JPS60156391A - 抗生物質ｅｍ５４８７ - Google Patents
抗生物質ｅｍ５４８７Info
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- JPS60156391A JPS60156391A JP59257269A JP25726984A JPS60156391A JP S60156391 A JPS60156391 A JP S60156391A JP 59257269 A JP59257269 A JP 59257269A JP 25726984 A JP25726984 A JP 25726984A JP S60156391 A JPS60156391 A JP S60156391A
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- Japan
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- methanol
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- lysobacter
- mhz
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、酵母菌および菌類に対し活性を有するＥＭ５
４８７と称せられる新規な抗生物質に関する。
４８７と称せられる新規な抗生物質に関する。
発明の構成と効果
本発明の新規抗生物質（ＥＭ５４８’７ ）は、アメリ
カン・タイプ・カルチュア・コレクション（Ａｍｅｒｉ
ｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ −１１ｅｃ
ｔｉｏｎ）にＡＴＣＣＮｏ ３９４７２で寄託されてい
るリソバクター・ガモサス（Ｌｙｓｏ−ｂａｃｔｅｒ
ｇｕｍｍｏｓｕｓ）の菌株の培養によって生産される。
カン・タイプ・カルチュア・コレクション（Ａｍｅｒｉ
ｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ −１１ｅｃ
ｔｉｏｎ）にＡＴＣＣＮｏ ３９４７２で寄託されてい
るリソバクター・ガモサス（Ｌｙｓｏ−ｂａｃｔｅｒ
ｇｕｍｍｏｓｕｓ）の菌株の培養によって生産される。
ＥＭ５４８７の生産に用いる微生物は、土壌から単離し
たりソバフタ−・ガモサスの菌株である。
たりソバフタ−・ガモサスの菌株である。
かかる微生物の二次培養物は、メリーランド州ロックビ
ルのアメリカン・タイプ・カルチュア・コレクションの
常設保管所から入手することができる。保管の受入番号
はＡＴＣＣＮｏ ３９４７２である。本明細書で記載お
よび特徴づける特定の微生物以外に、該微生物の突然変
異体（例えばＸ線、紫外線または窒素マスタードの使用
によって生じる突然変異体）もこれを培養してＥＭ５４
８７を生産しつることを理解すべきである。
ルのアメリカン・タイプ・カルチュア・コレクションの
常設保管所から入手することができる。保管の受入番号
はＡＴＣＣＮｏ ３９４７２である。本明細書で記載お
よび特徴づける特定の微生物以外に、該微生物の突然変
異体（例えばＸ線、紫外線または窒素マスタードの使用
によって生じる突然変異体）もこれを培養してＥＭ５４
８７を生産しつることを理解すべきである。
リソバクター・ガモサスを単離して特性を決定するため
、それが存在する土壌試料の一部を殺菌希釈側（例えば
水）の中に８濁し、振盪する。この希釈した懸濁液を、
ビタミンＢ１２およびシクロへキシミドの添加で変性し
た栄養培地、例えばＴｒｉｐｌｅ Ｓｕｇａｒ Ｉｒｏ
ｎ Ａｇａｒ（メリーランド州コツキイースピルのバル
チモア・ビオロジカル・ラボラトリイーズ）に塗抹する
。使用培地の組成は、以下の通りである。
、それが存在する土壌試料の一部を殺菌希釈側（例えば
水）の中に８濁し、振盪する。この希釈した懸濁液を、
ビタミンＢ１２およびシクロへキシミドの添加で変性し
た栄養培地、例えばＴｒｉｐｌｅ Ｓｕｇａｒ Ｉｒｏ
ｎ Ａｇａｒ（メリーランド州コツキイースピルのバル
チモア・ビオロジカル・ラボラトリイーズ）に塗抹する
。使用培地の組成は、以下の通りである。
ヱ
ポリペプトン ２０．Ｏ
Ｌ’ＪａＣ／ ５．０
う〃ドース １０．０
サツカロース １０．０
ブドウ糖 １．０
硫酸第一鉄アンモニウム ０．２
フエノールレツド ０．０２５
寒天 １３．０
蒸留水で全体を１１
上記培地をオートクレーブ中１２１℃で１５分間殺菌す
る。培地を約５０〜５５℃に冷却せしめた後、これに以
下に示す殺菌溶液を補給する。
る。培地を約５０〜５５℃に冷却せしめた後、これに以
下に示す殺菌溶液を補給する。
ビタミンＢ１２の０．１％溶液 ２．０ｒｎ！シクロへ
キシミドの１．０％溶液 ｉｏ、ｏユ１２５℃で４８〜
