JPS6255090A - 新規抗生物質ｓｆ−２３９２物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は抗菌及び抗コクシジウム活性を有する新規抗生
物質ＳＦ−２３９２物質及びその製造法に関するもので
ある。

従来の技術及び発明が解決しようとする問題点従来、数
多くの抗生物質が発明され、医薬品、動物用薬品、農薬
等の分野で実用化されている。

しかしなが呟まだ有効な物質が見出されないため解決さ
れていない医療あるいは産業分野が多く残されている。

例えば細菌感染症並びに鶏のコクシジウム症などの分野
においても、新しい作用をもつ新規の抗菌並びに抗コク
シジウム活性を有する抗生物質を提供することは常に要
望されている。本発明者らは、以上のような点に着目し
、新規な抗生物質を提供するとともに、その製造法を確
立することによってこれを解決しようとするものである
。

問題点を解決するための手段、作用及び効果本発明者ら
は、上述の期待にこたえるべく、抗菌並びに鶏のコクシ
ジウム症に対する活性を有する物質の探索を続けていた
ところ、アクチノマデユラ（八ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ
）属に属するある菌株の培養物中に各種細菌に対する強
い発育阻止作用並びに抗コクシジウム効果を有する物質
が生産されていることを見出し、有効物質ＳＦ−２３９
２物質を単離し、その理化学的特性及び生物学的特性を
確定することにより本発明を完成した。

したがって第一の本発明は、下記の特性を有する新規抗
生物質ＳＦ−２３９２物質を提供するものである。

（１）色および形状：無色針状結晶 （２）元素分析値　：　Ｃ６２，９５％　Ｈ９，１２％
（３）分子式　　　：Ｃ４４Ｈ７６０１４％式％） （４）分子量：〔α〕Ｄ　Ｏｏ（ｃｌ、メタ／−ル）（
７）紫外線吸収スペクトル：　　１０００μｇ／ｄメタ
ノール溶液中、　２１０ｎｍ〜３６０ｎｍに特徴的な吸
収を示さない。

（８）赤外線吸収スペクトル：　臭化カリウム錠による
スペクトルを第１図に示す。

（９）水素核核磁気共鳴スペクトル：　第２図に示す。

（１０）炭素核核磁気共鳴スペクトルのケミカルシフト
　：　第１表に示す。

（１１）呈色反応：　シリカゾル薄層上で硫酸及びバニ
リン硫酸試薬に陽性、ニンヒドリン試薬に陰性。

（１２）　　溶解性：　　ｎ−ヘキサン、クロロホルム
、酢酸エチル、アセトン及びメタノールに易溶、水に難
溶。

（１３）　　シリカゲル薄層クロマトグラフィーのＲｆ
値酢酸エチル　　　　　　　　　　０．１７ベンゼンー
ア七トン　　（２：１）　　０．１９１−ヘキサン−ア
セトン　（２：１）　　０．２６クロロホルム−アセト
ン（１：１）　　０．６４（１４）塩基性、酸性、中性
の区分：酸性ＳＦ−２３９２物質の寒天平板希釈法で測
定した各種微生物に対する最小発育阻止濃度をｔｊＳ２
表に示す。

次にＳＦ−２３９２物質の鶏でのフイメリ７・テネラ（
Ｅｉ＋ｎｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ）による実験的コク
シジウム症に対する効果を第３表１こ示す。

感染　　　６６　　　４０　　　４０　　　４０　　２
６ＡＣＩ（抗コクンノウム指数）：（相対増体率十生存
率）−（病変値＋オーシスト値） 上述の理化学的並びに生物学的性状から、ＳＦ−２３９
２物質は、いわゆるポリエーテル系イオノフオア抗生物
質に分類されると考えられる。既知のポリエーテル系抗
生物質の中でＳＦ−２３９２物質と同一の分子式を有す
る物質としてはエメリシト（Ｅｎｅｒｉｃ　ｉｄ、ジャ
ーナル・オブ・ケミカル・ソサエティ・ケミカル・コミ
ユニケーシヨン、９５１〜９５２頁＝　１９７５年）、
ＤＥ−３９７６（ジャーナル・オブ・アンチビオチフス
２９巻　９１〜９２頁、１９７６年）及びロノマイシン
（Ｌｏｎｏｍｙｃ　ｉ　ｎ　ｔ　ジャーナル・オプ・ア
ンチビオディス２２９巻　１５〜２０頁、１９７６年）
などが知られているが、ＳＦ−２３９２物質とは比旋光
度、炭素核各磁気共鳴スペクトル及びその池の理化学的
性状が異なる。

