JPS6119494A - 新規な生理活性物質ｓｓ３３４１０及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な生理活性物質８８３３４１０及びその製
造法に関する。

〔従来の技術〕

従来、微生物が生産する種々の生理活性物質が知られて
いる。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は医療用として有用な新規生理活性物質を得るこ
とを目的とする。

〔問題を解決するための手段〕

本発明者らは天然の土壌より数多くの微生物を単離し、
その生産物について種々研究を行なった結果、福島県喜
多方市の土壌から分′離した菌株が、抗炎症作用を有す
る新規な生理活性物質５Ｓ３３４１’０を生産すること
を見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は新規な生理活性物質８８３３４１０
及びその製造法を提供するもので゛　　ある。

本発明の生理活性物質８８３３４１０を産生する８３３
４１０１株は次のような菌学的性質を有する。

Ｕ）形態 各種、寒天培地で２７℃、７〜１４日培養し、形態を光
学顕微鏡あるいは走査を電子顕微鏡で観察した結果、本
菌株は以下の形態的特徴を示した。　。

気菌糸より胞子形成菌糸が単純分枝し、その先端部紘４
〜７回転からなるらせん形を形成している。これは、オ
ートミール寒天培地、スターチ寒天培地等でよく観察で
きる。車軸分枝は認めない。オートミール寒天培地で成
熟した分生胞子を観察すると１０個以上の胞子連鎖を認
め、個々の胞子の形は楕円形〜円筒形で、大きさは０．
５〜０．７　ｘＯ，８〜１４μｍである。胞子表面には
とげ状の構造物を多数認め、とげ状（５ｐｉｎｙ　）タ
イプの特徴を示す。

各種寒天培地で生育した本菌株について観察を行なった
が、胞子前、鞭毛胞子、菌核などの特殊な構造は認めな
かった。ｔた、基中菌糸の分断も昭めなかった。

シ）各種培地における生育状態 ８３３４１０株の各種培地での生育状態は次表のとおり
である。観察は２７℃、１４日増色の記載には、日本色
灯事業＠発行の「色名小辞典」を用い、その系統名で表
示した。

なお、表中括弧内は色標番号を示す。

以下余巾 斗 ※　シュクロース・硝酸塩寒天培地における裏面の色は
ｐＨインディケータ−である（０．０５ＮＨＣ）で明る
い赤紫、０．０５　Ｎ　ＮａＯＨで明るい赤今の黄） （３）生理的性質 ■　生育温度範囲（イースト・麦芽寒天培地、１４日培
養） 生育至適温度　　３０〜３５℃ 生育可能温度　　１５〜３９℃ ■　ゼラチンの液化　　　　陽性 ■　スターチの加水分屏　　陽性 ■　脱脂牛乳の凝固　　　　陽性 Ｉ　　　ペゾトン化　陽性 ■　メラニン様色素の生成　陽性 ■　硝酸塩の還元　　　　　陽性 ■　セルロースの分解　　　陰性 （４）　　炭素源の同化性（ゾリドハム・ゴドリープ寒
天培地、２７℃、１４日培養） Ｌ−アジビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−７ラクトース、°シュクロース、イノシトール、Ｌ
−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−マンニット、ガラク
トース、サリシンをいずれもよく利用する。

（５）菌体中のジアミノぎメリン酸 全菌体中のシアミノピメリン酸を分析した結果、ＬＬ−
シアミノピメリン酸を検出した。

以上の形態的諸特徴及び■１−ゾアミノピーメリン酸を
含むことよ抄、８３３４１０株唸ストレゾトミセス属に
属する一菌株であることはβ 明確である。

８３３４１０株の菌学的性質を要約すると次のようにな
る。気菌糸の先端はらせん形で、１０個以上の胞子が連
鎖し、胞子表面はとげ状である。気菌糸の色は、ホワイ
ｔカラーシリーズないしはレッドカラーシリーズでアル
１特徴的な裏面の色を有する。可耐桂色素をわずかに認
める。メラニン様色素を生成する。

以上の諸性質を基Ｋｓ　Ｅ、　Ｋ１１ｓｔｅｒの検索式
％式％ システマテイク・バクテリオロゾイ−（工ｎｔ、・Ｊ、
　−５ｙｓｔ、−Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　）　２２巻、
１３９〜１４８頁、１９７２年）より種を検索した結果
蔦次の４種が近縁の種として挙げられる。

ストレプトミセス　ゾルプラスセンス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｐｕｒｐｕｒａｓｃｅｎ
ａ　）ストレットミセス　ロゼオビオラセクス（Ｓ、　
ｒｏｓｅｏｖｉｏｌａｃｅｕｓ　）ストレットミセス　
ピ第２セウス （８，ｖｉｏｌａｃｅｕｓ　） ストレットミセス　ビオラルス （Ｓ、　ｖｉｏｌａｒｕ＋ｓ　） しかしな、がら、８３３４１０株を当研究所で保存して
いる上記種のそれぞれの菌株と同一条件下で比較したと
ころ、いずれとも一致しなかまた。

