JPS601320B2 - 抗生物質ｂａ―８４３ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗生物質ＢＡ一８４３ならびにその製
造法に関する。

本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として、多
数の土壌微生物を分離し、その生産する代謝産物につい
て研究を重ねた結果、ある種の土壌細菌が生産する抗生
物質ＢＡ一８４３が新規化合物であること、またその生
産菌はフラボバクテリウム属に属すること、さらに該抗
生物質は化膿性疾患やその他の疾病の治療に用いること
ができ、また器具、道具、装置の殺菌にも用いることが
できることを見出し、これにもとづいてさらに研究した
結果、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、‘１｝抗生物質ＢＡ−８４３，およ
び■フラボバクテリウム属に属する抗生物質ＢＡ−８４
２主産菌を培地に培養し、抗生物質ＢＡ−８４３を生成
蓄積せしＺめ、これを採取することを特徴とする抗生物
質ＢＡ−８４３の製造法、である。本願では、抗生物質
ＢＡ−８４３を「ＢＡ−８４３」と称することもある。

本発明で使用される新規抗生物質ＢＡ−８４２生産Ｊ菌
としては、フラボバクテリウム属に属しＢＡ−８４３を
生産しうるものであれば如何なるものでもよいが、たと
えば本発明者らが滋賀県高島郡牧野町の土壌から採取し
、新菌種フラボバクテリゥム・アンティビオティクムに
属することが明らか２にされたＢＡ−８４３珠‘ま最も
有利に使用されうるものの一例である。

フラボバクテリウム・アンテイビオテイクム・ＢＡ−８
４３珠の菌学的性状は下記の通りである。

【ａー 形態学的特徴 ２
１ 細胞の形：棒状（ブイヨン寒天，２８００，２日，
表面培養）細胞の大きさ：０．４〜０．７〆×１．３〜
２．坪２ 多形性：なし３ 運動性：なし
３４胞子：なし５ グラム染色性：陰性 ６ 抗酸性：非抗酸性 ‘ｂ’ 各種培地上での生育状態（２８ｑｏで１〜７日
間培養し常法により観察した。

） ３■ 肉汁寒天平板培養集落は円形で
降起状，全縁で光沢あり、半透明で淡黄色を呈する。

可溶性色素なし。■ 肉汁寒天斜面培養 生育は中程度，糸状で光沢あり半透明で淡４黄色を呈す
る。

■ 肉汁液体培養 表面にうすい菌環を形成して生育し、混濁は少ない。

沈澱も少ない。■ 肉汁ゼラチン穿刺培養 層状に液化。

■ リトマス・ミルク培養 凝固せずべブトン化し、中性〜ややアルカリ性。

【Ｃｉ 生理的性質 ■ 硝酸塩の還元：蔭性 ■ 脱窒反応：陰性 ■ ＭＲテスト：陰性 ■ ＶＰテスト：陰性 ■ インドールの生成：陰性 ■ 硫化水素の生成：陰性 ■ デンプンの加水分解：陰性 ■ クエン酸の利用：陽・性 ■ 無機窒素源の利用：陽・性 ■ 色素の生成：菌体中に黄色々素を生成。

水浴性色素の生成は認められない。■ ウレアーゼ：陽
性 ■ オキシダーゼ：陽性 ■ カタラーゼ：陽性 ■ 生育の範囲 ・ ｐＨ 至適ｐＨ６．５〜７．５ ｉｉ 温度 至適温度は２８ｑ０，３７ｏ０では生育し
ない。

■ 酸素に対する態度：好気性 ■ ○一Ｆテスト〔ヒユーライフソン（Ｈｕｇｈ−Ｌｅ
ｉｆｓｏｎ）法〕：陰性■ 各種糖類からの酸およびガ
スの生成：べプトン水への糠添加では、Ｌーアラピノー
スＤ−キシロース，Ｄーグルコース，Ｄーマンノース，
Ｄーフラフトース，Ｄーガラクトース，麦芽糖，ショ糖
，乳糖，トレハローズ，Ｄーソルビツト，Ｄーマンニツ
ト，イノシツト，グリセリンおよびデンプンより酸およ
びガスの生成は認められない。

