JPS63192792A - 新規抗生物質ｓｆ２４８７物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は新規抗生物質ＳＦ２４８７物質、及びその製造
法に関するものである。

従来の技術及び発明が解決しようとする問題点従来、数
多くの抗生物質が発明され、医薬品、動物薬品等の分野
で実用化されている。しかしながらまだ有効な物質が見
出されないため解決されていない医療あるいは産業分野
が多く残されている。たとえば、細菌あるいはウィルス
感染症の化学療法分野においても、新しい作用をもつ新
規抗生物質を提供することは常に要望されている。

本発明者らは以上のような点に着目し、新規な抗生物質
を提供するとともにその製造法を確立することによって
これを解決しようとするものである。

問題点を解決するための手段 本発明者らはアクチノマデユラ属に属する特定の菌株を
培養することにより、ファージに対して増殖阻止作用を
有する物質が培養物中に生産、蓄積されることを見い出
し、その有効物質を採取することに成功した。さらに本
発明者らは、有効物質ＳＦ−２４８７物質を単離し、そ
の理化学的性状及び生物学的性状を確立することにより
本発明を完成した。

したがって本発明は、ナトリウム塩が下記の特性を有す
る新規抗生物質ＳＦ２４８７物質を提供するものである
。

（１）色及び性状：無色柱状結晶 （２）元素分析値： 実測値：　Ｃ６４，１６％、Ｈ８．１６％理論値：　Ｃ
６４，４３％、Ｈ８．１１％（３）分子量　　：　ＦＤ
−ＭＳ　ｍ／ｚ　７８３　［Ｍ十旧１５１−ＭＳ　ｍ／
ｚ　８０５　［Ｍ＋Ｎａ］＋（４）分子式　　”　Ｃ４
２Ｈ６３０１２”（５）融　点　　：　２５０−２５２
℃（分解）（ｃ＝０．１、メタノール） （７）紫外線吸収スペクトル： メタノール中二λｌ＄ＬＸ（ε） ２５２（１Ｈ００）、２９９（９８００）ｎｍ酸性メタ
ノール中：λｗａｘ（ε）２４８（１１８００）ｎｍア
ルカリ性メタノール中二λｍａｘ（ε）２４０（１０９
００）、３０５（６８００）ｎｍ（８）赤外線吸収スペ
クトル：　ＫＢｒ錠で測定したスペクトルを第１図に示
す。

（９）核磁気共鳴スペクトル二重クロロホルム中での水
素核核磁気共鳴スペクトルを第２図に、炭素核核磁気共
鳴スペクトルを第３図に示す。

（１０）　　１解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセ
トン、メタノールに易溶、水に難溶。

（１１）呈色反応：硫酸、ヨード、モリブデン酸及びレ
ミュー試薬に陽性、ニンヒドリン及びグレイグ・リーバ
ック試薬に陰性。

（１２）　　シリカゲル薄層クロマトグラフィーのＲｆ
値ニ ジエチルエーテル　　　　　　　０．７３クロロホルム
：メタノール（５０：１）０．４８ｎ−ヘキサン：アセ
トン（８：２）　　　０．２７さらに本発明は、アクチ
ノマデユラ属に属する抗生物質ＳＦ２４８７物質生産菌
を培養し、その培養物から抗生物質ＳＦ２４８７物質を
採取することを特徴とする抗生物質ＳＦ２４８７物質の
製造法を提供するものである。

前記のＳＦ２４８７物質の理化学的性状及び生物学的性
状から、本物質はポリエーテル系抗生物質に分類される
と考えられる。さらに、銀塩結晶によるＸ線解析から本
物質の構造は次式と決定された。

現在まで数多くのポリエーテル系抗生物質が知られてお
り、その部分構造にテトロン酸を有する物質としてはＴ
ｅｔｒｏｎｏｍｙｃｉｎ（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔ、　ｖ
ｏｌ。

３５　ｐ、１４２−１５０　１９８２年）及びＨ−１３
９６０３物質（Ｊ。

Ｃ，Ｓ、Ｃｈｅｗ、Ｃｏｗ、　ｐ、１０７３−１０７４
　１９８１年）が知られているが本発明ｎＳＦ２４８７
物質とは異なる物質である。さらに、本物質と同じ物理
化学的性質並びに化学構造を有する物質は、従来知られ
ていない。従ってＳＦ２４８７物質は新規抗生物質であ
ると判断された。

