JPS601152A - 新抗生物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は一般式（１） 〔式中、几は水素原子（ＤＯ−８７−Ａまたは−Ｏ−２
−０−メチル−α−Ｌ−ラムノース（ＤＣ−８７−Ｂを
表わす〕で表わされる化合物ならびにそれらの製造法に
関する有用な抗生物質は常にめられており、この目的の
ために微生物による抗生物質の生産について研究した結
果、１）　Ｏ−８７−Ｂが生産されることが見い出され
た。本発明のＤＣ−８７−Ａ、ＤＯ−８７−Ｂの具体的
な理化学的性質は次の通りである。

（１）　Ｄ　Ｏ−８７−Ａ ■融点　１２５−１２７℃ ９■分子ｆｆ、：　３７０（マススペクトル法）■分子
式　Ｃ２゜Ｈ２ＳＯ４ ■赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）；第１図■Ｐ
ΔＩＲスペクトル（ＣＤＣｌ　３中、ＴＭＳ基準）；第
２図Ｑ）紫外部吸収スペクトル（９０％ＭｅＯＨ中）２
２８＋　２５８＊　４３２ｎｍ 上記理化学的性質からこの物質は次の平面４７キ造式で
表わされる化合物であると決定され＋２１　Ｄ　Ｃ−８
７−Ｂ ■融　点　１８Ｂ−１９３℃ ■元素分析値　Ｃ：５７．８５チ　Ｈ：５．５０％■分
子餠　５４６ ■分子式　〇、　、Ｈ，。０１゜ ■赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ＠剤法）第３図ψ）Ｐ
Ｍ）Ｌスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄｓ中、ＴＭＳ基準）第
４図 ■紫外部吸収スペクトル（９０ｐ　ＭｅＯＨ中）２２８
＝　２５８，４３２ｎｍ 上記理化学的性質からこの物質は次の平面構造式で表わ
される化合物であると決定されＤＣ−８７−Ａ、ＤＣ−
８７−Ｂ物質のシリカゲル薄層クロマトグラフィー〔シ
リカゲルとしてＫｉｅｓｅｌ　ｇｅｌ　６０　Ａｒｔ、
　５７１５（商品名Ｅ、Ｍｅｒｃｋ西独）を用い、室温
で２時間展開する〕でのＲｆ値は第１表に示される。

第１表 ９０：１０（容量比）ＤＣ−８７−Ｂ　Ｏ，２０■酢酸
エチル　ＤＣ！−８７−Ａ　Ｏ，５７ＤＣ−８７−Ｂ　
Ｏ，１３ 本発明のＤＣ−８７−ＡおよびＤＣ−８７−Ｂはいわゆ
るアンスラサイクリン群に属するが、いずれの既知化合
物とも合致せず、新スリ、化合物である。

ＤＣ−８７−ＡおよびＤＣ−８７−Ｂの各秒微生物に対
する抗菌活性（寒天希釈法ｐＨ７，０）を第２表に示す
。

第２表 ＡＴＵＣ１０２３１ 次にＤＣ−８７−Ａ、−Ｂの急性毒性（ＬＤ６゜）はマ
ウスへの腹腔内投与でそれぞれ４０　ｏｍｉｐ以上、３
０鳴４であった。

次にこれらの抗腫瘍活性を示す。

実験方法 ザルコーマ１８０腹水型腫瘍に対する治療効果体重約２
０ｆのｄｄｙ雄マウス１群６匹にサルコーマ１８０腹水
型肺瘍細胞ｓ　ｘ　ｉ　ｏ’個を腋窩部皮下に移植した
。移植後２４時時間上各種濃度のＤＣ−８７−Ａ、−Ｂ
の燐酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）溶液Ｑ、　２ｍｌを
１回腹腔内に投与ＮａｃｌＯ，８ｐ（ｆ４　薦０．０２
ｆ／ｉｔ。

した。ＰＢＳの組成はＮａｇ）ｌＰＯ４１，１５ｆＡｔ
ｌ。

△ ＫＨ，ＰＯ４０，０２ｆ／ｄ／、　ｐＨ７，２０モ（７
）”ｔ’アル。比較例としてＪ！１価細胞移植後２４時
開目にマイトマイシンＣを含むＰ　Ｂ　８０．２　ｍを
腹腔内に投与した群を設けた。移植１０日後の平均腫瘍
体積（＊ｍ”　）およびＴ／Ｃ（Ｔ　：試験例の平均腫
瘍体積、Ｃ：ＰＢＳ０．２−を腹腔内投与したものの平
均腫瘍体積）を測定し、第３表に示す結果を得た。

