JPS596891A - 抗生物質ｙ−１８０５５およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗生物質Ｙ−１８０５５およびその塩
、ならびにその製造法に関する。

本発明者らは、新規々抗生物質の製造を目的として、多
数の土壌から微生物を分離し、それが生産する抗生物質
を検索し九ところ、福岡県築上郡太平村にて採取した土
壌から分離された微生物が新規な抗生物質を生産すゐこ
と、当該微生物がストレプトミセス属に属すること、生
産され九抗生物質はグラム陽性細菌およびグラム成性細
菌に対して広範囲に抗菌力を示すことを知り、この抗生
物質を単離し、その理化学的性質および抗菌活性３− などから、本発明の抗生物質は新規物質であることを確
認し、これを抗生物質Ｙ−１８０５５と称することにし
た。

すなわち、本発明は、（１）抗生物質ｙ−ｉ８０５ｇお
よびその塩、ならびに（２）ストレプトミセス属に属す
る抗生物質Ｙ−１８０５５生産菌を培地に培養し、培養
物中に抗生物質Ｙ−１１１０５５を生成蓄積させ、これ
を採取することを特徴とする抗生物質Ｙ−１８０５５の
製造法に関する。

本発明の抗生物質ｙ−１８０５５を製造するにあたって
は、ストレプトミセス属に属すゐ抗生物質ｙ−１８０５
５生産菌が用いられる◎その一例として、以下の菌学的
性状を示すａ４−１株があげられゐ。

（１）形態的特徴 胞子柄は直線状ないし曲状であり、長く伸長し４− ている。

一本の胞子の連鎖は、１０個から５０個以上など、さま
ざまである。胞子の形態は円筒形が多く、その表面杖平
滑である。

胞子の大きさは、０．６〜０．７　Ｘ　０．９〜１．１
ミクロン程度である。

胞子柄は単純妙技であシ、ループ状、カギ状または螺旋
状にはならない。

その他の特殊な器室の形成は認められない。

（２）各種培地における生育状態 各種培地上での３０℃、１４日間培養後の性状は第１表
の過多である。

−以下余白一 第１表 （３）生理的性質 ■生育温度範囲（ワックスマン培地上、１週間培＊）＄
　８〜３７℃で生育する。至適温度は２０℃〜３０℃で
ある。

■ゼラチンの液化（グルコース管ペプトンゼラチン培地
上、２１’Ｃ１２週間）Ｘ陽性■スターチの加水分解（
スターチ寒天培地上）：陽性 ■脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：ともに陽性■メラニン
様色素の生成（チロシン寒天培地およびペプトンΦイー
ス）９ｍｍ天地地上寡ともに随性 （４）各種炭素源の同化性（プリドハム中ゴツトリープ
寒天培地上、３０’Ｃ１２週間）は、第２表に示した通
りである。

一以下余白一 ７− 第　　　２　　　表 ｔｊＩＩＩ２表中、「十」は生育するを、「−」は生育
しないことをそれぞれ意味すゐ。

以上の性状から、０４１株はストレプトミ（ス属に属す
ることは明らかである。本菌株の特徴は、胞子形成菌糸
は［線状な−し曲状で、胞子は８− 円筒状で、その表面は平滑であること、種々の培地上で
の発育は良好で、淡黄色の基生菌糸の上に灰色ないし淡
黄色の気菌糸を着生すること、スターチの加水分解およ
び脱脂牛乳の凝固・ペプトン化が陽性であシ、メラニン
色素産生が観察されないこと、ならびにＤ−グルコース
、Ｌ−ラムノース、Ｄ−マンニット、Ｄ−ガラクトース
ｔ−資化Ｌ、シュクロース、イノシトール、ラツイノー
スヲ資化しないという点にある。そこで、既知の菌株に
ついて、パーシースＱマニュアル―オプΦデイターミネ
イティブ嗜バクテリオロジ−（Ｂａｒｇｅゾ８Ｍａｎｕ
ａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｙｅ　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ　）＄１１（１９７４年）およびインタ
ーナシ目ナル脅ジャーナル・オプ脅システマテイツク・
バクテリオロジー（工ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｙａ　−ｔａｍａｔｉａ　Ｂａｏ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）を検索したとζろ、最も近縁な
菌株としてスト１／ブトミセスＩ７アルボビリデイス（
８ｔｒｅｐｔｏｍｙｏｅａ　ｆｕｌｙｏｖｉｒｉｄｉａ
）があげられる。

