JPS6046958B2 - 新抗生物質ｓｆ−２０４９物質およびその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新抗生物賞Ψ−２０４吻質およびその製造法に
関するものであり、更に詳しく述べるとストレプトミセ
ス属に属するＳＦ−２０４９物質生産菌を培地に培養し
、得られた培養物から採取した新抗生物鄭Ｆ−２０４９
物質およびその製造法に関するものである。

本発明者らはストレプトミセス属に属する或る菌株の培
養物中に植物病原糸状菌に対して抗菌作用を示す物質が
生産されていることを見出し、その有効物質を培養物か
ら純粋に単離し、その性状を調べた結果、既知物質とは
異なる新抗生物質てあることを確かめ、この有効物質を
ＳＦ−２０４９物質と命名して本発明を完成した。

すなわち、本発明はＳＦ−２０４画質およびストレプト
ミセス属に属するＳＦ−２０４９物質生産菌を培養しそ
の培養物中にＳＦ−２０４画質を生成せしめこれを採取
することを特徴とする抗生物 Ｆヨー２０４画質の製造
法に関するものである。

本発明の方法で使用されるストレプトミセス属のＳＦ−
２０４中質生産菌の一例としては、本発明者らによつて
岡山県新見市の土壌から新たに分離されたストレプトミ
セス壺エスピー会ＳＦ−２０４９株がある。この菌株は
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第４４８
６号として受託されている。この菌株の菌学的性状は次
のとおりである。Ｉ形態気菌糸は、シユクロース・硝酸
塩寒天、スターチ寒天、オートミル寒天及びイースト・
麦芽寒天て良好に着生し胞子形成も豊富てある。

分枝は単，純分枝で車軸分枝はみられない。気菌糸の先
端は鉤状、あるいはコンパクトな閉鎖型のらせん状、ま
たは開放型のらせん状となり、菌核形成は認められない
。

電子顕微鏡による胞子の表面構造は平滑であり、胞子は
円筒型または惰円型で大きさは０．７〜０．９×１．ｌ
−１．３ミクロンで、胞子の連鎖は川個以上てある。ｎ
各種培地土の生育状態 次表に示す通りである。

〔 〕内に示した色の表示はＣＯｌＯｒＨａｒｍＯｎｙ
跪 −Ｎｕａｌ（ＣＯｎｔａｊｎｅｒＣＯｒｐＯｒａｔ
ｊＯｎＯｆＡｎｌｅｒｉｃａ）による色の分類に従つた
ものである。

徂 生理的性質（１）生育温度範囲：イーストスターチ
寒天培地において２０゜Ｃ〜４７Ｃの温度範囲て良好な
生育をする。

（２）ゼラチンの液化：２０゜Ｃ，３０日間培養で少々
液化する。

（３）スターチの加水分解：陽性 （４）脱脂乳のペプトン化： 陰性（２８゜Ｃ）、少々（３ＴＣ） ｐの凝固 陽性（３ＴＣ）、陰性（２８゜Ｃ） （５）メラニン様色素の生成： 陰性 Ｗ炭素源の利用性（ブリードハム・ゴツトリーブ寒天培
地）（１１利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フランクト
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンニトール、Ｉ−イノシ
トール、Ｌ−ア ラビノース、ラムノース、シユクロー ス、ラフィノース 以上のＳＦ−２０４淋の菌学的特徴を要約すると気菌糸
はらせん状を形成し、胞子表面構造は平滑である。

裏面の色調は、クリーム色〜オレンジ色〜黒褐色となる
。気菌糸は白色〜灰色〜灰褐色となり、スターチ寒天、
イースト・麦芽寒天、チロシン寒天でうすい黄色〜淡黄
色〜淡褐色の可溶性色素がみとめられ、メラニン様色素
の形成はみとめられなかつた。これらの性状より、ＳＦ
−２０４皓はストレプトミセス属に属する菌株てある。

