JPS60192593A - Ｆｒ−９００４６２物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野」 この発明は薬理活性を有する新規物質（以下ＦＲ−９０
０４６２物質と呼称）に関する。

「問題点を解決するための手段」 この発明のＦＲ−９００４６２物質は、エリトロスボラ
ンギウム・トカシキエンセ（Ｆｌｙｔｒｏｓｐｏ　−エ
リトロスポランギクム属に属するＦＲ−９００４６２物
質産生菌株の醗酵によって生産することができる。

ＦＲ−９００４６２物質製造に使用した菌の特徴を以下
に説明する。

菌 １ｋ７１２４菌株は沖縄県渡嘉敷島から得られた土壌試
料から分離された。

原理的にはシャーリングおよびゴツトリープ（Ｓｈｉｒ
ｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ　）によって記載
された方法［シャーリング、イー・ビー・アンド・ディ
ー・ゴットリープ二メソッズ・フォー・キャラクテリゼ
ーション・オグ・ストレプトマイセス・スペシーズ、イ
ンターナショナル・ジャーナル・オフ・システマチック
・バクテリオロジー（Ｓｈｉ　−ｒｌｉｎｇ、　Ｅ、　
Ｂ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ：Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ’　ｆｏｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ
　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐｅｃｉｅｓ、　Ｉｎｔ
、　Ｊ、　８ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　）第１
６巻、３１３〜３４０頁、１９６６年〕をこの分類学的
研究に使用した。形態学的観察はイースト・マルトエキ
ストラクト寒天上、オートミール寒天上またはスターチ
・無機塩寒天上、３０℃で１４日間生育させた培養物に
ついて顕微鏡および電子顕微鏡を用いて行なった。成熟
胞子はら線状をなす約１０〜２０個の胞子鎖として生成
した。胞子は電子顕微鏡観察の結果シリンダー状、卵形
または腎臓形で、０．４〜０．５　ｘ　Ｏ，７〜０．９
　ｐ−の大きさであった。胞子の表面には多くのいぼま
たはとげがあった。ｍ７１２４菌株は寒天培地中で基底
菌糸上に単胞子鎖または短胞子鎖を形成した。

培養上の特徴をシャーリングおよびゴツトリーフ”ナラ
ヒにワクスマン［ソクスマン、ニス・ニー・：ザ・アク
チノマイセッッ、第２　＠　：クラシフィクーション、
アイデンティフィケーション・アンド・デスクリプジョ
ン・オプ・ゼネラ・アンド・スペシーズ、ザ・クィリア
ムズ・アンド・クィルキンス社、バルチモア発行、３９
６１年（Ｗａｋｓ−ｍａｎ、　Ｓ、　Ａ、　：　Ｔｈｅ
　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、　Ｖｏｌ、　２　：　
Ｃ１ａ−ｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、　１ｄｅｎｔｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎ　ａｎｃｌ　ｄｅｓｃｒｉｐ　−ｔｉｏｎ
　ｏｆ　ｇｅｎｅｒａ　ａｎｄ　５ｐｅｃｉｅｓ、　Ｔ
ｈｅ　Ｗｉｌｌｉａｍｓａｎｄ　Ｗｉｌｌｋｉｎｓ　Ｃ
ｏ、　、　Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ＋　１９６１　）］によ
って記載された１０種類の培地上で観察した。３０°Ｃ
で１４日間インキュベートした。この研究で使用した色
名は日木色彩株式会社の新色冬枯による。

オートミール寒天上、イースト・マルトエキストラクト
寒天上およびスターチ・無機塩寒天上で生育した場合、
集落は灰色系または赤色系に属していた。可溶性色素は
イースト・マルトエキス寒天、その他の中で産生された
。結果を第１表に示す。