本発明者らは、さらに詳細に検討した結果、本発明の０
４−１株はほとんどの点でストレプトミセス９７アルポ
ビリデイス（８ｔｒｅｐｔｏｍｙｏｅａｆｕｌｖｏｖｉ
ｒ１ｄｉｓ　）と一致した性質を有することが判例した
ので、ストレプトミセス曹７アルボビリデイス（８ｔｒ
ｓｐｔｏｍｙｏａａ　ｆｕｌｖｏｖｉｒｉｄｉｓ）　０
４−１株と同定した。

本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌
寄第６２６３号として受託されている。

さらに１本菌株は（財）発酵研究所（大阪市淀用区十三
本町２丁目１７−８５　）に工ｈｏ　１４１４３として
も寄託されていゐ。

以上のような性質を有する０４−１株の諸性質は、一定
したものではなく、自然的または人工的に容易に変異す
ることは周知の通りであり、本発明で使用しうる菌株は
、ストンブトミセス属にＸし、抗生物質Ｙ−１８０５５
を生産する菌株すべてを包合するものである。

本発明方法における培養は一般放線菌における培養方法
に準じて行なわれ、液体培地中での振盪培養あるいは通
気撹拌培養によるのが好ましい。

培地成分としては、放線菌の栄養源として公知のものが
使用され、たとえば、炭素源としてブドウ糖、グリセリ
ン、マルトース、デキストリン、スターチなどが、窒素
源としては大豆粉、綿実粉、ペプトン、肉エキス、コー
ン［株］スチープΦリカーなどが、無機塩としては食塩
、リン酸塩、炭酸カルシウムなどが、微量金属塩として
硫酸第一鉄、硫酸ｉグネシクム、硫酸亜鉛、塩化マンガ
ン、塩化コバルトなどが必要に応じて適宜添加される。

液体培養に際しては、シリコン油、界面活性剤、植物油
などが消泡剤として適宜使用される。培地のｐＨは弱酸
性ないし中性、培養湿度は２３〜２８℃特に２５℃前後
が好ましい。培養液中に生産される抗生物質Ｙ−１１１
０５５の力価の経時的変化は、被検菌としてニジエリシ
ア０コリ（ｌｉｌａｏｈｅｒｉｏｈｉａｏｏｌｌ　）　
ＮＩＨＪ　　Ｊ　Ｏ−２を用いるディスク検定法によ）
測定される。通１に６０〜９０時間の培養で、抗生物質
Ｙ−１８０５５の生産量は最高に達す小。

培養液よ９抗生物質Ｙ−１１１０５５を採取するには、
その性質を利用して一般の抗生物質の採収の方法に準じ
て行えばよい。

抗生物質Ｙ−１８０５５は、水によく溶け、主剤とする
ｐ過操作あるいは遠心分離によって除去し、そのｐ液あ
るいは上清中に存在する抗生物質Ｙ−１８０５５は、後
記する理化学的性状を利用することによ如、抽出精製す
ることができる。たとえば、抗生物質Ｙ−１８０５５が
安定である中性付近のみで酸性物質として挙動すること
を利用し、陰イオン交換体あるいは合成吸着剤Ｖｃ吸脱
着させて精製することができる。

陰イオン交換体としては、Ｄ１ｆｔＡｌｔ！−セファデ
ックス、ＱＡＮ−セファデックス（ファルｉシア　　　
　　ｉｔ［）、：ｏｎＡＨ−セルロース、ダイヤイオン
Ｐム−３０６（三菱化成社製）などが、台成吸肴剤とし
ては、ダイヤイオンＨＰ−１０、ＨＰ−２０（三菱化成
社製）、アンバーライ））ｌ：ＡＤ−２（ローム幸アン
ド中ハース社製）などが利用できる。

また、酸性物質の性質を利用して、ジメチル・ベンジル
９セチルアンモニウムやクロライドのよ靭 うな４１１１アンモニクム塩を水と混和しない溶媒、た
とえばジクロルメタンに溶解し、抗生物質Ｙ　−ｔａｏ
ｓｓを水溶液から４級アンモニクム塩として抽出する方
法も用いられる。

