JPH0374655B2

JPH0374655B2 -

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Publication number: JPH0374655B2
Application number: JP60120627A
Authority: JP
Priority date: 1985-06-05
Filing date: 1985-06-05
Publication date: 1991-11-27
Also published as: JPS61280286A

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野本発明は抗真菌及び抗菌活性を有する新規抗生
物質SF−2369物質及びその製造法に関するもの
である。従来の技術及び発明が解決しようとする問題点従来、数多くの抗生物質が発明され、医薬品、
動物用薬品、農薬等の分野で実用化されている。
しかしながら、まだ有効な物質が見出されないた
め解決されていない医療あるいは産業分野が多く
残されている。例えば真菌に対する化学療法分野
においても、新しい作用をもつ新規の抗真菌抗生
物質を提供することは常に要望されている。本発明者らは、以上のような点に着目し、新規
な抗生物質を提供するとともに、その製造法を確
立することによつてこれを解決しようとするもの
である。問題点を解決するための手段、作用及び効果本発明者らは、上述の期待にこたえるべく、抗
真菌活性を有する物質の探索を続けていたとこ
ろ、アクチノマデユラ（Actinomadura）属に属
するある菌株の培養物中に、クリプトコツカス・
ネオフオルマンスM9010（Cryptococcus
neoformansM9010）等の真菌の生育を阻害する
物質が生産されていることを見出し、有効物質
SF−2369物質を単離し、その化学構造式、理化
学的特性及び生物学的特性を確定することにより
本発明を完成した。従つて、第一の本発明は、次の化学構造式も有
する新規抗生物質SF−2369物質（２，５−ビス
−（３−イソシアノブチリルアミノ）−１−ペンタ
ノール）を提供するものである。本発明のSF−2369物質は、単離、精製工程に
おける後処理の如何により、遊離形又は溶媒化物
として得られるが、いずれも本発明の範囲に含ま
れるものである。 SF−2369物質を単離、精製するに際し、ジエ
チルエーテルで結晶化を行うと、SF−2369物質
はジエチルエーテル溶媒化物として単離される。このジエチルエーテル溶媒化物は、次の理化学
的特性を有する。元素分析値：炭素 58.49重量％、水素 8.14重量％、窒素 17.44重量％（50℃，８時間減圧乾燥後）分子量：308 （FD−MSにおいて331（Ｍ＋Na）、
SI−MSにおいて309（Ｍ＋１）を観
測した。）融点：45〜47℃ 比旋光度：［α］²⁵ _D−21゜（c1.0、メタノール）紫外部吸収スペクトル：特徴的な吸収なし（メタ
ノール中）赤外部吸収スペクトル：第１図に示す（臭化カリ
ウム錠中）溶解性：水、メタノール、エタノール、クロ
ロホルムに可溶、ｎ−ヘキサンに不溶呈色反応：ヨード反応、グレイグ・リーバツク試
薬…陽性ニンヒドリン反応…陰性塩基性・酸性・中性の区別：中性外観：無色針状晶本発明のSF−2369物質は、ジエチルエーテル
溶媒化物として、更に第２図に示す重クロロホル
ム中で測定した水素核核磁気共鳴スペクトル及び
第３図に示す重クロロホルム中で測定した炭素核
核磁気共鳴スペクトルを示す。また、シリカゲル薄層クロマトグラフイーにお
けるRf値は、展開溶媒クロロホルム−メタノー
ル−水（65：25：４）で0.65、アセトンで0.52で
ある。上述の理化学的特性及び各種スペクトルデータ
からSF−2369物質は、C₁₅H₂₄N₄O₃の分子式を有
し、イソニトリル基２個を有すると推定される。
しかしながら、これまでに見い出されているイソ
ニトリル基を有する抗生物質とは理化学的特性が
異なることからSF−2369物質は新規物質と判定
した。更に、第２の本発明は、アクチノマデユラ属に
属するSF−2369物質生産菌を培養し、得られた
培養物からSF−2369物質を採取することを特徴
とするSF−2369物質の製造法を提供するもので
ある。本発明に用いるSF−2369物質生産菌としては、
その培養物中に、採取するに充分な量のSF−
2369物質を生産する能力を有するものであれば、
いかなるものであつてもよく、このような菌株の
一例としては本発明者らにより神奈川県厚木市の
土壌より新たに分離されたSF−2369株が挙げら
れる。本菌株の菌学的性状は次の通りである。形態的特徴基生菌糸はよく伸長分岐し、通常の条件下で
は分断しない。気菌糸はグリセロール・アスパ
ラギン寒天、チロシン寒天、リンゴ酸カルシウ
ム寒天等で比較的よく着生し、胞子形成も豊富
である。気菌糸の分岐は単純分岐で車軸分岐は
見られない。気菌糸上の胞子連鎖は主に直状
で、時にループ状も認められる。電子顕微鏡で
観察すると、胞子は卵型〜楕円型で、0.9〜1.1
×1.0〜1.4μmの大きさを有し、表面はしわ状〜
粗面状である。胞子の連鎖は４〜10個程度の場
合が多い。菌核、胞子のう、鞭毛胞子は認めら
れない。各種培地上の生育状態