そこで、本発明者らは８３３４１０株をストレットミセ
ス　エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｐ、）Ｓ
３３４１０と命名して、工業技術院微生物工業技術研究
所に微工研菌寄第７６７９号（δＲＭＰ−７６７９）と
して寄託した。

本発明の生理活性物質ＳＳ　３３４１０は上記菌株を栄
養源含有培地に接種し、好気的に培養することにより製
造される。生理活性物質８８３３４１０生産株としては
上記８３３４１０株はもとより、その人工変異株あるい
は自然変異株であっても生理活性物質８８３３４１０を
生産する能力を有するものであれば、すべて本発明に使
用することができる。上記８３３４１０株の人工変異株
は、池の放線菌の場合同様、例えば紫外線、コバルト６
０照射、化学変異誘起剤等により容易に得ることができ
る。

つぎに、生理活性物９８８３３４１０の製造における菌
株の培養について説明する。すなわち、ストレゾトミセ
ス属に属する生理活性物質８８３３４１０生産株の培養
には通常の放線菌の培養法が用いられる。

栄養培地としては、資化しうる炭素源、窒素源、無機物
々どを適当に含有する限り、合成培地、半合成培地ある
いは天然培地、のいずれでも使用可能である。

炭素源としては、例えばグルコース、シュクロース、’
　７７　り）−ス、クリセリン、マンニトール、アラビ
ノース、澱粉、糖蜜等が単独または組合せて用いられる
。さらに面の資化性によっては炭化水素、アルコール類
、有機酸等も用い得る。窒素源としては、無機もしくは
有機輩素化合物、例えば塩化アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム、硝酸アンモニウム、尿素、硝酸ナトリウム、グ
ルタミン酸ナトリウムなど、または天然物、例えば大豆
抽出物、大豆粉、脱脂大豆、酵母エキス、乾燥酵母、綿
実粕、ペゾトン、ソイトン等が単独または組合せて用い
られる。無機物としては、例えば炭酸カルシウム、塩化
ナトリウム、硫酸鋼、塩化マンガン、硫酸亜鉛、塩化コ
バルト等が単独または組合せて用いられる。その他８３
３４１０株の発育を助け８８３３４１０の生産。

を促進する物質あるいはシリコン油又はアラビノース（
商品名）等の一般的消泡剤を適宜培地に添加することも
できる。

培養法としては、一般の生理活性物質の生産に用いられ
る方法が採用されるが、液体培養法、特に深部攪拌培養
法が最も適している。

培養は好気的榮件下で行われ、培養に、適当な温度は２
５〜３５Ｃであるが、一般に２７℃付近で培養するのが
好ましい。生理活性物質５Ｓ３３４１０ｉ振盪培養、深
部攪拌培養の何れの場合もその生産量は３〜７日間ｄ培
養で最高に達する。培養液中の生理活性物質８８３３４
１０の蓄積量が最高に達した時に培養を停止し、培養液
中から目的物質を単離・精製する。培養液中からの生理
活性物質８８３３４１０の単離は、後記実施例に示す如
く、本生理活性物質の理化学的性状を考慮して種々の方
法を単独で、あるいは適宜組合せることによって行なわ
れる。

すなわち、生理活性物質５Ｓ３３４１０は通常培養液及
び菌体中に存在するので、培養物を遠心分離、又は濾過
等によって菌体を分離し、その菌体及び培養Ｆ液から通
常９分１手段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法、
グル濾過法、吸着又は分配カラムクロマト法喀透析法、
沈澱法などを単独で、あるいは適宜組合せて生理活性物
質８８３３４１０を分離精製する。

好ましい分離１′＃製法の例としては、次の方法が＃げ
られる。発酵を終了した培養物を遠心分離し、Ｆ液と菌
体に分ける。次いで戸液および菌体を各々適当な溶媒、
例えばメタノール、酢酸エチル等で抽出す、る。Ｆ液抽
出液と菌体抽出液を合わせ、溶媒を留去し、残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーに付す。活性画分を集
め、減圧濃縮後、残渣をセファデックスＬＨ−２０（７
アルマシアフアインケミカル製）によるカラムクロマト
グラフィーに付す。活性画分を集め、減圧濃縮後、残渣
を適当な溶媒、例えばメタノール及びメタノール−イン
ゾロピルエーテルで再結晶すると８８３３４１０の無色
柱状結晶が得られる。