ただし低濃度窒素源の培地で、振糧培養すると、果糖，
ブドウ糖，ガラクトース’マンノース，麦芽糖，トレハ
ロースで酸の生成が認められる。

｛ｄ’その他の性質 Ｉ ＤＮＡの○Ｃ含量 ６７±１モル％２ べプチド
系抗生物質を生成する。

以上の諸性質を、パージーズ・アニュアル・オブ・デタ
ーミナデイブ・バクテリオロジジー（Ｂｅｒ 一 ｇｅ
ｙｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅにｒｍｉｎａｔｉｖｅ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第３版の記載と照合すると
ＢＡ−８４３株は、グラム陰性で非運動性の樟菌で、グ
ライデイング・ムーブメントやスウオーミングを示さず
、黄色の集落を形成し、オキシダーゼ陽性，カタラーゼ
腸性などの性質から、フラポバクテリウム（Ｆ１ａｖｏ
−戊ｃｔｅｒＮｍ）属細菌種とするのが妥当である。

上記マニュアル第８版に記載されているフラボバクテリ
ウム属１２塵のうちＤＮＡのＧＣ含量６３〜７０％のグ
ループに属すると考えられるが、既知種の中には該当す
るものを見出すことは出来ない。また、本菌株のように
、ベプチド系抗生物質を生産するフラボバクテリウム属
菌は見出されていない。したがってＢＡ−８４３粥まフ
ラボバクテリウム属の新種とみなさざるを得ず、本属菌
が抗生物質を生産するのは極めて希な性質と考えられる
ので本菌種をフラボバクテリウム・アンテイ ビ オ
テ イ ク ム （ ＦｌａＶｏｂａｃにｒｉ側ａｎｔ
位ｉｃｔｉｃｕｍ）と命名し、従来種と区別した。なお
、本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ
−Ｐ ＮＯ．３９４５として、また財団法人発酵研究所
にｍ○−１３７１５としてそれぞれ供託されている。本
発明に用いられるフラボバクテリウム属菌は一般にその
性状が変化しやすく、たとえば紫外線，エックス線，化
学薬品などを用いる人工的変異手段で容易に変異しうる
ものであり、どのような変異株であっても本発明の対象
とする抗生物質ＢＡ−８４３の生産能を有するものはす
べて本発明に使用することができる。

本菌の培養に際しては、炭素源としては、たとえばグル
コース，シユークロース，マルトース，澱粉，可溶性澱
粉，廃糖蜜グリセロール，油脂類（例、大豆油，オリー
ブ油など），アルコール類（例、エタノールなど），有
機酸類（例、酢酸，クエン酸，コハク酸など），脂肪酸
類（例、パルミチン酸，オレィン酸など）など菌が資化
しうるものが適宜用いられる。

窒素源としては、たとえばべプトン，大豆粉，純美粉，
コーン・ステイープ・リカー，乾燥酵母，酵母エキス，
肉エキス，ポリベプトン，尿素，硫酸アンモニウム，硝
酸アンモニウム，塩化アンモニウム，燐酸アンモニウム
などの有機窒素化合物や無機窒素化合物が利用できる。
また、無機塩としては、たとえば塩化ナトリウム，塩化
カリウム，炭酸カルシウム，硫酸マグネシウム，燐酸ー
カリゥム，燐酸二ナトリウムなどの通常細菌の培養に必
要な無機塩類が単独もしくは適宜、組み合わせて使用さ
れる。また、必要に応じて、たとえば重金属塩類（例、
硫酸第１鉄，硫酸鋼など），ビタミン類（例、ビタミン
Ｂ，，ビオチンなど）などの徴量栄養源のほかシリコー
ンオイルやポリアルキレングリコールエ−テルなどの消
泡剤や界面活性剤を培地に添加してもよい。その他菌の
発育を助け、抗生物質ＢＡ−８４３の生産を促進するよ
うな有機物や無機物を適宜に添加してもよい。培養方法
としては、一般に抗生物質の生産方法と同様に行なえば
よく、固体培養でも液体培養でもよい。

液体培養の場合は静贋培養，蝿梓培養，振糧培養，通気
培養などいずれを実施してもよいがとくに通気燈枠培養
が好ましい。又培養温度はおよそｌｙｏ〜３ぷ０の範囲
が好ましく、培地のｐＨは約４〜９．５の範囲でおよそ
１幼時間〜１瞬時間培養する。生成したＢＡ−８４３は
培養炉液中および菌体中に存在するので、培養物を遠心
分離あるいは炉過によって炉液と菌体とに分離し、その
炉液から精製することができるし、また菌体から水性ア
セトン，水性メタノールなどの溶媒で抽出し、その抽出
液から採取することもできる。

また、培養物に直接、溶媒を添加して抽出したのち、遠
心分離あるいは炉過によって菌体を除きその抽出液から
採取してもよい。ＢＡ−８４３の採取には、微生物が生
産する代謝産物を採取するのに通常用いられる手段を適
宜に利用することが出来る。たとえば、溶媒抽出法。

