JPS6250473B2

JPS6250473B2 -

Info

Publication number: JPS6250473B2
Application number: JP11133881A
Authority: JP
Inventors: Norio Ezaki; Takashi Shomura; Shoichi Amano; Tomizo Niwa; Michio Kojima; Tatsuo Ito
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1981-07-16
Filing date: 1981-07-16
Publication date: 1987-10-24
Also published as: JPS5813392A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規抗生物質及びその製造法に関する
ものであり、さらに詳しくは抗生物質SF−
2107A₂物質及びダクチロスポランギウム
（Dactylosporangium）属に属するSF−2107A₂物
質生産菌を培地に培養し、得られた培養物から抗
生物質SF−2107A₂物質を採取することを特徴と
する新規抗生物質SF−2107A₂物質の製造法に関
するものである。本発明者らは、ある種の菌株の培養物中にグラ
ム陰性菌及び陽性菌に対して抗菌作用を示す物質
が生産されていることを見出し、その有効物質を
培養物から純粋に単離し、その性状を調べた結
果、既知の物質とは異なる新規抗生物質であるこ
とを確かめ、この有効物質をSF−2107A₂物質と
命名した。新規抗生物質SF−2107A₂物質生産菌として
は、その培養物中に、採取するに充分な量のSF
−2107A₂物質を生産する能力を有するものであ
れば、いかなるものであつてもよいが、このよう
な菌株の一例としては本発明者らにより神奈川県
横浜市鶴見区駒岡町の常倫寺の土壌より新たに分
離されたSF−2107株がある。該菌株の菌学的性
状は下記の通りである。形態基生菌糸はよく分枝して波状に伸長し、その直
径は約0.5〜0.6ミクロンである。寒天培地及び液
体培地のいずれにおいても基生菌糸の分断は通常
観察されない。気菌糸はほとんど見られず事実上形成されない
と思われる。SF−2107株は寒天培地の表面に胞
子のうを１個あるいはタフト状に形成する。胞子
のうはスターチ寒天培地、グリセロース・アスパ
ラギン寒天培地等で多数認められる。胞子のうは
指状で大きさはおよそ0.8〜1.1×2.5〜4.0ミクロ
ンである。各胞子のうは中に一列に３〜４コの胞
子を含む。胞子のうを含む寒天培地表面をかきと
つて滅菌水に懸濁し、30分以上放置した後、検鏡
すると胞子が活発な遊走性を有することが認めら
れる。このような胞子を電子顕微鏡で観察する
と、胞子は楕円ないし短円筒型で表面は平滑
（Smooth）であり、一端に数本の鞭毛が認められ
る。各種培地上の生育状態 SF−2107株の各種培地上の生育状態は次表に
示す通りである。色の記載について〔〕内に示
す標準はコンテナー・コーポレーシヨン・オブ・
アメリカ（Container Corporation of
America）社製の「カラー・ハーモニー・マニユ
アル（Color Harmony Manual）」に記載のもの
を用いた。観察は28℃で、14〜21日培養後に行な
つた。

【表】生理的性質 (1) 生育温度範囲：イースト麦芽寒天培地におい
て20〜42℃の温度範囲で生育し、28〜37℃で良
好に生育する。 (2) ゼラチンの液化：陰性（20℃、21日培養） (3) スターチの加水分解：陰性（28℃、14日培
養） (4) 硝酸塩の還元：陽性（28℃、14日培養） (5) 脱脂乳のペプトン化：陰性（28℃、37℃、14
日培養）脱脂乳の凝固：陰性（28℃、37℃、14日培養） (6) 耐塩性：1.5％では生育するが3.0％以上では
生育しない。 (7) メラニン様色素の生成：陰性炭素源の利用性

