JPS59170092A - 新規抗生物質ｓｓ８２０１ｄ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質ＳＳ　８２０１　Ｄ及びその製
造法に関する。

本発明者らは天然の、土壌より数多くの微生物を単離し
、その生産物について種々研究を名こなった結果、群馬
県妙義山麓の土壌から分離した菌株が真菌に対し優れた
抗菌力を有する新規な抗生物質８８８２０１　Ｄを生産
することを見い出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は新規な抗生物質ＳＳ　８２０１　Ｄ及
びその製造法を提供するものである。

本発明の抗生物質ＳＳ　８２０１　Ｎを産生ずる　５８
２０１株は次のような菌学的性質を有する。

（１）形態 気菌糸の分枝は単純分枝で、市軸分枝は認められない。

気菌糸の先端部はらせん状である。基生菌糸は通常分断
しない。胞子の５、鞭毛胞子、菌核はいずれも認められ
ない。電子顕微鏡観察によると、胞子の表面は平滑であ
り、形は卵円形ないし楕円形である。その大きさは、０
．５〜０．７Ｘ０．８〜１，４μｍであり、通常１０個
以上が連鎖している、。

（２）各種培地における生育状態 ８８２０１株の各種培地上での生育状態は次表のとおり
である。観察は２７℃、１４日培養後に行った。

色の記載には日本色何事業１樽発行の「色名小辞　　　
□典」を用いその系統色名で表示した。

（３）生理的性質 ■生育温度範囲（ペネット寒天培地、１４日培養） ７、１３．１６．２０．２３．２５．２８．３２．３４
．３８．４２及び４７℃の各温度で実験した結果２０〜
３２℃で生育するが、１６℃以下及び３４℃以上では生
育しない。生育至適温度は２５〜３２℃である。

■ゼラチンの液化　　　　　　陽性 ■スターチの加水分解　　　　陽性 ■脱脂乳の凝固　　　　　　　陽性 脱脂乳のペプトン化　　　　陽性 ■メラニン様色素の生成　　　陽性 ■硝酸塩の還元　　　　　　　陰性 ■セルロースの分解　　　　　陰性 （４）炭素源の利用性（プリトノ・ム・ゴドリーフ゛寒
天培地、２７℃、１４日培養） （１）　　Ｌ−アラビノース　　　＋ （２）Ｄ−キシロース　　　　＋ （３）Ｄ−グルコース　　　　＋ （４）Ｄ−フラクトース　　　＋ （５）　　シュクロース　　　　　− （６）　　イノシトール　　　　　− （力　Ｌ−ラムノース　　　　＋ （８）　　ラフィノース　　　　　− （９）Ｄ−マンニット　　　　＋ ＠）　＋は利用する、−は利用しない。

（５）細胞壁組成 細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸を分析した結果
ＬＬ型であった。

以上の菌学的性状から、本８８２０１　株はストレプト
ミセス属に属する・と判断される。更に該株は気菌糸の
先端はらせん形で１０個以上の胞子が連鎖し、胞子表面
は平滑であること、気菌糸の色はグレイカラーシリーズ
で裏面の色はうすい黄〜ブラウンみのオリーブであるこ
と、可溶性色素は黄みのブラウン−オリーブであること
、裏面の色及び可溶性色素はどちらもｐ、Ｅ（指示色で
ないこと、メラニン様色素を生成すること等の特徴を有
する。

叙上の蘭学的性状に基き公知文献を参酌し、探索すると
、これに最も近似する菌株として、抗生物ＡＮ−４６１
物質を生産し、ストレプトミセス・ジアスタトクロモゲ
ネスの新亜種として同定されたＮ−４６１号株が挙げら
れる（特開昭５５−３１０号）。

しかし、８８２０１株とＮ−４６１号株を比較すると、
シュクロース・硝酸塩寒天培地上で旺盛な生育を示し、
黒褐色ないし黒色の可溶性色素を生成する点及びシュク
ロースを利用する点でＮ−４６１号株と異なる。

そこで、本発明者らは、８８２０１株を新菌株と同定し
、ストレプトミセス・エスピー・Ｓ　８２０１（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　５８２０１　　）と命名
して、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第
６８５６号（ＦＥＢＭ　Ｐ−６８５６）として寄託した
。

