウム・シリンドロスポル
ムの分生子は、特徴的に長く、引長された形状である
が、新種トリポクラディウム・バリウムCY/93株のそれ
は、球形であって、僅かに引長されているに過ぎない。
的に卵形をしており、培養された新種トリポクラディウ
ム・バリウムCY/93株において観察されるそれよりも長
い。トリポクラディウム・インフラーツムの小梗は、輪
生個所において直接菌糸体上に、あるいは2〜3μmの
長さの担子細胞上に形成される。しかし、新種トリポク
ラディウム・バリウムCY/93株においては、そのような
輪生配置形態は見られず、この配置は、常に、まばらに
検出されるに過ぎない。
クラディウムのすべての種のコロニーは白色を呈する
が、コロニーの裏面は黄色を帯びた灰色であるか、無
色、あるいは黄色である。典型的な可溶性色素の形成は
皆無である。この点に関しても、新種トリポクラディウ
ム・バリウムCY/93株を識別することができる。すなわ
ち、麦芽エキスおよび酵母エキスとともに、ブドウ糖お
よびペプトンを含有する培地においては、それぞれ、濃
い暗灰色で、しかも黒色の色素が、一時的な変異性を伴
って形成されるのである。
る分類学的評価は、ガムズの論文[ペルソーニア(Pers
oonia)、6巻(1971)185〜191ページ];バロン(G.
L.Barron)の論文[カナディアン・ジャーナル・オブ・
ボタニー(Can.J.Bot.)、5巻R(1980年)439〜442ペ
ージ]、およびビセット(Bisett、J.)の論文[カナデ
ィアン・ジャーナル・オブ・ボタニー、61巻(1983年)
1311〜1329ページ]に基ずいて行なったものである。
態は、要約すると次の通りである。
面は、白色、綿状の、胞子形成の盛んな気生菌糸体で覆
われている。コロニーの裏面は、黄色を帯びた灰色、ま
たは濁った灰色である。複合培地においては暗灰色の可
溶性色素が形成されることがある。気生菌糸において
は、末端および側面の双方の胞子形成が観察される。
あるいは(2〜3μmの)短い担子細胞上に密集するこ
となく、まばらに存在する。小梗は、膨大した基部(2
〜4x2〜3μm)と、長く、繊維状の頸部(2〜4x0.5〜
0.6μm)とから成る。頭頂部の分生子は、小さく(2
〜3x1.3〜2.2μm)、通常、球形、かつ滑らかである。
種名を示すバリウム(varium)なる小名は、小梗が変化
に富むことに因んでいる。
るが、ハルポスポリウム(Harposporium)と同じ生活環
を示す。
とができないが、表面培養においては、マンニトール、
イノシトール、庶糖、果糖、ラムノース、ガラクトー
ス、デキストロース、アラビノース、およびキシロース
を炭素源として活発に増殖する。培養に際して、この菌
株は、栄養寒天培地および麦芽エキス培地においてはあ
まり発育が良好ではないが、大豆粥寒天培地、ツァペッ
ク寒天培地、および馬鈴薯デキストロース寒天培地上で
は充分に発育する。オートミール寒天培地およびデキス
トロース・酵母エキス寒天培地は保存に適さない。
部が若干くぼんでいる分生子を産生するトリポクラディ
ウム・トリゴノスポルムとは、明らかに異なっている。
トリポクラディウム・バリウムはまた、トリポクラディ
ウム・バラノイデスとも異なっている。後者のトリポク
ラディウム・バラノイデスは、壺状の側小梗を形成す
る。
株(CY/93)は、トリポクラディウム・インフラーツム
(CBS 714.70)の正統型菌株とは異なるものである。つ
まり、マルトース寒天培地を用いて培養した際、トリポ
クラディウム・インフラーツムの菌株が、多数の白色気
中菌糸体を生ずるのに対して、新種トリポクラディウム
・バリウムCY/93は、そのような気中菌糸体を形成しな
い。