細胞壁分析をベラカー等〔ベラカー・ビー、エム・ビー
・レジバリヤー、アール・イー・コードンおよびエイチ
・ニー・レジバリヤー：ラピッド・ジフェレンシエーシ
ョン・ビトクイーン・ツカルティア・アンド・ストレプ
トマイセス・パイ・ペーパークロマトグラフィー・オグ
・ホール−セル・ハイドロリゼーン：アプライド・マイ
クロバイオロジー、第１２９，４２１〜４２３頁１９６
４年（Ｂｅｃｋｅｒ、　Ｂ、　、　Ｍ、　Ｐ、　Ｌｅｃ
ｈｅｖａｌｉｅｒ、　Ｒ，Ｅ、　Ｇｏｒｄｏｎａｎｄ　
Ｈ，Ａ、　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　：　Ｒａｐｉｄ　
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ−ｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　
Ｎｏｃａｒｄｉａ　ａｎｄ　５ｔｒｅ　ｔｏｍ　ｃｅｓ
ｂｙ　ｐａｐｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ
　ｗｈｏｌｅ−ｃｅｌｌｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　：
　Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　１２’＋　４２
１〜４２３、１９６４）］および山口［山口、ティー：
コンバリシン・オプ・ザ・セルΦウオール・コンポジシ
ョン・オフ・モルホロジカリー・テイステンクト・アク
チノマイセソソ：ジャーナル・オフ・バクテリオロジー
、第８９春、４４４〜４５３貝。

１９６５年（山口：　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔ
ｈｅ　ｃｅｌｌ　−ｗａｌｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
　ｏｆ　ｍｏｒｐｈｏｒｏｇｊ、’ｃａｌｌｙｃｌｉｓ
ｔｉｎｃｔ　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　：　Ｊ、Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ、。

８９、　４４４〜４５３．　１９６５）］の方法によっ
て行なった。菌株Ｆｋ３．７１２４の全細胞加水分解物
の分析は、Ｎｏ、　７１２４がＬＬ−ジアミノピメリン
酸を含有することを示した。すなわち、この菌株の細胞
壁はクイズＩであると考えられる。

菌株ｌｌ＆Ｌ７１２４の生理学的性質を第２表に示す。

生育温度範囲および生育至適温度は、温度勾配インキュ
ベーター（東洋化学産業社製）を用いて、イースト・マ
ルトエキストラクト寒天上で測定した。生育温度範囲は
１８〜３４℃、至適温度は２３〜２９°Ｃであった。ス
クーチの加水分解、ゼラチンの液化およびミルクのペプ
トン化は陽性であった。

炭素源の資化性をプリトノ・ムおよびゴツトリープの方
法〔プリドハム、ティー・ジー・アンド・ティー・ゴッ
トリープ：ザ・ユーティライゼーション・オグ・カーボ
ン・コンパウンダ・パイ・サム・アクチノマイセッテー
ルズ・アズ・アン・エイド・フォー・スペシース・デタ
ーミネーション：ジャーナル・オフ・バクテリオロジー
、第５６巻、１０７〜１１４頁、１９４８年（Ｐｒｉｄ
ｈａｍ。

Ｔ、Ｇ、ａｎｄ　Ｄ、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ　：　Ｔｈｅ　
ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆ　ｃａｒｂｏｎ　ｃｏｍｐ
ｏｕｎｄｓ　ｂｙ　ｓｏｍｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅ−
ｔａｌｅｓ　ａｓ　ａｎ　ａｉｄ　ｆｏｒ　５ｐｅｃｉ
ｅｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ：　Ｊ、Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ、　５ｆ２．　１０７〜１１４．　１９４８　
）に従って試験した。結果は３０℃、１４日間インキュ
ベート後に測定した。

