JPH0329079B2

JPH0329079B2 -

Info

Publication number: JPH0329079B2
Application number: JP58113519A
Authority: JP
Inventors: Yasumitsu Kondo; Takashi Shomura; Junko Yoshida; Kazuo Okano; Masaji Sezaki; Tatsuo Ito
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1983-06-23
Filing date: 1983-06-23
Publication date: 1991-04-23
Also published as: EP0129877A3; US4548816A; DE3478443D1; EP0129877B1; EP0129877A2; JPS606194A

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕本発明は新規抗生物質及びその製造法に関する
ものである。〔発明の目的〕本発明は種々のグラム陽性菌、陰性菌に抗菌活
性を有する新規かつ有用な抗生物質を探索した結
果、アクチノマデユラ属に属する放線菌を栄養培
地中で醗酵させることによつて、新規抗生物質
SF−2288が生産されることを見い出し、SF−
2288物質を単離し、その理化学的性状、生物学的
性状より新規物質であり、かつグラム陽性、グラ
ム陰性菌に対しすぐれた抗菌活性を有することを
見い出した。〔発明の構成〕本発明の新規抗生物質SF−2288及びその塩、
及びアクチノマデユラ属に属する抗生物質SF−
2288生産菌を培地に培養し、得られた培養物から
抗生質SF−2288又はその塩を採取することによ
り新規抗生物質SF−2288又はその塩を製造する
方法である。本発明の新規抗生物質SF−2288の生産菌の１
例としては、本発明者らにより静岡県馬込川の土
壌より新たに分離されたSF−2288株がある。 SF−2288株の菌学的性状は下記の通りである。．形態基生菌糸はよく伸長分枝し、その直径は約0.5
ミクロンである。寒天培地及び液体培地の何れに
おいても基生菌糸の分断は通常観察されない。一般に気菌糸の着生は貧弱であるが、オートミ
ール寒天では比較的よく着生し、胞子形成も良好
である。気菌糸の分枝は単純分枝で車軸分枝は見
られない。胞子のう，鞭毛胞子，菌核は観察され
ない。胞子の連鎖は直状、鉤状またはループ状と
なる。電子顕微鏡で観察すると胞子は楕円〜卵型で
0.6〜1.1×0.8〜1.5ミクロンの大きさを有し、胞
子の連鎖は５〜10ケの場合が多い。胞子の表面は
smooth（ややしわ状）である。．各種培地上の生育状態 SF−2288株の各種培地上の生育状態は次表に
示す通りである。色の記載について〔〕内に示
す標準はコンテイナー・コーポレーシヨン・オ
ブ・アメリカ（Container Corporation
ofAmerica）社製の「カラー・ハーモニー・マニ
ユアル（Color Harmony Manual）」に記載の
ものを用いた。観察は28℃で14〜21日培養後に行
つた。