【表】用いた基本培地：｛酵母エキス（Difco社製）：１ｇ炭素カルシウム：0.2ｇ寒天（Difco社製）：15ｇ蒸留水：1000ml｝細胞壁組成ベツカー（Becker）らの方法〔Appl.
Microbiol.，13：236（1965）参照〕により分析
した結果、細胞壁組成分中のジアミノピメリン酸
は主にヒドロキシ型であつた。以上の性状より、SF−2107株は放線菌の中で
ダクチロスポランギウム（Dacty
losporangium）属に属する菌株である。本発明者らはSF−2107株をダクチロスポラン
ギウム・エスピー・SF−2107（Dacty
losporangium sp.SF−2107）と称することにし
た。本菌株は微工研に寄託されており、その微工研
微生物受託番号は第5351号である。 SF−2107株は他の放線菌の多くの菌株の場合
にみられるようにその性質が変化しやすく、例え
ば紫外線、エツクス線放射線、薬品等を用いる人
工的変異手段で変異しうるものであるが、いずれ
の変異株であつてもSF−2107A₂物質の生産能を
有するダクチロスポランギウム属の菌株はすべて
本発明の方法に使用することができる。本発明の方法では、前記菌株を通常の微生物が
利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄
養源としては従来、放線菌の培養に利用されてい
る公知のものが使用できる。例えば炭素源として
グルコース、グリセロール、シユクロース、澱
粉、デキストリン、水飴、糖蜜、大豆油等が使用
できる。又、窒素源としては大豆粉、小麦胚芽、
肉エキス、ペプトン、酵母エキス、乾燥酵母、コ
ーンステイープリカー、綿実粕、魚粉、硫酸アン
モニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用しうる。そ
の他、必要に応じて炭酸カルシウム、塩化ナトリ
ウム、塩化コバルト、燐酸塩等の無機塩類を添加
する他、菌の発育を助け、SF−2107A₂物質の生
産を促進することができる有機及び無機物を適当
に添加することができる。培養法としては、一般の抗生物質生産方法と同
じく好気的条件下での培養法であれば、いかなる
方法を適用してもよいが、特に深部培養法が最も
適している。培養に適当な温度は25〜37℃である
が、多くの場合28〜32℃付近で培養を行なうのが
好ましい。SF−2107A₂物質の生産は振盪培養、
タンク培養共に３〜10日で蓄積が最高に達する。 SF−2107A₂物質の検定に当つては、ビブリ
オ・パーコランス（Vibrio percolans）ATCC
8461を用いる生物検定法、シリカゲル薄層クロマ
トグラフイー及び高速液体クロマトグラフイーを
併用する。 SF−2107A₂物質は後記する理化学性状を有す
るのでその性状に従つて抽出、精製することが可
能であるが、以下に示す方法により効率的に抽
出、精製が可能である。すなわち、有効成分は主
として培養液から液体部分を去した固形部分に
含まれており、固形部分から含水アセトン、含水
メタノール等で抽出し、有機溶剤を留去したの
ち、酢酸エチル等の溶剤で抽出する。また、液
にも有効成分が含まれている場合は、培養液か
ら酢酸エチル等の溶剤で抽出する。次に、有効成
分を含有する酢酸エチル等の溶剤層を濃縮、乾固
し、シリカゲル、アルミナ、セフアデツクスLH
―20（フアルマシア社製）、フロリジル等の担体
を用いたクロマトグラフイー、高速液体クロマト
グラフイーあるいは向流分配操作法を適宜組合せ
て使用することによりSF−2107A₂物質の純品を
得ることができる。かくして得られたSF−
2107A₂物質は各種の溶剤系での薄層クロマトグ
ラフイーでいずれも単一のスポツトを与え、ま
た、高速液体クロマトグラフイーで実質的に単一
のピークを示すことから純品であると判断され
る。前記の方法で得られたSF−2107A₂物質の理化
学性状は以下のとおりである。元素分析：炭素54.63重量％、水素6.79重量％
（窒素、ハロゲン、硫黄、リンを含有しな
い。）分子量：900〜1100（ゲル過法による。）融点：191゜〜200℃（徐々に融解）比旋光度：〔α〕^２５ _Ｄ＝＋18゜（c0.5、メタノー
ル）紫外線吸収スペクトル：第１図に示す（メタノー
ル中）。赤外線吸収スペクトル：第２図に示す（臭化カリ
ウム錠剤法。）呈色反応：ヨード反応、レミユー反応…陽性ニン
ヒドリン反応、塩化第二鉄反応…陰性外観：淡黄色粉末中性、酸性、塩基性の区別：中性ないし弱酸性物
質として挙動（電気泳動による。）シリカゲル薄層クロマトグラフイー： Rf＝0.67（クロロホルム：メタノール＝
５：１）＝0.56（アセトン：ベンゼン＝５：１）高速液体クロマトグラフイー：ヌクレオジル
5C18を担体として用い、メタノール：ア
セトニトリル：水（７：１：1.9）の系で
展開（３ml／min）したときの保持時間は
16.9分。溶解性：メタノール、アセトンに可溶、ベンゼ
ン、クロロホルム、ｎ―ヘキサン、水に難
溶。 SF−2107A₂物質の寒天希釈法で測定した各種
の微生物に対する最小発育阻止濃度は、次表に示
すとおりでありグラム陽性及び陰性細菌に対し有
効であることが判る。前記したSF−2107A₂物質の理化学性状、及び
生物学的性状を既知抗生物質のそれと比較したが
該当する物質はなく、本物質は新規抗生物質であ
ることが判明した。