この菌株の炭素源資化性を第３表にまとめて示す。

この菌株の基底菌糸胞子の形成および細胞壁組成分析結
果は、この菌株がファルカオ・ドウ・モラリス等、１９
６６年［クロス、ティーおよびエル・ニー・アル−シワ
ニー：ストレプトマイセス・クイズ・ザブストレート・
マイセリアム・スポアズ：ザ・ゼヌス・エリトロスポラ
ンジクム・イン・シャーシ・アンド・プルフェラー（エ
ディジョン）、アクチノマイセッツ：プロシーディング
・オプ・ザ・フォース・インターナショナル・シンポジ
ウム・オン・アクチノマイセット・バイオロジー、ゲス
ターフ・フィッシャー・フェアラーク、シュトットガル
ト、ニューヨーク、５９〜６５頁、１９８１年［Ｃｒｏ
ｓｓ、　Ｔ、　ａｎａ　Ｌ、　Ａ、　ＡＩ！−ｄｉｗａ
ｙ　：旦ｔｒｅ　ｔｏｍ　ｃｅｓ　ｗｉｔｈ　５ｕｂｓ
ｔｒａｔｅ　ｍｙｃｅｌｉｕｍｓｐｏｒｅｓ　：　Ｔｈ
ｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｅｌｙｔｒｏｓ　ｏｒａｎ　ｉｕｍ　
１ｎＳｃｈａａｌ　ａｎｄ　Ｐｕ１ｖｅｒｅｒ（ｅｄｉ
ｔ、　）、　ＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅＳ：　Ｐｒｏｃ
ｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒｔｈ　ｉｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ａｃ
ｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ　ｂｉｏｌｏｇｙ、　ＧｕｓｔＡ
ｖＦｉｓｃｈｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ
＋　Ｎｅｗ　Ｙｏ’ｒｋ＋ｐｐ。

５９〜６５．１９８１）　］によるとエリトロスポラン
ギウム属に属することを示している。

゛すなわち、この菌株をエリトロスポランギクム種と比
較した。エリトロスポランギウム・プラジリエンセＡＴ
ＣＣ２３７２７、エリトロスポランギクム・カルピネン
セＡＴＣＣ２７１１６およびエリトロスポランギクム・
スバイラルスＡＴＣＣ２５６６４の培養上の特徴、生理
学的性質および炭素源資化性をそれぞれ第１表、第２表
および第３表いる。しかしながら、菌株Ｆ＆ｘ、　７１
２４の胞子鎖の形態、培養上の特徴および炭素源の資化
性は３種のそれらと異なる。従って菌株ｍ７１２４はエ
リトロスポランギクムの新種と考えられ、この菌株は渡
嘉敷島で得られ、菌を分離した土壌にちなんでエリトロ
スボランギクム・トカシキエンセ・エスピー−ノブ（Ｅ
ｌ　ｔｒｏｓ　ｏｒａｎ　ｉｕｍ　ｔｏｋａｓｈｉｋｉ
　−姐並Ｓｐ、　ｎＯＶ、　）と命名された。

エリトロスポランギウム・トカシキエンセ隘７１２４、
の培養物は日本、工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄Ｐ−７３９３号として、１９８４年１月１４日
付で寄託されている。

ＦＲ−９００４６２物質の産生 この発明のＦＲ−９００４６２物質は、エリトロスポラ
ンギクム属に属するＦＲ−９００４６２物質−産生菌株
、例えばエリトロスボランギクム・トカシキエンセＩｌ
＆１．７１２４、微工研菌寄Ｐ−７３９３号を、同化し
うる炭素源および窒素源を含む栄養培地中、例えば振と
う培養、深部培養等の好気性条件下に生育せしめる場合
に産生される。

栄養培地中の好ましい炭素源は、グルコース、フルクト
ース、シュークロース、グリセリン、スターチ、デキス
トリン等のような炭水化物である。

その他マルトース、マンノース、イノシトール、マンニ
ラトール、イヌリン、クエン酸ナトリクム等も含まれる
。

好ましい窒素源はイーストエキストラクト、ペプトン、
グルテン粉、綿実粉、大豆粉、コーンステイープリカー
、乾燥イースト、小麦胚芽、羽毛粉等、ならびに例えば
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、燐酸アンモニウ
ム等のアンモニウム塩、尿素、アミノ酸等のような無機
および有機窒素化合物である。

炭素源および窒素源は組合わせて使用すると有利である
が、生育因子を痕跡含みかつかなりの量の無機栄養素を
含むより低い純度の物質も使用に適しているので、純粋
な形で使用する必要はない。

所望の場合妊は、培地に炭酸ナトリウムまたは炭酸カル
シウム、燐酸ナトリウムまたは燐酸カリツム、塩化ナト
リウムまたは塩化カリツム、沃化ナトリウムまたは沃化
カリツム、マグネシクム塩類、銅塩類、コバルト塩等の
ような無機塩類を添加してもよい。要すれば、とりわけ
培養培地が激しく発泡する場合には、液状パラフィン、
脂肪油、植物油、鉱物油またはシリコンのような消泡剤
を加えてもよい。