【表】

【表】生理的性質 (1) 生育温度範囲：イースト麦芽寒天において15
〜42℃の温度範囲で生育し、26〜37℃が最適温
度である。 (2) ゼラチンの液化：陰性（20℃，21日培養） (3) スターチの加水分解：陽性 (4) 硝酸塩の還元：陽性 (5) 脱脂乳のペプトン化：陰性（28℃，37℃，14
日培養）脱脂乳の凝固：陰性（28℃，37℃，14日培養） (6) 耐塩性：1.5％では生育するが3.0％では生育
しない。 (7) メラニン様色素の生成：陰性．炭素源の利用性（プリドハム・ゴツトリーブ
寒天培地） (1) 利用する：Ｄ−グルコース，Ｄ−フラクトー
ス，Ｄ−キシロース，Ｌ−アラビノース，Ｄ−マ
ンニトール，Ｌ−ラムノース (2) 利用しない：ｉ−イノシトール，ラフイノー
ス，シユクロース，グリセロール．細胞壁組成 SF−2288株の全細胞加水分解物中にメソージ
アミノピメリン酸及びマデユロースが認められ
た。以上の性状より、SF−2288株は放線菌の中で
アクチノマデユラ（Actinomadura）属に属する
菌株である。従つて本発明者らはSF−2288株を
アクチノマデユラ・エスピー・SF−2288
（Actinomadura sp.SF−2288）と称することに
した。本菌株は微工研に寄託されており、その微工研
受託番号は第7045号（FERM−P7045）である。 SF−2288株は他の放線菌の多くの菌株の場合
にみられるようにその性質が変化しやすく、例え
ば紫外線、エツクス線，放射線，薬品等を用いる
人工的変異手段で変異しうるものであるが、いず
れの変異株であつても抗生物質SF−2288の生産
能を有するアクチノマデユラ属の菌株はすべて本
発明の方法に使用することができる。本発明の方法では、前記菌株を通常の微生物が
利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄
養源としては従来、放線菌の培養に利用されてい
る公知のものが使用できる。例えば、炭素源とし
てグルコース，スターチ，デキストリン，水あ
め，糖みつ，植物油，動物油等が使用できる。
又、窒素源としては大豆粉，小麦胚芽，肉エキ
ス，ペプトン，酵母エキス，コーンステイープリ
カー，綿実かす，魚粉，硫酸アンモニウム，硝酸
ソーダ，尿素等を使用しうる。その他、必要に応
じて炭酸カルシウム，塩化ナトリウム，硫酸コバ
ルト，燐酸塩等の無機塩類を添加する。また、菌
の発育を助け、抗生物質SF−2288生産を促進す
ることができる有機及び無機物を適当に添加する
ことができる。培養法としては好気的条件下での培養法、特に
深部培養法が最も適している。培養に適当な温度
は15〜42℃であるが多くの場合26〜37℃付近で培
養する。抗生物質SF−2288の生産は培地や培養条件に
より異なるが、振盪培養，タンク培養ともに通常
２〜10日の間でその蓄積が最高に達する。 SF−2288物質の検定に当つてはシユードモナ
ス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）
を被検菌とする生物検定法を用いる。この検定法
ではSF−2288物質が250〜2000mcg／mlの濃度範
囲でその対数と阻止円径との間に直線関係が成立
し、それぞれ11〜17mmの阻止円径を与える。 SF−2288物質は後述する理化学的性状を有す
るので、その性状に従つて抽出精製することが可
能であるが、以下の方法により効率的に抽出精製
できる。まず培養物に濾過助剤を加えて、10規定水酸化
ナトリウムにてpH9とし、菌体を含む固型物を濾
別する。次に培養濾液の有効成分をアンバーライ
トIRC−50（NH₄＋型）（ローム・アンド・ハース
社）のような陽イオン交換樹脂に吸着させ、１規
定アンモニア水にて溶出する。さらにアンバ−ラ
イトCG−50（NH₄＋型）（ローム・アンド・ハー
ス社）に吸着させ、0.025〜0.1規定アンモニア水
にて溶出する。さらにアビセル・セルロース（フ
ナコシ薬品社）、陽イオン交換樹脂ダウエツクス
１×２（OH−型）（ダウ・ケミカル社）等のカラ
ムクロマトグラフイーを適宜組合せることにより
SF−2288物質の純品を得ることができる。なお、
本物質は遊離塩基の形で単離することができる
が、SF−2288物質の酸付加塩として、塩酸，臭
化水素酸，硫酸，硝酸，燐酸の如き薬学的に許容
できる無機酸との塩、並びに酢酸，クエン酸，安
息香酸，アスコルビン酸の如き薬学的に許容でき
る有機酸との塩とすることができる。以下にSF−2288物質（遊離塩基）の理化学的
性状を示す。１外観：白色の無定形粉末２融点：161〜163℃ ３元素分析値：炭素39.61％，水素6.40％，窒
素8.89％４紫外部吸収スペクトル：220〜360mmに特徴的
な吸収極大を示さない。５赤外部吸収スペクトル：臭化カリカム錠中で
測定したスペクトルは第１図に示すように、
3350，2900，1580，1450，1370，1330，1250，
1150，1090，1000，860cm^-1にピークが認めら
れる。６重水中で測定した水素核磁気共鳴スペクトル
（200MHz）第２図に示すように、3.20，3.26，
3.65，3.71，3.83，3.89，4.00，4.75，5.05，
5.13ppmにピークが認められる。又、重水中で測定した炭素核磁気共鳴スペクト
ル（50MHz）は第３図に示すように、51.49，
51.61，51.66，60.08，60.18，60.27，69.01，
69.3573，77，73.85，74.02，96.37，96.42，
96.47，ppmにピークが認められる。７比旋光度：〔α〕²⁵ _D＋323.3゜（C1.0，水）８中性，酸性，塩基性の区別：塩基性物質，ピリジン・酢酸バツフアー（PH6.4）
を用いた高圧濾紙電気泳動（3500V，15分間）
で、陰極側へ８cm移動するRm（Lys）0.9）。９分子量：滴定によりPka′7.1で滴定当量から
の分子量は（159）ｎである。また、アミコン
社製ダイヤフローメンブレンYK5（分画子量
5000）を通過し、ダイヤフローメンブレン
YM2（分画分子量1000）を１／４通過したこと
より、分子量は1000〜5000程度と推定される。 10 溶解性：水に易溶，メタノール，酢酸エチ
ル，クロロホルム，ベンゼン，ｎ−ヘキサンに
難溶である。 11 安定性：PH２〜10で安定である。 12 セルロース薄層クロマトグラフイーのRf
値：メタノール・10酢酸アンモニウム（１：１）
0.63 ｎ−プロパノール・ピリジン・酢酸・水（15：
10：３：12）０クロロホルム・メタノール・17％アンモニア
（２：１：１の上層）0.23 13 呈色反応：陽性：モリツシユ，アンスロン，エルソンモル
ガ，レツド・テトラゾリウム，グレイグ・リーバ
ツク，ニンヒドリン反応陰性：坂口，トレンス，フエーリング反応次にSF−2288物質の各種微生物に対する抗菌
活性を第１表に示す。