７２時間培養後、平板土壌からコロニーを単離する。次
いで、これらの単離コロニーを下記成分を含有する培地
で発育する。
キシミドの１．０％溶液 ｉｏ、ｏユ１２５℃で４８〜
７２時間培養後、平板土壌からコロニーを単離する。次
いで、これらの単離コロニーを下記成分を含有する培地
で発育する。
肉エキス １．５
酵母エキス ３．０
ペプトン ６．０
ブドウ糖 １．０
蒸留水で全体を１１
培地をオートクレーブ中１２１℃で１５分間殺菌する。
リソバクター・ガモサス（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎｏ、３９
４７２）の特徴は以下の通りである。
４７２）の特徴は以下の通りである。
細胞形態学上：微生物はグラム陰性桿菌（ｒｏｄ）で、
相鏡検法によると生にテーパ一端よりはむしろ丸味をも
った長く細い桿菌のようである。いくつかの鎖状形成が
明らかである。トリプトン（０，０５％）−酵母エキス
（０，０５％）寒天の場合、該桿菌は滑走運動を示す成
長方向に平行な縦軸にそって共にくるまっている。寒天
上にねばねばしたたれ状物が観察された。
相鏡検法によると生にテーパ一端よりはむしろ丸味をも
った長く細い桿菌のようである。いくつかの鎖状形成が
明らかである。トリプトン（０，０５％）−酵母エキス
（０，０５％）寒天の場合、該桿菌は滑走運動を示す成
長方向に平行な縦軸にそって共にくるまっている。寒天
上にねばねばしたたれ状物が観察された。
培養特性：液状培養物はかなりの粘性で、寒天培養物は
かなりの粘着性を有する。サッカロース（０，２５％）
−酵母エキス（０，５％）寒天の場合、コロニーは黄色
半透明のもので、前色透明で不規則に広がる、スカラッ
プ取りした縁を有する。
かなりの粘着性を有する。サッカロース（０，２５％）
−酵母エキス（０，５％）寒天の場合、コロニーは黄色
半透明のもので、前色透明で不規則に広がる、スカラッ
プ取りした縁を有する。
生化学反応゛微生物は、その不透明なスキンミルク状ア
セテート寒天の除去によって明らかなように蛋白質分解
する。それはカタラーゼ、オキシダーゼ、ホスファター
ゼを生成し、発育の単独炭素源としてシトレートを利用
することができる。
セテート寒天の除去によって明らかなように蛋白質分解
する。それはカタラーゼ、オキシダーゼ、ホスファター
ゼを生成し、発育の単独炭素源としてシトレートを利用
することができる。
それは水溶性ピグメント（色素）を生成せず、あるいは
スターチを加水分解しない。それはＴｗｅｅｎ２０およ
びＩ”ｗｅｅｎ ８０に脂肪分解し、グルコース、セロ
ビオース、サッカロース（遅延）およびラクトースから
酸を生成するが、グリセロールまたはマンニトールから
は生成しない。それはエオシン−メチレンブルー寒天上
で発育する。
スターチを加水分解しない。それはＴｗｅｅｎ２０およ
びＩ”ｗｅｅｎ ８０に脂肪分解し、グルコース、セロ
ビオース、サッカロース（遅延）およびラクトースから
酸を生成するが、グリセロールまたはマンニトールから
は生成しない。それはエオシン−メチレンブルー寒天上
で発育する。
生理学上；微生物は酵母細胞に溶解する。そのＤＮＡの
Ｇ ＋ Ｃ含有率は６６．９％（これはクリステンゼン
およびタックが報告した６５，４〜７０．１モル％の範
囲に入る値）である。
Ｇ ＋ Ｃ含有率は６６．９％（これはクリステンゼン
およびタックが報告した６５，４〜７０．１モル％の範
囲に入る値）である。
これらの特徴は、ＥＭＳ ４ ｓ ７の生産原料がリソ
バクター・ガモサスだと同定するのに役立ち、Ｐ、クリ
ステンゼンおよびＦＤタック（Ｉｎｃ、Ｊ。
バクター・ガモサスだと同定するのに役立ち、Ｐ、クリ
ステンゼンおよびＦＤタック（Ｉｎｃ、Ｊ。
５ｙｓｔ Ｂａｃｅｔｅｒｉｏｌ ２８．６７〜３９３
．１９７８年）の該微生物の説明と一致する。
．１９７８年）の該微生物の説明と一致する。
次に本発明に係る新規抗生物質の生産について説明する
。
。
リソバクター・ガモサス（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ６Ｎｏ、３９
４７２）は、酵母および菌類に対し活性を有する抗生物
ｉＥＭ５４８７を生産する。好ましい方法に従って抗生
物質ＥＭＳ ４８７を形成するため、リソバクター・ガ
モサス（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎｏ、３９４７２ ）を同化
される炭水化物および窒素源を含有する水性栄養培地中
液内好気条件下、室温（２５℃）またはその付近で発育
させる。発酵は、培地に実質的な活性が付与されるまで
、通常発酵条行に応じて約２４〜４８時間行われる。
４７２）は、酵母および菌類に対し活性を有する抗生物
ｉＥＭ５４８７を生産する。好ましい方法に従って抗生