したがって、ＳＦ−２３９２物質は新規抗生物質である
と判断された。

更に第二の本発明は、アクチノマデユラ属に属する抗生
物質ＳＦ−２３９２物質生産菌を培養し、その培養物か
ら抗生物質ＳＦ−２３９２物質を採取することを特徴と
する抗生物質ＳＦ−２３９２物質の製造法を提供するも
のである。

本発明に使用されるＳＦ−２３９２物質生産菌の一例と
しては、本発明者らにより福島県の土壌から新たに分離
されたＳＦ−２３９２株がある。

ＳＦ−２３９２株の菌学的性状は次ぎの通りである。

１、形態 基土菌糸はよく伸長分枝し、通常の条件下では分断しな
い。気菌糸の着生は極めて貧弱であり、放線菌の培養に
通常用いられる寒天培地では、肉眼的に気菌糸着生は観
察できない。しかし、光学＠＠鏡で観察すると、リンゴ
酸カルシウム寒天とスターチ寒天で気菌糸着生が認めら
れ、前者では気菌糸先端に胞子連鎖も認められた。気菌
糸の分枝は単純分枝で車軸分枝は見られない。胞子連鎖
はらせん状、直状〜７ツク状ら認められる。胞子のう、
菌核、鞭毛胞子は観察されない。

電子顕微鏡による観察では、胞子は卵型ないし楕円型で
、大きさは０．５〜０．７Ｘ０．６〜１．２μ１１表面
構造は平滑状（ｓｍｏｏｔｈ）である。胞子は通常、２
〜１５個連鎖する。

■、各種培地上の生育状態 ＳＦ−２３９２株の各種培地上の生育状態は第４表に示
す通りである。色の記載について［１内に示す標準は、
コンテイナー・コーポレーシヨン・オブ・７メリｈ　（
Ｃｏｎｔａｉｎｐｒ　ｒＯｒｎｎｒ；ｎ１ｎｎ　Ｏ「Ａ
ｍｅｒｉｃａ）　社製の「カラー・ハーモニイ番マニア
ル（Ｃｏｌｏｒ　ｌｌａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）Ｊ
に記載のものを用いた。

観察は２８°Ｃで１４〜２１日培養後に行った。

■、生理的性質 （１）生育温度範囲：　イースト麦芽寒天において、１
５〜４０°Ｃの温度範囲で生育し、２６〜３０℃が最適
温度である。

（２）ゼラチンの液化：　陰性 （３）スターチの加水分解：　陰性 （４）硝酸塩の還元：　陰性 （５）脱脂乳のペプトン化：　陰性 脱脂乳の凝固：　陰性 （６）耐塩性：３．０％ＮａＣｌ含有培地でわずかに生
育するが、４．０％以上では生育しない。

（７）　メラニン様色素の生成：　陰性■、炭素源の利
用性 （１）利用する：　Ｄ−グルコース、Ｄ−７ラクトース
、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンニトール、Ｌ−ラムノース （２）利用しない：　ラフィノース、シュクロース （３）利用が疑わしい：　Ｌ−７ラビノース、ｉ−イノ
シトール なお、基礎培地として酵母エキス（Ｄｉｒｃｏ）　１　
ｙ、ＣａＣ０ｚ　０．２ｙ、寒天（Ｄｉｒｃｏ）１５１
？及び蒸留水１０００ｚ１の組成の培地を使用した。