他の生物学的活性物質の大ｌ生産に使用される好ましい
方法の場合のように、好気性深部培養条件がＦＲ−９０
０４６２物質の大量生産には好ましい。少量生産の場合
にはフラスコ中またはびん中掘とう培養または表面培養
が行なわれる。さらに捷た、生育が大型タンク内で行な
われる場合には、ＦＲ−９００４６２物質の生産工程に
おける生育遅延を回避するために、生産タンクへの菌の
接種には菌を生育している形で使用するのが好ましい。

従ってまず菌の胞子または菌糸を比較的少量の培養培地
に接種し、接種したその培地を培養することにより菌の
生育中の菌糸をまず生産し、次いで培養した生育中の菌
糸を無菌的に大型タンクに移し変えるのが望捷しい。生
育中の菌糸を生産するだめの培地は、ＦＲ−９００４６
２物質の生産に使用される培地と実質的に同じであるか
または異なる。

培養混合物の撹拌および通気は種々の方法で行なわれる
。撹拌はプロペラもしくはこれに類似する機械的撹拌、
醗酵器の回転もしくは振とう、種々のポンプ装置まだは
培地を通しての滅菌空気の通過によって行なわれる。

発酵は通常約２０〜４０°Ｃ１好捷しくけ２５〜３５℃
の間の温度範囲で、約５０〜１５０時間行なわれる。

生産されたＦＲ−９００４６２物質は、他の公知の生物
学的活性物質の回収に共通して使用される常法によって
培養培地から回収することができる。

産生されたＦＲ−９００４６２物質は培養菌糸中に見出
される。ＦＲ−９００４６２物質は培養プロスの濾過ま
たは遠心分離によって得られる菌糸から抽出される。抽
出はアセトン、プクノール等を用いて行なうことができ
る。このようにして得られだ粗ＦＲ−９００４６２物質
は、シリカゲル等を使用するカラムクロマトグラフィー
、液体クロマトグラフィー、結晶化等のような慣用の方
法によって精製することができる。

前記製造法に従って得られたＦＲ−９００４６２物質は
、下記の物理化学的性質を有する。

（１）形状および色 うす黄色の粉末 （２）元素分析値 Ｃ：６２．６０％＋Ｈニア、０１％、Ｎ：８．１１％（
３）呈色反応 硫酸セリウム反応、沃素反応、ニンヒドリン反応および
ドラーゲンドルフ反応：陽性パラジクム反応：陰性 （４）溶解性 メタノールおよびアセトンに可溶 エタノールおよびクロロホルムに微温 ヘキサン、水およびベンゼンに不溶 （５）融　点 １７８〜１８２℃ （６）比旋光度 〔α］２３：　＋１８６．２°　（Ｃ：１．０５．メタ
ノール）（７）紫外部吸収スペクトル １％　。

：　３０７ｎｍ　（Ｅ　、４７０） １ｃｍ ：　３３５ｎｍ　（Ｅ’％　：　３００）１ｃ＋ｎ １％　。

：　３８０ｎｍ　（Ｅ　、１３０） ｃ１ｎ ３０７、　３１７．　３３５゜ ８０ｎｍ ３０７、　３１７．　３３５゜ ８０ｎｍ （８）赤外吸収スペクトル １４４０、　１３００．　１２５５．　１２００゜１１
８０、　１１６０．　１１４５．　１１３０゜１０８０
、　１０５０（ｓｈ、）、　１０３０゜９８０、　９５
５．　’８２５．　７５０ｃｍ−１（９）分子量 ＥＩ　Ｍａｓｓ　：　ｍ／ｚ　４９９（Ｍ　）ＦＤ　Ｍ
ａｓｓ　：　ｍ／ｚ　４９９（Ｍ　）ＦＡＢＱ　Ｍａｓ
ｓ　：　ｍ／ｚ　５２２（Ｍ　＋　Ｎａ）ｍ／ｚ　５０
０（Ｍ　＋　１） （１０）　１００棟磁気共鳴スペクトル（ＣＤ３０Ｄ）
： δ（ｐｐｍ）・１６４．３．　１４９．５．　１４９．
３．　１３３．８．。

