JPS6243999B2

JPS6243999B2 -

Info

Publication number: JPS6243999B2
Application number: JP55041206A
Authority: JP
Inventors: Norio Ezaki; Takashi Shomura; Shoichi Amano; Tomizo Niwa; Michio Kojima; Tatsuo Ito
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1980-04-01
Filing date: 1980-04-01
Publication date: 1987-09-17
Also published as: JPS56156297A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規抗生物質及びその製造法に関する
ものであり、さらに詳しくは抗生物質SF−2107
物質及びダクチロスポランギウム
（Dactylosporangium）属に属するSF−2107物質
生産菌を培地に培養し、得られた培養物から抗生
物質SF−2107物質を採取することを特徴とする
新規抗生物質SF−2107物質の製造法に関するも
のである。本発明者らは、ある種の菌株の培養物中にグラ
ム陰性菌及び陽性菌に対して抗菌作用を示す物質
が生産されていることを見出し、その有効物質を
培養物から純枠に単離し、その性状を調べた結
果、既知の物質とは異なる新規抗生物質であるこ
とを確かめ、この有効物質をSF−2107物質と命
名した。新規抗生物質SF−2107物質生産菌としては、
その培養物中に、採取するに充分な量のSF−
2107物質を生産する能力を有するものであれば、
いかなるものであつてもよいが、このような菌株
の一例としては本発明者らにより神奈川県横浜市
鶴見区駒岡町の常倫寺の土壌より新たに分離され
たSF−2107株がある。該菌株の菌学的性状は下
記の通りである。形態基生菌糸はよく分枝して波状に伸長し、その
直径は約0.5〜0.6ミクロンである。寒天培地及
び液体培地のいずれにおいても基生菌糸の分断
は通常観察されない。気菌糸はほとんど見られず事実上形成されな
いと思われる。SF−2107株は寒天培地の表面
に胞子のうを１個あるいはタフト状に形成す
る。胞子のうはスターチ寒天培地、グリセロー
ル・アスパラギン寒天培地等で多数認められ
る。胞子のうは指状で大きさはおよそ0.8〜1.1
×2.5〜4.0ミクロンである。各胞子のうは中に
一列に３〜４ケの胞子を含む。胞子のうを含む
寒天培地表面をかきとつて滅菌水に懸濁し、30
分以上放置した後、検鏡すると胞子が活発な遊
走性を有することが認められる。このような胞
子を電子顕微鏡で観察すると、胞子は楕円ない
し短円筒型で表面は平滑（Smooth）であり、
一端に数本の鞭毛が認められる。各種培地上の生育状態 SF−2107株の各種培地上の生育状態は次表
に示す通りである。色の記載について〔〕内
に示す標準はコンテナ−・コーポレーシヨン・
オブ・アメリカ（Container Corporation of
America）社製の「カラー・ハーモニー・マニ
ユアル（Cclor Harmony Manual）」に記載の
ものを用いた。観察は28℃で、14〜21日培溶後
に行つた。