物質ＥＭＳ ４８７を形成するため、リソバクター・ガ
モサス（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎｏ、３９４７２ ）を同化
される炭水化物および窒素源を含有する水性栄養培地中
液内好気条件下、室温（２５℃）またはその付近で発育
させる。発酵は、培地に実質的な活性が付与されるまで
、通常発酵条行に応じて約２４〜４８時間行われる。
発酵が終了した後、液体培地（ブイヨン）を遠心分離し
て産生微生物を取出す。次いで、酸性化した液体培地の
上澄みから酢酸エチルで抗生物質を抽出し、５％重炭酸
ナトリウムに逆抽出し、そして重炭酸す） ＩＪウム溶
液でｐ Ｈ２に酸性死後酢酸エチルに再抽出する。また
別法として、全液体培地を塩化水素酸で酸性化し、次い
で懸濁液を遠心分離して固体にペレット化する。固体を
アセトンで抽出し、アヤトン抽出物をプールして減圧濃
縮する。得られる濃縮液を水で希釈し、酢酸エチルに抽
出し、５％重炭酸ナトリウムに逆抽出し、次いで重炭酸
塩溶液で酸性化して新しい酢酸エチルに抽出する。更に
抗生物質をシリカゲルにてクロロホルム／メタノール勾
配でクロマトグラフィーに付し、次いで活性物質をＤｉ
ａｉｏｎ ＣＨＰ２０１’にて水／アセトン勾配でクロ
マトグラフィーに付し精製を行う。５ｅｐｈａｄｅｘ、
ＬＨ−２０にてメタノールで溶離するクロマトグラフィ
ーで、最終精製を行う。
て産生微生物を取出す。次いで、酸性化した液体培地の
上澄みから酢酸エチルで抗生物質を抽出し、５％重炭酸
ナトリウムに逆抽出し、そして重炭酸す） ＩＪウム溶
液でｐ Ｈ２に酸性死後酢酸エチルに再抽出する。また
別法として、全液体培地を塩化水素酸で酸性化し、次い
で懸濁液を遠心分離して固体にペレット化する。固体を
アセトンで抽出し、アヤトン抽出物をプールして減圧濃
縮する。得られる濃縮液を水で希釈し、酢酸エチルに抽
出し、５％重炭酸ナトリウムに逆抽出し、次いで重炭酸
塩溶液で酸性化して新しい酢酸エチルに抽出する。更に
抗生物質をシリカゲルにてクロロホルム／メタノール勾
配でクロマトグラフィーに付し、次いで活性物質をＤｉ
ａｉｏｎ ＣＨＰ２０１’にて水／アセトン勾配でクロ
マトグラフィーに付し精製を行う。５ｅｐｈａｄｅｘ、
ＬＨ−２０にてメタノールで溶離するクロマトグラフィ
ーで、最終精製を行う。
次に実施例を挙げてＥＭＳ ４８７の生産についてより
具体的に説明する。
具体的に説明する。
実施例１
酵母エキス、ペプトン、グルコース寒天斜面に、リソバ
クター・ガモサス（Ａ、Ｔ、Ｃ０Ｃ９Ｎｏ、３９４７２
）を播種し、２５℃で一夜培養し、これを、５００ｍ１
容綿栓エルレンマイヤーフラスコ中１００ ｍｌＭｆ
＜の水性培地に接腫する。発芽培地の曲成は以下の通り
である。
クター・ガモサス（Ａ、Ｔ、Ｃ０Ｃ９Ｎｏ、３９４７２
）を播種し、２５℃で一夜培養し、これを、５００ｍ１
容綿栓エルレンマイヤーフラスコ中１００ ｍｌＭｆ
＜の水性培地に接腫する。発芽培地の曲成は以下の通り
である。
培地 ヱ
酵母エキス ４
麦芽エキス □０
ブドウ糖 ４
蒸留水で全体を１１
ｐＨを７．３に調整した後、１２１℃で１５分間殺菌す
る。接種した発芽フラスコを、２インチストロークで３
０ ’Ｏｒ、ｐｏｍで作動する回転振盪機にて２５℃で
約２４時間培養する。
る。接種した発芽フラスコを、２インチストロークで３
０ ’Ｏｒ、ｐｏｍで作動する回転振盪機にて２５℃で
約２４時間培養する。
かかる発芽フラスコから１％（■／ｖ）を、上述の新し
い酵母エキス、麦芽エキス、ブドウ糖培地１００ｒｎ１
部に移す。フラスコを２５℃で約４８時間培養するが、
上記の発芽フラスコと同じ操作条件を採用する。
い酵母エキス、麦芽エキス、ブドウ糖培地１００ｒｎ１
部に移す。フラスコを２５℃で約４８時間培養するが、
上記の発芽フラスコと同じ操作条件を採用する。
培養期間の終りに、フラスコの内容物をプールし、これ
を６２５００Ｘｆｉ’で遠心分離して細胞をペレット化
する。細胞と上澄みを分離後、上澄み（２０Ｉりを濃臨
酸でＰＨ２にＭＩＭ整し、次いで同量の酢酸エチルで抽
出する。各相を分離後、有機相を洗液のｐＨが約４．５
になるまで水洗し、次いで２．８１に減圧濃縮する。濃
縮液を０．５容量の重炭酸す） ＩＪウム５％水溶液で
２回抽出する。集めた水性層を室温で激しく攪拌し、そ
の間６Ｎ−ＨＣ／でＰＨ２に調整する。その後抗生物質
を酢酸エチル（３１）に逆抽出し、次いで洗液のｐＨが
１的６となるまで水洗する。有機層を熱水当♂０４上で
乾燥し、沖過し、減圧下で濃縮乾固して相接生物質４．
５ｆ！−の残渣を得る。
を６２５００Ｘｆｉ’で遠心分離して細胞をペレット化
する。細胞と上澄みを分離後、上澄み（２０Ｉりを濃臨
酸でＰＨ２にＭＩＭ整し、次いで同量の酢酸エチルで抽
