JPH0360838B2

JPH0360838B2 -

Info

Publication number: JPH0360838B2
Application number: JP27285486A
Authority: JP
Inventors: Nozomi Ootake; Haruo Seto; Hiroshi Nakayama; Toyonari Endo; Kazunori Ooba; Michiaki Iwata; Tetsuo Watanabe
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1986-11-18
Filing date: 1986-11-18
Publication date: 1991-09-17
Also published as: JPS63126495A

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野本発明は坑イネいもち病菌を有する新規抗生物
質6257物質およびその製造法に関するものであ
る。従来の技術および発明が解決しようとする問題点従来、数多くの抗生物質が発明され、医薬品、
動物用薬品、農薬等の分野で実用化されている。
しかしながらまだ有効な物質が見出されないため
解決されていない医療あるいは産業分野が多く残
されている。例えば植物病原菌に対する化学療法の分野にお
いても、新しい作用をもつ新規の抗生物質を提供
することは常に要望されている。本発明者らは以上のような点に着目し、新規な
抗生物質を提供するとともに、その製造法を確立
することによつてこれを解決しようとするもので
ある。問題点を解決するための手段、作用及び効果本発明者らは、上述の期待にこたえるべく、イ
ネいもち病に対して防除活性を有する物質の探索
をつづけていたところ、ストレプトミセス属
（Streptomyces）に属するある菌株の培養物中
に、イネいもち病に対して防除活性を示す物質が
生産されていることを見出した。その有効物質を
培養物から単離し、その性状を調べた結果、既知
の抗生物質とは異なる新規な構造を有する物質で
あることを確かめ、この有効物質を6257物質と命
名して、本発明を完成した。本発明による新抗生
物質6257物質は、イネいもち病に対してすぐれた
防除効果を有している。本発明の6257物質はジア
ステレオアイソマーのNa塩として得られ、その
理化学的性状は次の通りである。１外観：白色の無定形粉末２元素分析値：炭素39.02％、水素5.93％窒素12.08％、酸素35.02％ナトリウム6.53％３分子量：FAB−MS 328（Ｍ＋１）⁺ ４分子式：C₁₁H₁₈N₃O₇Na ５紫外部吸収スペクトル：末端吸収を示す６赤外部吸収スペクトル：第１図に示す通り７溶解性：水に可溶、アセトン、酢酸エチル、ベンゼ
ンに不溶８呈色反応：ニンヒドリン、レミユー反応に陽性坂口反応に陰性９旋光度：［α］²² _D−27.7゜（C1.0，H₂O） 10 融点：166〜168℃（分解） 11 高圧濾紙電気泳動：Rm（gln）0.67 （PH6.4ピリジン−酢酸緩衝液 3500V、15
分）上記の物理化学的性質及び水素核核磁気共鳴
スペクトル等より6257物質の化学構造は次の通
りと決定された。本発明の6257物質の抗菌活性を調べると、イ
ネいもち病菌（Pyricularia oryzae）に対して
50μｇ／mlの濃度で20mmの阻止円径を与える
（ペーパーデイスク法）。また温室内のポツト試
験では100ppmの濃度でイネいもち病に対して
83％の防除活性を示す。本発明はまた、ストレプトミセス属に属する
6257物質生産菌を培養し、その培養物から6257
物質を採取することを特徴とする新抗生物質
6257物質の製造法を要旨とする。本発明の方法に使用される6257物質生産菌の
一例としては、本発明者らにより宮城県松島町
の土壌より新たに分離された6257−MC₁株が
ある。6257−MC₁株の菌学的性状は次の通り
である。本菌株の基生菌糸はよく分枝しながら伸展
し、桿菌状または球菌状に分断しないが、とき
には単胞子葉の顆粒体を着生する。気中菌糸は
単軸分枝し、直状また波状の10〜50個からなる
胞子鎖を着生する。ときには、胞子鎖の先端が
曲状またはループ状を呈することがあり、菌核
状または胞子塊状の物体を気中菌糸上に形成す
ることがある。胞子は0.4〜0.5×1.0〜1.5μｍの
円筒形で、平滑表面、非運動性である。本菌株
は胞子のうを形成せず、全菌体加水分解物中の
ジアミノピメリン酸はLL−型である。以上の結果から、本菌株はストレプトマイセ
ス（Streptomyces）属に所属される。本菌株の培養性状と生理的性状は表１と表２
にそれぞれ示す。集落表面の菌叢色は黄色系
列。基生菌糸の裏面色は淡黄色から淡黄橙色、
淡黄茶色、または鈍黄色、鈍黄橙色から灰味黄
茶色である。拡散性色素はメラニン様色素の他
に黄味橙色または黄味茶色の色素を培地の種類
によつて僅少または多量に形成する。本菌株は中温性で、メラニン様色素を形成
し、炭素源としてイノシトール、Ｌ−ラムノー
ス、ラフイノースを同化せず、Ｌ−アラビノー
スの同化は実験の度に判定が異なる程度に微弱
である。バージー氏細菌同定便覧の検索表により、上
述の性状を基準に検索すると、本菌株はS.キサ
ントクロモゲネスが最も近縁種であると推定さ
れた。その種の基準株IFO12828株と本6257−
MC₁株を比較観察を行なつた結果、両菌株は
形態、培養、生理的性状ともによく一致した。
そこで本菌株はストレプトマイセス・キサント
クロモゲネス（Strepto−myces
xanthochromogenes）6257−MC₁株と呼ぶこ
とにする。なお本菌株はストレプトマイセス・
キサントクロモゲネス6257−MC₁株として工
業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第
9017号（FERM Ｐ−9017）として受託されて
いる。