本発明の抗生物質８８８２０１１）の製造は上記菌株を
栄養源含有培地に接種し、好気的に培養することにより
おこなわれろう抗生物質ＳＳ　８２０１　Ｄ生産株とし
ては上記菌株はもとより、その人工並びに自然変異株も
同様に使用できる。

培養に用いられる培地としては、当該菌が利用する栄養
源を含むものであれば、合成培地、半合成培地、天然培
地の何れでもよい。培地中の栄養源のうち、炭素源とし
ては、例えばグルコース、グリセロール、アラビノース
、キシロース、マンニトール、ラムノース、７ラクトー
ス、澱粉、糖みつ、水あめ等あるいはこれらの混合物を
使用しうる。また窒素源としては、大豆粉、ペプトン、
綿実かす、魚粉、コーンステイープリカー、酵母エキス
、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等あるいはこれ
らの混合物を使用することができる。

また、その他必要に応じて炭酸カルシウム、塩化ナトリ
ウト、燐酸塩等の無機塩類を添加したり、菌の発育を助
け、ＳＳ　８２０１　Ｄの生産を促進するために、有機
物、無機物及びシリコン油又はアラビノース（肋品名）
等の一般的消ｆｔＦｌ剤金適宜添加することができる。

培養法としては、一般の抗生物質の生産に用いられる方
法が採用されるが、液体培養法、特に深部培養法が最も
適している。培養は好気的条件下で行われ、培養に適当
な温度は２５〜３２℃であるが、一般に３０℃付近で培
養するのが好ましい。

抗生物質ＳＳ　８２０１　Ｄは撮盪培養、深部培養の何
れの場合も培養開始後３〜１０日でその蓄装置が最高に
達する。

Ｊｉｌｔ　＜　して得られた培養物中からの抗生物質５
Ｓ８２０１　Ｄの単離は、後記実施例に示す如く、本抗
生物質の理化学的性状を考慮して種々の方法を適当に組
合せることによって行われる。すなわち、抗生物質ＳＳ
　８２０１　Ｄは通常菌体及び培養液中に存在するので
、培養物を遠心分離又はｐ過等に付して菌体を分離し、
その菌体及び培養ｐ液から通常の分離手段、例えば沈澱
法、溶媒抽出法、イオン交瑛樹脂法、ゲルｐ過法、吸着
若しくは分配カラムクロマト法、透析法などを単独で、
あるいは適宜組合せて抗生物質ＳＳ　８２０１　Ｄを分
離精製する。

好ましい分離精製法の例としては次の方法が挙げられる
。まず、培養液に希塩酸を加え、ｐＨ４，０とし、遠心
分離により菌体を含めた沈澱物を得る。

次いでどの沈澱物に適当な溶媒、例えばクロロホルム−
メタノール混液を加えよ（混合して抽出し、涙過する。

ｐ過残渣を再度クロロホルム−メタノール混液で抽出し
、ｐ液を合わせ、この抽出液に適当量の水を加え分配し
下層をとる。この下層を減圧留去し残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーに付す。得られた活性画分を減
圧留去し、残渣をＰｒｅｐａｋ　５００／ＣＩ８カラム
クロマトグラフイーに付す。活性画分を濃縮し、濃縮物
に水を加え、生成した沈澱物をＦＵＷＬ乾燥する。この
粉末を熱エタノールに溶解したのち放冷すると無定形の
粉末が析出する。この粉末を、集め乾燥すると　５ｓ８
２０１０は白色粉末として単離される。

以上の如（して得られたＳＳ　８２０１　Ｄは次のよう
な理化学的性質及び生物学的性質を有する。

（１）理化学的性質 ■元素分析 ＣＨＮ 実験値（％）　　６６．６２　　７．４３　　５．２３
理論値（灼　６６、．６５　　７．４６　　５．１００
分子敏 ５４０．６６ ■融　点 ３００℃以上 ■比旋光度 〔α知＝　＋１１９°　（ｃ＝ｏ、５ｒ　Ｎ、Ｎ−ジメ
チルホルムアミド） ■紫外線吸収スペクトル 第１図 ０、ＩＮ　Ｎａ０ｋＶＥ　ｔＯＨ λｍａｘ　　　　　　　　２３８ｎｍ（ｇ１８８００）
。