【表】生理的性質 (1) 生育温度範囲：イースト麦芽寒天培地にお
いて20〜42℃の温度範囲で生育し、28〜37℃
で良好に生育する。 (2) ゼラチンの液化：陰性（20℃、21日培溶） (3) スターチの加水分解：陰性（28℃、14日培
養） (4) 硝酸塩の還元：陽性（28℃、14日培養） (5) 脱脂乳のペプトン化：陰性（28℃、37℃、
14日培養）〃の凝固：陰性（28℃、37℃、14日培
養） (6) 耐塩性：1.5％では生育するが3.0％以上で
は生育しない。 (7) メラニン様色素の生成：陰性炭素源の利用性炭素源生育Ｄ−グルコース〓Ｄ−キシロース＋Ｄ−フラクトース〓Ｄ−マンニトール＋Ｌ−アラビノース＋Ｌ−ラムノース＋ｉ−イノシトール＋シユクロース〓ラフイノース＋グリセロール＋無添加＋〓良好に生育（利用性：＋）＋弱い生育（利用性：−）用いた基本培地：（酵母エキス（Difco社製）：１ｇ炭酸カルシウム：0.2ｇ寒天（Difco社製）：15ｇ蒸留水：1000ml）細胞壁組成ベツカー（Becker）らの方法〔Appl.
Microbiol.13：236（1965）参照〕により分析
した結果、細胞壁組成成分中のジアミノピメリ
ン酸は主にヒドロキシ型であつた。以上の性状より、SF−2107株は放線菌の中で
ダクチロスポランギウム（Dactylosporangium）
属に属する菌株である。本発明者らはSF−2107株をダクチロスポラン
ギウム・エスピー・SF−2107
（Dactylosporangiumsp.SF−2107）と称するこ
とにした。本菌株は微工研に寄託されており、その微工研
受託番号は微工研菌寄第5351号である。 SF−2107株は他の放射線菌の多くの菌株の場
合にみられるようにその性質が変化しやすく、例
えば紫外線、エツクス線、放射線、薬品等を用い
る人工的変異手段で変異しうるものであるが、い
ずれの変異株であつてもSF−2107物質の生産能
を有するダクチロスポランギウム属の菌株はすべ
て本発明の方法に使用することができる。本発明の方法では前記菌株を通常の微生物が利
用しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄養
源としては従来、放線菌の培養に利用されている
公知のものが使用できる。例えば炭素源としてグ
ルコース、グリセロール、シユクロース、澱粉、
デキストリン、水飴、糖蜜、大豆油等が使用でき
る。又、窒素源としては大豆粉、小麦胚芽、肉エ
キス、ペプトン、酵母エキス、乾燥酵母、コーン
ステイープリカー、綿実粕、魚粉、、硫酸アンモ
ニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用しうる。その
他、必要に応じて炭酸カルシウム、塩化ナトリウ
ム、塩化コバルト、燐酸塩等の無機塩類を添加す
る他、菌の発育を助け、SF−2107物質の生産を
促進することができる有機及び無機物を適当に添
加することができる。培養法としては一般抗生物質生産の方法と同じ
く好気的条件下での培養法であれば、いかなる方
法を適用してもよいが、特に深部培養法が最も適
している。培養に適当な温度は25〜37℃であるが
多くの場合28℃〜32℃付近で培養を行なうのが好
ましい。SF−2107物質の生産は振盪培養、タン
ク培養共に３〜10日で蓄積が最高に達する。 SF−2107物質の検定に当つては、ビブリオパ
ーコランス（Vibrio percolans）ATCC8461を用
いる生物検定法を用いる。この検定法によれば
1000mcg／ml〜31.3mcg／mlにおいて、SF−2107
物質は、その濃度の対数と阻止円径との間に直線
関係を示し、ペーパーデイスク法によればそれぞ
れ26〜14mmの阻止円径を与える。 SF−2107物質は後記する理学性状を有するの
でその性状に従つて抽出、精製することが可能で
あるが、以下に示す方法により効率的に抽出、精
製が可能である。すなわち、有効成分は主として
は培養液から液体部分を去した固形部分に含ま
れており、固形部分から含水アセトン、含水メタ
ノール等で抽出し、有機溶剤を留去したのち、酢
酸エチル等の溶剤で抽出する。また、液にも有
効成分が含まれている場合は、培養液から酢酸
エチル等の溶剤で抽出する。次に、有効成分を含
有する酢酸エチル等の溶剤層を濃縮、乾固し、シ
リカゲル、アルミナ、セフアデツクスLH−20
（フアルマシア社製）、フロリジル等の担体を用い
たクロマトグラフイーあるいは向流分配操作法を
適宜組合せて使用することによりSF−2107物質
の純品を得ることができる。かくして得られた
SF−2107物質は各種の溶剤系での薄層クロマト
グラフイーでいずれも単一のスポツトを与えるこ
とから純品であると判断される。前記の方法で得られたSF−2107物質の理化学
性状は以下のとおりである。元素分析：炭素58.39重量％、水素7.88重量％、
（窒素、ハロゲン、硫黄、リンを含有しない。）分子量：900〜1100（ゲル過法による。）融点：170゜〜184℃（徐々に融解）比旋光度：〔α〕^２５ _Ｄ＝＋20゜（c0.2、メタノー
ル）紫外線吸収スペクトル：第１図に示す（メタノー
ル中）。赤外線吸収スペクトル：第２図に示す（臭化カル
シウム錠剤法）。呈色反応：ヨード反応、レミユー反応陽性ニン
ヒドリン反応、塩化第二鉄反応陰性外観：淡黄色粉末中性、酸性、塩基性の区別：中性ないし弱酸性物
質として挙動（電気泳動による。）シリカゲル薄層クロマトグラフイー： Rf＝0.67（クロロホルム：メタノール＝５：
１）＝0.56（アセトン：ベンゼン＝５：１）溶解性：メタノール、アセトンに可溶ベンゼン、クロロホルム、ｎ−ヘキサン、水
に難溶。 SF−2107物質の寒天希釈法で測定した各種の
微生物に対する最小発育阻止濃度は、次表に示す
とおりでありグラム陽性および陰性細菌に対し有
効であることが判る。また、本物質のマウスを用
いた急性毒性試験の結果、腹腔内投与で90mg／Kg
で全例生存した。前記したSF−2107物質の理化学性状、および
生物学的性状を既知抗生物質のそれと比較したが
該当する物質はなく、本物質は新規抗生物質であ
ることが判明した。以下にSF−2107物質の製造法の実施例を示す
が、ここに例示しなかつた多くの変形、修飾手段
を用いることは言うまでもない。