以上の如くして得られた生理活性物質 ８８３３４１０は次のような理化学的性質を有する。

〈理化学的性質〉 ■　元素分析 ＣＨ 実験値（％）　　６６．１０　８．０３理論値（鋒）　
　６５．２９　８．４１■　分子量及び分子式 ％式％ ：）） ■　紫外線吸収スペクトル 第１図 ２８４ｎｍ（２４３） ■　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）第２図 ■　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ　）第３図 重クロロホルム／重メタノール（２：１）混合溶液中Ｔ
ｈ１Ｓを基準物質として測定した。

■　溶解性 ビリシン、ジメチルスルホキシド、クロロホルム、クロ
日ホルムーメタノール混液、酢酸エチルに可溶。アセト
ン、メタノールに難溶。

ｎ−ヘキサン、エーテル、水に不溶。

■　塩基性、酸性、中性の区別 酸性 ［相］　物質の色及び性状 無色柱状晶（メタノール−イソゾロビルエーテルより再
結晶） 吸湿性 ■　呈色反応 バニリン硫酸試薬で赤色に呈色、さらに、　加熱すると
黒、横色に変化する。ドラーダンドルフ試薬、塩化第二
鉄反応は陰性。

＠　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカダルプレートＦｚｓ４（メルク社Ｍ） 以下余白 〔作用〕 本発明の生理活性物質Ｓ　８３３４１０は次のような生
物学的性質を有する。

■　抗菌作用 スタフイはコツカス　アクレウス （εｔａｐｈｙｌｏｅｏｃｃｕｍ　ａｕｒｅｕｍ’　）
　、ＦＤム２０９Ｐ％ミクロコツカス　リゾデイクテイ
カス （Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　１ｙｓｏｄｅｌｋＨａｕｇ
　）　ＩＦｏ　３３３３、バチルス　ズブチリス（Ｂａ
ｃｉｌｌｔｎ　５ｕｂｔｉｌｉ鄭〕ＰＣＩ　２１９、ニ
ジエリシア　コリ （Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｉｌ　）　０−１、シ
ュードモナス　エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
　ａｅｒｔ＋ｇｉｎｏａａ　）Ｐ！、セラチア　マル七
スセンス（８ｒｒｒａｔｉｍｍ＆ｒｅｅｍｅ・ｎｌ）＄
３３、クレブシエ２　ニュー　　　ごモニエ（Ｋｌｅｂ
ｓＩｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉ４ｅ　）　Ａ、ＴＣＣ
ｉ００３１．ゾロチフス　ミラピリス（Ｐｒｏｔ＊ｕ＋
ｍｉｒａｂ１１１ｇ　）　、マイコバクテリウム　スメ
グマチス（Ｍｙｅｏｂａｅｔ＠ｒｉａｍ　ｓｍｅｇ％ａ
ｔｌ−）　Ａ’ｒｃｃ６０７、カンジダ　アルビカンス
（Ｃａｎｄｉ　ｄａａｌｂｉｃｍａｍ　）　ＮＩＬ　４
，０１９及びパイリフ２リアオリイゼ（Ｐｙｒｌｅｕｌ
ａｒｌａ　ｏｒｙｚａｅ　）について−生理活性物質８
８３３４１０のｌ■／―溶液を用いたＤｉｓｋ法により
抗菌活性を測定したとζろ、いずれの供試菌株にも抗菌
活性は認められなかった。

■　抗炎症作用　　　　　　。

生理活性物質ｇｓａａ４ｉｏの抗炎症作用を下記方法に
より試験した。結果を第１表に示す。

実験方法： 体重約２０２のｄｄ系雄性マクス７匹を１群とし、本発
明化合物を生理食塩液に懸濁し、経口投与した。１時間
後に２％カラダニン溶液０．０５−を右後足踏に皮下投
与した。４時間後に右及び左後定電を切断して、それぞ
れｌ量゛を測定し、次の＜１）式より浮腫皐■を求めた
。

別に対照群をして生理食塩液を経口投与し、上記同様忙
浮腫率を求め、次の（ＩＩ）式により浮腫抑制率を求め
た。

浮腫抑制率如 ＦＰｆｉｌ峯（対照群） 第１表 〔発明の効果〕 これらの抗炎症活性からみて、生理活性物質５ｓ３３４
１０＃′ｉ医療用として有用な物質である。

〔実施例〕

次に実施例を挙けて説明する。

実施例 ？ナトスターチ２．０％、グルコース２．０％、脱脂大
豆２．０％、イーストエキストラクト０．５％、塩化ナ
トリウム０．２５％、炭酸カルシウム０，３２％、硫酸
銅０．０００５％、塩化マンガンｏ、ｏｏｏｓ％、硫酸
亜鉛０．００５％の組成を有する液体培地をｐＨ７，０
とし、５００ｍＡ容坂ロフラスコに１００−分注して滅
菌する。