【表】生理的性質 (1) 生育温度範囲：オートミール寒天におい
て、15〜42℃の温度範囲で生育し、25〜37℃
において良好に生育する。 (2) ゼラチンの液化：陰性（20℃，21日培養） (3) スターチの加水分解：陰性（28℃，21日培
養） (4) 硝酸塩の還元：陽性 (5) 脱脂乳に対する作用：ペプトン化も凝固も
陰性（28℃，37℃） (6) メラニン様色素の生成：陰性 (7) 耐塩性：1.5％の食塩含有培地では生育す
るが、3.0％以上では生育しない。炭素源の利用性（プリードハムとゴツトリー
ブ培地使用） (1) よく利用する：Ｄ−グルコース，Ｄ−マン
ニトール，Ｌ−ラムノース (2) 利用する：Ｄ−フラクトース，Ｌ−アラビ
ノース (3) 利用しない：Ｄ−キシロース，ｉ−イノシ
トール，シユクロース，ラフイノース細胞壁組成全細胞加水分解物中の２，６−ジアミノピメ
リン酸はメソ型であり、糖としてマデユロース
が認められた。以上の性状よりSF−2369株は放線菌の中でア
クチノマデユラ属に属すると考えるのが妥当であ
る。従つて、本発明者らはSF−2369株をアクチ
ノマデユラ・エスピー・SF−2369
（Actinomadura sp.SF−2369）と命名した。SF
−2369株は工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄第8198号（FERMP−8198）として受託
されている。 SF−2369株は他の放線菌の場合に見られるよ
うに、その性状が変化しやすい。例えば、SF−
2369株の、又はこの株に由来する突然変異株（自
然発生又は誘発性）、形貫接合体又は遺伝子組換
え体であつても、抗生物質SF−2369物質を生産
するものは全て本発明に使用出来る。本発明の製
造法では、前記の歯を通常の微生物が利用しうる
栄養物を含有する培地で培養する。栄養源として
は、グルコース、水飴、デキストリン、シユクロ
ース、澱粉、糖みつ、動・植物油等を使用でき
る。また窒素源として、大豆粉、小麦胚芽、コー
ンステイープリカー、綿実粕、肉エキス、ペプト
ン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソー
ダ、尿素等を使用できる。その他、必要に応じ
て、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネ
シウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸及びその他
のイオンを生成することができる無機塩類を添加
することは有効である。また菌の発育を助け、抗
生物質SF−2369物質の生産を促進するような有
機及び無機物を適当に添加することができる。培養法としては、好気的条件での培養法、特に
深部培養法が最も適している。培養に適当な温度
は、15〜42℃であるが、多くの場合、25〜35℃付
近で培養する。SF−2369物質の生産は培地や培
養条件により異なるが、振盪培養、タンク培養と
も通常１〜10日の間でその蓄積が最高に達する。
培養物中のSF−2369物質の蓄積量が最高になつ
た時に培養を停止し、培養液から目的物質を単
離、精製する。本発明のSF−2369物質の検定には検定菌とし
てグリプトコツカス・ネオフオルマンスM9010を
用いる。寒天培地上での生育阻止円径は100〜
1000μｇ／mlにおいて濃度の対数と直線関係を示
し、15〜26mmの阻止円を与える。本発明のSF−2369物質は、前述のような理化
学的特性を有しているので、培養物からSF−
2369物質の採取にあたつては、その特性を利用し
て単離、精製することができる。即ち、アンバー
ライトXAD−２（ローム・アンド・ハース社製）、
ダイヤイオンHP−20（三菱化成社製）等の合成
吸着剤、セフアデツクスLH−20（フアルマシア
社製）、トヨパールHW−40（東洋曹達社製）等の
ゲル過剤、シリカゲル、アルミナ等によるカラ
ムクロマトグラフイー及びｎ−ブタノール等によ
る溶媒抽出法、更に、ジエチルエーテル等を溶媒
とする結晶化法等が有効である。以上のような方法により、あるいは、これらを
適宜組合わせることにより、高純度のSF−2369
物質が得られる。次に、SF−2369物質の真菌に対する最小発育
阻止濃度（MIC）を第１表に示した。