第３表 ＤＣ−８７−Ａ　４００ｒｔ９　０．５０２００ｍ９　
０．８７ １００ｖ９　１．０５ ＤＣ−８７−Ｂ　３００■　０．４７ １５０ｍｇ０．７５ ７５’ｒ１９　０．９７ マイトマイシン０　６ｍ９　０．３３ 従ってここにあげた化合物は、それぞれ抗菌剤のみなら
ず抗腫瘍剤として有用である。

次に］）Ｃ−８７−ＡおよびＤＣ−８７−Ｂの製造法に
ついて説明する。

これらの物質はストレプトスボランジウム属にＡ鳴し、
ＤＣ！−８７−ＡまたはＤＣ！−８７−Ｈの生産能を有
する微生物を培地に培養し、培養物中にＤＣ−８７−Ａ
及びＤＣ−８７−Ｈの少なくとも１種を蓄積せしめ、該
培養物から蓄積したＪ）Ｃ−８７−ＡまたはＤＣ−８７
−Ｂを採取することによって得ることがセきる。

使用する微生物としては、ストレプトスポランジウム屈
に属し、Ｉ）Ｃ−８７−ＡまだはＤＣ−８７−Ｂを生産
する能力を有する微生物であればいずれの微生物も用い
ることができる。

好適な菌としては前記Ｄｏ　−８７株があげられる。

次にＤｏ−８７株の蘭学的性質について記述する。

Ｄｏ−８７株の特徴 ■　形態的特徴 本菌株は、合成培地よシ天然培地上に比較的よく生育す
るが、一般に使用されている寒天培地上では気中菌糸の
形成は弱い。

比較的よく生育した培地上では、若生菌糸は盛υ上って
おシ、色調はクリーム色系で、培地によっては、いずれ
も薄い黄、黄茶、もしくはピンク色を帯びる。気中菌糸
の形成能は低く、その色調社、白もしくは薄い灰色であ
シ、形態は直状に伸長した菌糸から頻繁な分枝が観察さ
れる。胞子は、気中菌糸から分枝した炉かい胞子柄端に
形成される胞子嚢内にのみ数多く存在し、胞子の形は１
．３〜ＩＸ１．２〜０．８μｍのほぼ球状で、その表面
は平滑で、運１ｊｂ性は紹められない。胞子勃の形は、
５〜６μｍの直径を持つ球状である。

■　各数倍地上での生育状態 本菌株を各種培地上で生育させた時の生育。

色などについて以下に示す。色の表示はＣｏ１ｏｒ　Ｉ
Ｉａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ　）によ
る色の分類に従ったものである。

（１）　シュクロース・硝酸塩寒天培地生育：なし く２）クルコース・アスパラギン寒天培地生育：不良 気中菌糸：なし 若生菌糸の表面、′Ｒ面の色ニライト・フィー）（２ｅ
ａ） 可溶性色素：なし く３）　グリセリン・アスパラギン寒天培地生育：不良 気中菌糸：なし 若生菌糸の表面、ＩＡ面の色二パール・ピンク（３゛ｃ
ａ） 可溶性色素：なし く４）スターチ寒天培地 生育：不良 包中菌糸：貧弱、白色（ａ） 苛生菌糸の表面、裏面の色二パール・ピンク（３Ｃａ）
〜ライト・タン（３ｆｃ　）可溶性色素：なし く５）チロシン寒天培地 生育：普通、隆起状 気中菌糸二月弱、白色（ａ） 若生菌糸の表面、裏面の色：フレッシュ・ピンク（４ｃ
ａ）〜パール・ピンク（３ｃａ）可溶性色素：フレッシ
ュ・ピンク（５ｃａ）（６）栄養寒天培地 生育：不良〜普通、隆起状 気中菌糸：なし 若生菌糸の表面、裏面の色：クリーム（１＋ｃａ　） 可溶性色素：なし く７）イースト・麦芽寒天培地 生育：普通２粒状 気中菌糸：貧弱、白色（ａ） 若生菌糸の表面、＆面の色ニライト・マスタード・タン
（２ｉｅ　） 可溶性色素：なし く８）オートミール寒天培地 生育：普通、隆起状 気中菌糸：貧弱！白色（ａ） 若生菌糸の表面、裏面の色：マスタード（２Ｉ！ｅ）可
溶性色素：なし く９）　ペプトン・イースト鉄寒天培地生育：なし Ｑｌ　ヒツキー・トレスナー氏寒天培地生育：晋通、隆
起状 気中角糸：普通、パール・グレイ（１３ｄｃ）若生菌糸
の表面、裏面の色二ベージ−（３ｇｅ）可溶性色素：な
し ■　生理的性質 ＤＯ−８７菌株の生理的諸性質を以下に示す。温度なら
びにＹルクおよび繊維素に対する作用以外のものについ
ては２８℃で３週間後の観察結果を示し、温度は３日後
、ミルク及び繊維素に対する作用については１力月後の
結果を示す。