出する。各相を分離後、有機相を洗液のｐＨが約４．５
になるまで水洗し、次いで２．８１に減圧濃縮する。濃
縮液を０．５容量の重炭酸す） ＩＪウム５％水溶液で
２回抽出する。集めた水性層を室温で激しく攪拌し、そ
の間６Ｎ−ＨＣ／でＰＨ２に調整する。その後抗生物質
を酢酸エチル（３１）に逆抽出し、次いで洗液のｐＨが
１的６となるまで水洗する。有機層を熱水当♂０４上で
乾燥し、沖過し、減圧下で濃縮乾固して相接生物質４．
５ｆ！−の残渣を得る。
この粗物質を少量のメタノール（１０ｍ／）およびクロ
ロホルム（５ｍｔ）に溶解し、溶液をケイ酸カラム（２
，５ｃｍＸ ４６ｃｍ）にてクロマトグラフィーに付す
（クロロホルムからクロロホルム／メタノール（１：１
）の２Ｊの直線勾配、流速３ｍ１１分、１２ｒｎ１画分
採取）。活性画分をペーパーディスク、寒天拡散検定■
で検定する。、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄ
ａ ａｌｂｉｃａｎｓ ）ＳＣ５３１４を集め、減圧■
で濃縮乾固して２．１７の黄色固体を得る。
ロホルム（５ｍｔ）に溶解し、溶液をケイ酸カラム（２
，５ｃｍＸ ４６ｃｍ）にてクロマトグラフィーに付す
（クロロホルムからクロロホルム／メタノール（１：１
）の２Ｊの直線勾配、流速３ｍ１１分、１２ｒｎ１画分
採取）。活性画分をペーパーディスク、寒天拡散検定■
で検定する。、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄ
ａ ａｌｂｉｃａｎｓ ）ＳＣ５３１４を集め、減圧■
で濃縮乾固して２．１７の黄色固体を得る。
固体物質を最小渚のア＋トン／水（３：１）混合物に溶
解し、Ｄｉａｉｏｎ ＣＨＰ２０Ｐの２．５ｃｍ×２８
ｃｍカラムにてクロマトグラフィーに付し２０％アセト
ン／水から１００％アセトンの１．２１の直線勾配で溶
離する（流速３ｒｎ１．７分、１２−画分採取）。
解し、Ｄｉａｉｏｎ ＣＨＰ２０Ｐの２．５ｃｍ×２８
ｃｍカラムにてクロマトグラフィーに付し２０％アセト
ン／水から１００％アセトンの１．２１の直線勾配で溶
離する（流速３ｒｎ１．７分、１２−画分採取）。
注＊ ）Ｄｉａｉｏｎ ＣＨＰ２０Ｐはマクロ網状のス
チレン−ジビニルベンゼン共重合体ビーズ（三菱化威勢
）である。
チレン−ジビニルベンゼン共重合体ビーズ（三菱化威勢
）である。
活性画分を約７０％アセトン水溶液で溶離し、これらを
合し減圧下で蒸発乾固して、６００■の黄色固体を得る
。
合し減圧下で蒸発乾固して、６００■の黄色固体を得る
。
更に５ｅｐｈａｄｅｘＬＨ−ＱＱ”の２．５ Ｃｌ１ｌ
Ｘ１１０■カラムにてクロマトグラフィーに付し、精
製を行う（溶幣剤メタノール、流速２−７分）。
Ｘ１１０■カラムにてクロマトグラフィーに付し、精
製を行う（溶幣剤メタノール、流速２−７分）。
活性画分を合し、溶剤を減圧蒸発させて、２８０ｍｆＩ
のＥＭ５４ ｓ ７を黄色−オレンジ色非結晶固体で得
る。
のＥＭ５４ ｓ ７を黄色−オレンジ色非結晶固体で得
る。
法令＊ ）Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０はアルキル化
架橋デキストランゲルビーズ（ファーマシア・ファイン
・ケミカルズ・ＡＢ、スウェーデン国アブサラ）である
。
架橋デキストランゲルビーズ（ファーマシア・ファイン
・ケミカルズ・ＡＢ、スウェーデン国アブサラ）である
。
抗生物質ＥＭＳ ４８７の物理的および化学的性質は以
下の通りである。
下の通りである。
ＵＶχｍａｘ （メタノール中）：２６０ｎｍ（Ｅ１９
′６６ｒ）ｏ）、３３５（１８０）ＵＶχｍａｘ （０
，０１Ｎ −Ｎ ａＯＨ中）：２６０ｎｍ （Ｅ’７６
０’）、３３５ （１８０）ＵＶχｍａｘ （０，０１
Ｎ−）（Ｃ／中）：２６９’ｎｍ （Ｅ１′／＋３０’
Ｏ）、３５７（２３８）、３７５（１８０） Ｉ Ｒ（Ｋ Ｂ ｒ ） ： ３４０５ブロード、２９
３０゜２８９５．２８００． １７０３．１６５５．１
６２０．１５６６および１００５０一１分子情：５１０
（ＦＡＲＭＳによる）、（Ｍ＋Ｈ’） ｍ／ｚ ５１１ （Ｍ−Ｈ） ｍ／ｚ ５０９ イオンフラグメント（Ｍ −’ＨΣにおける高分解質量
スペクトルデータ： ｒｎ ／ ｚ ５０９ （Ｃ２９
Ｈ３７Ｎ２０６の分析） 元素分１斤： （実測値）Ｃ６４，９８、Ｈ７，４６、Ｎ ５．８６Ｔ
ＬＣ・ シリカゲル（メルク）、ＣＨＣ１３／ Ｍ ｅ ＯＨｌ
ｏ、０５Ｍ−リン酸塩緩衝液（６５： ３５ ：１０）
、ＰＨ２，３，低相のＲｆＱ、３０Ｐｔｉ ｕ、ｐ ｃ
ｌ ２ ””、７０ ＜ｙ−＝ ） ７水溶液の１（ｆ
Ｑ、３ Ｉ Ｔ Ｌ Ｃ／ Ｓ Ａ” ” ” ” 、 ＣＨＣ
Ｉ！３／ Ｍｅ ＯＨ／ＥｔＯＡｃ（９０：５：２）（
７）Ｒｆｏ、３注申傘−）Ｏｐｔｉ ＵＰＣ１２は、ド
