JPS58875B2 - シンコウセイブツシツ ｓｆ−１７６８ ブツシツノセイゾウホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はストレプトバー千シリワム属の菌株を培養する
ことによって得られる新抗生物質５Ｆ＝１７６８物質の
製造法に関するものである。

本発明者らは、ストレプトバー千シリワム属に属する一
菌株の培養物中にダラム陰性菌及びダラム陽性菌に対し
抗菌作用を示す新規物質が生産ささ、これを培養物中か
ら採取しうろことを知り本発明を完成した。

本発明の方法で使用されるストＶプトバーチシリワム属
の５Ｆ−１７６８生産菌の一例としては、本発明者らに
よって高知県高知市の土壌から新たニ分離され、ストン
ブトパー千シリワム・ユーロシデイクムに属するものと
同定されたストレプトバーチシリワム・ユーロシデイク
ム・５Ｆ−１７６８株が用いられる。

この菌株は微生物工業技術研究所に寄託した（微工研菌
寄第２８７０号）。

ストレプトバー千シリワム・ユーロシデイクム・５Ｆ−
１７６８株の菌学的性質は次の通りである。

■、形態 気菌糸の着生は一般によくないが、スターチ寒天では比
較的よく着生し、胞子形成も良好である。

気菌糸の分枝は車軸分枝であり、主に一次輪生枝が観察
される。

分生波はいずれも直線状である。

電子顕微鏡による胞子の表面構造は平滑型である。

胞子は円筒型で、大きさは０．８〜１．３Ｘ０．４〜０
．５ミクロンである。

胞子の連鎖は通常１０胞子前後である。

■、生理的性質 （１）生育温度範囲ニスター手寒天培地において２０〜
３８℃の温度範囲で生育する。

（２）セラチンの液化：２０℃、２１日培養で液化がみ
られる。

（３）スター千の加水分解：陽性（２８℃）（４）脱脂
乳の凝固：陽性（２８，３７℃）脱脂乳のペプトン化：
陽性（２８℃） （５）メラニン様色素の生成：陽性 但し、千ロシナーゼ反応は陰性である。

■、炭素源の利用性（ブリードハム・ゴツトリーブ寒天
培地） （１）利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、
■−イノシトール （２）利用しない＝Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース
、Ｄ−マンニトール、ラムノース、シュクロース、ラフ
ィノース 上記から、５Ｆ−１７６８株の菌学的特徴を要約すると
、気菌糸は主に一次輪生枝を形成し、各分生波は直線状
で、胞子表面構造は平滑型である。

発育色調は淡黄色〜淡褐色で、気菌糸は淡黄色〜淡灰黄
色となる。

メラニン様色素の生成は陽性であるが、その他の可溶性
色素は認められない。

５Ｆ−１７６８株のこのような性状はストレプトバー千
シリワム属の菌種の中でストレプトバー手シリワム・ユ
ーロシディクム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉ−１１ｉｕ
ｍ ｅｕｒｏｃｉｄｉｃｕｍ）の性状と最も近似してい
る。

１５Ｐ（インターナショナル・ストンブトミセス・プロ
ジェクト）の記載（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ ５ｙｓｔｅｒｎａｔｉｃ Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ、２２巻、２９３〜２９７頁、１９７
２年）によるストレプトバーモシリワム・ユーロシデイ
クムと５Ｆ−１７６８株を比較すると、形態、気菌糸色
調、生理性状及び炭素源利用性に関して両者はよく一致
しており、発育色調（イースト・麦芽寒天培地）にわず
かな相違が認められるにすぎない。

以上より、５Ｆ−１７６８株はＩＳＰの記載株とは発育
色調においてわずかに相違するものゝ、基本性状に関し
てはよく一致するから、これをストレプトバー壬シリワ
ム・ユーロシデイクムの種に属させることは妥当であり
、従って、本発明者らは５Ｆ−１７６８株をストレプト
バー千シリワム・ユーロシデイクム・ＳＦ−１７６８（
Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｅｕｒｏｃ
ｉｄｉｃｕｍｓＦ−１７６８）と命名した。

５Ｆ−１７６８株は他の放線菌の場合にみられるように
、その性状が変化しやすく、例えば紫外線、エックス線
、高周波、放射線、薬品等を用いる人工的変異手段で変
異しうるものであり、このような変異株であっても５Ｆ
−１７６８物質の生産能を有するストレプトバー千シリ
ワム属の菌はすべて本発明の方法に使用することが出来
る。