〔実施例〕

以下に本発明の実施例を示す。実施例１ (1) SF−2288株の培養種培地としてスターチ2.0％，グルコース1.0
％，小麦胚芽0.6％，ペプトン0.5％，イーストエ
キス0.3％，大豆粉0.2％，炭酸カルシウム0.1％を
含む培地を用いた。また、生産培地としてスター
チ3.0％，大豆粉1.5％，小麦胚芽1.0％，グルテン
ミール1.0％，ミートエキス0.5％，塩化ナトリウ
ム0.25％，炭酸カルシウム0.3％を含む培地を用
いた。なお、殺菌前PHは全て7.0に調節した。イーストエキス・スターチ寒天スラントに充分
生育したアクチノマデユラ・エスピー・SF−
2288株（微工研菌寄第7045号）を前記殺菌済の種
培地20mlずつを分注した100ml容三角フラスコ２
本に３〜４白金耳ずつ接種し、28℃で４日間振盪
培養し、これを第一種培養液とした。ついで、種培地80mlずつを分注した500ml容の
三角フラスコ２本に、前記の第一種培養液を４ml
ずつ接種し、28℃で３日間振盪培養し、これを第
二種培養液とした。ついで、種培地１ずつを分注した５容の三
角フラスコ２本に、前記の第二種培養液を50mlず
つ接種し、28℃で３日間振盪培養し、これを第三
種培養液とした。ついで、第三種培養液を35の殺菌済生産培地
を含む50容のジヤーフアーメンター２基に接種
し、28℃で、６日間、通気、撹拌培養した（通気
量35／min、回転数270rpm）。培養終了後、培養液のPHを9.0に調節し、ケイ
ソウ土を用いて濾過し、培養濾液40を得た。実施例２実施例１で得た培養濾液40（PH９）をアンバ
ーライトIRC−50（NH₄＋型）（ローム・アンド・
ハース社）４を充填した塔に通し、有効成分を
吸着させる。20水で洗浄後、１規定アンモニア
水20で有効物質を溶出させる。活性区分を減圧
下で２に濃縮してアンモニアを除去する。これをアンバーライトCG−50（NH₄＋型）（ロ
ーム・アンド・ハース社）200mlを充填した塔に
通過させ有効物質を吸着させる。１の水、
0.025規定及び0.05規定のアンモニア水で洗浄後、
0.1規定のアンモニア水で展開すると、20ml分画
で分画No.15〜28に有効成分が溶出されてくる。こ
の活性分画を減圧下で濃縮乾固してSF−2288物
質の淡黄色の粗粉末1.04ｇを得た。実施例３実施例２で得た粗粉末1.0ｇを少量の水に溶解
し75％メタノール水にて充填したアビセル・セル
ロース（フナコシ薬品社）120mlの塔にのせ、75
％メタノール水600mlで洗浄後、50％メタノール
水にて展開すると、５ml分画で分画10〜17に有効
成分が溶出されてくる。この活性画分を減圧下で
濃縮乾固してSF−2288物質の白色粗粉末460mgが
得られた。次にこの粗粉末400mgを少量の水に溶
解して、ダウエツクス１×２（OH−型）（ダウ・
ケミカル社）400mlの塔にのせ、水にて展開し、
８ml分画で分画No.45〜56に活性画分が得られ、こ
の活性画分を減圧下で濃縮乾固するとSF−2288
物質遊離塩基の白色粉末168mgが得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図はSF−2288物質遊離塩基の赤外部吸収
曲線図（臭化カリウム錠）である。第２図はSF
−2288物質遊離塩基の200MHz水素核磁気共鳴ス
ペクトル（重水中）である。第３図はSF−2288
物質遊離塩基の50MHz炭素核磁気共鳴スペクトル
（重水中）である。