プトン寒天倍地で菌糸基体中に赤褐色の内色素を生成さ
せるが、新種トリポクラディウム・バリウムCY/93の菌
糸体は、淡黄色のままである。
ラビノースを利用しないが、トリポクラディウム・イン
フラーツムは利用する。亜硝酸ナトリウムを利用した場
合、トリポクラディウム・インフラーツム菌株は、多く
の菌糸体を発生するのに対して、新種トリポクラディウ
ム・バリウムCY/93は、殆んど成長しない。
ポクラディウムの正統型菌株、トリコデルマ・ポリスポ
ルムATCC16,641、およびシリンドロカルポン・ルーシヅ
ムNRRL5760と比較したものを、表Iに示す。
可能な炭素源および窒素源を含有する栄養培地中で、サ
イクロスポリン系抗生物質複合体、またはその構成単位
である、サイクロスポリンA、サイクロスポリンB、お
よびサイクロスポリンCの生合成を行なう糸状菌の菌株
の好気発酵、および、生成産物の単離による上記抗生物
質の製造方法に関係することとなる。
ナル・コレクション・オブ・アグリカルチュラル・アン
ド・インダストリアル・マイクロオーガニスムスに受託
番号NCAIM(P)F001005の下に寄託された新種トリポク
ラディウム・バリウムCY/93株であることが好ましい、
サイクロスポリン系抗生物質複合体を生産するトリポク
ラディウム・バリウムなる新真菌種の一菌株を、無機塩
類とともに炭素源、および有機および無機窒素源を含有
する栄養培地において、25〜30℃の温度範囲の好気的条
件のもとで培養する段階と、所望の場合における生成サ
イクロスポリン系抗生物質複合体またはその構成単位の
単離および精製段階とから成る。
物質複合体は、新規である新種トリポクラディウム・バ
リウムCY/93株を用いて生産される。選択された菌株
は、増殖が速やかであることによる非常な利点がある。
ス、麦芽糖、果糖、澱粉、グリセロール、あるいは油脂
を、また、トウモロコシ浸出液、ペプトン、酵母エキ
ス、肉エキス、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫
酸アンモニウム、あるいは各種アミノ酸のような多様な
有機および無機窒素源を利用できることは、好都合な特
徴である。上記の炭素および窒素源に加え、サイクロス
ポリン系抗生物質複合体の生産に用いられる栄養培地に
は、無機塩類(塩化カリウム、硫酸マグネシウム、ある
いは燐酸二水素カリウム)、微量元素(銅、マグネシウ
ム、鉄塩)、更にビタミン、および消泡剤を加えること
ができる。
・バリウムCY/93株の寒天斜面培養によって調製した分
生子と、菌糸体の懸濁液を用いて液体培地に接種が行な
われる。3日間の培養後に得られた前培地を用いて、抗
生物質生産用の培養液に接種を行ない、その後、これを
25〜30℃、好ましくは25℃の温度で5〜7日間温置す
る。発酵の間、pHは6.0〜2.5の範囲、好ましくはpH5.2
に保つ。発酵は、活発な攪拌(750〜1000rpm)および毎
時300リットルの通気による好気的条件下で行なわれ
る。
グラフィー(HPLC)を用いてブロス中のサイクロスポリ
ン含量を監視する。抗生物質の最大生産量達成後は、直
ちに公知の抽出または吸着方法を用いて、培養液からこ
れらの抗生物質を回収する。
を用い、サイクロスポリンの抗真菌活性を目安として測
定する。試験用生物としては、クロカビ(Aspergillus
nigar)、アスペルギルス・ジャポニクス(Aspergillus
Japonicus)、およびクルブラリア・ルナータ(Curvul
aria lunata)を用いるのが有利である[ドレイフス
(M.Dreyfuss)ら、ユーロピアン・ジャーナル・オブ・
アプライド・マイクロバイオロジー(European J.Appl.
