JPS59162892A - 新抗生物質ｒｋ−１３３９物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 その製造法に関するものである。

更に詳しくは、本発明はストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐ
．ｔｏｍｙｃｅｓ）　属に属する抗生物質Ｒに一／３３
９物質生産菌を＃４養して得られる培養物より新抗生物
質Ｒに一／３３タ物質を分離、採取することを特徴とす
る新抗生物質ＲＫ一／Ｊ’３９物質の製造法及び該抗生
物質ＲＫ−／３Ｊ’？物質に係るものであり、前記Ｒに
一７３３９物質は既知文献未載の新規物質である。

本発明者らは、吉日肉腫細胞（Ｙｏｓｈｌｄａ　ｓａｒ
ｃｏ−ｍａ　ｃ４１１ｓ）に対して細胞変性作用を示す
新規活性物質の探索を目、的として多数の土壌中より微
生物を分離し、その産生ずる；次代謝物質を分離、探索
した結果、ストレプトミセス属に属する微生物の培養液
中に文献未載の新規活性物質が産生、蓄積されることの
新たな知見を得て、ここに本発明を完成するに至った。

以下Ｋ、本発−の新抗生物’ＪＲに一７３３９物質及び
その製造法について詳述する。

本発明方法において用いる微生物は、新抗生物質Ｒに一
／３３９物質の生産能を有するストレプトミセス風に属
する菌種である。

その一例として、ストレプトミセス・エスピーＲ　Ｋ　
−　／　３　３　９　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｓｓ　ｓ
ｐ．　Ｒに−７３３９）（以下、単に「ＲＫ−／３３９
株」という。）と呼称される微生物が前記の特性を有す
る新菌株で、本発明の新抗生物質ＲＫー／，？，７９物
質を有利に生産するものであり、本発明方法に有効に利
用し得る微生物として挙げられる。

また、前記ストレプトミセス・エスピー・ＲＫ−７３３
９の自然的及び人工的変異株は勿論、ストレプトミセス
属に属する菌種で、後述の新抗生物質Ｒ　Ｋ　−　／　
３　３　９物’ｌ　（以下、単ｃｒＲに−、／　３　３
　９物質」という。）の生産能を有する微生物は、すべ
て本発明方法において使用することができる。

Ｒに一７３３９株は本発明者により、岩手県宮古市で採
取した土壌試料中より発見されたストレプトミセス，％
に属する土壌放線菌であり、工業技術院微生物工業技術
研究所に昭和Ｓｇ年λ月２６日に寄託され、その微生物
受託番号は、微工研菌寄第６タ３グ号（ＦＥＲＭ　Ｐ一
乙２３≠）である。

Ｒに一７３３９株の菌学的性質は次の通りである。

（Ｉ）形態的特徴 Ｒに一／３３９株はストレプトミセス属に属し、スター
チ無機寒天培地、チロシン寒天培地、イースト麦芽寒天
培地、オートミール寒天培地上で豊富な気中菌糸の生育
と共に良好な発育をする。シュークロース硝酸塩寒天培
地、グルコースアスパラギン寒天培地、ペプトンイース
ト鉄塵天培地上での気中菌糸の発育は不良か又はないが
、基底菌糸は良好に生育する。グリセロールアス・母う
ギン寒天培地、栄養寒天培地との発育はやや不良で気中
菌糸の発育も充分でない。

検査対象の炭素源に対しては全て生育するがＬーアラビ
ノースで発育が若干悪い。気中菌糸は全般に灰白色で、
可溶性色素の生成は少ない。

気中菌糸の光学顕微鏡観察では分枝は不規則に分枝し、
その先端に約７μｍの胞子鎖を形成する。胞子は楕円形
状で数十個がつらなる。スターチ無機痩天培地に生育し
たものは菌糸先端がカール状である。