【表】実施例１種菌としてダクチロスポランギウム・エスピ
ー・SF−2107株（微工研受託番号微工研菌寄第
5351号）を用い、種培地としてグルコース1.0
％、可溶性澱粉1.0％、ポリペプトン0.5％、肉エ
キス0.2％、酵母エキス0.3％、大豆粉0.2％、炭酸
カルシウム0.2％（滅菌前PH7.0）を含む培地を用
いた。イースト麦芽斜面寒天培地に28℃で14日間培養
した種菌６〜７白金耳を100ml容三角フラスコ中
で20mlの上記種培地に接種し、28℃で６日間振盪
培養した。これを第１種培養として３本培養し
た。次いでこの種培養を500ml容三角フラスコ中で
80mlの種培地に８mlづつ６本に接種し、28℃で３
日間振盪培養し、これを第２種培養とした。 100本の500ml容三角フラスコに80mlづつの生産
培地を仕込み、これに前記第２種培養を５％の割
合で接種した。生産培地としてグルコース2.5％、小麦胚芽2.0
％、サングレイン（サントリー製）0.5％、塩化
ナトリウム0.25％、（滅菌前PH7.0）の組成からな
る培地を用いた。培養は28℃で７日間ロータリーシエーカー
（220rpm）を用いて振盪培養した。培養終了後、
過により液を除去し、固形分に６の80％ア
セトン水を加えて撹拌し、SF−2107物質を抽出
した。抽出液のアセトンを減圧下で留去し、残渣
を1.3の水溶液としてPH９にして酢酸エチル１
ずつで２回抽出した。抽出液を合せ、減圧下で
濃縮乾固して300mgの油状物を得た。これをメタ
ノール３mlに溶解しセフアデツクスLH−20（フ
アルマシア社）100mlを充填したカラムにかけ、
メタノールで展開し活性画分を分離しそれを減圧
下で濃縮、乾固して120mgの粉末を得た。得られ
た粉末をワコーゲルＣ−200（和光純薬社）20ml
を充填したカラムにかけ、クロロホルム−メタノ
ール（50：１）の混合溶剤で展開し、活性画分の
うち薄層クロマトグラフイーで単一のスポツトを
示す画分を濃縮、乾固して微黄色の粉末16mgを得
た。実施例２種菌としてダクチロスポランギウム・エスピ
ー・SF−2107株（微工研申請書受理番号第5351
号）を用い、種培地として可溶性澱粉2.0％、グ
ルコース1.0％、小麦胚芽0.6％、大豆粉0.2％、ポ
リペプトン0.5％、酵母エキス0.3％、肉エキス0.2
％、炭酸カルシウム0.1％（滅菌前PH7.0）を含む
培地を用いた。イースト麦芽斜面寒天培地に28℃
で14日培養した種菌５白金耳を容量100mlの三角
フラスコ中で20mlの上記種培地に接種し、32℃で
96時間振盪培養した。ついで、この種培養液を容
量500mlの三角フラスコ中で80mlの種倍地に８ml
ずつ10本に接種し32℃で72時間振盪培養し、これ
を第２種培養とした。容量30のジヤーフアーメ
ンターに20の生産培地を仕込み、これに前記の
第２種培養800mlを接種した。生産培地として
は、グルコース1.7％、シユークロース1.5％、小
麦胚芽2.0％、酵母エキス0.2％、グルテンミール
0.3％、塩化ナトリウム0.25％（滅菌前PH7.0）の
組成からなる培地を用いた。培養は28℃で164時
間通気撹拌培養を行なつた。培養終了後、過に
より液を除去し、固形分に12の80％アセトン
水を加え撹拌し有効成分を抽出した。抽出液のア
セトンを減圧下で留去し、２の水溶液とし、PH
９にして酢酸エチル1.5ずつで２回抽出した。
抽出液を合せ、減圧下で濃縮乾固して800mgの油
状物を得た。これをメタノール５mlに溶解し、セ
フアデツクスLH−20（フアルマシア社）500mlを
充填したカラムのかけ、メタノールで展開し、活
性画分を分離しこれを減圧下で濃縮、乾固して
280mgの粉末を得た。この粉末をワコーゲルＣ−
200（和光純薬社）100mlを充填したカラムのか
け、クロロホルム−メタノール（25：１）の混合
溶媒で展開し、活性画分を濃縮、乾固して微黄色
の粉末60mgを得た。この粉末をメタノールに約２
％の濃度になるように溶解し、マイクロポンダパ
ツクC18（ウオーターズ社）のカラムを用い、溶
離液としてメタノール−アセトニトリル−水
（７：１：３）の混合溶媒を用いて高速液体クロ
マトグラフ（ウオーターズ社）で分取し、得られ
た画分を減圧濃縮、乾固して微黄色の粉末36mgを
得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はSF−2107物質の紫外部吸収スペクト
ルであり、25mcg／mlのメタノール溶液を用いて
測定したものである。第２図はSF−2107物質の
赤外部吸収スペクトルであり、臭化カリウム錠と
して測定したものである。