さらに、抗生物質Ｙ−１８０５５を精製する丸めには、
アビ七ル（旭化成社製）などのセルロースあるいはシリ
カゲルのような担体を用いた分配クロマトグラフィーや
、セファデックスＧ−１０、Ｇ−１５およびＬＨ−２０
（ファ）Ｖ−ｑレア社製）、バイオダルＰ−２（バイオ
・ラッド脅ラボラトリー社製→を担体とする分子ふるい
りａ−ｖ）グラフィーが適している。

抗生物質Ｙ−１８０５５は粉末状態では乾燥剤存在下で
低温保存すれば比較的安定であるが、水溶液中では酸性
で極めて不安定でアシ、アルカリｇ↓５− る。

性で不安定である。ｐＨ６，５〜８．０の間が最も安定
であるが、中性溶液中でも商況では速やかに分解する。

従って、培養液から抗生物質Ｙ−１８０５５を単離する
にあたっては、溶液のｐＨが６．５〜８．０の間を維持
するように細心の注意を払い、溶液での取扱いは、低温
（１０℃以下）で、かつ迅速に行うことが肝要である。

抽出、精製過程における抗生物質Ｙ−目１０ｆ１５の確
認は、培養液中の蓄積ｉ認と同じく、ディスク検定法に
よる抗菌試験によυ行った。また、後述の高速液体クロ
マトグラフィーにて行う。以上の精製手段を適宜に組合
せるか、必要に応じて反復して用いることによって抗生
物質Ｙ−１８０５５を精製単離することがでらる。

このようにして得られた抗生物質ｙ−１８０５５のナト
リウム塩は以下の理化学的性質を有してい１６− ベンゼンに不溶 （１）形状ト微黄色粉末（凍結乾燥した試料）（２）元
素分析値（測定値）８ ８５０．１８％、Ｈ３，９０％、Ｈλ９４％、ｓｌ、ｌ
り％（３）分子量ｇ　３　Ｓ　９　（マススペクトルに
よゐ、）（４）紫外線吸収スベタトル喜 ０．０１Ｍリン酸緩衝液（１）Ｈ？、０）中の紫外線吸
収スペクトルは第１図に示した通りである・（５）赤外
線吸収スペクトル（臭化カリクム＃り８第２図に示し九
過多であゐ。

（６）プロトン核磁気共鳴スペクトル（重水、２７９Ｍ
Ｈｚ）客 重水中の２７０ＭＨｚプシトン核磁９Ｌ共鳴スペクトル
はｉｓ３図に示し九通りである。

（７）溶剤に対す、ｉ＋１解性」本に島溶、メタノール
に宥干可ｓ、ア七トン、酢酸エチル、クロロホルム１（
８）呈色反応； 陽性寡塩化第二鉄反応 陰性窓ニンヒドリン反応 （９）薄層クロマトグラフィー（検出はバイオオートグ
ラム法による。）Ｘ （ａ）Ｒｆ　＝　０．９１ ブタノール８インプロパツール８水（７＄７＄６）、セ
ルロース（イーストマン社製、イーストマンクロマトシ
ー）６０６４） （ｂ）Ｒｆ＝　０．４１ ブタノール；メタノール８水（４ｆｌ寡２）、シリカゲ
ル（イーストマン社製、イーストマンクロマトシー）６
０６０） （ｃ）　Ｒｆ　＝　０．６２ プロパツールｇＯ，ＩＭリン酸ａ衝液（ｐ）１７．０）
（７寥３）、シリカゲル（イーストマン社製、イースト
インクロイトシー）６０６０）（ト）高速液体クロマト
クリフィー（島津製作所製）８Ｒｔ＝８．０分 カラム＋Ｌｓ−４ｉｏ（ｌｏｆｉ、東洋曹達製）（内径
４Ｘ１５０ｍｍ） 溶媒８アセトニトリル＄　０．　Ｉ　Ｍ酢酸アンモニク
ム（１ｇ９９） 流速寞２ｒｒｔｅ１分 検出器客紫外線３００　ｎｍ 次に、抗生物質Ｙ−１８０５５の生物学的性質について
述べる。抗生物質Ｙ−１８０５５のナトリウム塩の各種
微生物に対する最小生育阻止濃度は第３１Ｌに示す過多
である。なお、最小生育阻止濃度は、日本化学療法学★
ｖＩＡ準法によ如測定し九。