イオン交去勢樹脂による吸脱着法，セルロースのカラム
クロマトグラフイーやセフアデックスＬＨ−２０（ファ
ルマシア社製）カラムによるゲル炉過法，溶媒沈澱法な
どの方法を単独あるいは組合せて利用される。なお、精
製工程中有効画分を確認するには、ＢＡ−８４３により
生育が阻止される微生物、たとえばバチルス・ズブチＩ
ＪスＰＣ１２１玖珠を用いるバイオアツセィ法と、薄層
クロマトグラフィーまたはペーパークロマトグラフィー
で展開したのち、上記被験菌によるバイオオートグラフ
ィーおよび／または、坂口試薬で発色させて検出する方
法を併用するのがよい。

次に、抗生物質ＢＡ−８４３の理化学的性状を示す。

ａ 元素分析： Ｃ＝４７．９２〜４９．９２％ Ｈ＝６．８３〜７．８３％ Ｎ＝１１．１３〜１３．１３％ ｂ 分子量： 約５０００〜７０００（蒸気圧法，エタノール）ｃ 融
分解点：２４３〜２５３０○
Ｚｄ 比施光度：〔ａ〕奪十○‐１５
±１０（Ｃ＝１‐０，メタノ−ル）ｅ 紫外部吸収スペ
クトル：２２０〜３６仇ｈ仏の間で特徴的な紫外部吸収
極大Ｊを示さない。

第１図参照。ｆ 赤外部吸収スペクトル： ＫＢｒ法におけるスペクトルを第２図に示す。

主な吸収波数は次の通りである。３４００肌‐１（Ｓ）
，２９５０肌‐１（Ｍ）， ２１７３０肌‐
１（Ｗ），１６６５伽‐１（Ｓ），１６２５伽‐１（Ｓ
），１５４０肌‐１（Ｍ），１４５０肌‐１（Ｍ），１
２５０伽‐１（Ｍ），１２００仇‐１（Ｗ），１１０５
伽‐１（Ｍ），１０１０伽‐１（Ｗ）
２（ただし、Ｓ，Ｍ，Ｗは強，中，弱をそ
れぞれ示す。

）ｇ 溶解性： メタノール，エタノール，プロパノール，およびブタノ
ールに易溶、水，酢酸エチル，アセ３０トン，クロロホ
ルム，ベンゼンおよびエーテルに難溶。

ｂ 呈色反応： 腸性：坂口反応，ヨード反応 陰性：ニンヒドリン反応，過マンガン酸カリ汐ウム反応
，エールリッヒ反応，ィサチン反応，キルシコール反応
，ラィドン，ス ミス反応。

ｉ 物質の色： 白色 ｉ 薄層クロマトグラフィー： １ セルロース（東京化成製，スポットフィルム，微結
晶セルロース）９９％メタノール：Ｒｆ〇．４９ ブタノール：エタノール：水（４：１： ５）：Ｒｆｏ．５０ ７０％プロパノール：Ｒｆｏ．７２ プタノール：酢酸：水（３：１：１）： Ｒｆｏ．６３ ０ シリカゲル（東京化成製，スポットフィルム，シリ
カゲル）：９９％メタノール：Ｒｆ〇．〇 ブタノール：エタノール：水（４：１： ５）：Ｒｆｏ．０６ プロパノール：ピリジン：酢酸；水（１５：１０：３：
２）：Ｒｆｏ．６４ｋ 構成アミノ酸組成： ＢＡ−８４３を６規定塩酸中１１ぴ○，２４時間加水分
解した後のアミノ酸組成をアミノ酸分析計で調べるとア
ルギニン，スレオニン，セリンおよびプロリンが１：１
：１：２（モル比）の割合で検出された。

この他に、ヒドロキシプロリンと思われるピークおよび
未知のニンヒドリン腸性ピークが検出された。１ 塩基
性，酸性，中性の区別：中性 次にＢＡ−８４３の生物学的性状について述べる。

ＢＡ−８４３の各種微生物に対する抗菌スペクトルは第
１表に示す遮りである（寒天希釈法）。

第１表 抗菌スペクトル 注：培地：トリプテイカーゼ・ソイ・ブロス寒天第１表
から、ＢＡ−８４３はグラム場性菌に有効なべプチド系
抗生物質であることは明らかである。