Microbiol.)、3巻(1976年)125〜133ページ]。
ツィッヒ(F.Kreuzig)に従って、メタノールで10倍に
希釈したブロス試料に対して行なう[ジャーナル・オブ
・クロマトグラフィー(J.Chromat.)、290巻(1984
年)181ページ]。
リウムCY/93株によって、主産物としてサイクロスポリ
ンA、および少量構成単位としてサイクロスポリンBお
よびサイクロスポリンCを含有するサイクロスポリン系
抗生物質複合体は高い歩留まりで(950μg/ml)生産さ
れる。
ては、抽出法を用いて有利に行うことができる。抽出の
前に、濾過または遠心分離のいずれかを用いて菌糸体を
分離する。微生物の細胞からは、メタノールであること
が好ましい低級アルコール、あるいは、アセトンである
ことが好ましい有機ケトン体を用いて、発酵中に生産さ
れた抗生物質を洗い出すのが有利である。一方、ブロス
濾液中のサイクロスポリンは、酢酸エチル、n−酢酸ブ
チル、ジクロルメタン、1,2−ジクロルエタン、あるい
はクロロホルムのような水に混和されない有機溶媒、好
ましくはn−酢酸ブチルを用いて抽出することができ
る。抽出によって得られた粗生成物には、真菌によって
生成された赤色あるいは紫色の色素が混入しているが、
これは、活性炭またはシリカゲルに吸着させて除去する
ことができる。
ーテル、および10%の水を含むメタノールの系を用いた
分配により、不純物を石油エーテル相に移動させ、分離
することができる。
タンを用いて抽出し、これを蒸発させて、精製サイクロ
スポリンが得られる。サイクロスポリンAは、カラムク
ロマトグラフィーおよび再結晶法を用いて、他の少量サ
イクロスポリン構成単位から分離することができる。
共鳴、および13C核磁気共鳴を利用した分光分析法、質
量分光分析法、およびアミノ酸分析法を用いて解明され
る。
本発明の対象範囲を限定するものではない。
ム・バリウムCY/93株の寒天斜面培養から、分生子及び
菌糸体の0.9%塩化ナトリウム懸濁液5mlを調製する。こ
の懸濁液1mlを用いて、500ml入りエーレンマイヤーフラ
スコ中の滅菌IC移植片培養液100mlに播種を行なう。
℃にて25分間滅菌する。培地を回転振盪器(340rpm)に
おいて、25℃で温置し、次いで、各々FC1滅菌培養液100
mlの入った500ml入りエーレンマイヤーフラスコ15本
に、この移植片培養液各5mlを加えて播種を行なう。
℃にて25分間滅菌する。
置する。ブロスにおける抗生物質濃度の監視は、プレー
ト拡散試験を用いて行なう。試験用生物としては、クロ
カビ(Aspergillus nigar)を使用する。ブロス中のサ
イクロスポリン系抗生物質複合体の濃度は、サイクロス
ポリンAを標準物質として用いて検定する。
400μgのサイクロスポリン系抗生物質複合体が含まれ
るようになる。サイクロスポリン複合体を単離する方法
は、次のとおりである。
lを2回用いて、抗生物質を洗い落とす。メタノール水
溶液を減圧下で濃縮し、次いで、この濃縮水溶液から、
n−酢酸ブチル50mlを2回用いて、抗生物質複合体を抽
出する。ブロス瀘液中のサイクロスポリン含有物は、n
−酢酸ブチル200mlを用いて抽出する。n−酢酸ブチル
の抽出液を加え併せ、無水硫酸ナトリウムを用いて完全
に脱水し、次いで、40℃の減圧下で蒸発させる。
ノールを用いて作成されたセファデックス(Sephadex)
LH-20番ゲルカラム(カラム長40cm、カラム径2.5cm)の
頂部に注ぐ。その結果、不純脂質は、メタノールへの溶
出によって分離される。
圧下で蒸発させる。得られたサイクロスポリン複合体
(1.05g)からの各構成単位の分離は、キーゼルゲル(K
ieselgel)40番[レアナル(Reanal)社、ブダペスト]
20gを用いたシリカゲルカラムによるクロマトグラフィ
ーを用い、メタノール容積を漸増させつつカラムを通し
たクロロホルム/メタノール混合液中に溶出させること
によって行なわれる。すなわち、溶出は、クロロホルム
100mlを用いて開始し、100mlごとにメタノール含量を0.