【表】

【表】本菌株、すなわち6257−MC₁株は他の放線
菌の場合にみられるようにその性状が変化しや
すく、たとえば紫外線、エツクス線、放射線、
薬品等を用いる人工的変異手段で変異しうるも
のであり、このような変異株であつても6257物
質の生産能を有するストレプトミセス属の菌は
すべて本発明の方法に使用することができる。
本発明の方法では、6257−MC₁株を通常、微
生物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養
する。たとえば、炭素源としてグルコース、シ
ユクローズ、デキストリン、澱粉、水あめ、糖
みつ、植物油、動物油等を使用しうる。また、
窒素源として大豆粉、小麦胚芽、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、コーンステイープリカ
ー、硝酸ソーダ、硫酸アンモニウム等を使用し
うる。その他、必要に応じて炭酸カルシウム、
塩化カリウム、燐酸塩等の無機塩類を添加する
ほか、菌の発育を助け6257物質の生産を促進す
るごとき有機物および無機物を適当に添加する
ことができる。培養法としては、一般の抗生物質生産の方法
と同じく好気的条件下での培養法であれば、い
かなる方法を適用してもよいが、深部培養が最
も適している。培養に適した温度は20〜35℃で
あるが、多くの場合26〜32℃の付近で培養を行
なうのが好ましい。6257物質の生産は振盪培
養、タンク培養共に２〜７日で蓄積が最高に達
する。本発明の6257物質の検定に当たつては、検定
菌としてイネいもち病菌（ペリキユラリア・オ
リゼー）を用いる生物学的検定法を用いる。寒
天培地上での生育阻止円径は25〜250μｇ／ml
において濃度の対数と直線関係を示し、15mm〜
38mmの阻止円を与える。本発明によつて得られる6257物質は酸性の水
溶性物質であり、前述のような理化学的性状を
有するので、培養物から6257物質の採取にあた
つては、その性状を利用して抽出精製すること
ができる。すなわちアンバーライトIRA−40（OH），
DEAE−セフアデツクスＡ−25（Cl）等の陰イ
オン交換樹脂、クロマト用活性炭、ダイヤイオ
ンHP−20等の吸着剤、セフアデツクスＧ−10
等のゲルろ過剤等、これらを適宜組み合わせる
ことにより、高純度の6257物質のナトリウム塩
がジアステレオアイソマーとして得られる。次
に温室内のポツト試験による6257物質のイネい
もち病に対する防除効果を第３表に示した。ま
た本物質は第３表に示した濃度では全く薬害を
示さない。尚、本物質はマウスによる急性毒性のLD₅₀
は50〜100mg／Kg（i.v）であつた。第３表イネいもち病に対する防除効果 6257濃度（ppm）防除価（％） 200 94 100 83 50 58 25 56 （温室内ポツト試験）以下に本発明の実施例を示すが、これらは単
なる一例であつて本発明を限定するものではな
い。ここに例示しなかつた多くの変法あるいは