従来、細菌によって生産されるべプチド系抗生物・質に
ついては数多〈報告されている。ケミカル・アブストラ
クト（ＣｈｅｍｉｃａｌＡｂｓｔｒａｃｔ）。オーカニ
ツシヱ・ヘミー（〇ｒｇａｎｉｓｅｈｅ Ｃｈｅｍ鷺）
（Ｂｅｉｌｓｔｅ■），ジヤーナル・オブ・アンテイビ
オテイクス（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｅ
ｓ），アンテイビオテイクス・アンド・ケモセラピー（
ＡｎｔｉｂｉｏｔにｓａｎｄＣｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）
，アワテイビオテイクス・アニユアル（Ａｈｔｉｂｂｔ
ｉｃｓＡｎｎ雌１），アンテイマイクロノゞイアル・エ
ージェント・アンド・ケモセラピ （ Ａｎｔｉ
ｍｂｒｏｂｉａｌ Ａ袋ｎｔ ａｎｄＣｈｅｍｏ比
ｅｒａｐｙ），インデックス・オブ・アンテイビオテイ
クス・フロム・ストレプトミセス（Ｉｎｄｅｘｏｆ他肋
ｊｏｔｉｃｓｆｒｏｍ Ｓｔｒｐｔｏｍｙｃｅｓ），ア
ン ティビ オ ティクス（ 抑肋ｉｏｔにｓ刀Ｔ．Ｋ
ｏｒｚｙ戊ｋｉ ， ｚ．Ｋｏｗ６ｚｙｋ − Ｇｉｎ
ｄ辻ｅｒ ，Ｗ．Ｋｍｙｌｏｗｉｃｚ著），抗生物質（
住木論介著，上，下，補１，Ｄ），抗菌性物質（梅沢純
夫署）などの記載や、その後の特許公報の記載とＢＡ−
８４３の理化学的性質とを比較したが、一致する物質は
全く見出しえなかった。従って本発明者らはＢＡ−８４
３を新規抗生物質と断定した。上記したように、ＢＡ一
８４３はグラム陽性菌に対して有効である。

また、ＢＡ−８４３の毒性は、ＬＤ５。値が４００ｍｇ
′ｋｇ以上（マウス・腹燈内投与）で低毒性である。し
たがって、抗生物質ＢＡ−８４３は医薬として、たとえ
ば内服剤，注射薬，外用剤として化膿性疾患などの治療
に有用である。たとえば本抗生物質を０．０１％〜０．
１％量含む常套の局所用クリームや軟膏などの外用薬と
して人や動物（例、犬，ネコ，ラツト，マウス）に使用
しうる。、に をもってさらに詳細に本発明の内容
を説明するが、これによって本発明が限定されるもので
はない。

実施例 １栄養寒天斜面上に生育させたフラボバクテリ
ウム・アンテイビオテイクム（Ｆ１ａｖｏｂａｃＰｒｉ
ｍｍａｎ地ｊｏｔｉｃｕｍ）ＢＡ−８４３株（ＦＥＲＭ
−ＰＮｏ３９０５，ＩＦＯ−１３７１５）の菌体を、グ
ルコース１％，ベプトン１％，肉エキス０．６％，Ｎａ
ＣＩＯ．５％（ｐＨ７．０）からなる培地５０仇ｈｌを
２そ客坂口フラスコに入れ、１２０℃で２び分間蒸気殺
菌したもの２本に接種してキ２８ｑｏで４癖間往復振濠
培養して・その培養物を種菌とする。

次に、ブドウ糖２％，可溶性澱粉２％，プロフロ１％，
脱脂大豆粉１％，硫酸マグネシウム０．０５％，炭酸カ
ルシウム０．５％からなる培地１００〆を２００そ客ス
テンレス製発酵槽に入れ、その液性を３０％苛性ソーダ
溶液にてｐＨ６．５に調整し、１２０ｏｏで２０分間蒸
気殺菌したのち、前記種菌を接種した。

次いで温度２がｏ，通気量１００ぞ／分，損梓回転数１
８仇ｐｍの発酵条件下で培養を続けると、４１時間後に
はその培養液のバチルス・ズブチリスＰＣ１２１９株に
対する抗菌活性は最大となる。