本発明の方法では前記菌株を通常の微生物が利用しうる
栄養物を含有する培地で培養する。

栄養源としては、従来放線菌の培養に利用されているも
のが使用できる。

例えば、炭素源としてグルコース、シュクロース、澱粉
、グリセリン、水あめ、糖みつ、大豆油等を使用しうる
。

また、窒素源として大豆粉、小麦胚芽、肉エキス、ペプ
トン、乾燥酵母、コーンステイープリカー、硫酸アンモ
ニワム、硝酸ナトリウム等を使用しうる。

その他、必要に応じて炭酸カルシウム、食塩、塩化カリ
ウム、燐酸塩等の無機塩類を添加するほか、菌の発育を
助け、５Ｆ−１７６８物質の生産を促進するごとき有機
及び無機物を適当に添加することが出来る。

培養法としては一般抗生物質生産の方法と同じく、液体
培養法、特に深部培養法が最も適している。

培養は好気的条件下で行われ、培養に適当な温度は２５
〜３４℃であるが、多くの場合２８℃付近で培養する。

５Ｆ−１７６８物質の生産は振盪培養、タンク培養共に
１〜４日で最高に達する。

５Ｆ−１７６８物質の検定に当っては、次の方法が用い
られる。

検定用培地としてはポリペプトン０．５％、肉エキス０
．３％、寒天１．５％（ｐＨ７，０）の組成からなる培
地を用いる。

検定菌としてはエシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ ｃｏｌｉ）を用いる。

５Ｆ−１７６８物質はこれを用いた検定において１００
１００Ｏ／ｍｌ〜１２５ｍｃｇ／ｍｌにおいて濃度の対
数と阻止円径との関係は直線関係を示し、それぞれ１９
．６〜１０．５ｍｍの阻止円と与える（カップ平板法）
。

５Ｆ−１７６８物質は後記するような理化学性状を有す
るので、その性状によって抽出、精製することが出来る
。

即ち、培養によって主に培養ろ液中に生産される５Ｆ−
１７６８物質は酢酸工千ル、酢酸ブチル、ｎ−ブタノー
ル等の水とまざらない有機溶媒で抽出することができる
。

有機溶媒中の有効成分は減圧下に濃縮乾固して５Ｆ−１
７６８物質の組物質（シラツブ状）を得る。

かくして得られた組物質はクロロホルム等の５Ｆ−１７
６８物質を溶解する有機溶媒にて抽出し、不溶物を除い
たり、石油エーテル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサン等
の５Ｆ−１７６８物質を溶解し難い有機溶媒で洗滌した
り、また５Ｆ−１７６８物質を溶解した有機溶媒に石油
エーテルシクロヘキサン、ｎ−ヘキサン等を添加して５
Ｆ−１７６８物質をオイル状に沈澱させたり、又５Ｆ−
１７６８物質がクロロホルム、酢酸工千ル等の有機溶媒
の外に水にも易溶な点を利用して水で抽出することによ
り、さらに純度を向上することが出来る。

５Ｆ−１７６８物質をさらに精製するには、シリカゲル
等の吸着剤やセファデックスＬＨ−２０などを用いるク
ロマトグラフィ法が有効である。

例えば、シリカゲルに吸着させ、ベンゼン：アセトン（
５：１）の混合溶媒で展開するカラムクロマレグラフイ
ーで５Ｆ−１７６８物質を純粋に単離することができる
。

５Ｆ−１７６８物質の理化学性状を以下に述べる。

（１）性状；無色シロップ （２）溶解度；水、メタノール、エタノール、ブタノー
ル、アセトン、酢酸工千ル、クロロホルムに可溶。

ベンゼンに難溶。

石油エーテル、ｎ−へキサン、シクロヘサンに殆んど不
溶。

（３）呈色反応；硫酸、過マンガン酸カリ発色、陽性。

ニンヒドリン発色、陰性。

（４）シリカゲル薄層クロマトグラフィーにおけるｆ ０．３３（ベンゼン−アセトン−２：１展開）０．６９
（クロロホルム−メタノール−４＝１展開） （５）紫外線吸収スペクトル ノール中） （６）赤外線吸収スペクトル ５Ｆ−１７６８物質のスペクトル第１図に示す。