第３表 ＝１９− 培地は、トリプトソイ寒天を用いた。拳印を付し九被検
菌は馬血清を１０％添加したトリプトソイ寒天培地を用
い友。′！！九、串串甲を付した被検菌はβ−ラクタム
高度耐性株である。

以上の諸性質から、抗生物質Ｙ−１８０５５は、２０− β−ラクタム系抗生物質と推定される。

本発明によって得られる抗生物質Ｙ−１８０５５は、上
記の抗菌スペクトルから明らかなように、ダラム陽性菌
およびダラム陰性菌に対して広範囲に抗菌力を示す。し
たがって、抗生物質Ｙ−１８０５ｓは哺乳動物（！クス
、ラット、モルモット、サル、ヒトなど）の細菌感染症
の治療に用いることができる。

抗生物質Ｙ−１８０５５を、たとえば大腸菌感染症の治
療薬として用いるには、たとえば、抗生物質Ｙ−１８０
５５を生理的食塩水に溶解して注射剤として皮下ま九は
筋肉内に０．１〜５０ｗｖ／Ｋｆ／日、好ましくは０．
５〜２（Ｊｌｆ／ＫＷ／日投与する。

また、経口剤として、抗生物質Ｙ−１８０５５を乳糖と
混合してカプセル剤とするか、または、タルク、ステア
リン酸マグネシクム、メチルセル″口−スなどと１％査
して打錠し、錠剤とするか、さらに、これを糖衣錠とし
て、抗生物質Ｙ−１８９５５としテ１〜１００ｖ／Ｋｆ
／１１、ｕｔＬ＜Ｕ５〜ＳＯｑ／Ｋｇ／日投与する。

次に、実施例によυ本発明をさらに詳細に説明するが、
これによって本発明が限定されゐものではないことは言
う壕でもないことである。

実施例 ストンブトミセス９７アルボビリデイスａ４−１株を１
００ｔｎｌの下記ム培地を金む５００−賽三角フラスロ
に一白金耳接種し、２５０ｒｐｍで、２８℃、７２時間
振盪培養した。

ム培地 可溶性デンプン　　３．０％（重量／容量）大豆粉　　
　　　　２．０ ａｕｓｏ４＠５ｎ２ｏ　　　　Ｏ，０００１Ｍｎ０１２
＠４Ｈ２００，００Ｑ　ｌ ＺｎＣｌ２　　　　　　　　ｏ、ｏ　００１０ｏＣ！１
２”　６Ｈ２００，０００５ｐＨ６，５（殺菌前） との種培養液を上記ム培地５００１ｎｌｅ膏む２１容三
角フラスコに１０−接種し、２５０　ｒｐｍで、２８℃
、４８時間回転振盪培養機で培養した。この第２段種培
養液２１を１００／のム培地を含む１７０１容培養槽に
接種し、通気量毎分６０１゜撹拌＆　２　Ｓ　Ｏｒｐｍ
で２５℃にて７２時間培養し、Ｃ４−１株を含む４Ｕ／
１ｎｌの培養液が得られた。