以上より、ＳＦ一２０４９株をストレプトミセス壺エス
ピー番ＳＦ一２０４９（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｓｐ
．ＳＦ−２０４９）と称することにした。ＳＦ−２０４
淋は他のストレプトミセス属に菌株の場合にみられるよ
うにその性状が変化しやすく、例えば、紫外線、エツク
ス線、高周波、放射線、薬品等を用いる人工的手段で変
異しうるものであり、このような変異株であつてもＳＦ
−２０４９物質の生産能を有するストレプトミセス属の
菌はすべて本発明の方法に使用することができる。

本発明の方法では前記菌株を通常の微生物が利用しうる
栄養物を含有する培地て培養する。栄養源としては、従
来ストレプトミセス属の菌の栄養に利用されている公知
のものが使用できる。例えば、炭素源としてグルコース
、スターチ、デキストリン、シユクロース、水あめ、糖
みつ、大豆油等を使用しうる。また窒素源として、大豆
粉、コーンステイープリカー、小麦胚芽、コツトンシー
ドミール、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等を使用
しうる。その他、必要に応じて炭酸カルシウム、食塩、
塩化カリ、燐酸塩等の無機塩類を添加するほか、菌の発
育を助け、ＳＦ−２０４＠質の生産を促進することき有
機及び無機物を適当に添加することができる。培養法と
しては、一般の抗生物質生産の方法と同じく液体培養法
、特に深部培養法が最も適している。培養は好気的条件
下で行われ、培養に適当な温度は２５〜３５℃てあるが
、多くの場合２８℃付近て培養する。ＳＦ−２０４９物
質の生産は振盪培養、タンク培養共に２〜６日て蓄積が
最高に達する。ＳＦ−２０４吻質の検定は稲いもち病菌
を使用する通常のディスク平板法において２５０〜３１
．２５ｎ１ｃｇ１ｍ１において濃度の対数と阻止円径と
の関係は直線関係を示し、それぞれ５６〜３７Ｔ１ｒＩ
ｎの阻止円を与える。ＳＦ−２０４吻質は後記するよう
な理化学性状を有するのて、ＳＦ−２０４吻質の採取に
当つてはその性状を利用して抽出、精製することが出来
る。

即ち、ＳＦ−２０４吻質は主として、培養液中の液体部
分に存在し、活性炭およびアンバライトＸＡＤ−２（ロ
ーム・アンド・ハース社）、ダイヤイオン即−１へ即−
２０（三菱化成）等の非イオン性の交叉結合したポリス
チレン重合体の吸着樹脂に吸着され、水とアセトン、ア
ルコール類などの有機溶剤との混液で容易に溶出するこ
とができる。また後述するように半水溶性の酸性物質て
あるので、イオン交換樹脂としてアニオン交換樹脂とし
てアンパーライトＩＲＡ４Ｏへ４１１（ローム●アンド
●ハース社）の０Ｈ型、ダウエツクス１Ｘ２（ダウケミ
カル社）のＣｌ型セフアデツクスＡ−２５（フアルマシ
ア社）Ｃｌ型が用いられ、食塩で溶出することができる
。そして、ｎ−ブタノール等の水と混らない有機溶剤に
抽出される。これを減圧下で濃縮すると褐色の粉末が得
られる。このＳＦ−２０４吻質を含む褐色粉末をカラム
・クロマトグラフィー、例えばクロロホルム・メタノー
ル（７：１）を展開剤としたシリカゲル・カラムクロマ
トグラフィー及びセフアデツクスＬＨ２Ｏ（フアルマシ
ア社）などを用いるクロマトグラフィーを行ない濃縮乾
固するとＳＦ−２０４９物質の白色粉末を得る事が出来
る。ＳＦ−２０４ｇＶｊ質は酸性の化合物なので、常法
によりナトリウム塩等の各種塩を形成することができる
。

例えばＳＦ−２０４Ｃｋ質を水に懸濁して、１当量の苛
性ソーダを加えて溶解後水溶液を減圧乾固すればナトリ
ウム塩が得られる。本発明の方法で得られたＳＦ−２０
４吻質の理化学的性状は以下の通りである。