5容量%ずつ増加させたクロロホルム/メタノール混合
液を100mlずつ用いて、これを続けるのである。
グラフィー[プレート:F254キーゼルゲル60番、DCアル
ホイル(Alufoil)(メルク(Merck)社)、展開液:酢
酸エチル/イソプロパノール95:5混合液、検出試薬:沃
素蒸気]を用いて行なう。
がそれぞれ2.0、2.5、および3.0容量%のクロロホルム
/メタノール混合液によって溶出する。純粋な構成単位
を含有する分画を減圧下で蒸発させ、サイクロスポリン
A[融点:137〜140℃、[α]D:−189℃(メタノー
ル)]225mg、サイクロスポリンB(融点149〜151℃)2
5mg、および、サイクロスポリンC(融点:150〜152℃)
52mgが得られる。
菌を施したIC移植片培養液5リットルに、実施例1に記
載の方法で調製した振盪培養による移植片培地200mlを
用いて播種を行い、次いで、750rpmで攪拌し、かつ、毎
時300リットルの通気を行ないつつ、25℃にて温置す
る。
室用発酵器内で、121℃にて45分間滅菌されたFC2培養液
5リットルに、この移植片培養液500mlを用いて播種を
行なう。
た培地を750rpmにて攪拌し、かつ、毎時300リットルの
通気を行いつつ、25℃にて温置する。
リンの最大力価を達成し、次いで、ブロスからの回収を
行なう。
合体500μgが含まれる発酵ブロス4.5リットルから単離
されるが、その方法は次のとおりである。
用いた細胞からのサイクロスポリン複合体の洗い落とし
を2回行なう。メタノール水溶液を減圧下で濃縮し、次
いでn−酢酸ブチル250mlを用いた抽出を2回行なっ
て、濃縮水溶液から抗生物質複合体を抽出する。発酵ブ
ロスの瀘液からのサイクロスポリン複合体の抽出は、n
−酢酸ブチル500mlを2回用いて行なう。n−酢酸ブチ
ルによる抽出液をすべて加え併せ、無水硫酸ナトリウム
を用いて完全に脱水し、次いで、溶液を40℃にて減圧下
で蒸発させる。得られた粗生成物(19.2g)の予備的精
製は、展開用溶媒としてクロロホルム/メタノール/ア
セトン(92:4:4)混合液を用い、キーゼルゲル60番(粒
子径0.063〜0.2mm)100gを用いて作成したカラムによる
クロマトグラフィーによって行なう。
ゲル60番、DCアルホイル(メルク社);展開用溶媒:ヘ
キサン/アセトン/(2:1)混合液;検出試薬:塩素/
トリジン試薬]によって得られたサイクロスポリン複合
体含有分画を蒸発、乾燥させる。蒸発残渣(5.28g)に
カラムクロマトグラフィーを施して、サイクロスポリン
Aを得る。カラムは、キーゼルゲル60番(粒子径0.063
〜0.2mm)115gを用いて作成し、アセトンの容積を漸増
させつつヘキサン/アセトン混合液をカラムに通して溶
出を行なう。サイクロスポリンAは、23容量%のアセト
ンを含む混合液によってカラムから溶出する。サイクロ
スポリンA含有の分画の蒸発により、サイクロスポリン
A1.46gが得られる。
エキスと酵母エキスを用いた寒天斜面培養から、分生子
及び菌糸体の0.9%塩化ナトリウム懸濁液5mlを調製し
て、実施例1に記載され、3リットル入りエーレンマイ
ヤーフラスコ内で滅菌したIC移植片培養液800mlへの播
種に用いる。フラスコは、回転振盪器(340rpm)におい
て25℃にて2.5日間温置し、次いで、10リットル入り研
究室用発酵器内で、121℃にて45分間滅菌を施したFC3培
養液5リットルに播種する。
た培地は、1000rpmで攪拌し、かつ、毎時300リットルの
通気を施しつつ、25℃にて温置する。
定によれば1mlあたり60μgのサイクロスポリン複合体
が含まれるようになる。
からサイクロスポリンA310mgが得られる。
(P)F001005)の、麦芽糖エキスと酵母エキスを用い
た5〜7日経過後の寒天斜面培養から、分生子及び菌糸
体の0.9%塩化ナトリウム懸濁液5mlを調製し、実施例1
に記載の、3リットル入りエーレンマイヤーフラスコ中