本発明に使用される新規抗生物質ＳＦ２４８７物質の生
産菌の一例としては、千葉県茂原市の土壌から新たに分
離されたＳＦ２４８７株がある。

ＳＦ２４８７株の菌学的性状は下記の通りである。

１、形態 基土菌糸は、よく伸長分岐し、通常の条件下では分断し
ない。スターチ寒天、オートミール寒天、イースト麦芽
寒天、グリセロール・アスパラギン寒天上などで気菌糸
を着生し、胞子を形成する。気菌糸の分岐は単純分岐で
車軸分岐は見られない。気菌糸先端の胞子連鎖は波状な
いしループ状となる。電子顕微鏡による観察では、胞子
は円筒形ないし楕円形で０．５〜ｏ、ｓｘｏ。

８〜１．５ミクロンの大きさを有し、しわ状ないし、い
ぼ状である。胞子は２〜１０個程度連鎖する。

胞子のう、運動性胞子、菌核等は観察されない。

■、各種培地上の生育状態 ＳＦ２４８７株の各種培地上の生育状態は第１表に示す
通りである。色の記載について（）内に示す基準はフン
テイナー・コーポレーション・オブＯアメリカ（Ｃｏｎ
ｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔ’＋ｏｎ　ｏｆ　Ａ１
１ｅｒｉｃａ）社製「ｈ　ラー・ハーモニイー・マニア
ル（Ｃ。

ｆｏｒ　ＨａｒｌＩＩｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）ｊに記載
のものを用いた。

観察は２８℃で１４〜２１日培養後に行なった。

■、生理的性質 （１）生育温度範囲：１５〜４２°Ｃの温度範囲で生育
し、２５〜３０℃で良好に生育する。

（２）ゼラチンの液化：陰性 （３）スターチの加水分解：陽性 （４）硝酸塩の還元：陽性 （５）脱脂乳のペプトン化：陰性 脱脂乳の凝固：陰性 （６）耐塩性：４％の食塩含有培地では生育するが、５
％以上では生育しない。

（７）　メラニン様色素の生成：陰性 ■、炭素源の利用性 （１）利用する二〇−グルフース、Ｄ−７ラクトース、
Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−マンニトール
、 （２）利用しない；グリセロール、ｍｙｏ−イノシトー
ル、し−ラムノース、シュークロース、ラフイ／−ス ■、細胞壁組成 全画体加水分解物中のアミノ酸としては、メソ型ジアミ
ノピメリン酸を有し、糖としては、マジェロースが検出
された。

以上の性状か呟ＳＦ２４８７株は放線菌の中で７クチノ
マジユラ属に属すると考えるのが妥当である。従って、
本発明者らはＳＦ２４８７株を７クチノマジユラ・エス
ピーＳＦ２４８７（八ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　ｓｐ、
ＳＦ２４８７）と称することにした。

ＳＦ２４８７株は、工業技術院微生物工業技術研究所に
微工研菌寄第９０６３号（ＦＥＲＮ　Ｐ−９０６３＞と
して受託されている。

ＳＦ２４８７株は他の放線菌の場合に見られるように、
その性状が変化しやすい。例えば、ＳＦ２４８７株の、
またはこの株に由来する突然変異株（自然発生または誘
発性）、形質接合体または遺伝子組換え体であっても、
抗生物質ＳＦ２４８７物質を生産するものは全て本発明
に使用出来る。本発明の方法では、前記の菌を通常の微
生物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄
ｇｌ源としては、グルコース、水あめ、デキストリン、
シュクロース、澱粉、糖みつ、動・植物油等を使用でき
る。また窒素源として、大豆粉、小麦はい芽、コーンス
テイープリカー、綿実かす、肉エキス、ペプトン、酵母
エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用
でとる。その他、必要に応じ、ナトリウム、カリウム、
カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫
酸、及びその池のイオンを生成することができる無機塩
類を添加することは有効である。また菌の発育を助け、
抗生物質ＳＦ２４８７物質の生産を促進するような有機
および無機物を適当に添加することができる。

培養法としては、好気的条件での培養法、特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は、１５〜４２
゛Ｃであるが、多くの場合、２５〜３０℃付近で培養す
る。抗生物質ＳＦ２４８７物質の生産は培地や培養条件
により異なるが、振どう培養、タンク培養とも通常３〜
１０日の間でその蓄積が最高に達する。培養物中の抗生
物質ＳＦ２４８７物質の蓄積量が最高になった時に培養
を停止し、培養液から目的物質を単離精製する。