１性状：白色粉末 ２融点：２０５〜２１０℃（以後徐々に褐色する）３比
旋光度性： 〔α〕Ｌ４＋５８々（Ｃｌ、クロロ
ホルム・メタノール１：１）４紫外部吸収スベク
トルニメタノール溶液中 の紫
外部吸収スペク トルを第１図
に示 す。

主な吸収極大は ２２４ｎｍ（Ｅ
（％ ６７９）、２７２ｒ１ｍ
（Ｅ （％３３３）、肩２８３
ｒ１ｍ（Ｅ（％３０９）、肩 ３
０１ｎｍ（Ｅ （％ ２３９）、
肩３２１ｎｍ（Ｅ ）％１８２
）て、酸性メ タノール、塩基
性メ タノール中でも殆ん
ど変化しない。

５赤外部吸収スベクトルニ臭化カリウム錠剤
法による赤外部吸収
スペクトルを第２図 に
示す。

３３３０、 ２９９０１１６８０、
１５２０、 １４５０１１３００１
１１８０１１０８へ１０５０ｃｍ−１に主
なる吸収極大を有す
る。

６元素分析値炭素：４３．８２％、水素４．２６％、
窒素１４．８４％、硫黄１２．８４％７
分子量：約７００（蒸気圧法）８溶解性：塩基性水、ク
ロロホルム●メタノ ール（１：１）に易溶
、メタノ ール、ｎ−ブタノールに可溶、
水、酸性水、アセトン、酢酸工 チ
ル、ベンゼン、エチルエーテ ルに難溶９呈
色反応：過マンガン酸カリ、エールリツ ヒ
・硫酸反応陽性、ニンヒドリ ン、硝酸銀、
グレイク・レアバ ツク反応陰性
ォ３１０封管中５規定塩酸で１０５℃、１時間加
水分解：アミノ酸分析計による分析て既知アミノ酸とし
てアスパラギン酸、スレオニン、プロリン、グリシンと
一致するピークが得られ未同定ピークとして少なくとも
３つのピークが存在した。

１１シリカゲル薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値
展開溶媒 Ｒｆ値クロロホル
ム●メタノール（１：１）０．６７クロロホルム・メタ
ノール（２：１）０．１５ｎ−ブタノール●メタノール
●水（４：１：２） ０．３
９１２安定性：１００℃で１０分間処理すると、酸、ア
ルカリ不安定、中性では安定である。

ＳＦ−２０４吻質の抗菌スペクトルは第２表に示す通り
である。

第２表て明らかなように、本抗生物質は寒天培地上て稲
いもち病菌（ピリクラリア・オリゼ）をはじめ、ある種
の植物病原性真菌の生育を特異的に抑制するが、細菌類
に対してはまつたく抗菌力を示さないという特徴をもつ
。

また稲いもち病ポット試験においてＳＦ−２０４吻質は
２００ｐｐｍの濃度て市販のいもち病防除薬剤と同等の
防除効果を示す。以上の理化学的性質及び抗菌スペクト
ルからＳＦ−２０４吻質は既知抗生物質の中に一致する
ものがなく、従つてＳＦ−２０４９物質は新規な抗生物
質と認められる。

次に実施例を示すが、本発明においてここに例示しない
多くの変契約いは修飾手段を用いることは勿論である。
実施例１ストレプトミセス●エスピー●ＳＦ−２０４９
株（微工研菌寄第４４８６号）の胞子をスターチ２．０
％、ペプトン１．０％、肉工キズ０．３％、リン酸二カ
リ０．０５％（ＰＨ７．Ｏ）の液体培地１′（坂ロフラ
スコ１０本使用）に接種し、２８℃て０時間振盪培養し
たものを種母とする。