１２７．４．　１２６．５．　１２５．９．　１２５．
３゜１１４．１．　１０７．７．　１０７．４．　１０
４．３゜１０１．９．　７５．７．　７３．３．　７０
．６．　６８．９゜５８．４．　５１．１．　３８．６
．　３６．１．　２５．３゜２４、Ｌ、２０．０．　１
９．８．　１８．６．　９．４（１１＋’Ｈ核磁気共鳴
スペクトル （ＣＤ３０Ｄ）： δ（ｐｐｍ）：　７．０４（ＬＨ，ｓ）、６．９１（Ｉ
Ｈ，ｂｒ、　８．　）。

６．２７（ＩＨ，ｄ、　Ｊ−１６Ｈｚ）、５．５７（Ｉ
Ｈ。

ｍ）、　５．２５（ＬＨ，ｄ、Ｊ−１，８Ｈｚ）、４．
１５（１１，ｍ）、３．７６（ＩＨ，ｍ）、３．６０（
ＩＨ。

ｄ、　Ｊ＝１．８Ｈｚ）、３．５７（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝
１３Ｈｚ）。

３．３５（ＩＨ，ｍ）、３．１８（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝１
６゜１１Ｈｚ）、２．６２（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ＝１６．
４．５Ｈｚ）。

２．５２（３Ｈ，ｓ）、２．４７（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝１
０Ｈｚ）。

２．０１（３Ｈ，ｓ）、１．８１（３Ｈ，ｄ、　Ｊ＝６
．３Ｈｚ）。

１．６３（３Ｈ，ｓ）、１．５２（３Ｈ，、Ｂ）１　１
．３９（３Ｈ，ｓ）、１．３０（３Ｈ，ｄ；　Ｊ、＝６
．’３Ｈｚ）（１２）薄層クロマトグラフィー ＦＲ−９００４６２物質は腫瘍、感染症等の治療に有用
である。

そのよう々薬理活性を示す例として、薬理試験結果数例
を以下に示す。

試験Ｉ ＦＲ−９００４６２物質の抗腫瘍活性 ＦＲ−９００４６２物質の抗腫瘍活性をマクスの実験的
腫瘍系で測定した。

メラニン性黒色腫Ｂ１６をＣ５７ＢＬ／６系成熟雌マク
スに、マクス当り細胞数Ｉ　Ｘ　１０’個の接種サイズ
で腹腔内注射によシ移植した。腫瘍細胞移植２４時間後
、各濃度段階のＦＲ−９００４６２物質をマウスに腹腔
内注射によシ投与した。処置は腫瘍接種後、第１．２．
３および４日目に１日１回行なった。対照群の動物には
生理食塩水を腹腔的注射により投与した。注射容量はす
べての実験で０．２　ｍｅとした。各実験群には５匹の
マウスを使用した。

抗腫瘍活性をマクス群の平均生存時間で評価し、処置群
の平均生存時間／対照群の平均生存時間×１００、すな
わちＴ／Ｃ％で表わした。

その結果を第４表に示す。

ＦＲ−９００４６２物質はメラニン性黒色腫Ｂ１６に対
して有効であった。６０〜５００μｙ／ｋｙの間の投写
部でマウスの寿命は有意に延長した。

第４表、ＦＲ−９００４６２物質の抗腫瘍活性試験２ ＦＲ−９００４６２物質の抗菌活性 ＦＲ，−９００４６２物質の抗菌活性を菌のプーイヨン
培地のプロス逐次希釈法によって測定した。

３７°Ｃで一夜培養後に、最小阻止濃度（ＭＩＣ）をｐ
ｙ／ｍｅで表わした。

ＦＲ−９００４６２物質はＢａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔ
ｉｌｉｓに対してＭ　Ｉ　Ｃ：１．２５　ｆｉｆ／ｍｅ
、５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ　２０９
　Ｐ　Ｋ対してＭ　Ｉ　Ｃ：　５　）ｔ９　／ｍｅの抗
菌活性を示した。