かく生産されるＳＦ２４Ｓ７物質は前記する理化学的性
状を有するので、その性状に従って培養液から精製する
ことが可能であるが、特に以下の方法により効率的に精
製できる。

すなわち、有効成分を含む培養物から固形物を濾別し濾
液と固形物とに分ける。固形物はアセトン等の水と自由
に混合する溶媒を加えて攪拌し、固形物から有効成分を
抽出し、有機溶媒を留去した後、先の濾液とともに、吸
着樹脂、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社製）で処
理して活性物質を樹脂に吸着する。ついでアセトン等の
適当な溶媒にて溶出し、溶出液を減圧濃縮することによ
り溶媒を留去し、水溶液とする。この水溶液より酢酸エ
チル等の水と混和しない有機溶媒を用いて有効成分を抽
出する。抽出液の溶媒を留去して得な油状物質を少量の
溶媒に溶解し、シリカゲル、ゲル濾過剤等の担体を適宜
組み合わせて使用し、ＳＦ２４８７物質を単離する。

単離されたＳＦ２４８７物質を酢酸エチル等の有機溶媒
に溶解し、酸性水と撹拌し、純水で洗浄後、水酸化す）
　＋）ラム水と攪拌する。有機溶媒を純水で洗浄後、有
機溶媒を減圧濃縮し、得られた残留物をメタノール等の
溶媒系を用いて結晶化することによりＳＦ２４８７物質
のナトリウム塩結晶を得る。

ＳＦ２４８７物質の検定に当たっては、バチルス・ズブ
チルス５Ｒ２２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ
　５Ｒ２２）を宿主菌とする５ＰＩ０７７−ジを検定菌
とする生物学的検定法、及びシリカゾル薄層クロマトグ
ラフィーによる化学的検定法を用いることができる。

大嵐医 以下に本発明の実施例を示すが、これらは単なる一例で
あって本発明を限定するのもではない。ここに例示しな
かった多くの変法あるいは修飾手段を用いうろことは勿
論のことである。

実施例１ 種培地として、スターチ２．０％、グルコース１．０％
、小麦胚芽０．６％、ポリペプトン０．５％、酵母エキ
ス０．３％、大豆粉０．２％、炭酸カルシウム０．１％
を含む培地を用いた。

また、生産培地として、水飴３．０％、大豆油０．２％
、綿実粕０．５％、サングレインＦ２．１５％、炭酸カ
ルシウム０．１％、硫酸第１鉄（７水塩）０．０００５
％、塩化コバルト（６水塩）０．０００５％、を含む培
地を用いた。

なお、殺菌前ｐｕはすべてｐＨ７，０に調製して使用し
た。

前記種培地２０ｒｎ（ｌを分注した１００ｄ容三角フラ
スコを１２０℃で３０分間殺菌し、これにアクチノマジ
ュラ・ニス・ピー・ＳＦ２４８７（ＦＥＲＮ　Ｐ−９０
６３）の斜面培養の２〜３白金耳を接種し、２８°Ｃで
４日間振盪培養し、第１種培養とした。ついで種培地８
０ｍ！を分注した５００ｄ容三角フラスコを１２０°Ｃ
で３０分間殺菌し、前記第１種培養４Ｊを接種し、２８
°Ｃ２日間振盪培養し、これを第２種培養とした。さら
に種培地責を分注した５１容三角フラスコを１２０’Ｃ
で３０分間殺菌し、第２種培養５０社を接種し、２８℃
２日間振盪培養し、これを第３種培養とした。

予め１２０°Ｃ３０分間殺菌した３５＆の生産培地を含
む５０１容ジヤー７アーメンターに前記の第３種培養１
ρを接種し、２８℃６日間通気（２ＯＮ／分）、攪拌（
初期２５０ｒｐａ＋、６５時間以降３５０ｒｐｍ）培養
した。