修飾手段を用い得ることはもちろんのことであ
る。実施例１ 6257−MC₁株の培養ストレプトミセス・キサントクロモゲネス
6257−MC₁株（微工研受託番号FERM Ｐ−
9017）の胞子を、スターチ１％、ポリペプトン
１％、モラーセス１％、肉エキス１％（PH7.2）の液体培地30ml（15ml仕込み、大型
試験管２本使用）に接種し、28℃72時間振盪培
養したものを第１種母とする。これを上記の培
地600ml（500ml容三角フラスコ６本使用）に２
mlずつ接種し、28℃48時間振盪培養し、これを
第２種母とする。グリセリン2.5％、ペプトン
2.0％、炭酸カルシウム0.4％（PH7.2）の組成か
らなる液体培地35に前記の第２種母を接種
し、28℃で78時間通気撹拌培養した（50ジヤ
ーフアーメンター、等量通気、400rpm／
min）。培養終了後、ケイソウ土を濾過助剤に
用いて吸引濾過し、培養濾液22を得た。実施例２ 6257物質の精製実施例１で得られた培養ろ液22を陰イオン
交換樹脂アンバーライトIRA−401（OH型、２
）に吸着させ、10の水で洗浄後、0.4規定
塩酸水で溶出し、２分画でフラクシヨン２〜
４に活性画分が得られた。得られた活性画分を
苛性ソーダ溶液で中和後、クロマト用活性炭
（200ml、和光純薬製）の塔に通し、活性物質を
通過させる。この通過液６を１まで濃縮し、塩酸水に
てPH2.0に調整後、クロマト用活性炭（600ml）
の塔に通すと活性物質が吸着される。２の水
で洗浄後、50％アセトン水1.5で活性物質を
溶出し、脱塩した。得られた溶出液を500mlに減圧濃縮した後、
DEAE−セフアデツクスＡ−25（400ml、フアル
マシア製）の塔に通し、活性物質を吸着させ
る。１の水で洗浄後、0.05M塩化ナトリウム
溶液で展開すると20ml分画でフラクシヨン61〜
100に活性画分が得られた。この活性画分800ml
をPH2.0に調整後、クロマト用活性炭（200ml）
に吸着させ、水洗後、50％アセトン水で活性物
質を溶出し、濃縮後、凍結乾燥すると、6257物
質の粗粉末が202mg得られた。この粗粉末202mgを少量の水に溶かし、セフ
アデツクスＧ−10（800ml、フアルマシア製）の
塔にのせ、水で展開するクロマトグラフイーを
行なつた。溶出液を10mlずつ分画すると、フラ
クシヨン37〜43に活性画分が得られ、これを集
め濃縮、凍結乾燥することにより6257物質のナ
トリウム塩がジアステレオアイソマーとして
120mg得ることができた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の6257物質ナトリウム塩の赤
外吸収スペクトル図（KBr錠剤）である。

Claims

【特許請求の範囲】１下記の構造：を有する新規なジペプチド抗生物質6257物質。２ストレプトミセス属に属する6257物質生産菌
を培養し、その培養物から6257物質を採取するこ
とを特徴とする新抗生物質6257物質の製造法。