（１）炭素源の資化性＝Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノ
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンニット、Ｄ−フラクト
ースを資化するが、Ｄ−アラビノース、イノシトール、
Ｌ−ラムノース！シュクロース、ラフィノースは資化し
ない。

（２）　ゼラチンの液化：なし く３）　脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：いずれもなし く４）繊維素の分解作用：わずかにある。

（５）生育温度範囲＝２４℃〜３６℃ （６）　スターチの加水分解二弱い （７）メラニン様色素の生成（チロシン寒天培地及びペ
プトン・イースト鉄寒天培地上）：なし １）　０−８７菌株は寒天培地上で、比較的よく分枝し
た気中菌糸を形成し、かつ、気中菌糸上に球形の胞子光
を作シ、包含される胞子は運動性を持たない。一方、細
胞壁のジアミノピメリン酸のタイプはＤＬ型を有するこ
とから、本菌株は放線菌のストレブトスボランギウム（
８ｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ　）属に属する菌
株である。よって、ＤＯ−８７菌株をストレプトスボラ
ンギウム・８Ｐ−ＤＯ−８７と命名し、本菌株は工業技
術院微生物１粟技術研究所に徴工研菌寄第７０３２号と
して寄託されている。

次に培養法についてのべる。

本発明の培養においては通常の放線菌の培養法が一般に
適用できる。培養は炭素源、窒素源、熱桧物等を程よく
含有する培地であれは天然、人工いずれの培地ででもで
きる。

炭素源としてはブドウ糖、澱粉、デキストリン、マンノ
ース、フラクトース、シュ蓼クロース、２クトース、キ
シロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜などが単
独まだは組み合わせて用いられる。さらに、菌の資化能
によっては炭化水素、アルコール類、有機酸なども用い
うる。無機および有機の窒素源としては塩化アンモンＩ
硫酸アンモンー硝酸アンモン、硝酸ソーダ、尿素など、
さらに窒素を含有する天然物例えばペプトン、肉エキス
。

酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチーブ・リカー、大
豆粉、カザミノ酸などが単独まだは組み合わせて用いら
れる。

そのほか、必要に応じて食塩、塩化カリ！硫酸マグネシ
ウム、炭酸カルシウム、燐酸二水素カリウム、燐酸水素
二カリウム、硫酸第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガ
ン、硫酸亜鉛、硫酸銅などの無機塩類を加える。さらに
使用菌の生育やＤＣ−８７物質の生産を促進する微量成
分例えばビタミンＢ１ｖビオチンなどを適当に添加する
ことができる。

培養法としては、液体培養法、とくに深部ｔｑ拌培養法
がもうとも適している。培養温度は２５〜４０℃、特に
２８〜３８℃が最適で、培地のｐＨはアンモニア水や炭
酸アンモニア水などを添加して、ｐＨ４〜１０、好まし
くは６〜８で培養を行なうことが望ましい。

液体培養で通常１日ないし４日培養を行なうと、目的物
質が培養液中および菌体中に生成蓄積される。

培養物中の生成量゛が好ましくは最大に達したときに培
養を停止し、菌体な炉別し、培養液と菌体にわける。

培養済液からのＤＣ−８７−Ａ、−Ｂの単６１ト精製に
は、微生物代謝生産物を、その培養液から単離するため
に用いられる通常の分離・ｆｉｌ法が適用される。例え
ば、培養生産物を培養液と菌体とに分離し、培養液はそ
のままは、ＨＰ−２０、商品名、三菱化成製など）△ を通過させ、活性成分を吸着させた後、メタノール、ア
セトン、酢酸エチルなどを用いて吸着物質を脱着させる
。

この脱着液を濃縮し、濃縮液をシリカゲルのカラムクロ
マトグラフィーに付しクロｐホ△ ＤＣ−８７−ＡおよびＤＣ−８７−Ｂを含む両分を集め
、溶解を留去した後、酢酸エチルから結晶化を行い、橙
赤色の結晶を得る。

次に本発明の態様を実施例で示す。

実施例中、ＤＣ−８７−ＡおよびＤＣ−８７−Ｂはバチ
ルス・ズブチリス／％１０７０７を用いるバイオアッセ
イ法又はこれら固有の橙赤色を目安にして追跡した。

実施例１ 徨菌としてストレプトスボランジウム・エスピーＤｏ−
８７微工研菌寄第７０３２号を用いる。骸菌株を２１容
量の三角フラスコ中の種培地〔グルコース１０　ｆ／ｌ
　、可溶性でんぶん１０μシ牛肉エキス３　ｆ／１１　
、酵母エキス５りｌ、バクトドリプトン５□、　ＣａＣ
０゜２ｆ／ｌ　ｌ　ｐＨ７，２）　３００−に植菌し、
３０”Ｃで４８時時間表り（２２０ｒｐｍ）培養する。