これにストレゾトミセスエスビー８３３４１０株（微工
研菌寄第７６７９号）を接種し、２７℃で２日間振盪培
養して稲培養液を作成する。同じ培地組成からなる液体
培地１６１を３０１容の７ヤーフアメンタ１、−に仕込
み、これに前記の種培養液３２０−を接種し、培養温度
２７℃、攪拌数４５　Ｏｒ、ｐ、ｍ、　、通気量１６ｔ
／分の条件下で１２０時間培養を行なう。

培養終了後、培養液を遠心分離し、得られたＦ液を２倍
量の酢酸エチルで２回抽出した＠一方方体体はメタノー
ル５ｔを加えて攪拌後濾過（この操作を２回行うコシ、
得られたＦ液を４０℃で約１／１　Ｇまで減圧濃縮した
。

次いでこの濃縮液に当量の水を加え酢酸エチル２ｔで３
回抽出した。先の抽出液と合わせて溶媒を減圧留去し、
紫色油状の粗抽出物２８ｇを得た。

との粗抽出物をシリカゲル（和光純薬製ワコーグルＣ−
２００）カラムクロマ）／、＞フィー（４，５Ｘ　４　
Ｑ傷）Ｋ付し、クロロホルム／メタノール（５０：１？
／Ｙ）で溶出し、活性画分を集めた。この両分を濃縮し
て得た　。

油状物を再度シリカゲルカラムクロマトグツフィー（３
ａｍ　ｘ　３　ｇ　ａｍ’）に付し、同溶媒で溶出し、
油状物７ｔを得た。仁の油状物を２０′−のメタノール
に溶解し、０℃で放置し、析出する結晶を集めた。次り
でこの結晶を少量のクロロホルム／メタノール（２：ｌ
マ／マンに溶解し、セファデックスＬＨ−２０（ファル
マシアファインケミカルズ製）カラムクロマトグラフィ
ー（２ｔｘ　Ｘ　３０　ｔｘ　）　Ｋ付して同溶媒で蔗
出し、目的画分を集め、濃縮後メタノールより結、晶化
した。かくして得られた粗結晶をメタノール／イソゾロ
ビルエーテルより再結晶して無色柱状の８８３ａａｌｏ
　　ｏ、７０　ｔを得た６

【図面の簡単な説明】

第、１図は本発明の生理活性物質５ｓ３３４１０ノ紫外
線吸収スペクトル、第２図は同赤外線吸収スペクトル、
第３図は同１　）１−　ＮＭＲスペクトルである。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性質を有する生理活性物質ＳＳ３３
   ４１０。 （１）元素分析 　　　　　　　　Ｃ　　　　　Ｈ 実験値（％）　６６．１０　８．０３ 理論値（％）　６５．２９　８．４１ （２）分子量及び分子式 ７９０、Ｃ＿４＿３Ｈ＿６＿６Ｏ＿１＿３ （３）融点 １３１℃（分解） （４）比旋光度 〔α〕＾２＾５＿Ｄ＝−２１．０°〔ｃ＝１、クロロホ
   ルム／メタノール（１：１）〕 （５）紫外線吸収スペクトル 第１図 λ＾Ｍ＾ｅ＾Ｏ＾Ｈ＿ｍ＿ａ＿ｘ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ
   ＿ｍ）：２４４ｎｍ（５４５）２８４ｎｍ（２４３） （６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 （７）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ）第３図 重クロロホルム／重メタノール（２：１） 混合浴液中ＴＭＳを基準物質として測定し た。 （８）溶解性 ピリジン、ジメチルスルホキシド、クロ ロホルム、クロロホルム−メタノール混 液、酢酸エチルに可溶。アセトン、メタ ノールに難溶。ｎ−ヘキサン、エーテル、 水に不溶。 （９）塩基性、酸性、中性の区別 酸性 （１０）物質の色及び性状 無色柱状晶（メタノール−イソプロピル エーテルより再結晶） 吸湿性 （１１）呈色反応 バニリン硫酸試薬で赤色、さらに加熱す ると黒褐色に変化する。ドラーゲンドル フ試薬、塩化第二鉄反応は陰性。 （１２）薄層クロマトグラフィー 担体：シリカゲルプレートＦ＿２＿５＿４（メルク社製
   ） ▲数式、化学式、表等があります▼ ２、ストレプトミセス属に属する生理活性物質ＳＳ３３
   ４１０生産菌を培養し、その培養物から生理活性物質Ｓ
   Ｓ３３４１０を採取することを特徴とする新規生理活性
   物質ＳＳ３３４１０の製造法。 ３、ＳＳ３３４１０物質生産菌がストレプトミセスエス
   ピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｓ３３４１
   ０株微工研菌寄第７６７９号）である特許請求の範囲第
   ２項記載の製造法。