【表】培地：ハートインフユージヨンアガー
(栄研)
以下にSF−2107A₂物質の製造法の実施例を示
すが、ここに例示しなかつた多くの変形、修飾手
段を用いうることは言うまでもない。実施例種菌としてダクチロスポランギウム・エスピ
ー・SF−2107株（微工研微生物受託番号第5351
号）を用い、種培地として可溶性澱粉2.0％、グ
ルコース1.0％、小麦胚芽0.6％、大豆粉0.2％、ポ
リペプトン0.5％、酵母エキス0.3％、肉エキス0.2
％、炭酸カルシウム0.1％（滅菌前PH7.0）を含む
培地を用いた。イースト麦芽斜面寒天培地に28℃
で14日培養した種菌５白金耳を容量100mlの三角
フラスコ中で20mlの上記種培地に接種し、32℃で
96時間振盪培養した。ついで、この種培養液を容
量500mlの三角フラスコ中で80mlの種培地に８ml
ずつ10本に接種し、32℃で72時間振盪培養し、こ
れを第２種培養とした。容量30のジヤーフアー
メンターに20の生産培地を仕込み、これに前記
の第２種培養800mlを接種した。生産培地として
は、グルコース1.7％、シユクロース1.5％、小麦
胚芽2.0％、酵母エキス0.2％、グルテンミール0.3
％、塩化ナトリウム0.25％（滅菌前PH7.0）の組
成からなる培地を用いた。培養は28℃で164時間
通気撹拌培養を行なつた。培養終了後、過によ
り液を除去し、固形分に12の80％アセトン水
を加え撹拌し有効成分を抽出した。抽出液のアセ
トンを減圧下で留去し、２の水溶液とし、PH９
にして酢酸エチル1.5ずつで２回抽出した。抽
出液を合わせ、減圧下で濃縮乾固して800mgの油
状物を得た。これをメタノール５mlに溶解し、セ
フアデツクスLH−20（フアルマシア社製）500ml
を充填したカラムにかけ、メタノールで展開し、
活性画分を分離しこれを減圧下で濃縮、乾固して
280mgの粉末を得た。この粉末をワコーゲルＣ−
200（和光純薬社製）100mlを充填したカラムにか
け、クロロホルム：メタノール（25：１）の混合
溶媒で展開し、活性画分を濃縮、乾固して微黄色
の粉末60mgを得た。この粉末を高速液体クロマト
装置（ウオーターズ社製）を用いてSF−2107A₂
物質を単離した。このときの条件は、担体として
ヌクレオジル5C18（ナーゲル社製）を用い、展
開は、展開溶剤としてメタノール：アセトニトリ
ル：水（７：１：1.9）の混合溶剤を用い、流速
は３ml／minで行なつた。保持時間15.0分にSF−
2107物質（特願昭55−41206号）が溶出し、16.9
分に本SF−2107A₂物質が溶出した。SF−2107A₂
物質の画分を減圧濃縮し、20mgのSF−2107A₂物
質の純品を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はSF−2107A₂物質の紫外部吸収スペク
トルであり、25mcｇ／mlのメタノール溶液を用
いて測定したものである。第２図はSF−2107A₂
物質の赤外部吸収スペクトルであり、臭化カリウ
ム錠として測定したものである。

Claims

【特許請求の範囲】１下記の物理化学的特性を有するSF―2107A₂
物質元素分析：炭素54.63重量％、水素6.79重量％
（窒素、ハロゲン、硫黄、リンを含有しな
い。）分子量：900〜1100（ゲル過法による。）融点：191゜〜200℃（徐々に融解）比旋光度：〔α〕^２５ _Ｄ＝＋18゜（c0.5、メタノー
ル）紫外線吸収スペクトル：第１図に示す（メタノー
ル中）。赤外線吸収スペクトル：第２図に示す（臭化カリ
ウム錠剤法）。呈色反応：ヨード反応、レミユー反応…陽性ニン
ヒドリン反応、塩化第二鉄反応…陰性外観：淡黄色粉末中性、酸性、塩基性の区別：中性ないし弱酸性物
質として挙動（電気泳動による。）シリカゲル薄層クロマトグラフイー：Rf＝0.67
（クロロホルム：メタノール＝５：１）＝0.56（アセトン：ベンゼン＝５：１）高速液体クロマトグラフイー：ヌクレオジル
5C18を担体として用い、メタノール：ア
セトニトリル：水（７：１：1.9）の系で
展開（３ml／min）したときの保持時間は
16.9分。溶解性：メタノール、アセトンに可溶、ベンゼ
ン、クロロホルム、ｎ―ヘキサン、水に難
溶。２ダクチロスポランギウム
（Dactylosporangium）属に属する抗生物質SF―
2107A₂物質生産菌を培養し、得られた培養物か
ら抗生物質SF―2107A₂物質を採取することを特
徴とする新規抗生物質SF−2107A₂物質の製造
法。