デシルトリクロロシランと結合した薄層逆相クロマトグ
ラフィープレート（メルク・ケミカルズ・コーポレーシ
ョン、ニューヨーク）でアル。
′６６ｒ）ｏ）、３３５（１８０）ＵＶχｍａｘ （０
，０１Ｎ −Ｎ ａＯＨ中）：２６０ｎｍ （Ｅ’７６
０’）、３３５ （１８０）ＵＶχｍａｘ （０，０１
Ｎ−）（Ｃ／中）：２６９’ｎｍ （Ｅ１′／＋３０’
Ｏ）、３５７（２３８）、３７５（１８０） Ｉ Ｒ（Ｋ Ｂ ｒ ） ： ３４０５ブロード、２９
３０゜２８９５．２８００． １７０３．１６５５．１
６２０．１５６６および１００５０一１分子情：５１０
（ＦＡＲＭＳによる）、（Ｍ＋Ｈ’） ｍ／ｚ ５１１ （Ｍ−Ｈ） ｍ／ｚ ５０９ イオンフラグメント（Ｍ −’ＨΣにおける高分解質量
スペクトルデータ： ｒｎ ／ ｚ ５０９ （Ｃ２９
Ｈ３７Ｎ２０６の分析） 元素分１斤： （実測値）Ｃ６４，９８、Ｈ７，４６、Ｎ ５．８６Ｔ
ＬＣ・ シリカゲル（メルク）、ＣＨＣ１３／ Ｍ ｅ ＯＨｌ
ｏ、０５Ｍ−リン酸塩緩衝液（６５： ３５ ：１０）
、ＰＨ２，３，低相のＲｆＱ、３０Ｐｔｉ ｕ、ｐ ｃ
ｌ ２ ””、７０ ＜ｙ−＝ ） ７水溶液の１（ｆ
Ｑ、３ Ｉ Ｔ Ｌ Ｃ／ Ｓ Ａ” ” ” ” 、 ＣＨＣ
Ｉ！３／ Ｍｅ ＯＨ／ＥｔＯＡｃ（９０：５：２）（
７）Ｒｆｏ、３注申傘−）Ｏｐｔｉ ＵＰＣ１２は、ド
デシルトリクロロシランと結合した薄層逆相クロマトグ
ラフィープレート（メルク・ケミカルズ・コーポレーシ
ョン、ニューヨーク）でアル。
注ゆ、。）ＩＴＬＣ／ＳＡは、ケイ酸を含浸したガラス
ミクロファイバーのＨＩＩクロマトグラフィー用シート
（ゲルマン・インストルメント・カンパニー、ミシガン
、アン・アーボア）である。
ミクロファイバーのＨＩＩクロマトグラフィー用シート
（ゲルマン・インストルメント・カンパニー、ミシガン
、アン・アーボア）である。
実施例２
酵母エキス、ペプトン、グルコース寒天斜面にリソバク
ター・ガモサス（Ａ、Ｔ、Ｃ０Ｃ，Ｎｏ、３９４７２）
を播種し、２５℃で一夜培養し、これを、５００ｍ１
容綿栓エルレンマイヤーフラスコ中１００ ｍ１Ｍ％の
水性培地に接種する。発芽培地の組成は以下の通りであ
る。
ター・ガモサス（Ａ、Ｔ、Ｃ０Ｃ，Ｎｏ、３９４７２）
を播種し、２５℃で一夜培養し、これを、５００ｍ１
容綿栓エルレンマイヤーフラスコ中１００ ｍ１Ｍ％の
水性培地に接種する。発芽培地の組成は以下の通りであ
る。
培地 Ｌ
酵母エキス ４
麦芽エキス １０
ブドウ糖 ４
蒸留水で全体を１１
ｐＨを７．３に調整した後、１２１℃で１５分間。
殺菌する。
接種した発芽フラスコを、２インチスローで３０ Ｏｒ
、ｐ、ｍで作動する回転搦盪機にて２５℃で約２４時間
培養する。
、ｐ、ｍで作動する回転搦盪機にて２５℃で約２４時間
培養する。
かかる発芽フラスコから１６／Ｑ（Ｖ／Ｖ ）を、７５
１ｊＦｅｒｍａｔｒＯｎ発酵機にニュー・ブランス・ク
イック・サイエンティフィック、エジソン、ニュー・シ
ャーシー）に入った上述の同じ培地５０１に移す。２５
℃にて空気５０１／分の空気量および攪拌速度２０Ｏｒ
、ｐ、ｍで２８〜３０時間発酵を続行せしめる。発酵の
終りに、液体培地を収得し、濃ＨＣ／を加えてｐ Ｈ２
に調整する。次いで酸性化した液体培地を６２５００Ｘ
Ｆで遠心分離して、固体と上澄みを分離する。
１ｊＦｅｒｍａｔｒＯｎ発酵機にニュー・ブランス・ク
イック・サイエンティフィック、エジソン、ニュー・シ
ャーシー）に入った上述の同じ培地５０１に移す。２５
℃にて空気５０１／分の空気量および攪拌速度２０Ｏｒ
、ｐ、ｍで２８〜３０時間発酵を続行せしめる。発酵の
終りに、液体培地を収得し、濃ＨＣ／を加えてｐ Ｈ２
に調整する。次いで酸性化した液体培地を６２５００Ｘ
Ｆで遠心分離して、固体と上澄みを分離する。
上記固体（湿−１ｆｔ３７５１を２，５１のアセトンに
懸濁し、周囲温度で約３０分間撹拌する。ウオットマン
Ｎ ｏ ｌ ｆ過紙でρ過してアセトンを集め、固体を
再関新しいアセトン（２，５１）に懸濁する。攪拌後同
体とアセトンの分離を再度行い、もう１回抽出操作を繰
返す。三つのアでトン抽出物を合し、減圧濃縮して水性
スラリー（約２０〇−）とする。スラリー（ｐＨ，４）
に２００ｍ１の蒸冒水を加えて希釈し、ａｌ−（Ｃ／の
添加でｐＨを２に調整する。酸性化したスラリーを５ｏ
ｏｉｇの酢酸エチルで２回抽出し、有機相を保留し、集
める。このプールしたものを６００ｒｎｌ都の重炭酸ナ
トリウム５％水溶液で２回抽出する。水性層を合し、濃
ＨＣ１でＰＨ２に酸性化する。酸性化した水性相からそ
れぞれ１．５１の新しい酢酸エチルによる２回抽出で連
続的）こ抗生物質を再抽出する。
懸濁し、周囲温度で約３０分間撹拌する。ウオットマン
Ｎ ｏ ｌ ｆ過紙でρ過してアセトンを集め、固体を