３２０ｎｍ（ε１１５００） λ０．ＩＮＨＣ６／ＥｔＯＨ２２１ｎｍ（ｇ２０４００
）。

ｎａｘ ３２５ｎｍ（４１５８００） λＥｔＯＨ２４２ｎ＋ｎ（ｇ１８０００）。

ａｘ ３２２ｎｍ（ε１１５００） ■赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 ■’ｋｌ−ＮＮｉＲ，ｚ、ベクトル（９０ＭＨｌ　）重
ジメチルスルホキシド（８０℃）溶液中ＴＭＳを基準物
質として測定した。第３図■”Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒ 重ピリジン溶液中ＴＭＳを基準物質として測定した。

δ（ｐｐｍ）　１９４．５．１８３．７．１８０．２．
１６７．１．１４５．５゜１３８．９．１３０．８．１
２５．５．１０２．９．７７．６．７２．０゜６９．０
．５８．１．５５．１．５３．９．５０．５．４７．５
．４７．５゜４７．５．４６．３．４１．４．４０．３
．３９．４．３７．４．３７．４゜３４．２．３２．５
．２５．７．１８．１．１７．７■溶剤に対する溶解性 クロロホルム−メタノール混液、Ｎ、Ｎ−ジメチルホル
ムアミド、ジメチルスルホキシド、ピリジンに可溶、メ
タノール、エタノールにやや可溶、ｎ−ヘキヅン、ベン
ゼン・、エーテル、水、クロロホルム、アセトンに難溶
。

■呈色反応 塩化第２鉄試薬で赤褐色を呈する。バニリン硫酸試薬で
赤紫色を呈する。ニンヒドリン試薬、ドラーゲンドルフ
試薬には呈色しない。

０塩基性、酸性、中性の区別 酸性 ０物質の色及び性状 白色の粉末 Ｏ薄層クロマトグラフィー 担体；シリカゲルプレー）　Ｆ２５４　（メルク社製） ０分子式 Ｃ３０Ｈ４ＯＮ２０７　’ Ｏ構造式 上記の理化学的測定値より、本発明の抗生物質ＳＳ　８
２０１　Ｄは下記の式で表わされる構造のものと決定し
た。

（２）生物学的性質 抗菌作用 抗生物ａｓｓ　８２０１１）の各種微生物に対する最小
発育阻止濃度（Ｍ　Ｉ　Ｃ）を第１ｐに示すっ以下弦臼 第１表 試験菌培養条件：　イノキュラムサイズ約１０’ｃｅ　
ｌ　Ｉ　ｓ／ｒｎｌ バクテリアの場合はミューラー・ヒントン―アガー（ｐ
ｉｆｃｏ　）で３７℃にて１８〜２０時間培養。

酵母・カどの場合はグルコース・ペプトン培地で２８℃
にて１２０時間培養。

以上述べた諸性質を本発明化合物に類似する既知抗生物
質のそれと比較したが該当する物質はなく　５８８２０
１　Ｄは新規な抗生物質と判断された。

次に実施例を挙げ、本発明を説明する。

実施例 ５Ｓ８２０１Ｄの生産菌ストレプトミセス・エスピー８
８２０１（微工研・菌寄第６８５６号）を可溶性澱粉２
．０％、ソイトン１．５チ、グルコース０．２％、塩化
ナトリウム０．２　％　、炭酸カルシウム０．３２％（
９１（７，０）の液体培地に接種し、３０℃で４８時間
振盪して種培養液を作成する。同じ培地組成からなる液
体培地１６Ｂを３０４容の発酵槽に仕込み、これに前記
の種培養液３．００ｍ７！を接種し、通気量１６！／分
、攪拌数４０　Ｏｒｐｍ、培養温度３０℃の条件下で９
日間培養する。培養終了後、培養液１５石に希塩酸を加
えｐ）ｉ４．ｏとし、遠心分離により菌体を含めた沈澱
物を得た。この沈澱物ニクロロホルムーメタノール（１
：４　）混液２乃を加え、よく混合して抽出した後濾過
し、炉液と濾過残渣とに分けた。濾過残液を再度クロロ
ホルム−メタノール（１：１）混液２看で抽出し、ｐ液
を合わせた。この抽出液に水２ｐを加えて分配し、下層
を分取した。この下層を減圧濃縮乾固し、エーテルを加
え撹拌し、−過すると褐色の粗粉末１１．０５４が得ら
れた。こうして得られた粗粉末は更に次のように精製し
た。粗粉末をクロロホルム−メタノール−水（６０：１
’Ｏ：１）混液に溶解し、あらかじめクロロホルム−メ
タノール−水（６０：１０：１）混液で充填したシリカ
ゲル（ＷＡＫＯＧＥＬ　Ｃ−３００）のカラム（５φｘ
　８０　ｃｍ　）に通導し、同溶媒で溶゛出し、イカル
ガマイシン（特公昭４６−２８８３３号＞、ＳＳ　８２
０１Ｂ　、’　　Ｎ−４６１（特開昭５５−３１０　）
を除去した後、クロロホルムーメタノール−水（４０：
　ｉｏ　：　ｉ　）混液で溶出した。活性画分を集め１
、濃縮乾固し少計のメタノールで洗浄すると、２．１ｚ
の粗ＳＳ　８２０１　Ｄが得られた。