■、細胞壁ｍ成 全細胞加水分解物中の２，６−ジアミノピメリン酸はメ
ン型であり、糖としてマジュロースが認められた。

以上の性状より、ＳＦ−２３９２株は放線菌の中で、ア
クチノマデユラ属に属すると考えるの７！！を妥当であ
る。従って、本発明者らはＳＦ−２３９２株を７クチノ
マデユラ・エスピー・ＳＦ−２３９２（＾ｃＬｉｎｏ＋
ｎａｏｌｕｒａ　ｓｐ、　Ｓ　Ｆ　　２３９２　）と命
名した。ＳＦ−２３９２株は工業技術院微生物工業技術
研究所に微工研菌寄第８２９８号（ＦＥＲＭ　Ｐ−８２
９８）として受託されている。

ＳＦ−２３９２株は池の放線菌の場合に見られるように
、その性状が変化しやすい。たとえば、ＳＦ−２３９２
株の、またはこの株に由来する突然変異株（自然発生ま
たは透発性）、形質接合体または遺伝子組換え体であっ
ても、抗生物質ＳＦ−２３９２物質を生産するものは全
て本発明に使用できる。本発明の方法では、前記の菌を
通常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養
する。栄養源としては、グルコース、水あめ、デキスト
リン、シュクロース、澱粉、糖みつ、動・植物油等を使
用できる。また窒素源として、大豆粉、小麦はい芽、コ
ーンステイープリカー、綿実かす、肉エキス、ペプトン
、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等
を使用できる。その池、必要に応じ、ナトリウム、カリ
ウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、燐
酸、硫酸、及びその池のイオンを生成することができる
黒磯塩類を添加することは有効である。また菌の発育を
助け、抗生物質ＳＦ−２３９２物質の生産を促進するよ
うな有機および無機物を適当に添加することができる。

培養法としては、好×的条件での培養法、待に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は、１５〜４０
℃であるが、多くの場合、２６〜３０°Ｃ付近で培養す
る。抗生物質ＳＦ−２３９２物質の生産は培地や培養条
件によ；）異なるが、振どう培養、タンク培養とも通常
２〜１０日の間でその蓄積が最高に達する。培養物中の
抗生物質Ｓ’　　　Ｆ−２３９２物質のＭ積置が最高に
なった時に培養を停止し、培養液から目的物質を単離精
製する。

かく生産されるＳＦ−２３９２物質は前記の理化学的性
状を有するのでその性状に従って培養物から抽出、精製
することが可能であるが特に以下の方法により効率的に
抽出、精製することができる。

即ち、有効成分を含む培養物に酢酸エチル等の水と自由
に混和しない有機溶媒を加えて攪拌抽出する。あるいは
培養物から固形物を濾別した濾液に酢酸エチル等の水と
自由に混和しない溶媒を加えて撹拌抽出する。一方、固
形物はアセトン等の水と自由に混和する溶媒を加えて攪
拌し、固形物から有効成分を抽出し、有機溶媒を留去し
た後、酢酸エチル等の水と自由に混和しない有（代心媒
で有効成分を抽出する。抽出液の溶媒を留去して得た袖
状物質をｎ−ヘキサン等の溶媒を加えて抽出し、残香を
ろ別する。抽出液の溶媒を留去して得た袖状物質を少量
の溶媒の溶解し、シリカゲル、アルミナ、デルろ過剤等
の担体を使用したクロマトグラフィーを適宜組み合わせ
て、ＳＦ−２３９２物質を単離する。

また、固形物から有効成分を抽出し、有機溶媒を留去し
た濃縮液をＨＰ−２０（三菱化成社製）のカラムに通し
水で洗浄し、アセトン等の有機溶媒で溶離する。溶離液
の溶媒を留去して得た袖状物質をｎ−ヘキサン等の溶媒
を加えて抽出し、残香をろ別する。抽出液の溶媒を留去
して得た袖状物質を少量の溶媒に溶解し、シリカゲル、
アルミナ、ゲルろ過剤等の担体を用いたクロマトグラフ
ィーｉ作を適宜組み合わせて使用し、ＳＦ−２３９２物
質を単離することができる。ＳＦ−２３９２物質の検定
に当ｒこってはバチルズ・ステアロサーモフィラス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ　ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕ
ｓ）を検定菌とする生物学的検定法を用いる。