再関新しいアセトン（２，５１）に懸濁する。攪拌後同
体とアセトンの分離を再度行い、もう１回抽出操作を繰
返す。三つのアでトン抽出物を合し、減圧濃縮して水性
スラリー（約２０〇−）とする。スラリー（ｐＨ，４）
に２００ｍ１の蒸冒水を加えて希釈し、ａｌ−（Ｃ／の
添加でｐＨを２に調整する。酸性化したスラリーを５ｏ
ｏｉｇの酢酸エチルで２回抽出し、有機相を保留し、集
める。このプールしたものを６００ｒｎｌ都の重炭酸ナ
トリウム５％水溶液で２回抽出する。水性層を合し、濃
ＨＣ１でＰＨ２に酸性化する。酸性化した水性相からそ
れぞれ１．５１の新しい酢酸エチルによる２回抽出で連
続的）こ抗生物質を再抽出する。
集めた酢酸エチル曲出物を洗液のｐＨが中性となるまで
水洗し、５００ｒｎｌに減圧濃縮し、無水ＭｇＳＯ４上
で乾燥し、沖過して固体を除去し、次いで減圧濃縮して
残渣（２，３５５１を得る。
水洗し、５００ｒｎｌに減圧濃縮し、無水ＭｇＳＯ４上
で乾燥し、沖過して固体を除去し、次いで減圧濃縮して
残渣（２，３５５１を得る。
生物学的活性
試験化合物として精４１ＥＭ５４８７を用い、数種のカ
ンジダ屈菌株（Ｃａｎｄｉｄａ）についての２倍寒天希
釈検定の結果は、以下の通りである。
ンジダ屈菌株（Ｃａｎｄｉｄａ）についての２倍寒天希
釈検定の結果は、以下の通りである。
微生物 ＭＩＣ（μｍ／−）
カンジダ・Ｔ）Ｌｔビカ７ス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂ
ｉ−■ ｃａｎｓ）、ＳＣ５３１４＋＋＋＋＋ａ、ｔカンジダ・
アルビカンス、５Ｃ１１４２２・・・・・・３．１ カンジダ・アルビカンス、５Ｃ１２７３４（Ｂａｃｉｌ
ｙｓｉｎｒ）■ −・−１，６カンジダ・トロピカリス
（Ｃａｎｄｉｄａｒｒｏｐｉ ｃａｌ ｉ ｓ ） 、
ＳＣ８１５９＝−６，３カンジダ・トロピカリス、Ｓ
Ｃ２９ＳＣ２９６３（Ａ ｔ ｅ ｒ １ｃｉｎ Ｂｒ
） −、、−、，６，３カンジダ・トロピカリス、ＳＣ
９８６１（ＡｍｐｈＳＣ９８６１（Ａ Ｂ ） −−−
−・−１，６カンジダ・り／Ｌｚ−４＝イ（Ｃａｎｄｉ
ｄａ Ｋｒｕｓｅｉ）、５Ｃ２９６７（Ａｍｐｈｏｔｅ
ｒｉｃｉｎ Ｂｒ）・・・・・・３．１ カンジダ・クルセイ、５Ｃ２９６９ （Ｎｙｓｔａｔｉｎ ） ・・・・・・３．１カンジダ
・パラクルセイ（ＣａｎｄｉｄａＰａｒａｋｒｕｓｅｉ
）、５Ｃ２６２１・・・・・・１．６カンジダ・シュー
ドトロピカリス（ＣａｎｄｉｄａＰｓｅｕｄｏｔｒｏｐ
ｉｃａｌ ｉｓ）、５Ｃ１１２４１・・・・・・１．６ カンジダ・ギリエルモンデイ（ＣａｎｄｉｄａＧｕｊｌ
ｌ ｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ）、５ｃ２２１０・・・・・
・６３ カンジダ・ステラトイデア（ＣａｎｄｉｄａＳｔｅｌｌ
ａｔｏｉｄｅａ）、ＳＣ２２１１・・・・・・６．３ カンジダ・ゲラブラタ（ＣａｎｄｉｄａＧｌａｂｒａｔ
ａ）、５Ｃ１１２６７−−３，１注、１））ＳＣとはニ
ューシャーシー州プリンストンのイー−アール・スクイ
ブ・アンド・サンズ・インコーホレイテッドの菌培養保
管所（Ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ）から
入手した微生物を指称する。
ｉ−■ ｃａｎｓ）、ＳＣ５３１４＋＋＋＋＋ａ、ｔカンジダ・
アルビカンス、５Ｃ１１４２２・・・・・・３．１ カンジダ・アルビカンス、５Ｃ１２７３４（Ｂａｃｉｌ
ｙｓｉｎｒ）■ −・−１，６カンジダ・トロピカリス
（Ｃａｎｄｉｄａｒｒｏｐｉ ｃａｌ ｉ ｓ ） 、
ＳＣ８１５９＝−６，３カンジダ・トロピカリス、Ｓ
Ｃ２９ＳＣ２９６３（Ａ ｔ ｅ ｒ １ｃｉｎ Ｂｒ
） −、、−、，６，３カンジダ・トロピカリス、ＳＣ
９８６１（ＡｍｐｈＳＣ９８６１（Ａ Ｂ ） −−−
−・−１，６カンジダ・り／Ｌｚ−４＝イ（Ｃａｎｄｉ
ｄａ Ｋｒｕｓｅｉ）、５Ｃ２９６７（Ａｍｐｈｏｔｅ
ｒｉｃｉｎ Ｂｒ）・・・・・・３．１ カンジダ・クルセイ、５Ｃ２９６９ （Ｎｙｓｔａｔｉｎ ） ・・・・・・３．１カンジダ
・パラクルセイ（ＣａｎｄｉｄａＰａｒａｋｒｕｓｅｉ
）、５Ｃ２６２１・・・・・・１．６カンジダ・シュー
ドトロピカリス（ＣａｎｄｉｄａＰｓｅｕｄｏｔｒｏｐ
ｉｃａｌ ｉｓ）、５Ｃ１１２４１・・・・・・１．６ カンジダ・ギリエルモンデイ（ＣａｎｄｉｄａＧｕｊｌ
ｌ ｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ）、５ｃ２２１０・・・・・
・６３ カンジダ・ステラトイデア（ＣａｎｄｉｄａＳｔｅｌｌ
ａｔｏｉｄｅａ）、ＳＣ２２１１・・・・・・６．３ カンジダ・ゲラブラタ（ＣａｎｄｉｄａＧｌａｂｒａｔ
ａ）、５Ｃ１１２６７−−３，１注、１））ＳＣとはニ
ューシャーシー州プリンストンのイー−アール・スクイ