主要な吸収極太波数： ３４００，１７４０〜１７２０
，１２４５，１０４５ｃｍ−１（７）核磁気共鳴吸収ス
ペクトル 重クロロホルム中の６０ＭＨｚスペクトルを第２図に示
す。

ピークのケミカル・シフト（δ値）：２．０２゜３．８
７，４．２２，４．７０，６．２９，７．５９（８）分
子量 １８６（質量分析） （９）旋光度 （１０）元素分析値 実測値：炭素５０．４２％、水素５．３９％Ｃ３Ｈ１ｏ
Ｏ５・１／４Ｈ２０とした場合の理論値：炭素５０．５
％、水素５．５５％ 以上の理化学性状より、５Ｆ−１７６８物質は既知抗生
物質に一致するものがなく、新抗生物質である。

５Ｆ−１７６８物質の抗菌スペクトルは次表に示す通り
である。

上表から明らかなように５Ｆ−１７６８物質はダラム陰
性菌及びダラム陽性菌に対し、広く抗菌活性を示す。

次に実施列を示す。

実施例 ｌ ストレプトバー千シリウム・ユーロシディクム５Ｆ−１
７６８株（微工研菌寄第２８７０号）の胞子を澱粉１．
１％、大豆粉３．０％（ｐＨ７，０）の液体培地６００
ｍ１に接種し、２８℃で４８時間振盪培養し、その培養
物を種母とする（坂ロフラスコ６本使用）。

グルコース２．５％（別殺）、小麦胚芽２．０％、ポリ
ペプトン０．５％、塩化ナトリウム０．２５％（ｐＨ７
，０）の液体培地２０１に前記の種母を接種し、２８℃
で２３時間通気撹拌培養した。

培養後、濾過し、涙液１６１を得た（ｐＨ５，０）。

得られた涙液（１６１）を等量の酢酸工千ルで抽出する
と有効成分は酵酸工千ル層に転溶する。

次に酢酸工千ルを減圧下に濃縮乾固し５Ｆ−１７６８物
質の黄色粗物質（シラツブ状）１．２ｇを得た。

かくして得られた黄色粗物質１．２ｇを少量のアセトン
に溶解し、シリカゲル（Ｓｉｌｉｃｉｃ ａｃｉｄ。

１００メツシユ、Ａ Ｒｇｒａｄｅ、Ｍａｌｌｉｎｃｋ
ｒａｄｔ ｃｈｍｉｃａｌ ｗｏｒｋｓ、 Ｕ、Ｓ、Ａ
製）のカラム（１００ｍｌ）に通し、ベンゼン１００ｍ
１で洗った後、ベンゼン：アセトン（２０：１）でさら
に洗い、次いでベンゼン：アセトン（５：１）で展開し
、１０ｇづつ分取した。

フラクション６からフラクション１３に活性があり、シ
リカゲル薄層クロマトグラフィ（クロロホルム：メタノ
ール＝５：１、硫酸発色）で調べた結果、フラクション
１０〜１３が単一スポットを示したのでこの部分を濃縮
乾固し、５Ｆ−１７６８物質の無色シロップ９３ｍｇ（
純度１００％）を得た。

またフラクション６〜９を濃縮乾固して１６０ｍ９のシ
ロップ（純度：６５％）を回収した。

実施例 ２ 実施例１で得たシリカゲル・カラムクロマトグラフィ溶
出液の前半部分（フラクション６〜９）の中８０〜をク
ロロホルム２ｍｌに溶解し、水２ＣＣづつ２回抽出後、
水層とクロロホルム層を濃縮乾固すれば夫々５５ｍＩ、
２５■のシロップ状残渣を得た。

各残渣をシリカゲル薄層クロマトグラフィ（ベンゼン−
アセトン−２：ｌ展開）で分析した所、水抽出物は５Ｆ
−１７６８物質の単一スポットを示し、紫外線吸収の強
さの測定により純度は９５％であると認められた。

これに対して、クロロホルム分配物は５Ｆ−１７６８物
質のスポットは僅少で、５Ｆ−１７６８物質以外のスポ
ットが大部分であった。

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｆ−１７６８物質の赤外線吸収スペクトル曲
線図であり、第２図は５Ｆ−１７６８物質の核磁気共鳴
吸収スペクトル曲線図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストンブトパー千シリウム属に属する５Ｆ−１７６
   ８物質生産菌を培養して、その培養物から５Ｆ−１７６
   ８物質を採取することを特徴とする新抗生物質５Ｆ−１
   ７６８物質の製造法。