このようにして得られた培養液９０のこ等量のアセトン
を加え、１時間蝿拝を続けたのち、ハイフロ スーパー
セル（米国，ジョンズ・マンビル・プロダクト社製造）
７ｋ９を加えてよくかきまぜた。混合物を加圧式炉過器
で炉遇し、１６０その炉液をえた。得，られた炉液を減
圧濃縮器に入れ、減圧下でアセトンを留去せしめ７０そ
の濃縮液をえた。この濃縮液のｐＨを塩酸で３．０に調
整し、３５そのｎ−ブタノールを加えて混合したのち、
ｎーブタノール層と水層に分けた。水層にはさらに３５
そのｎ−ブタノールを加えて混合し、同様にｎ−ブタノ
ール層と水層にわけた。ｎーブタノール層を合せて３５
その水で洗浄後、減圧下で濃縮し７その濃縮液をえた。
これに水９３そを加えて薄めたのち、ダウェツクス１×
２（酢酸型，ダウ・ケミカル社製）１０とを充填したカ
ラムに通液し、カラムを３０その水で洗練したのち、０
．州酢酸ナトリウム５０％メタノール溶液で漆出した、
この溶出液の活性画分１５そを減圧下に濃縮し０．５そ
の濃縮液を得た。この濃縮液を１０そのセルロースカラ
ムにかけ水飽和ブタノールにて展開綾出した。抗菌活性
を有する画分を集めて濃縮し、セフアデツクスＬＨ−２
０（フアーマＺシア社製）カラムにかけ９９％メタノー
ルで漆出した。活性画分を集め、減圧下で濃縮した。こ
の濃縮液にアセトンを滴下し、生じた沈澱をガラスフィ
ルターで炉別乾燥し、白色のＢＡ−８４９扮末５夕をえ
た。 Ｚ実施例 ２実施
例１と同様に培養した培養物８０夕にトプコ・パーラィ
ト（東興パーラィト工業■）６ｋ９を加えよくかきまぜ
た。

これを減圧炉過して炉液４７そと湿菌体含有物３５そを
えた。この炉液のｐＨを３５％硫酸で３．０に調整した
のちｎ−ブタノール７０夕を加え損洋混合した。ｎ−ブ
タノール層と水層に分離したのち、ｎ−ブタノール層を
減圧下で濃縮し、濃縮液４そをえた。これを実施例１と
同様に処理し、ＢＡ−８４３扮末２．５夕をえた。実施
例 ３実施例２で得られた湿菌体含有物３５そに７０％
アセトン３５〆を加え、１時間魔梓抽出した。

この混合物を減圧炉遇して炉液４８夕をえた。これを減
圧下で濃縮し３その濃縮物を得、以下実施例１と同様に
処理し、ＢＡ−８４群粉末２夕をえた。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＢＡ−８４３の紫外部吸収スペクトル
を第２図は抗生物質ＢＡ−８４３の赤外部吸収スペクト
ルをそれぞれ示す。 第２図 多ｌ図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の性質を有する抗生物質ＢＡ−８４３；ａ）元素
   分析：Ｃ＝４７．９２〜４９．９２％ Ｈ＝６．８３〜７．８３％ Ｎ＝１１．１３〜１３．１３％ ｂ）分子量： 約５０００〜７０００（蒸気圧法、エタノール）ｃ）分
   解点：２４３〜２５３℃ ｄ）比施光度： 〔ａ〕＾２＾５＿Ｄ＋０．１５±１°（ｃ＝１．０，メ
   タノール）ｅ）紫外部吸収スペクトル： ２２０〜３６０ｍμの間で特徴的な紫外部吸収極大を示
   さない。 ｆ）赤外部吸収スペクトル： ＢＡ−８４３のＫＢｒ法における主な吸収波数とその強
   弱：３４００ｃｍ＾−＾１（Ｓ），２９５０ｃｍ＾−＾
   １（Ｍ），１７３０ｃｍ＾−＾１（Ｗ），１６６５ｃｍ
   ＾−＾１（Ｓ），１６２５ｃｍ＾−＾１（Ｓ），１５４
   ０ｃｍ＾−＾１（Ｍ），１４５０ｃｍ＾−＾１（Ｍ），
   １２５０ｃｍ＾−＾１（Ｍ），１２００ｃｍ＾−＾１（
   Ｗ），１１０５ｃｍ＾−＾１（Ｍ），１０１０ｃｍ＾−
   ＾１（Ｗ），（ただし、Ｓ，Ｍ，Ｗは強，中，弱をそれ
   ぞれ示す。 ）ｇ）溶解性： メタノール，エタノール，プロパノールおよびブタノー
   ルに易溶，水，酢酸エチル，アセトン，クロロホルム，
   ベンゼンおよびエーテルに難溶。 ｈ）呈色反応： 陽性；坂口反応，ヨード反応 陰性；ニンヒドリン反応，過マンガン酸カリウム反応，
   オルシノール反応，ライドン・スミス反応，エールリツ
   ヒ反応，イ サチン反応。 ｉ）物質の色： 白色 ｉ）塩基性，酸性，中性の区別：中性 ２ フラボバクテリウム属に属する抗生物質ＢＡ−８４
   ３生産菌を培地に培養し、抗生物質ＢＡ−８４３生成蓄
   積せしめ、これを採取することを特徴とする抗生物質Ｂ
   Ａ−８４３の製造法。