実施例　１ 種培地としてスターチ２．０％、グルコース１．０％。

小麦はい芽０．６％、ポリペプトン０．５％、酵母エキ
ス０．３％、大豆粉０．２％、炭酸カルシウム０．１％
を含む培地を用いた。また生産培地として、水あめ２．
０％、大豆油０．３％、大豆粉１．２％、小麦はい芽１
．２％。

炭ｅカルシウム０．１％、硫酸マグネシウム０．１％、
猛３化コバル）　０．００１％を含む培地を用いた。な
お殺菌前ｐＨは全てｐＨ７，０に調整して使用した。

前記種培地２０ｚＮを分注した１００社容三角フラスコ
を１２０’Ｃで３０分間殺菌し、これにアクチ／マチ−
ニラ・エスピー・ＳＦ−２３９２株（ＦＥＩＩＩＭ　Ｐ
−８２９８）／ｎ　ｊ：Ｌ　’；ｉ；　＋ａ　”Ｉｋ　
、小Ａ　　−、ｅ　　＾／１．ｆｆ　？−４ａ　ｆ屓Ｉ
　　　　ＱＣＩ・Ｍ−ｆ＋Ｏ１ｍ問振とう培養し、第１
種培養としｒこ。ついで、種培地ＳＣＷずつを分注しｔ
こ５００社容三角フラスコ３本を１２０’Ｃで３０分間
殺菌し、前記第１種培養ＡＩＩＲずつを接種し、２８°
Ｃで３日間振どう培養し、これを第２種培養とした。さ
らに種培地１１ずつを分注した５ｐ容三角フラスコ４本
を１２０”Ｃで３０分間殺菌し、第２種培養５０Ｉｌず
つを接種し、２８°Ｃで２日間振どう培養し、これを第
３種培養とした。予め、１２０°Ｃで３０分間殺菌した
３５１の生産培地を含む５０１容ジヤー７フーメンター
４基に前記の１３種培養ＩＩ！ずつを接種し、２８°Ｃ
で７日間通気（３５ρ／′分）、攪はん（初期１５０ｒ
ｐｍ、　７２時間以降２５０叩＋ｏ）培養した。