Claims

【特許請求の範囲】１下記の物理化学的特性を有するSF−2107物
質。元素分析：炭素58.39重量％、水素7.88重量％
（窒素、ハロゲン、硫黄、リンを含有しない。）分子量：900〜1100（ゲル過法による。）融点：170゜〜184℃（徐々に融解）比旋光度：〔α〕^２５ _Ｄ＝＋20゜（ｃ0.2、メタノー
ル）紫外線吸収スペクトル：第１図に示す（メタノー
ル中）。赤外線吸収スペクトル：第２図に示す（臭化カリ
ウム錠剤法）。呈色反応：ヨード反応、レミユー反応陽性ニン
ヒドリン反応、塩化第二鉄反応陰性外観：淡黄色粉末中性、酸性、塩基性の区別：中性ないし弱酸性物
質として挙動（電気泳動による。）シリカゲル薄層クロマトグラフイー： Rf＝0.67（クロロホルム：メタノール＝５：
１）＝0.56アセトン：ベンゼン＝５：１）溶解性：メタノール、アセトンに可溶ベンゼン、
クロロホルム、ｎ−ヘキサン、水に難溶。２ダクチロスポランギウム
（Dactylosporangium）属に属する抗生物質SF−
2107物質生産菌を培養し、得られた培溶物から抗
生物質SF−2107物質を採取することを特徴とす
る新規抗生物質SF−2107物質の製造法。