培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて濾過した。

得られた菌体を５０％アセトン水で抽出し、菌体抽出液
２０１を得た。さらに、菌体抽出液を減圧濃縮してアセ
トンを留去した水層８βを濾液２０１と合わせてダイヤ
イオンＨＰ−２０（三菱化成社製）４１の塔にかけ有効
成分を吸着させた後、水２ＯＲ及び５０％メタノール水
２０１で洗浄後、５０％アセトン水により有効成分を溶
出した。さらに、溶出液から減圧濃縮によりアセトンを
留去した水層８１に酢酸エチル１囲を加え、攪拌し有効
成分を酢酸エチル層に抽出した。この酢酸エチル抽出液
を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮し、油状
物質３．５ｇを得た。この油状物質をメタノールに溶解
しシリカゲル（Ｃ−２００、ワフーデル、和光純薬社製
Ｈ５９を加えて撹拌した後、メタノールを留去し減圧下
で１夜乾燥した１次いで、この粉末をクロロホルム２０
０−で予め充填したシリカゲル（Ｃ−２００、ワフーデ
ルＨ００ｙの塔の上部に充填し、クロロホルム８００ｖ
ａ（ｌで洗浄後、クロロホルム−メタノール（１００：
　１　）混液８００−で展開した。溶出液画分中のＳＦ
２４８７物質はクロロホルム−メタノール（５０：　１
　）混液を展開溶媒とするシリカゲル薄層（Ｆ２５４　
　＾ｒｔ　５７１５メルク社製）クロマトグラフィ（Ｒ
ｆ　Ｏ，４８）で検出した。

得られた活性画分を合わせて減圧下濃縮乾固し、２５６
Ｈの黄色粉末を得た。この粉末を少量のメタノールに溶
解し、メタ／−ルで充填したセファデックＸＬＨ−２０
（７７ルマシア社製）３５０＋Ｊの塔にかけ、メタノー
ルで展開し活性画分を濃縮乾固し、２０８ｒａｇの白色
粉末を得た。この粉末を２０ｍ１の酢酸エチルに溶解し
、２０ＩＩＩＮの００ＩＮ塩酸で攪拌し、さらに酢酸エ
チル層を純水で洗浄後、２０社の０．ＩＮ水酸化ナトリ
ウムで攪拌し、酢酸エチル層を純水で洗浄後、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し減圧上濃縮乾固し、白色粉末を得た
。この粉末を少量のメタノールに溶解後、冷所に静置し
てＳＦ２４８７物質のナトリウム塩結晶１０２昭を得た
。

実施例２ ＳＦ２４８７物質のナトリウム塩結晶１０ａＩｇを酢酸
エチル２０社に溶解し、ＩＮ塩酸水２０社と攪拌し、酢
酸エチル層を脱塩水で洗浄後、酢酸銀飽和溶液２０社と
攪拌する。次いで酢酸エチル層を純水で洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した後、減圧上濃縮乾固し、白色粉
末８ｍｇを得る。この粉末を少量のメタノールに溶解し
、冷所に静置しＳＦ２４８７物質銀塩を無色結晶として
得た。

発明の効果 本発明によるＳＦ２４８７物質のナトリウム塩は抗ウィ
ルス活性及び抗菌活性を有する。

したがって、ＳＦ２４８７物質は抗ウィルス剤あるいは
抗菌剤としての利用が考えられる。

■）抗ウィルス活性 （１）　　ＳＦ２４８７物質のナトリウム塩のＲＮ八へ
ィルス及びＤＮＡウィルスに対する抗ウィルス活性。

（ｉ）　　供試ウィルス株および細胞株・・・・・・Ｍ
ＤＣＫ細胞 ・・・・・・ＨｅＬａ　Ｙ細胞 ・・・・・化−９２９細胞 ・・・・・・Ｈｅ１ａ　Ｙ細胞 ・・・・・・Ｖｅｒｏ細胞 （ｉｉ）　　試験方法 接種後２日目におけるＣＰＥ（細胞変性効果）の観察結
果よ’）　ＴＣＩＤ５゜（５０％培養細胞感染量）を算
出し、無処置対照との一１０ＨＴｃｌＤｓｏの差をもっ
てＳＦ２４８７物質の’ｔ−トリウム塩の効果判定を行
なった。なお、ＳＦ２４８７物質のナトリウム塩の濃度
は２日目の最小変性濃度（第２表に示す）の１．１／２
．１／４．１７８倍量とした。

以上の方法でＳＦ２４８７物質ナトリウム塩の抗ウィル
ス活性を測定した結果、第３表に示す如くイン７ルエン
ザウイルス Ｎ．）株、ワクシニアウィルスＬｉｓｔｅｒ株に対して
著効を示し、ニューカッスル病つィルスＭｉｙａｄｅｒ
ａ株に対しても有効であった。