（１）各ｎ培地上での生育状態 特許庁産業別審査基準に従い、各種培地を調製し、接種
後３週間後に観察した結果を次に記載する。尚色調の記
載に於てに）内の記号はディスクリブチイブ・カラー・
ネームズ・ディクショナリー（Ｄｅｓｃｒｌｐｔｌｖｅ
　Ｃａ１Ｏｒ　ｎａｍｅｓ　ｄｌｃｔｌｏ−ｎａｒｙ）
第を版の色名記号に従ったものである。

ｌシュークロース硝酸塩寒天培地 生　　育　　　　：普　通 気中菌糸の着生　：な　し 気中菌糸の色　　：不　明 基底菌糸の色　　：（乙ｎｌＦインディアンレッド）可
溶性色素　　　：（乙１ｅレッドウッド）生成は少ない
。

コ、クルコース・アスノ４ラギン寒天培地生　育　　　
　：やや不良 り中菌糸の着生　：不良、わずかに着生がみられる。

気中菌糸の色　：（、？ｃｂサンド） 基底菌糸の色　：（３ｎｅ）バーズ） 可溶性色素　　：　（３ｆｃライトタン）生成は少ない
。

３グリセロール・アスノ４５ギン寒天培地生　　育　　
　；やや不良 気中菌糸の着生：やや不良 り中菌糸の色　：（グｅｃペイシュ） 基底菌糸の色　：（３１ｅキヤメル） 可溶性色素　　：な　し ダスターチ無機塩寒天培地 生　　育　　　：良　好 気中菌糸の惰性：豊　富 気中菌糸の色　：　（３ｃｂサンド） 基底菌糸の色　：（３６ａライナメロンイエロー）可溶
性色素　　：な　し よチロシン寒天培地 生　　育　　　：良　好 気中菌糸の着生：豊　富 気中菌糸の色　：（ｃライトグレー） 、基底菌糸の色　：（、？ｃａシェル）可溶性色素　　
　：な　し ム栄養寒天培地 生　　育　　　　：やや不良 気中菌糸の着生　：な　し 気中菌糸の色　　：不　明 基底菌糸の色　　：（、？ｃａシェル）可溶性色素　　
　：な　し フィースト麦芽寒天培地。

生　　育　　　　：良　好 気中菌糸の着生　：豊　富 気中菌糸の色　　：（ｄグレー） 基底菌糸の色　　：（３＋ｅキヤメル）可溶性色素　　
　：（３１ｃライトアンバー）生成は少ない。

＆オートミール寒天培地 生　　育　　　：良　好 気中菌糸の着生：豊　富 気中菌糸の色　＝（ｂオイスターホワイト）基底菌糸の
色　：（３１ｓキヤメル） 可溶性色素　　：な　し ９ペゾトン・イースト鉄寒天培地 生　　育　　　：普　通 気中菌糸の着生：な　し 気中菌糸の色　：不　明 基底菌糸の色　：（，２ｅａライトメイズ）可溶性色素
　　：な　し くＩＩＩ）炭素源の資化性（プリドハム・ゴツトリープ
散大培地）／Ｌ−アラビノース　　士 ユＤ−キシロース　　　＋＋＋ ３、　Ｄ−グルコース　　　＋＋＋ １ＡＤ−フラクトース　　＋＋＋ 左シュークロス　　　　＋＋＋ ムイノシトール　　　　＋＋ ７Ｌ−ラムノース　　　＋＋＋ と２フイノース　　　　＋＋＋ ワ、Ｏ−マンニット　　　＋＋＋ ＋　：　利用する。

十＋：　　よく利用する。

＋＋十二　　非常によ（利用する。

（ＩＶ）生理的性質 ／至適生育温度 ２７−３０℃ λゼラチンの液化（グルコース・ペグトンゼラチン培地
上） な　　し ３スターチの加水分解（スターチ寒天培地上）分解する
。

