JPH0413353B2

JPH0413353B2 -

Info

Publication number: JPH0413353B2
Application number: JP62024467A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Hatsumasa; Hiromi Watabe; Yoshinori Origasa; Takashi Yoshida; Takashi Shomura; Masaji Sezaki; Shinichi Kondo
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1987-02-06
Filing date: 1987-02-06
Publication date: 1992-03-09
Also published as: JPS63192792A

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野本発明は新規抗生物質SF2487物質、及びその
製造法に関するものである。従来の技術及び発明が解決しようとする問題点従来、数多くの抗生物質が発明され、医薬品、
動物薬品等の分野で実用化されている。しかしな
がらまだ有効な物質が見出されないため解決され
ていない医療あるいは産業分野が多く残されてい
る。たとえば、細菌あるいはウイルス感染症の化
学療法分野においても、新しい作用をもつ新規抗
生物質を提供することは常に要望されている。本発明者らは以上のような点に着目し、新規な
抗生物質を提供するとともにその製造法を確立す
ることによつてこれを解決しようとするものであ
る。問題点を解決するための手段本発明者らはアクチノマデユラ属に属する特定
の菌株を培養することにより、フアージに対して
増殖阻止作用を有する物質が培養物中に生産、蓄
積されることを見い出し、その有効物質を採取す
ることに成功した。さらに本発明者らは、有効物
質SF−2487物質を単離し、その理化学的性状及
び生物学的性状を確立することにより本発明を完
成した。したがつて本発明は、ナトリウム塩が下記の特
性を有する新規抗生物質SF2487物質を提供する
ものである。 (1) 色及び性状：無色柱状結晶 (2) 元素分析値：実測値：C64.16％、H8.16％理論値：C64.43％、H8.11％ (3) 分子量：FD−MSm／z783［Ｍ＋Ｈ］⁺ SI−MSm／z805［Ｍ＋Na］⁺ (4) 分子式：C₄₂H₆₃O₁₂Na (5) 融点：250−252℃（分解） (6) 比旋光度：［α］_20D＝−57.3゜（ｃ＝0.1、メタノール） (7) 紫外線吸収スペクトル：メタノール中：λmax（ε） 252（17100）、299（9300）nm 酸性メタノール中：λmax（ε）248（11800）
nm アルカリ性メタノール中：λmax（ε） 240（10900）、305（6800）nm (8) 赤外線吸収スペクトル：KBr錠で測定した
スペクトルを第１図に示す。 (9) 核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で
の水素核核磁気共鳴スペクトルを第２図に、炭素
核核磁気共鳴スペクトルを第３図に示す。 (10) 溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセト
ン、メタノールに易溶、水に難溶。 (11) 呈色反応：硫酸、ヨード、モリブデン酸及び
レミユー試薬に陽性、ニンヒドリン及びグレイ
グ・リーバツク試薬に陰性。 (12) シリカゲル薄層クロマトグラフイーのRf
値：ジエチルエーテル 0.73 クロロホルム：メタノール（50：１）0.48 ｎ−ヘキサン：アセトン（８：２） 0.27 さらに本発明は、アクチノマデユラ属に属する
抗生物質SF2487物質生産菌を培養し、その培養
物から抗生物質SF2487物質を採取することを特
徴とする抗生物質SF2487物質の製造法を提供す
るものである。前記のSF2487物質の理化学的性状及び生物学
的性状から、本物質はポリエーテル系抗生物質に
分類されると考えられる。さらに、銀塩結晶（実
施例２で製造）によるＸ線解析から本物質の構造
は次式と決定された。従つて、本発明により上記の化学構造式を有す
る新規抗生物質SF2487物質又はその塩類ならび
にそれらの製造法が提供される。現在まで数多くのポリエーテル系抗生物質が知
られており、その部分構造にテトロン酸を有する
物質としてはTetronomycin（J.Antibiot.vol.35
p.142−150 1982年）及びM139603物質（J.C.S.
Chem.Com.p.1073−1074 1981年）が知られてい
るが本発明のSF2487物質とは異なる物質である。
さらに、本物質と同じ物理化学的性質並びに化学
構造を有する物質は、従来知られていない。従つ
てSF2487物質は新規抗生物質であると判断され
た。本発明に使用される新規抗生物質SF2487物質
の生産菌の一例としては、千葉県茂原市の土壌か
ら新たに分離されたSF2487株がある。 SF2487株の菌学的性状は下記の通りである。形態基生菌糸は、よく伸長分岐し、通常の条件下で
は分断しない。スターチ寒天、オートミール寒
天、イースト麦芽寒天、グリセロール・アスパラ
ギン寒天上などで気菌糸を着生し、胞子を形成す
る。気菌糸の分岐は単純分岐で車軸分岐は見られ
ない。気菌糸先端の胞子連鎖は波状ないしループ
状となる。電子顕微鏡による観察では、胞子は円
筒形ないし楕円形で0.5〜0.8×0.8−1.5μｍの大き
さを有し、しわ状ないし、いぼ状である。胞子は
２〜10個程度連鎖する。胞子のう、運動性胞子、
菌核等は観察されない。各種培地上の生育状態 SF2487株の各種培地上の生育状態は第１表に
示す通りである。色の記載について（）内に
示す基準はコンテイナー・コーポレーシヨン・オ
ブ・アメリカ（Container Corporation of
America）社製「カラー・ハーモニイー・マニ
アル（Color Harmony Manual）」に記載のも
のを用いた。観察は28℃で14〜21日培養後に行な
つた。