この粗５Ｓ８２０１Ｄをジオキサン−水−Ｎ、Ｎ−ジメ
チルホルムアミド−酢酸（５０：２９：２０：ｌ）混液
に溶解し、Ｐｒｅｐａｋ　５００／ＣＩ　８カラム（Ｗ
ａ−ｔｅｒｓ社製）に通導し、同溶媒で溶出し、ＳＳ　
８２０１Ｄの活性画分を合わせ減圧濃縮し、次いでこの
濃縮物に水を加え生成した沈澱物をＰ取し乾燥すると、
１．７ｚの微黄色粉末が得られた。

この粉末を熱エタノールに溶解した後放冷すると、無定
形の粉末が析出した。この粉末を集め乾燥すると純粋な
ＳＳ　８２０１　Ｄ　１．２￥が白色粉末として得られ
た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抗生物質５Ｓ８２０１１）の紫外線吸
収スペクトルであり、（Ｉ）は０．　Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨ
−ｇｔＯＨｌ（１）　０．ＩＮ　ＨＣ石−ＥｔＯＨｌ（
Ｉ［）はＥｔＯ）Ｉに溶解し測定したものである。 第２図は本発明の抗生物質ＳＳ　８２０１　Ｄの赤外線
の吸収スペクトル（ＫＢｒ法）である。 第３図は本発明の抗生物＆１Ｓ８２０１ＤのＩＨ−Ｎ　
ｉＶ［Ｒスペクトル（溶媒二重ジメチルスルホキシド（
８０°Ｃ））である。 以上 出願人　ニスニス製薬株式会社 “１ 弁理士　高　野　登志雄　　　！ １：こ＋、、’：３Ｎ、：ｌ：、＋ （ニー、−・、二、１ ｉ、　　（ｉ−’　：　ｊ　： 第１頁の続き ０発　明　者　長谷用博司 八千代市へ千代台西３−１−８ 東光荘 ０発　明　者　佐藤純− 習志野市谷津２−２０−１３ ０発　明　者　松本勝 千葉県印施郡富里村日吉台４− ４−２−２−５０９ ０発　明　者　大野線用 成田市橋賀台３−５−２−３０８ ０発　明　者　中島利章 千葉県印施郡酒々井町東酒々井 ４−４−７２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　下記の理化学的性質を有する新規抗生物質ＳＳ２０
   １Ｄ０ ■元素分析 Ｃｌ（Ｎ 実験値（チ）　　６６．６２　　７．４３　　５．２３
   理論値（％）　　６６．６５　　７．４６　　５．１８
   ■分子量 ５４０．６６ ■融　点 ３００℃以上 ■比旋光度 〔α）２Ｊ　＝＋　ｌ　ｌ　９°（ｃ＝０．５　、　Ｎ
   、Ｎ−ジメチルホルムアミド） ■紫外線吸収スペクトル 第１図 λｏ、２Ｎ　ＮａＯＨ′８ｔＯｆ（２３８ｎｍ（ｔ　１
   ８８００　）　。 ３２０ｎｍ（ｔ１１５００） λ０．ＩＮＨＣ６／ＥｔＯＨ２２１ｎｍ（ｇ２０４００
   ）。 ａＸ ３２５ｎｍ（ε１５８００） λ””ＯＨ２４２ｎｍ（ｇ１８０００）。 ａＸ ３２２ｎｍ（ε１１５００） ■赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 ■’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０Ｍｔ（Ｚ　）重ジメチ
   ルスルホキシド（８０°Ｃ）溶液中ＴＭＳを基準物質と
   して測定した。第３図■１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル 重ピリジン溶液中Ｔ　Ｍ　Ｓを基準物質として測定した
   。 δ（ｐｐｍ）　　１９４．５．１８３．７．１８０．２
   ．１６７．１．１４５．５゜１３８．９．１３０．８．
   １２５．５．１０２．９．７７．６．７２．０゜６９．
   ０．５８．１．５５．１．５３．９．５０．５．４７．