培養終了後ろ過助剤として珪そう土を加えろ過し、菌体
を含む固形物及び培養ろ液を得た。得られた菌体を含む
固形物に７０％アセトン水５０１を加えて有効成分を抽
出する繰作を２回行い、菌体を含む　−固形物をろ別し
て抽出液１００１を得た。この抽出液を減圧濃縮してア
セトンを留去し、濃縮液４ＯＮを得た。この濃縮液及び
培養ろ液６０１を合併し、ダイヤイオンＨＰ−２０（三
菱化成社製）１０ａのカラムにかけ、５０％メタノール
で洗浄し、アセトン６０ｐで溶離した。この溶離液を濃
縮して、アセトンを留去し得られた濃縮液に酢酸エチル
１８１を加え、９０分間攪はんして有効成分を抽出した
。酢酸エチル抽出液に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥
後、減圧下濃縮し、褐色の油状物質を得た。この油状物
質に、ｎ−ヘキサンを加えて生ヒた沈澱をろ別し、ろ液
を濃縮して黒褐色の油状物２１ｇを得た。この黒褐色の
油状物質をクロロホルムに溶解し、あらかじめクロロホ
ルムで充填したシリカゲルＣ−２００（和光純薬工業社
製）２ρのカラムにかけ、クロロホルムで洗浄した。続
いてクロロホルム−酢酸エチル（２：１）の混液３；５
１、クロロホルム−酢酸エチル（Ｇｌ）の混液４．２１
、クロロホルム−酢酸エチル（１：３）の混液２１、り
ａａホルム−酢酸エチル（１：４）の混液２１、クロロ
ホルム−酢酸エチル（Ｇ９）の混液２ｇ及び酢酸エチル
２１で順次溶出した。溶出画分はシリカゾル薄層クロマ
トグラフィー（メルク社、キーゼルゲル６０Ｆ　２５４
、展開溶媒：酢酸エチル）を行ない、１０％硫酸水を散
布後過熱してＲｆ値０．１７にスポットを示す画分を集
め減圧下濃縮乾燥して、８１７ｙｇの淡黄色粉末を得た
。この粗粉末をｎ−ヘキサンに溶解し、あらかじめｎ−
ヘキサンで充填したシリカゲルＣ−２００，２０（７！
のカラムにかけ、ｎ−ヘキサンで洗浄した。つぎに、ｎ
−ヘキサン−酢酸エチル（４：１）の混液Ｒｎ−ヘキサ
ン−酢酸エチル（３：１）の混液０．８ｇ、ｎ−ヘキサ
ン−酢酸エチル（２：１）の混液１．５１、ｎ−ヘキサ
ン−酢酸エチル（１：１）の混液０．４１、ｎ−ヘキサ
ン−酢酸エチル（１：２）の混液０．５１及びｎ−ヘキ
サン−酢酸エチル（１：３）の混１２ｔ）で順次溶出し
た。溶出画分は前記の方法でシリカゲル薄層クロマトグ
ラフィーを行ない、Ｒｆ値０．１７を示す両分を集めて
、減圧下濃縮乾燥して４２７ｚ９の粗粉末を得た。この
粗粉末をメタノールに溶解し、あらかじめメタノールで
充填したセファデックスＬＨ−２０（７アルマシア・フ
ァインケミカル社製）３８０ｚ１のカラムにかけメタノ
ールで展開した。

両分は前記の方法でシリカゲル薄層クロマトグラフィー
を行ない、Ｒｆ値０．１７を示す両分を集め、減圧下濃
縮乾燥して３７１１Ｆ１Ｆの白色粉末を得た。この白色
粉末１３０ｚｙを酢酸エチル１００ｚ１に溶解し、０．
０５８　ＨＣＩ、１０（ｍ！を加え振とうした。さらに
酢酸エチル層を３００ｉＮの脱イオン水で洗浄した後無
順水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固して１１９Ｂの
粗粉末を得た。この粗粉末をメタノール−水混液より結
晶化してＳＦ−２３９２物質の無色針状結晶９４．６肩
ｇを得た。