【表】生理的性質 (1) 生育温度範囲：15〜42℃の温度範囲で生育
し、25〜30℃で良好に生育する。 (2) ゼラチンの液化：陰性 (3) スターチの加水分解：陽性 (4) 硝酸塩の還元：陽性 (5) 脱脂乳のペプトン化：陰性脱脂乳の凝固：陰性 (6) 耐塩性：４％の食塩含有培地では生育する
が、５％以上では生育しない。 (7) メラニン様色素の生成：陰性炭素源の利用性 (1) 利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトー
ス、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−
マンニトール、 (2) 利用しない：グリセロール、myo−イノシト
ール、Ｌ−ラムノース、シユークロース、ラフ
イノース細胞壁組成全菌体加水分解物中のアミノ酸としては、メソ
型ジアミノピメリン酸を有し、糖としては、マジ
ユロースが検出された。以上の性状から、SF2487株は放線菌の中でア
クチノマジユラ属に属すると考えるのが妥当であ
る。従つて、本発明者らはSF2487株をアクチノ
マジユラ・エスピーSF2487（Actinomadura sp.
SF2487）と称することにした。 SF2487株は、工業技術院微生物工業技術研究
所に微工研菌寄第9063号（FERM Ｐ−9063）と
して受託されている。 SF2487株は放線菌の場合に見られるように、
その性状が変化しやすい。例えば、SF2487株の、
またはこの株に由来する突然変異株（自然発生ま
たは誘発性）、形質接合体または遺伝子組換え体
であつても、抗生物質SF2487物質を生産するも
のは全て本発明に使用出来る。本発明の方法で
は、前記の菌を通常の微生物が利用しうる栄養物
を含有する培地で培養する。栄養源としては、グ
ルコース、水あめ、デキストリン、澱粉、糖み
つ、動・植物油等を使用できる。また窒素源とし
て、大豆粉、小麦はい芽、コーンステイープリカ
ー、綿実かす、肉エキス、ペプトン、酵母エキ
ス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使
用できる。その他、必要に応じ、ナトリウム、カ
リウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、
塩素、燐酸、硫酸、及びその他のイオンを生成す
ることができる無機塩類を添加することは有効で
ある。また菌の発育を助け、抗生物質SF2487物
質の生産を促進するような有機および無機物を適
当に添加することができる。培養法としては、好気的条件での培養法、特に
深部培養法が最も適している。培養に適当な温度
は、15〜42℃であるが、多くの場合、25〜30℃付
近で培養する。抗生物質SF2487物質の生産は培
地や培養条件により異なるが、振とう培養、タン
ク培養とも通常３〜10日の間でその蓄積が最高に
達する。培養物中の抗生物質SF2487物質の蓄積
量が最高になつた時に培養を停止し、培養液から
目的物質を単離精製する。かく生産されるSF2487物質は前記する理化学
的性状を有するので、その性状に従つて培養液か
ら精製することが可能であるが、特に以下の方法
により効率的に精製できる。すなわち、有効成分を含む培養物から固形物を
濾別し濾液と固形物とに分ける。固形物はアセト
ン等の水と自由に混合する溶媒を加えて撹拌し、
固形物から有効成分を抽出し、有機溶媒を留去し
た後、先の濾液とともに、吸着樹脂、ダイヤイオ
ンHP−20（三菱化成社製）で処理して活性物質
を樹脂に吸着する。ついでアセトン等の適当な溶
媒にて溶出し、溶出液を減圧濃縮することにより
溶媒を留去し、水溶液とする。この水溶液より酢
酸エチル等の水と混和しない有機溶媒を用いて有
効成分を抽出する。抽出液の溶媒を留去して得た
油状物質を少量の溶媒に溶解し、シリカゲル、ゲ
ル濾過剤等の担体を適宜組み合わせて使用し、
SF2487物質を単離する。単離されたSF2487物質を酢酸エチル等の有機
溶媒に溶解し、酸性水と撹拌し、純水で洗浄後、
水酸化ナトリウム水と撹拌する。有機溶媒を純水
で洗浄後、有機溶媒を減圧濃縮し、得られた残留
物をメタノール等の溶媒系を用いて結晶化するこ
とによりSF2487物質のナトリウム塩結晶を得る。 SF2487物質の検定に当たつては、バチルス・
ズブチルスSR22（Bacillus subtilis SR22）を宿
主菌とするSP10フアージを検定菌とする生物学
的検定法、及びシリカゲル薄層クロマトグラフイ
ーによる化学的検定法を用いることができる。実施例以下に本発明の実施例を示すが、これらは単な
る一例であつて本発明を限定するもではない。こ
こに例示しなかつた多くの変法あるいは修飾手段
を用いうることは勿論のことである。実施例１種培地として、スターチ2.0％、グルコース1.0
％、小麦胚芽0.6％、ポリペプトン0.5％、酵母エ
キス0.3％、大豆粉0.2％、炭酸カルシウム0.1％を
含む培地を用いた。また、生産培地として、水飴3.0％、大豆油0.2
％、綿実粕0.5％、サングレインF2.15％、炭酸カ
ルシウム0.1％、硫酸第１鉄（７水塩）0.0005％、