このようにして得られ九培簀液を遠心処理し、得られた
上清９０１を直ちに５℃に冷却し、２ｏｌツタイヤイオ
ンＨＰ−１０を充填したカラｌ’通過させ、５０１のｉ
ｔｏ％アセトンと水との混液で溶出する。溶出液を２１
ずつ分画し、ディスクＱ３− 検定法によ９約４１の活性分画を得る。これを凍結乾燥
することによ９得られる茶褐色粉末的８０ｇを、予め調
製し九ＳｔのセツアデツクスＬＨ−２０を充填したカラ
ム中に通過させ、１０％アセトンと水との混液で展開さ
せる。溶出液をＩＳｄずつ分画し、ディスク検定法によ
り約ＩＩの活性分画を得る。これを凍結乾燥することに
よ如黄色または褐色の粉末的１ｓｔ−得る。大量分取液
体クロマトグラフ（ｐｒ＠ｐ　　Ｐム０，０１８カート
リツメカラム、すｒｓｔｅｍ　−５００、クオーターズ
社製）に付し、３％アセトニトリルと０．０２モル酢酸
アンそニクムとの混液で展開し、前記高速液体り！マド
グラフィーまたはディスタ検定法により　ｓ　ｏ　ｏｔ
Ｒｌの活性分画を得る。この液から減圧下にア七ト二ト
リルを留去し、予めＷ４製した５００ｔ！／のダイヤイ
オンＩＰ−１０を充填したカラム中を通過させ、Ｂ４− 説イオン水で展開する。各分画から前記方法によｐ活性
分画２００−を得る。これを凍結乾燥すると、淡黄色粉
末的３９ｊｖを得る。さらに、Ｔ８に−ＧＥＬ　　１，
８−４１０（内径２１．５門、長さ３０α、東洋曹達社
製）カラムを用い、０．０２モル酢酸アンモニウム溶液
を、流速３ｗｄ！／分で展開し、活性分画２００ｍｌを
得る。この液を２００ｍ１ダイヤイオンＨＰ−１０を充
填し九カラム中を通過させ、脱イオン水で展開し、活性
分画１００ｄを得る。これを凍結乾燥することにより微
黄色粉末３岬を得る。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図および第３図は、抗生物質Ｙ−１８０５
５のナトリウム塩の紫外線吸収スペクトル（０，０１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７，０）中〕、赤外線吸収スペクト
ル（臭化カリクム錠）および２７０ＭＨｚ７’ロトン核
磁気共鳴スペクトル（１Ｌ木中）をそれぞれ示す。 代理人　弁理士　高宮城　　勝 ＄１図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ナトリクム塩として次の理化学的性質を有する抗生
   物質τ−１８０５５およびその塩。 （１）形状；微黄色粉末（凍結乾燥した試料）（２）元
   素分析値（測定値→：Ｃ３（Ｌ１８％、ｕＬ９Ｑ％。 Ｍ　１９４％、Ｓ　　Ｌ８９％ （３）分子量：３５９（マススペクトルによる）（４）
   紫外線吸収スペクトル：（ＬＯロ１ン酸緩衡液（ｐＨ７
   ，０）中の紫外線吸収スペクトルはｇｌＩ１１図に示し
   た通りである。 （５）赤外線吸収スペクトル（臭化カリクム錠）：第２
   図に示し九通シである。 （６）プロトン核磁気共鳴スペクトル（重水、２７０Ｍ
   Ｈｚ）３重水中の２７０ＭＨｚプロトン核磁気共鳴スペ
   クトルは第３図に示した通知である。 （７）溶剤に対する溶解性重水に易溶、メタノールに若
   干可溶、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼ
   ンに不溶。 （８）呈色反応８ 陽性窓塩化第二鉄反応 陰性８ニンヒドリン反応 （９）薄層クロマトグラフィー（検出はバイオオートグ
   ラム法による。）８ （ａ）　　Ｒｆ＝０．９１ ブタノール軍イソプロバノールエ水（７；７１６）、セ
   ルロース（イーストマン社製、イーストインクロマトシ
   ート６０６４）（ｂｌＲｆ＝０．４皿 ブタノール菖メタノール；水（４１１＄２）シリカゲル
   （イーストマン社製、イーストマンクロイトシート６０
   ６０） （ｃ）　　Ｅ４−０．６２ プロパツールｔ　Ｏ，Ｉ　Ｍ　！Ｊン酸緩衝液（ｐＨ７
   ，０）（７＄３）、シリカゲル（イーストマン社製、イ
   ーストマンクローＷ）シート６０６０） （ト）高速液体クロマトグラフィー（島津製作所製）Ｉ
   ２を 材＝８．０分 力ｊＡｔｒ、、５−４１０（１０声、東洋璽達製）（内
   １！４Ｘ１５０ｍｍ） 溶　媒８アセトニトリル寥０．　Ｉ　Ｍ酢酸アン峰二り
   ｘ（＄３９９） 流速１２１１ｄ／分 検出器［外４１１３００ｎｍ ２、ストンブトミセス属に属する抗生物質Ｙ−１８０５
   ５生産菌を培地に培養し、培養物中に抗生物質Ｙ−１８
   ０５５を生成蓄積させ、これを採取することを特徴とす
   る抗生物質Ｙ−１８０５５の製造法。