ＩＡ説脂牛乳の凝固・ペプトン化 な　　し ！メラニン様色素の生成（チロシン寒天培地及びペプト
ンイースト鉄寒天培地上） な　　し 上記の諸性質を有するＲに−７３３９−株を野々村氏に
よるジャーナル・オブ・ファーメンティジョン・テクノ
ロジー５２巻λ号記載の放線菌＋、ｓ、ｐ、　　４を左
ｇ菌種の分類法の記載（キイ・フォア・クラシイフイヶ
イション・アンド・アイデンテイフイケイション・オブ
・９３ｇスペシス・オプ、ザ・ストレプトミセス・イン
クルーデッド・イン１、Ｓ、Ｐ）（Ｋｅｙ　ｆｏｒ　ｃ
ｌａｓｓｌｆｌｃａｔｌｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｌｆ
ｌ−ｃａｔｌｏｎ　ｏｆ　タ左ｇｓｐｅｃｌｅｓ　ａｔ
　、ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ’Ｉｎｃｌｕｄｅｄ　Ｉ
ｎ　１．ｓ、Ｐ、）により探索すると、■気中菌糸が、
白から灰色を呈する点、■メラノイド色素を生成しない
点、■菌の裏が特徴的な色を呈さない点、■可溶性色素
を生成しない点、■胞子がスムースである点及び■糖を
すべて利用する点、等の特徴を有することから、Ｒに一
／３３９株は、ストレプトミセス・スフレロチイアラス
（Ｓｔｒｅ−ｐｔｏｍｙｃｅｓ　５ｃｌｅｒｏｔｌａｌ
ｕｓ）、ストレプトミセス・カルブス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ　ｃａｌｖｕｓ）、ストレグトミセス、グラ
ミノファシェンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒａｍ
ｌｎｏｆａｃｌｅｎｓ）に近緑の一菌種と考えられる。

次に、本発明を実施するに当っては、ストレプトミセス
属に属する抗生物雀Ｒに一／３３９物質生産菌を、抗生
物儀な生産する通常の方法で培養することができる。ｉ
＠養の形態は、液体培養でも固体培養でもよく、工業的
に有利に培養するためには、前記生産菌の胞子懸濁液又
は培養液を培地に接種し、通気攪拌培養を行えばよい。

培地の栄養源としては特に限定されることはなく、微生
物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源その他を培地
中に含有させることができる。炭素源としては、殿粉、
デキストリン、グリセリン、グルコース、シュークロー
ス、ガラクトース、イノシトール、マンニトールなどが
、また窒素源としてはペプトン、大豆粉、肉エキス、米
ぬか、皺、尿素、コーンステイープリカー、アンモニウ
ム塩、硝酸塩、その仙の有機または無機の窒素化合物が
用いられる。その他、無機塩類、たとえば、食塩、燐酸
塩類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、鉄等の
金属塩類等を適宜に添加してもよく、必要に応じて消泡
剤として、動・植・鉱物油等を添加してもよい。培養温
度、培養時間等の培養条件は使用菌の発育に適し、しか
もＲＫ−／３３９物質の生産が最高となるような条件が
゛選ばれる。

たとえば培地のｐ）ｌはり〜ヲ、特に中性付近がよく、
培養の適温は２５０〜３　、ｔ　’Ｃ：程度がよい。

しかし、これらの培養組成物、培地の水素イオン濃度、
培養温度、攪拌条件などの培養条件は使用する菌株の種
類や、外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節されるべきであることはいうまでもない
。このようにして得られる培養物からＲに一／３３９物
質を得るには、代謝産物を採取するのに通常用いられる
手段を適宜に利用し得る。たとえば、Ｒに一７３３９物
質と不純物との溶解度差を利用する手段、吸着親和力の
差を利用する手段のいずれも、それぞれ単独で、または
組合わせて、あるいは反復して使用される。具体的には
、培養液を遠心分離により上清及び菌体に分ける。上清
は酢酸エチル等により抽出する。一方菌体は、含水アセ
トン等で攪拌抽出し、次いで沖過、減圧濃縮して得た水
溶液を酢酸エチル等で抽出する。両袖出液を合わせ、水
洗、乾燥後、減圧乾固してシロップ状物質を得る。得ら
れた粗物質は、更にシリカゾル、セルロース等への吸着
性を利用して、これらの吸着剤を用いたカラムクロマト
グラフィーに付し、活性区分を集めて減圧濃縮してシロ
ップ状物質を得る。最終的な精製は、Ｎｕｃｌａｏｓｌ
ｌ左Ｃ／ざ等を用いた高速液体クロマトグラフィーによ
り行い、活性ピーク部分を集め、濃縮、抽出、粉末化し
て純粋なＲＫ−７３３９物質を得ることができる。