塩化コバルト（６水塩）0.0005％、を含む培地を
用いた。なお、殺菌前PHはすべてPH7.0に調製して使用
した。前記種培地20mlを分注した100ml容三角フラス
コを120℃で30分間殺菌し、これにアクチノマジ
ユラ・エス・ピー・SF2487（FERM Ｐ−9063）
の斜面培養の２〜３白金耳を接種し、28℃で４日
間振盪培養し、第１種培養とした。ついで種培地
80mlを分注した500ml容三角フラスコを120℃で30
分間殺菌し、前記第１種培養４mlを接種し、28℃
２日間振蘯培養し、これを第２種培養とした。さ
らに種培地１を分注した５容三角フラスコを
120℃で30分間殺菌し、第２種培養50mlを接種し、
28℃２日間振盪培養し、これを第３種培養とし
た。予め120℃30分間殺菌した35の生産培地を含
む50容ジヤーフアーメンターに前記の第３種培
養１を接種し、28℃６日間通気（20／分）、
撹拌（初期250rpm、65時間以降350rpm）培養し
た。培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて
濾過した。得られた菌体を50％アセトン水で抽出し、菌体
抽出液20を得た。さらに、菌体抽出液を減圧濃
縮してアセトンを留去した水層８を濾液20と
合わせてダイヤイオンHP−20（三菱化成社製）
４の塔にかけ有効成分を吸着させた後、水20
及び50％メタノール水20で洗浄後、50％アセト
ン水により有効成分を溶出した。さらに、溶出液
から減圧濃縮によりアセトンを留去した水層８
に酢酸エチル10を加え、撹拌し有効成分を酢酸
エチル層に抽出した。この酢酸エチル抽出液を無
水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮し、油
状物質3.5ｇを得た。この油状物質をメタノール
に溶解しシリカゲル（Ｃ−200、ワコーゲル、和
光純薬社製）15ｇを加えて撹拌した後、メタノー
ルを留去し減圧下で１夜乾燥した。次いで、この
粉末をクロロホルム200mlで予め充填したシリカ
ゲル（Ｃ−200、ワコーゲル）100ｇの塔の上部に
充填し、クロロホルム800mlで洗浄後、クロロホ
ルム−メタノール（100：１）混液800mlで展開し
た。溶出液画分中のSF2487物質はクロロホルム
−メタノール（50：１）混液を展開溶媒とするシ
リカゲル薄層（F254 Art 5715メルク社製）クロ
マトグラフイ（Rf0.48）で検出した。得られた活性画分を合わせて減圧下濃縮乾固
し、256mgの黄色粉末を得た。この粉末を少量の
メタノールに溶解し、メタノールで充填したセフ
アデツクスLH−20（フアルマシア社製）350mlの
塔にかけ、メタノールで展開し活性画分を濃縮乾
固し、208mgの白色粉末を得た。この粉末を20ml
の酢酸エチルに溶解し、20mlの0.1N塩酸で撹拌
し、さらに酢酸エチル層を純水で洗浄後、20mlの
0.1N水酸化ナトリウムで撹拌し、酢酸エチル層
を純水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し減
圧下濃縮乾固し、白色粉末を得た。この粉末を少
量のメタノールに溶解後、冷所に静置して
SF2487物質のナトリウム塩結晶102mgを得た。実施例２ SF2487物質のナトリウム塩結晶10mgを酢酸エ
チル20mlに溶解し、IN塩酸水20mlと撹拌し、酢
酸エチル層を脱塩水で洗浄後、酢酸銀飽和溶液20
mlと撹拌する。次いで酢酸エチル層を純水で洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下濃
縮乾固し、白色粉末８mgを得る。この粉末を少量
のメタノールに溶解し、冷所に静置しSF2487物
質銀塩を無色結晶として得た。発明の効果本発明によるSF2487物質のナトリウム塩は抗
ウイルス活性及び抗菌活性を有する。したがつて、SF2487物質は抗ウイルス剤ある
いは抗菌剤としての利用が考えられる。（）抗ウイルス活性 (1) SF2487物質のナトリウム塩のRNAウイルス
及びDNAウイルスに対する抗ウイルス活性。 (i) 供試ウイルス株および細胞株ａインフルエンザウイルス（Influenza
virus）Ａ／PR／８／34（H₁N₁）
……MDCK細胞ｂニユーカツスル病ウイルス Miyadera （Newcastle dessase virus，NDV） ……HeLa Ｙ細胞ｃ水疱性口内炎ウイルス New Jersey （Vesicular stomatitis virus，VSV） ……Ｌ−929細胞ｄワクシニアウイルス Lister （Vaccinia virus） ……Hela Ｙ細胞ｅ単純ヘルペスウイルス Type2 196 （Herpes simplex virus，HSV）
……Vero細胞 (ii) 試験方法接種後２日目におけるCPE（細胞変性効果）の
観察効果よりTCID₅₀（50％培養細胞感染量）を算
出し、無処置対照との−logTCID₅₀の差をもつて
SF2487物質のナトリウム塩の効果判定を行なつ
た。なお、SF2487物質のナトリウム塩の濃度は
２日目の最小変性濃度（第２表に示す）の１、1/
２、1/4、1/8倍量とした。