Claims

【特許請求の範囲】１遊離塩基として下記の特性を有する新規抗生
物質SF−2288及びその塩。 (1) 外観：白色の無定形粉末 (2) 元素分析値：炭素39.61％、水素6.40％，窒
素8.89％（重量比） (3) 比旋光度：〔α〕²⁵ _D＋323.3゜（C1.0，水） (4) 溶解性：水に易溶、メタノール、酢酸エチ
ル，クロロホルム，ベンゼン，ｎ−ヘキサンに
難溶。 (5) 紫外部吸収スペクトル：水溶液中での特徴的
な吸収極大を示さない。 (6) 赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠中で
測定したスペクトル 3350，2900，1580，1450，
1370，1330，1250，1150，1090，1000，860cm^-1
にピークが認められる。 (7) 水素核磁気共鳴スペクトル：重水中で測定し
たスペクトル3.20，3.26，3.65，3.71，3.83，
3.89，4.00，4.75，5.05，5.13ppmにピークが認め
られる。 (8) 炭素核磁気共鳴スペクトル：重水中で測定し
たスペクトル51.49，51.61，51.66，60.08，60.18，
60.27，69.01，69.35，73.77，73.85，74.02，
96.37，96.42，96.47，ppmにピークが認められ
る。 (9) 中性，酸性，塩基性の区別：塩基性物質，ピ
リジン，酢酸バツフアー（PH6.4）を用いた高圧
濾紙電気泳動（3500V，15分間）で陰極側へ８cm
移動する。Rm（Lys）0.9 (10) セルロース薄層クロマトグラムのRf値：メ
タノール−10％酢酸アンモニウム（１：１）
0.63n−プロパノール−ピリジン−酢酸−水
（15：10：３：12）原点クロロホルム−メタノー
ル−17％アンモニウム（２：１：１の上層）0.23 (11) 呈色反応：モリツシユ，アンスロン，エルソ
ンモルガン，レツド・テトラゾリウム，グレイ
グ・リーバツク，ニンヒドリン試薬は陽性。坂口，トレンス，フエーリング試薬は陰性。 (12) 分子量：滴定によりPKa'7.1で滴定当量から
の分子量は（159）ｎである。また、アミコン
社製ダイヤフローメンブレンYM5（分画分子量
5000）を通過し、ダイヤフローメンブレン
YM2（分画分子量1000）を１／４通過したこと
により、1000〜5000程度。２アクチノマデユラ・エスピー・SF−2288（微
工研株第7045）を培養し、培養物からSF−2288
物質を単離することを特徴とする新規抗生物質
SF−2288物質又はその塩の製造法。