で滅菌したIC移植片培養液500mlへの播種に用いる。フ
ラスコは、回転振盪器(340rpm)において25℃にて3日
間温置し、次いで、10リットル入り研究室用発酵器中
で、121℃にて45分間滅菌を施したFC4培養液5リットル
にこれを用いて播種する。
発酵ブロスを、1000rpmで攪拌し、かつ、毎時300リット
ルの通気を施しつつ、25℃にて温置する。
定によれば1mlあたり620μgのサイクロスポリン複合体
が含まれるようになる。
にして、ブロス1リットルからサイクロスポリンA305mg
が得られる。
(P)F001005)の、麦芽糖エキスと酵母エキスを用い
た5〜7日経過後の寒天斜面培養から、分生子及び菌糸
体の0.9%塩化ナトリウム懸濁液5mlを調製し、実施例1
に記載の、3リットル入りエーレンマイヤーフラスコ中
で滅菌したIC移植片培養液500mlへの播種に用いる。
日間温置し、次いで、10リットル入り研究室用発酵器の
中で、121℃にて45分間滅菌を施したFC1培養液5リット
ルにこれを用いて播種する。播種後、発酵ブロスは、75
0rpmで攪拌し、かつ、毎時300リットルの通気を行ない
ながら、25℃にて温置する。96時間培養した後に、麦芽
糖100gを溶かした滅菌水溶液を加え、培養を144時間ま
で継続すると、このブロスには、微生物学的検定によれ
ば、1mlあたり950μgのサイクロスポリン複合体が含ま
れるようになる。全部で4.8リットルのブロスが回収に
用いられる。実施例2に記載の方法を用いて単離を行な
うと、サイクロスポリンA2.75gが得られる。
Claims (5)
- 【請求項1】公知のトリポクラディウム種のコロニー
が、ブドウ糖、ペプトン、及び麦芽エキス−酵母エキス
を含む培地に、無色、或いは黄灰色のコロニーを形成す
るのに反し、暗濃−灰黒色コロニーを形成する新種トリ
ポクラディウム・バリウムCY/93。 - 【請求項2】ハンガリー国ブダペスト市所在のナショナ
ル・コレクション・オブ・アグリカルチュラル・アンド
・インダストリアル・マイクロオーガニスムスに受託番
号NCAIM(P)F001005の下に寄託された新種トリポクラ
ディウム・バリウムCY/93。 - 【請求項3】サイクロスポリン、或いはサイクロスポリ
ンA、サイクロスポリンB,及びサイクロスポリンCから
なるサイクロスポリン系複合体抗生物質を生合成する糸
状菌菌株を、炭素源、及び窒素源、並びに無機塩類を含
む栄養培地で好気性発酵すること、及び生成物を単離す
ることにより前記抗生物質を生産する方法であって、サ
イクロスポリン、或いはサイクロスポリン系複合体抗生
物質を生合成する新種トリポクラディウム・バリウム糸
状菌種の一菌株を、炭素源、有機及び無機窒素源、並び
に無機塩類を含む栄養培地で、25〜30℃の好気条件下で
培養すること、そして希望するならば、生産されたサイ
クロスポリン、或いはサイクロスポリン系複合体抗生物
質を単離し、精製することからなるサイクロスポリン、
或いはサイクロスポリン系複合体抗生物質を微生物生産
する方法。 - 【請求項4】トリポクラディウム・バリウム糸状菌種と
して、ハンガリー国ブダペスト市所在のナショナル・コ
レクション・オブ・アグリカルチュラル・アンド・イン
ダストリアル・マイクロオーガニスムスに受託番号NCAI
M(P)F001005の下に寄託されたトリポクラディウム・
バリウムCY/93を用いる請求項(3)記載のサイクロス
ポリン、或いはサイクロスポリン系複合体抗生物質を微
生物生産する方法。 - 【請求項5】ペプトン、硫酸アンモニウム、またはトリ
プトンを窒素源として、そしてブドウ糖、麦芽糖、或い
はソルビトールを炭素源として含有する培地で発酵を行
なう請求項(3)記載のサイクロスポリン、或いはサイ
クロスポリン系複合体抗生物質を微生物生産する方法。
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