【表】以上の方法でSF2487物質ナトリウム塩の抗ウ
イルス活性を測定した結果、第３表に示す如くイ
ンフルエンザウイルスＡ／PR／８／34（H₁N₁）
株、ワクシニアウイルスLister株に対して著効
を示し、ニユーカツスル病ウイルスMiyadera株
に対しても有効であつた。

【表】 (2)SF2487物質ナトリウム塩のインフルエンザウ
イルスに対するプラーク形成阻止活性。 (i) 供試ウイルス株および細胞株インフルエンザウイルスＡ／PR／８／334
（H₁N₁）（Influenza virus） MDCK 細胞 (ii) 試験方法 SF2487物質のナトリウム塩のインフルエンザ
ウイルスに対する増殖阻止活性をプラーク形成抑
制法により定量的に測定した。以上の方法でSF2487物質ナトリウム塩のイン
フルエンザウイルスＡ／PR／８／34（H₁N₁）株
に対する抗ウイルス活性を検討したところ、第４
表に示す如く、50％プラーク形成抑制濃度は0.2μ
ｇ／mlであつた。

【表】（）抗菌活性 SF2487物質ナトリウム塩の寒天希釈法で測定
した各種微生物に対する最小発育阻止濃度を第５
表に示す。

【表】

【表】（）急性毒性 SF2487物質のナトリウム塩のマウス（ICR系、
５週令）の腹腔内投与による急性毒性試験の14日
目の結果を第６表に示す。第６表 SF2487物質のナトリウム塩の急性毒性投与量（mg／Kg）生存数／試験数 50 ０／３ 25 １／３ 12.5 ３／３

【図面の簡単な説明】

第１図はSF2487物質ナトリウム塩のKBr錠で
の赤外線吸収スペクトルを示し、第２図は
SF2487物質ナトリウム塩の重クロロホルム中で
測定した水素核磁気共鳴スペクトルを示し、第３
図はSF2487物質ナトリウム塩の重クロロホルム
中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１下記の化学構造式を有する新規抗生物質
SF2487物質又はその塩類。２アクチノマデユラ属に属する抗生物質
SF2487物質生産菌を培養し、その培養物から
SF2487物質を採取することを特徴とする新規抗
生物質SF2487物質又はその塩類の製造法。