グルコース１．０％、水あめ４．０％、ソリユーブル◆
ベジタブル●プロテイン０．５％、大豆粉２．５％、酵
母工キズ０．２％、大豆油０．３％、硫酸第１鉄０．０
０１％、塩化ニッケル０．０００１％、塩化コバルト０
．０００１％ＰＨ７の組成から成る液体培地３５ｅに前
記の種母を接種し、２８゜Ｃて６４時間通気攪拌培養し
た。（５０ｅジヤーフアメンター）この培養物に沖過助
剤（ハイフロースーパーセル）を加えてｐ過し、得られ
たろ液２２ｅをダイヤイオンＨＰ−１０（三菱化成）３
ｅのカラムを通過せしめると、ＳＦ−２０４９物質は樹
脂に吸着される。１５ｅの水て樹脂を洗浄後、６０％ア
セトン水１０′て溶出し、２ｅずつ分画すると、分画２
〜３に活性区分が溶出される。

活性溶出区分を減圧濃縮して７００ｍ１の水溶液が得ら
れ、回収率は９０％てあつた。ＳＦ−２０４＠質を含む
水溶液７００ＴＬｔをセフアデツクスＡ−２５（フアル
マシア社、Ｃ１型）２００ｍＬのカラムを通過させ、１
ｅの水で水洗後、０．２Ｍの食塩水１ｅを流しさらに１
Ｍの食塩水て溶出させると、活性区分が溶出された。

この食塩水溶液をｎ−ブタノール１ｅで２回抽出すると
、ＳＦ−２０４９物質はｎ−ブタノールに抽出される。
これを濃縮乾固し、１．２ダの褐色粉末を得た。この粉
末１ｙを少量のメタノールに溶かし、クロロホルムにて
充填したシリカゲルカラム（１５０ｍＬ）の上にのせ、
クロロホルム・メタノーレ（１０：１）て７５０ｍ１て
洗浄後、クロロホルム・メタノール（７：１）の溶媒（
１．５ｅ）て溶出され、１５ｙ分画て、いもち病菌に対
して活性を示す分画１３０〜２２０を集め減圧濃縮乾固
すると、ＳＦ−２０４９物質を含む黄色粉末１１０ｍｇ
を得た。この黄色粉末１００ｍ９を少量のクロロホルム
●メタノール（１：１）に溶解し、クロロホルム●メタ
ノール（１：１）にて充填したセフアデツクスＬＨ−２
０カラム（フアルマシア社、３００ｍｔ）の上にのせ、
クロロホルム・メタノール（１：１）で展関し６ｙ分画
で分画し分画３４〜３８を濃縮乾固し、ＳＦ−２０４吻
質の白色粉末６０ｍ９が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図はＳＦ−２０４９物質のメタノール中での紫外部
吸収スペクトル図であり、第２図はＳＦ−２０４吻質の
ＫＢｒ錠剤法での赤外部吸収スペクトル図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の物理化学的特性を有するＳＦ−２０４９物質；
   白色粉末の酸性物質；比旋光度〔α〕＿Ｄ＾２＾４＋５
   ８゜（Ｃｌ、クロロホルム・メタノール１：１）；元素
   分析値炭素４３．８２％、水素４．２６％、窒素１４．
   ８４％、硫黄１２．８４％；融点２０５〜２１０℃（徐
   々に褐変する。 ）；添付図面の第１図に示す赤外部吸収スペクトルを有
   し；第２図に示す赤外部吸収スペクトルを有し；塩基性
   水、クロロホルム・メタノール（１：１）に易溶、メタ
   ノール、ｎ−ブタノールに可溶、水、酸性水、アセトン
   、酢酸エチル、ベンゼン、エチルエーテルに難溶；過マ
   ンガン酸カリ、エールリツヒ、硫酸反応陽性、ニンヒド
   リン、硝酸銀、グレイク・レアバツク反応陰性であり、
   封管中５規定塩酸で１０５℃、１５時間加水分解すると
   アミノ酸分析計により既知アミノ酸としてアスパラギン
   酸、スレオニン、プロリン、グリシンを生成する。２
   ストレプトミセス・エスピー・ＳＦ−２０４９株または
   、その生産性変異株を好気的に培養し、その培養中に生
   じたＳＦ−２０４９物質を分離、採取することからなる
   新抗生物質ＳＦ−２０４９物質の製造法。