   ５．４７．５゜４７．５．４６．３．４１．４．４０．
   ３．３９．４．３７．４．３７．４゜３４．２．３２．
   ５．２５．７．１８．１．１７．７■溶剤に対する溶解
   性 クロロホルム−メタノール混液、Ｎ、Ｎ−シメチルホル
   ムアミド、ジメチルスルホキシド、ピリジンに可溶、メ
   タノール、エタノールに　、やや可ｉ、ｎ−ヘキサン、
   ベンゼン、エーテル、水、クロロホルム、アセトンに難
   溶。 ［株］呈色反応 塩化第２鉄試薬で赤褐色を呈する。バニリン硫酸試薬で
   赤紫色を呈する。ニンヒドリン試薬、ドラーゲンドルフ
   試薬には呈色しない。 ０塩基性、酸性、中性の区別 酸性 Ｏ物質の色及び性状 白色の粉末 Ｏ薄）脅クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレー）　Ｆ２５４−（メルク社製） Ｃｓｏ　１（４０Ｎ２０７ ２　構造が次の式 で表わされるものである特許請求の範囲第１項記載の新
   規抗生物質ＳＳ　８２０１　Ｄ。 ３　ストレグトミセス属に属する新規抗生物質８８８２
   ０１’Ｄ生産菌を培養し、その培養物から下記の理化学
   的性質、 ■元素分析 ＨＮ 実験値（％）　　６６．６２　　７．４３　　５．２３
   理論値（％）　　６６．６５　　７．４６　　５．１０
   ０分子量 ５４０．６６ ■融点 ３００℃以上 ■比旋光度 〔α〕δ＝　＋１１９°　（ｃ＝０．５　、　Ｎ、Ｎ−
   ジメチルホルムアミド） ■紫外線吸収スペクトル 第１図 λ０．ｌＮＮａ０４ｔＯＨ２３８ｎｍ（ｇ１８’８００
   ）。 ａＸ ３２０ｎｍ（ε１１５００） λ０．ＩＮ　ＨＣ８／’に２　ｊＯｆ（２２ｔ　ｎ、ｎ
   （、２０４００）。 ａＸ ３２５ｎｍ（ε１５８００） λＥ”’　　　　　　　２４２ｎｍ（ｇ１８０００）。 ａＸ ３２２ｎｍ（ｔ　１１５００　） ■赤外線吸収スペクトル（ＫＩ３ｒ法）第２図 ■ＩＨ−ＮＩＶＩＲスペクトル（９０Ｍｔ（ｚ　）重ジ
   メチルスルホキシド（８０℃）溶液中ＴＭＳを基準物質
   として測定した。第３図■ｌ３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクト
   ル 重ピリジン溶液中ＴＭＳを基準物質とじて測定した。 δ（ｐｐｍ）　１９４．５　、１８３．７．１８０．２
   ．１６７．１．１４５．５゜１３８．９．１３０．８．
   １２５．５．１０２．９．７７．６．７２．０゜６９．
   ０．５８．１．５５．１．５３．９．５０．５．４７．
   ５．４７．５゜４７．５．４６．３．４１．４．４０．
   ３．３９．４．３７．４．３７．４゜’３４．２．３２
   ．５．２５．７．１８．１．１７．７■溶剤に対する溶
   解性 クロロホルム−メタノール混液、Ｎ、Ｎ−ジメチルホル
   ムアミド、ジメチルスルホキシド、ピリジンに可溶、メ
   タノール、エタノールにヤヤ可溶、ｎ−ヘキサン、ベン
   ゼン、エーテル、水、クロロホルム、アセトンに難溶。 ０呈色反応 塩化第２鉄試薬で赤褐色を呈する。バニリン硫酸試薬で
   沖紫色を呈する。ニンヒドリン試薬、ドラーゲンドルフ
   試薬には呈色しない。 ０塩基性、酸性、中性の区別 酸性 ■物質の色及び性状 白色の粉末 ０薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレートＦ２５４（メルク社製） ０分子式 ％式％ を有する抗生物質８８８２０１　Ｄを採取することを特
   徴とする新規抗生物質ＳＳ　８２０１　Ｄの製造法。