発明の効果 、第２表、第３表から明らかなとおり、ＳＦ−２３９２
物質はグラム陽性細菌に対し抗菌活性を示し、かつコク
シジウム症に対しても効果を有する。

【図面の簡単な説明】

第１図はＳＦ−２３９２物質の臭化カリウム錠中での赤
外部吸収スペクトルを示し、第２図はＳＦ−２３９２物
質の重クロロホルム中で測定した４００Ｍｌ１ｚ水素核
核磁気共鳴スペクトルを示す。 手続補正書 昭和６０年１２月／り目 特許庁長官　宇　賀　道　部　殿 １　事件の表示　昭和６０年特許ｊ［第１９３１３２号
２　発明の名称　新規抗生物賀ＳＦ−２３９２物質およ
びその製造法３　補正をする者 ４代理人 ５　補正命令の日付　　な　し ６　補正により増加する発明の数　　な　し７　補正の
対象　　明細書の「発明の詳細な説明」の欄８　補正の
内容　　別紙のとお抄 別紙 補正の内容 １．６頁２４行：［アウレウス　２０９ＪＰＣ−１ｊを
「アウレワス　２０９Ｐ　　ＪＣ−ＩＪに訂正する。 ２．６頁３０行：エピデルミディスＡＴＣＣ１４４９９
０Ｊをルス・アンスラシスＮｏ、１１９４に訂正する。 ４．７頁８行：ｒ（Ｅｓｂｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｉ
）Ｊを（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｌ＋ｉａ　　ｃｏｌｉ）に訂
正する。 ５．８頁６〜７行：「オーシスト値）」の後に［感染量
：５Ｘ１０’に訂正する。 ９．８頁１９行：「炭素核各殊入」を「炭素核枚殊人」
に訂正する。 １０．１２頁２１行：ｒ（３）スターチの加水分解二次
法」を［（３）生ｓｐ、　Ｊに訂正する。 １２．１６頁９行：「醜物質」を「波太物質」に訂正す
る。 １３．１６頁１０行：「残香をろ別する］を「沈澱を濾
別する」に訂正する。 １４．１６頁１２行：「ゲル４適所」を「ゲル産遇剋」
に訂正する。 １５．１６頁１８行：「油状」を「油状」に訂正する。 １６．１６頁１９〜２０行：「残香をろ別する」を「沈
澱を濾別する」に訂正する。 １７．１６頁２０行：「油状」を［油状］に訂正する。 １８．１７頁２行：「デルゑｉｔＭＱＪを「グル濾過剤
」に訂正する。 １９．１７頁５行：「バチルズ・ステア０」を「バチル
ス・ステア０」に訂正する。 ２０．１８頁１２行及び１つ頁４行＝［撹はん］を「撹
拌」に訂正する。 ２１．１８頁１３行：「ろ過」を「濾過」に訂正する。 ２２．１３頁１４行、１３′ｒｃ１９行及び１９頁８行
：「ろ液」を［′ａ液ｊに訂正する。 ２３．１３頁１７行及び１９頁７行：「ろ別」を「濾別
」に訂正する。 ２４．１９頁２０行、２０頁１２行及び２０頁１９行：
［行ない］を［行い」に訂正する。 ２５．１９頁２０行：「過熱して」を「加熱して」に訂
正する。 ２６．２＋）頁６行二「１罰−ヘキサン」を「υ旦−ヘ
キサン」に訂正する。 ２７．２１頁３行：「無順水」を「無水」に訂正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の特性を有する新規抗生物質ＳＦ−２３９２物
   質 （１）色および形状：無色針状結晶 （２）元素分析値：Ｃ６２．９５％　Ｈ９．１２％ （３）分子式：Ｃ＿４＿４Ｈ＿７＿６Ｏ＿１＿４ （４）分子量：Ｓ２８　ＦＤ−ＭＳ　ｍ／ｚ　Ｓ５１（
   Ｍ＋Ｎａ） （５）融点：１１８〜１２２℃ （６）比旋光度：〔α〕＾２＾２＿Ｄ　０°（ｃ１、メ
   タノール） （７）紫外線吸収スペクトル：１０００μｇ／ｍｌメタ
   ノール溶液中、２１０ｎｍ〜３６０ｎｍに特徴的な吸収
   を示さない。 （８）赤外線吸収スペクトル：第１図 （９）水素核核磁気共鳴スペクトル：第２図 （１０）炭素核核磁気共鳴スペクトルのケミカルシフト
   ：第１表 （１１）呈色反応：シリカゲル薄層上で硫酸及びバニリ
   ン硫酸試薬に陽性、ニンヒドリン試薬に陰性。 （１２）溶解性：ｎ−ヘキサン、クロロホルム、酢酸エ
   チル、アセトン及びメタノールに易溶、水に難溶。 （１３）シリカゲル薄層クロマトグラフィーのＲｆ値酢
   酸エチル　０．１７ ベンゼン−アセトン（２：１）　０．１９ ｎ−ヘキサン−アセトン（２：１）　０．２６ クロロホルム−アセトン（１：１）　０．６４ （１４）塩基性、酸性、中性の区分：酸性 ２、アクチノマデュラ属に属する抗生物質ＳＦ−２３９
   ２生産菌を培養し、その培養物から抗生物質ＳＦ−２３
   ９２物質を採取することを特徴とする抗生物質ＳＦ−２
   ３９２物質の製造法。