ブ・アンド・サンズ・インコーホレイテッドの菌培養保
管所（Ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ）から
入手した微生物を指称する。
■）記号「ｒ」は、微生物が括弧内に街並の抗生物質に
対して抵抗性を有することを意味する。
対して抵抗性を有することを意味する。
第１図はＥＭＳ ４８７／臭化カリウムの赤外スペクト
ル、＄２図はＥＭ５４８７／シュウチリウム置換メタノ
ールの１３Ｃ−Ｎ’ＭＲスペクトル（１００１Ｖ Ｈｖ
）、第３図はＥＭＳ ４８７／シユウチリウム置換メ
タノールのＬＨ−’ＮＭＲスペクトル（４００１ｖｆＨ
’ｚ ）、および第４図はＦ、 Ｍ ！５４ ｇ ７／
メタノールの紫外スペクトルを示す。 特許出願人 イー・アール・スクイブ・アンド・ザンズ
・インコーホレイテッド 代理人弁理士青山 葆 外１名
ル、＄２図はＥＭ５４８７／シュウチリウム置換メタノ
ールの１３Ｃ−Ｎ’ＭＲスペクトル（１００１Ｖ Ｈｖ
）、第３図はＥＭＳ ４８７／シユウチリウム置換メ
タノールのＬＨ−’ＮＭＲスペクトル（４００１ｖｆＨ
’ｚ ）、および第４図はＦ、 Ｍ ！５４ ｇ ７／
メタノールの紫外スペクトルを示す。 特許出願人 イー・アール・スクイブ・アンド・ザンズ
・インコーホレイテッド 代理人弁理士青山 葆 外１名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）近似元素分析値： Ｃ６４，９８、Ｈ７，４６，
Ｎ５．８６、第１図に示す臭化カリウム中の赤外スペク
トル、第２図に示すシュウチリウム置換メタノール中ノ
１３Ｃ−Ｎ Ｍ ＦＬ スペクトル（１００ＭＨ１）、
第３図に示すシュウチリウム置換メタノール中のＩＨ−
ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）、および第４図に示
すメタノール中の紫外スペクトルを有することを特徴と
するＥＭＳ ４８７と称せられる抗生物質。 （２ｊ Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ０Ｎ、ｏ、 ３９４７２のリソ
バクター・ガモサス（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ ｇｕｍｍ
ｏｓｕｓ）を、同化される炭化水素および窒素源を含有
する水性栄養培地中液内好気条件下、該培地に実質的な
抗生物質活性が付与されるまで培養することを特徴とす
る近似元素分析値： Ｃ６４，９８，Ｈ７，４６、Ｎ５
．８６、第１図に示す臭化カリウム中の赤外スペクトル
、第２図に示すシュウチリウム置換メタノール中の１３
Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）、第３図に示す
シュウチリウム置換メタノール中のＩＨ−ＮＭＲスペク
トル（４００Ｍ Ｈｚ）、および第４図に示すメタノー
ル中の紫外スペクトルを有するＥＭＳ ４８７の生産方
法。 （３）微生物リソバクター・ガモサスを約２５℃で培養
する前記第２項記載の方法。 （４）近似元素分析値：Ｃ６４，９８、Ｈ７，４６、Ｎ
５．８６．第１図に示す臭化カリウム中の赤外スペクト
ル、第２図に示すシュウチリウム置換メタン３ 一ル中の Ｃ−ＮＭ艮スペクトル（１００Ｍ）ＩＺ）、
第３図に示すシュウチリウム置換メタノール中のＩＨ−
Ｎ Ｍ Ｒスペクトル（４００ＭＨ１）、および第４図
に示すメタノール中の紫外スペクトルを有するＥＭ５４
８７を、窒素および炭水化物の同化される源を含有する
水性栄養培地中発酵させて回収可能な量で生産すること
ができる、Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ｎ ｏ、 ３９４７２の微
生物リソバクター・ガモサス（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ
ｇｕｍｍｏｓｕｓ）の生物学的に純粋な培養物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/557,803 US4588588A (en) | 1983-12-05 | 1983-12-05 | Antibiotic EM5487 |
| US557803 | 1983-12-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60156391A true JPS60156391A (ja) | 1985-08-16 |
Family
ID=24226947