かくして得られた種培養液を３０７容分のジャーファー
メンタ−中の下記組成の発酵培地１５１に５９ｇ（容ｆ
！′）（７）割合で移し、３０℃で通気攪拌方式（回転
数３０Ｏｒｐｍ＋通気９−．１５１／ｍ＋ｎ　）によシ
培養を行う。

発酵培地組成：グリセロール５０Ｆ／７！、コーン・ス
チーブ・リカー２０　ｆ／１１　、　ＩＩＧ（、ｍ、　
０．５ｆ／ｌ　９ＭｆＳＯａ　・７１１ｚＯ０，５シ汎
（、’ａｃＯ３５ｆｉｌｐＨ７，０（殺菌前）にＮａＯ
Ｈで調整する。

培養中培地のｐＨは２　Ｎ　Ｈ，８０，で７〜８に制御
し、７２時間培養する。培養液よシ菌体および沈澱物を
炉別し、Ｆ液を１３１！得る。

まずＦ液を１１の非イオン性多孔性樹脂（ＨＰ−２０、
商品名、三菱化成社Ｍ）に通塔して活性物質を吸着させ
、水約３１で水洗後、６０　％　（ｖ／ｖ）メタノール
約３１で洗い不純物を除去する。次いで約２１の水で水
洗し、約３ノの酢酸エチルで溶出する。酢酸エチル画分
を水１１にて洗い乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）後、濃縮乾固す
る。これを少量のクロロホルム・メタノール（５０：１
）に溶解し、予め同じ溶媒で懸濁後カラムに充填したシ
リカゲルを届いてり四マドグラフィーを行なう。クロロ
ホルム・メタノール（５０：　１　）で、いわゆるアン
スラサイクリン系化合物に属する８Ｍ−１７３Ｂ（日本
ロッシュ、公開特許公報昭５３−９９０００）が溶出さ
れてくる。

次にクロロホルム・メタノール（２０：　１　）テｔｃ
　−８７−ＡオヨびＤＣ−８７−Ｂが溶出される。また
クロロホルム・メタノール（１０：１）でアランシアマ
イシン（Ｗ、　Ｋｅｌ　１ｅｒ−８ｃｈｌｅｒｌｅｉｎ
　＋　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉａ　＋　２−６＋　９２
９＋　１９７０　）が溶出される。ＤＣ−８７−Ａおよ
びＤＣ−８７−Ｂを含む両分を集め、溶媒を留去した後
、それぞれ酢酸エチルよシ、再結晶するとＤＣ−８７−
Ａの橙赤色針状晶が５０１９、ＤＣ−８７−Ｂの橙赤色
針状晶が８０■得られる。

実施例２ 実施例１において、発酵培地組成を次のものに替えて行
う以外は実施例１と同様に培養を行いＤＣ！−８７−Ａ
およびＤＣ’−８７−Ｂをそれぞれ２５■、６０■得る
。

発酵培地組成ニゲルコース１０□Ｉラクトース２ＯＮ、
綿実粕１５　？／ｌ　、肉エキス１０　ｆ／ｌ　、酵母
エキス５　ｔ／ｌ　、　Ｃａ■３２１゜ｐＨ７，２（殺
菌前）　ＮａＯＨで調整。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図はそれぞれＤＣ−８７−Ａの赤外線吸
収スペクトル及びＰＭＲスペクトルを表わす。第３図及
び第４図はそれぞれＤＣ−８７−Ｂの赤外純吸収スペク
トル及びＰＭＲスペクトルを表わす。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式（１） 〔式中、Ｒは水素原子（該化合物をＤＣ−８７−八と称
   す。）または−０−２−０−メチル−α−Ｌ−ラムノー
   ス（該化合物をＩＪＯ−８７−Ｂと称す。）を表わす。 〕で表わされる化合物・
2. （２）ストレプトスボランジウムハにわ３し、ＤＣ−８
   ７−Ａ及び／又は１）０−８７−Ｉｓを生産する能力を
   有する微生物を培地中で培養し、培養物中ニＤ　Ｃ−８
   ７−Ａ及び／又はＤＣ−８７−Ｂを蓄積せしめ、該培養
   物から生成蓄Ｊ７ｉ　Ｌだ］）　Ｏ−８７−Ａ及び／又
   紘Ｄ（Ｊ−８７−Ｂを採取することを特徴とするＤＣ−
   ８７−人及び／又は１）Ｏ−８７−Ｂの製造法。