（２）　　ＳＦ２４８７物質ナトリウム塩のインフルエ
ンザウィルスに対するプラーク形成阻止活性。

（ｉ）　　供試ウィルス株および細胞株イン７ルエンザ
ウイルス （Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　　　ｖｉｒｕｓ）ＭＤＣＫ細°
胞 （ｉｉ）　　試験方法 ＳＦ２４８７物質のナトリウム塩のインフルエンザウィ
ルスに対する増殖阻止活性をプラーク形成抑制法により
定量的に測定した。

以上の方法でＳＦ２４８７物質ナトリウム塩のインフル
エンザウィルス＾／ＰＲ／８／３４（Ｈ，Ｎ，　）株に
対する抗ウィルス活性を検討したところ、第４表に示す
如く、５０％プラーク形成抑制濃度は０．２μｇ７ａｄ
ｌであった。

第４表　プラーク形成阻止率 試料　試料濃度（μｇ／ｒｎｌ）プラーク数阻止率（％
Ｈ、０　　　　　　　　０　　　　１００（ｎ）　　抗
菌活性 ＳＦ２４８７物質ナトリウム塩の寒天希釈法で測定した
各種微生物に対する最小益育阻止濃度を第５表に示す。

（［［）亀恒辱箪 ＳＦ２４８７物質のナトリウム塩のマウス（ＩＣＲ系、
Ｓ退会）の腹腔内投与による急性毒性試験の１４日口の
結果を第６表に示す。

第６表　ＳＦ２４８７物質のナトリウム塩の急性毒性投
与量（ｍｇ／ｋｇ）　　　生存数／試験数１２．５　　
　　　　　３／３

【図面の簡単な説明】

第１図はＳＦ２４８７物質ナトリウム塩のＫＢｒ錠での
赤外線吸収スペクトルを示し、第２図はＳＦ２４８７物
質ナトリウム塩の重クロロホルム中で測定した水素核磁
気共鳴スペクトルを示し、第３図はＳＦ２４８７物質ナ
トリウム塩の重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共
鳴スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ナトリウム塩が下記の理化学的性質を有する新規抗
   生物質ＳＦ２４８７物質。 （１）色及び性状：無色柱状結晶 （２）元素分析値： 実測値：Ｃ６４．１６％、Ｈ８．１６％ 理論値：Ｃ６４．４３％、Ｈ８．１１％ （３）分子量：ＦＤ−ＭＳｍ／ｚ７８３［Ｍ＋Ｈ］＾＋
   ＳＩ−ＭＳｍ／ｚ８０５［Ｍ＋Ｎａ］＾＋ （４）分子式：Ｃ＿４＿２Ｈ＿６＿３Ｏ＿１＿２Ｎａ（
   ５）融点：２５０−２５２℃（分解） （６）比旋光度：［α］＾２＾０＿Ｄ＝−５７．３°（
   ｃ＝０．１、メタノール） （７）紫外線吸収スペクトル： メタノール中：λｍａｘ（ε） ２５２（１７１００）、２９９（１１８００）ｎｍ酸性
   メタノール中：λｍａｘ（ε）２４８（１１８００）ｎ
   ｍアルカリ性メタノール中：λｍａｘ（ε） ２４０（１０９００）、３０５（６８００）ｎｍ（８）
   赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠で測定したスペクトル
   を第１図に示す。 （９）核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中での水
   素核核磁気共鳴スペクトルを第２図に、炭素核核磁気共
   鳴スペクトルを第３図に示す。 （１０）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセトン
   、メタノールに易溶、水に難溶。 （１１）呈色反応：硫酸、ヨード、モリブデン酸及びレ
   ミュー試薬に陽性、ニンヒドリン及びグレイグ・リーバ
   ック試薬に陰性。 （１２）シリカゲル薄層クロマトグラフィーＲｆ値： ジエチルエーテル０．７３ クロロホルム：メタノール（５０：１）０．４Ｓｎ−ヘ
   キサン：アセトン（８：２）０．２７２、アクチノマデ
   ュラ属に属する抗生物質ＳＦ２４８７物質生産菌を培養
   し、その培養物からＳＦ２４８７物質を採取することを
   特徴とする新規抗生物質ＳＦ２４８７物質の製造法。