試＠３ ＦＲ−９００４６２物質の急性毒性 ｄｄＹ系マウスにおける腹腔的注射によるＦＲ−９００
４６２物質の急性毒性は、ＬＤ５ｏ：　２０　ｍｙ／ｋ
ｙである。

この発明の医薬組成物は、例えば、外部用、内部用また
は非経口適用に適した有機捷たけ無機担体捷たは賦形剤
と混合して、ＦＲ−９００４６２物質を有効成分として
含有する固体状、半固体状まだは液体状の医薬製剤の形
で使用することができる。有効成分は、例えば、錠剤用
、ペレット用、カプセル用、坐剤用、溶液用、エマルジ
ョン用、懸濁液用および使用に適したその他のあらゆる
形状用の医薬として許容される無毒性担体と混合すれば
よい。使用されうる担体は水、グルコース、ラクトース
、アラビアゴム、ゼラチン、マンニラトール、スターチ
・ペースト、マグネシウムトリシリケート、グルコ、コ
ーンスターチ、ケラチン、コロイドシリカ、ボテトスク
ーチ、尿素および固体状、半固体状または液状の製剤製
造における使用に適したその他の担体であり、さらに、
助剤、安定剤、濃厚化剤、着色剤および芳香剤を使用し
てもよい。目的とする活性化合物は医薬組成物中に、疾
患の過程または条件によって所望の効果を発揮するのに
充分な岱含有される。

この組成物を人に適用するには、非経口投与によって適
用するのが好捷しい。ＦＲ−９００４６２物質の医薬と
しての有効投与量は処置すべき各個の患者の年齢および
条件によって変化するが、疾患の治療には有効成分１日
当り通常約１〜１０００巧、好ましくは１〜５００〜が
投与され、一般的には平均１回投与量約ｌり、５〜．１
０〜．５０■および１００■が投与される。

この発明を以下実施例に従って説明する。

実施例１ 醗酵 コーンスターチ１％、グリセリン１％、グルコ−ス０．
５％、綿実油１％、乾燥イースト０．５％、コーン・ス
テイープ・リカー０．５％およびＣａＣＯ３０，２俤を
含む種培地（８，０ｍｌ　）　（６ＮＮａＯＨでｐＨ６
，５にＮりを２５０　ｒｎｅのエルシンマイヤーフラス
コ３０個それぞれに注ぎ、１２０°Ｃで３０分間滅菌す
る。エリトロスボランギクム・トカシキエンセ１１ｋ１
．７１２４微工研菌寄Ｐ　−７３９３（Ｅｌｙｔｒｏ−
ｓ　ｏｒａｎ　ｉｕｍ　ｔｏｋａｓｈｉｋｉｅｎｓｅ　
ｔｈ　７１２４　ＦＥＲＭＰ−７３９３）の斜面培養物
の１白金耳を各培地に接種して３インチの行程、２０Ｏ
ｒｐｍのロータリー・シェーカー上３０℃で４日間培養
する。種培地３１を、予じめ１２０℃、３０分間滅菌し
た２００ｅの鋼製醗酵基中の、可溶性でん粉３係、シュ
ークロース１％、コーンスターチ０．５％、イーストエ
キストラクト０．５％、グルテン粉０．５％、羽毛粉０
．５％、Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ２００，０５％、ＮａＣＯ３
０，０５％、ＣＯＣｌ２−６Ｈ，、ＯＯ，ＯＯＯ４％、
ＮａＩ　Ｏ，００００５％およびＮａＣＯ３０，２％を
含む生産培地１６０１（ｐＨ６，８）Ｋ接種し、２０１
／分の通気下に３０　Ｏｒｐｍで撹拌しなから３０°Ｃ
で３日間培養する。