かくして得られたＲに一７３３９物質の理化学的及び生
物学的性状は通の通りである。

〔Ｒに一７３３９物質の理化学的性質及び生物学的性状
〕 （１）元素分析値 炭素：乙６３ｇ％、水素：　ｑ、ｔｇ％窒素：１！；２
％ （２）分子量（ＦＤマススペクトルによる）０７ （３）融　点 ｇざ〜ｑ／１ （４）比旋光度 〔α）３３　２に６°（ｃ＝θＳ、メタノール）（５）
紫外線吸収スペクトル 第１図に示す通り、メタノール中、２！；Ａｍμにε／
２Ｓ７θの吸収を示す。

（６）赤外線吸収スペクトル 第ｕ　１ｆｆｌに示すとおり、臭化カリ錠剤中で次の主
な極大値を示す。

３４ＬＯθ、　　２９．２０．　　／り／ダ、／６りθ
。

／ｇ！；ｇ、　　／ダ６０．　　／３ｇＯ，／コロ０゜
／／ダざ、　　／／３０．　　／θｑｏ、ｉｏｑ、ｇ。

／θに！ｒ、　　１００３．　　９７！；　　　ｃ＊−
１（７）１５Ｃ−核磁気共鳴スペクトル ＣＤ２（４中で、第３図のスペクトルを示す。

（８）溶解性 メタノール、７ｏｏホルム、ベンゼン、酢酸エチルに可
溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応 過マンガン酸カリ、沃素、アニスアルデヒド−硫酸反応
陽性、ニンヒドリン、アンスロン反応陰性である。

αω塩基性、中性、酸性の区別 環基性物質である。

ａυ動物質色 無色粉末 （１功生物活性 吉川肉腫細胞（Ｙｏｓｈｌｄａ　ｓａｒｃｏｍ６　ｃｅ
ｌｌｓ）　　に対しθθ／〜／　ＯｍｃＧｌｚ−の濃度
で細胞変性作用を示す、りｐレラ、ゾルガリス（Ｃｈｌ
ｏｒｅｌｌａＶｕｌｇａｒｌｓ）に対し０．　／　〜３
．　／　２　ｍｃ９／ｄ　　濃度で生育の部分阻害を示
し、１，２．３ｉ〜／　００　ｍｃ９んで完全阻害する
。

以上のＲに一７３３９物質の理化学的性質及び生物学的
性質を、既知の抗生物質と比較すると、吉川肉腫細胞及
びクロレラに対して特異的活性を示す点において、更に
上述の理化学的性状において一致する物質を見出せない
ので、Ｆ＜Ｋ−／、３３ワ物質は、新規物質であると結
論された。Ｒに一／３３９物質は、吉川肉腫細胞に対し
て細胞変性作用を示すところから、抗腫瘍剤としての利
用が期待される。

以下に、本発明を実施例によって詳述するが、本発明は
、何らこれに限定されるものではない。

実施例 グルコース２％、可溶性殿粉／％、肉エキス／％、乾燥
酵母θグ％、食塩ａ噌り第二燐酸カリθＯＯ左％、大豆
粉コ、３％よりなる培地に前記ＲＫ−／３３ヲ株〔微生
物受託番号微工研菌寄６り３≠号（ＦＥＲＭ　　Ｐ−Ａ
り。３ＩＩＬ）を接種してヲ乙時間２ｇＣで振盪培養す
る。