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59257269A Pending JPS60156391A (ja) | 1983-12-05 | 1984-12-04 | 抗生物質ｅｍ５４８７ |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4588588A (ja) |
| JP (1) | JPS60156391A (ja) |
| DE (1) | DE3444184A1 (ja) |
| FR (1) | FR2555900A1 (ja) |
| GB (1) | GB2150556A (ja) |
| IT (1) | IT1178691B (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1266247C (en) * | 1985-03-25 | 1990-02-27 | ANTIBIOTIC PREPARED BY LYSOBACTER SP. SC14.067 | |
| JP3339235B2 (ja) * | 1994-02-18 | 2002-10-28 | 日本メディカルリサーチ株式会社 | 抗生物質ｗａｐ−８２９４ａ、その製造法及び抗菌剤 |
| HU218351B (hu) * | 1995-02-02 | 2000-08-28 | Nippon Medical Research, Inc. | WAP-8294A antibiotikumok, eljárás előállításukra, a termelő mikroorganizmus és az antibiotikumokat tartalmazó antibakteriális gyógyszerkészítmények |
| WO2014028848A1 (en) * | 2012-08-17 | 2014-02-20 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and method for treating neutralizing microorganisms |
| KR101638833B1 (ko) * | 2014-09-16 | 2016-07-13 | 주식회사 한울 | 식물 병원균에 대한 항진균 활성 및 대취 분해능을 갖는 리소박터 굼모서스 균주와 이를 함유한 미생물 제제 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3160560A (en) * | 1957-08-23 | 1964-12-08 | Upjohn Co | Streptolydigin and production thereof |
| US4187292A (en) * | 1977-03-31 | 1980-02-05 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Antibiotics produced from the microorganism nocardice |
-
1983
- 1983-12-05 US US06/557,803 patent/US4588588A/en not_active Expired - Fee Related
-
1984
- 1984-12-04 IT IT23873/84A patent/IT1178691B/it active
- 1984-12-04 JP JP59257269A patent/JPS60156391A/ja active Pending
- 1984-12-04 GB GB08430613A patent/GB2150556A/en not_active Withdrawn
- 1984-12-04 DE DE19843444184 patent/DE3444184A1/de not_active Withdrawn
- 1984-12-05 FR FR8418555A patent/FR2555900A1/fr not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT1178691B (it) | 1987-09-16 |
| GB2150556A (en) | 1985-07-03 |
| FR2555900A1 (fr) | 1985-06-07 |
| IT8423873A1 (it) | 1986-06-04 |
| IT8423873A0 (it) | 1984-12-04 |
| DE3444184A1 (de) | 1985-06-13 |
| US4588588A (en) | 1986-05-13 |
| GB8430613D0 (en) | 1985-01-09 |
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