【表】で測定
上記の結果から明らかなように、SF−2369物
質はクリプトコツカス・ネオフオルマンスM9010
株等に対し抗菌作用を示し、真菌症治療剤として
の有用性が期待される。なお、本物質は100mg／
Kgの腹腔内投与でマウスに対し毒性を示さなかつ
た。以下に本発明の実施例を示すが、これらは単な
る一例であつて本発明を限定するものではない。
ここに例示しなかつた多くの変法あるいは修飾手
段を用い得ることはもちろんのことである。実施例種培地としてスターチ2.0％、グルコース1.0
％、小麦胚芽0.6％、ポリペプトン0.5％、酵母エ
キス0.3％、大豆粉0.2％、炭酸カルシウム0.1％を
含む培地を用いた。また、生産培地として、水飴
2.0％、大豆油0.2％、綿実粕1.0％、小麦胚芽1.0
％、コーンステイープリカー0.5％、炭酸カルシ
ウム0.1％、硫酸マグネシウム0.1％、硫酸第一鉄
0.0005％、塩化コバルト0.0005％を含む培地を用
いた。なお、殺菌前PHは全てPH7.0に調整して使
用した。前記種培地20mlを分注した100ml容三角フラス
コを120℃で30分間殺菌し、これにアクチノマジ
ユラ・エスピー・SF−2369株（FERM Ｐ−
8198）の斜面培養の４〜５白金耳を接種し、28℃
で５日間振盪培養し、第１種培養とした。次いで
種培地80mlずつを分注した500ml容三角フラスコ
２本を120℃で30分間殺菌し、前記第１種培養４
mlずつを接種し、28℃で３日間振盪培養し、これ
を第２種培養とした。更に種培地１ずつを分注
した５容三角フラスコ２本を120℃で30分間殺
菌し、第２種培養50mlずつを接種し、28℃で２日
間振盪培養し、これを第３種培養とした。予め
120℃で30分間殺菌した35の生産培地を含む50
容ジヤーフアーメンター２基に前記の第３種培
養１ずつを接種し、28℃で６日間通気（35／
分）、撹拌（初期250rpm，41時間以降400rpm）
培養した。培養終了後、過助剤として珪藻土を
加えて過し、液50を得た。得られた培養液50をダイヤイオンHP−20
（三菱化成社製）５を充填したカラムに通過さ
せることにより有効成分を吸着させた。カラムを
脱イオン水20にて水洗後、有効成分を50％メタ
ノール水にて溶出した。活性画分を集め、減圧下メタノールを留去して
10とし、ｎ−ブタノール５にて２回抽出し
た。ｎ−ブタノール層を減圧下濃縮乾固し21ｇの
油状物質を得た。得られた油状物質をワコーゲル
Ｃ−200（和光純薬工業社製）20ｇにまぶし一夜乾
燥後、クロロホルムで充填したワコーゲルＣ−
200 200mlのカラムの上に乗せクロマトグラフイ
ーを行つた。クロロホルム−メタノール混液
（20：１）で溶出される活性画分を集め、減圧下
濃縮乾固して427mgの油状物質を得た。この油状
物質をメタノールで充填したセフアデツクスLH
−20（フアルマシア社製）650mlのカラムに乗せ、
メタノールで展開した。活性画分を減圧下濃縮乾
固し、281mgの油状物質を得た。この油状物質を
少量のメタノールに溶解後、約20mlのジエチルエ
ーテルを加えて48時間、冷暗所に放置したとこ
ろ、SF−2369物質の無色針状晶16.3mgが得られ
た。本物質は前記の化学構造式及び理化学的特性
を有する。

【図面の簡単な説明】

第１図はSF−2369物質の臭化カリウム錠中で
の赤外部吸収スペクトルを示し、第２図はSF−
2369物質の重クロロホルム中での水素核核磁気共
鳴スペクトルを示し、第３図はSF−2369物質の
重クロロホルム中での炭素核核磁気共鳴スペクト
ルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１次の化学構造式：を有するSF−2369物質。２アクチノマデユラ（Actinomadura）属に属
するSF−2369物質生産菌を培養し、得られた培
養物からSF−2369物質を採取することを特徴と
するSF−2369物質の製造法。