培養終了後、培養液２１を遠心分離により菌体之上清に
分ける。上清は酢酸エチル２１で−同抽出する。菌体は
２１０ｇｏ％アセトンで攪拌抽出し、ｐ過後、減圧濃縮
して得た水溶液を／ｌの酢酸エチルで抽出する０両醋酸
エチル層を合し、水洗後、芒硝で脱水し、減圧乾固して
粗シラツブを得る。これをベンゼン−酢酸エチル（７２
／）の溶剤系を用いてシリカゲルカラムク田マドグラフ
ィーを行う（カラムサイズ：２×７０、ｃｙｔ　）　＠
溶出液を分取し、クロレラに対する活性区分を集めて減
圧濃縮してシラツブを得る。最終的な精製はＮｕｃｌａ
ｏｓｌｌ　ｊｃＩＢ　　（２Ｘ　３θｃＷＬ）のカラム
を用いて高速液体り四マドグラフィーによる分取を行っ
た。１％ジエチルアミン−ギ酸緩衝液（ｐＨムθ）−４
０％アセトニトリル−メタノール（／＋４１．？）より
なる溶剤系を用いて溶出を行い、保持時間５０分のとこ
ろに溶出する活性ピークを分取した。

この区分を濃縮して得た無色の油状物質を熱へキサンで
抽出し、これを濃縮するとＲＫ−７３３９物質３０ｆ１
９が白色粉末として得られた。

【図面の簡単な説明】

第７図は、ＲＫ−／、？、？？物質のメタノール中の紫
外線吸収スペクトルを示す図面であり、第２図は、ＲＫ
−／、？３９物質のＫＢｒ錠剤中の赤外線吸収スペクト
ルを示す図面であり、第３図は、ＲＫ−７３３９物質の
”ＣＤ２α２　中の１３０−核磁気共鳴スペクトルを示
す図面である。 特許出顆人理化学研究所

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ／　下記の理化学的性質及び生物学的性質を有すること
   を特徴とする新抗生物質ＲＫ−／３３９物質。 （１）元素分析値 炭素：　Ａ　４．３３％、水素：　９．Ａ　ｆ％、窒素
   ：／、、ｔ、２％ （２）分子量（ＦＤマススペクトルによる）９θ７ （３）融　点 Ｋｇ−９／’Ｃ （４）比旋光度 〔α絡３−．２　ｇ、ｌ、°（ｃ＝ＯＪ、　　メタノー
   ル）（５）紫外線吸収スペクトル ）Ｉｐ／−ル中２！；Ａｍｐ　Ｋｇ／ｌ！ｒ１０の吸収
   を示す。 （６）赤外線吸収スペクトル　− （臭化カリ錠剤中の主な極大値、） ３４／’θ０，２９２０．／り／４．／４７０、／！；
   ！；−ｇ、／ダ４０．／３ｇＯ，／２７，０、／／’Ｉ
   ｇ、／／、３０，１０９０，７０７ｇ、１０！；ｊｔ、
   １００３、り’７＆（ｃｒｎ、）（力溶解性 メタノール、酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼンに可
   溶、水、ヘキサンに難溶 （８）呈色反応 過マンガン酸カリ、沃素、アニスアルデヒド−硫酸反応
   は陽性、ニンヒドリン、アンスロン反応は陰性である。 （９）塩基性、酸性、中性の区別 塩基性物質 顛物質の色 無色粉末 αｌ）生物活性 吉日肉腫細胞に対し、細胞変性作用を示し、クロレラ・
   ブルガリスに対し、生育阻害作用を示す。 Ｊ　ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）　
   　属に属する抗生物質Ｒに一／３３９物質生産菌を培養
   し、その培養物から新抗生物質ＲＫ−／３３９物質を分
   離、採取することを特徴とする新抗生物質ＰＫ−７３．
   ３９物質の製造法。 ３　ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）　
   　属に属する抗生物質ｐＫ−／３３り物質生産菌がスト
   レプトミセス壷工、スピー・ＲＫ−７３３９（Ｓｔｒｅ
   ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　ＲＫ　−／　３３９　）で
   ある特許請求の範囲第２項記載の製造法。