分離 このようにしてｆＵ−られる培養ブロスを珪藻土４に７
を用いて濾過する。得られる菌糸にアセトン１２０ｇを
加えて３０分間撹拌し、抽出液を３０１容捷で減圧濃縮
する。得られる濃縮抽出液にブタノール３０１を加えて
振とうする。この抽出操作を２回行なって抽出液を合わ
せる。次いで抽出液を減圧濃縮し、得られる油状物質を
シリカゲル（４Ｉりを使用するカラムクロマトグラフィ
ーに付ス。カラムをアセトン６１およびアセトン／メタ
ノール（１０：１）混合物１２１で洸浄し、次いでアセ
トン／メタノール（５：１）混合物で溶出する。活性物
質を含む両分（６１）を窒素気流中減圧濃縮して粗製粉
末（５ｙ）を得る。この粉末をメタノール２０ｍｅに溶
解し、シリカゲル（３００ｍ、ｅ　）を使用するカラム
クロマトグラフィーに付し、次いでクロロホルム／メタ
ノール（１０：１）混合物で溶出する。活性物質を含む
両分（５００ｍｅ　）を窒素気流中減圧濃縮して粗製粉
末を得る。粗製粉末（９００■）をメタノール２０　ｍ
ｅに溶解し、高速液体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬ
Ｃと略称）に付す。レオダイン　モチルア１２５　（Ｒ
ｈｅｏｄｙｎｅ　Ｍｏｄｅｌ、　７１２５　）、注入器
を備えた日立モデル６３８−３０ポンプを用いてＨＰＬ
Ｃを行なう。クロマトグラフィーを紫外部吸収スペクト
ル検出器、日立モデル６３８−４１により３７０　ｎｍ
で監視する。コスモジル（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ　）５　Ｃ
１ｇ　（牛丼化学社製）を充填した内径１０Ｍも長さ２
５０　ｒａｍの鋼製カラムを流量５ｍｅ／分で使用する
。使用する移動相は酢酸アンモニウムを含むメタノール
／蒸留水（７：３）混合物である。活性物質を含む両分
を窒素気流中減圧濃縮して水懸濁液を得る。懸濁液をダ
イヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社製）のカラム（２０
’ｙｎｅ）を通過させ、水（１００＋＋＋ｆ’）洗して
５０％アセトン（５０ｍｅ　）　テ溶出する。有効画分
を窒素気流中減圧濃縮して純粋な活性物質を得る。活性
物質をＦ取、乾燥して、うす黄色の結晶（１００■）を
得る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 次の理化学的性質を有するＦＲ−９００４６２物質 ■形状および色 うす黄色の粉末 ■元素分析値 Ｃ：６２．６０％、Ｉ（ニア、０１％、Ｎ、：８．１１
   ％■呈色反応 硫酸セリウム反応、沃素反応、ニンヒドリン反応および
   ドラーゲンドルフ反応：陽性 バラジクム反応、陰性 ■溶解性 メタノールおよびアセトンに可溶 エタノールおよびクロロホルムに微温 ヘキサン、水およびベンゼンに不溶 ■融　点 １７８〜１８２℃ ■比旋光度 ■紫外部吸収スペクトル ３１７、’　３３５．　３８０　ｎｍ ３１７、　３３５．　３８０　ｎｍ ■赤外吸収スペクトル １４４０、　１，３００．　１２５５．　１２００．　
   １１８０．　１１６Ｇ１１４５，１１３０，１０８０．
   １０５０（ｓｈ、ｌ　１０３０゜９８０、　９５５．　
   ８２５．　７５０ｃｍ−１■分子刊 Ｅ工Ｍａｓｓ　：　ｍ／ｚ　４９９　（Ｍ　）ＦＤ　Ｍ
   ａｓｓ　：　ｍ／ｚ　４９９　（Ｍ　）ＦＡＢＱ　Ｍａ
   ｓｓ　：　ｍ／ｚ　５２２　（Ｍ　十Ｎａ）ｍ／ｚ　５
   ００　（Ｍ　＋１　） ［相］ＰＩＣ核磁気共鳴スペクトル （ＣＤ３０Ｄ）・ δ（ｐｐｍ）：　１６４．３．　１４９．５．　１４９
   ．３．　１３３．８゜１２７．４．　１２６．５．　１
   ２５．９．　１２５．３．　１１４．１゜１０７．７．
   　１０７．４．　１０４．３．　１０１．９．　７５．
   ７゜？３．３．　７０．６．　６８．９．　５８．４．
   　５１．１．　３８．６゜３６．１．　２５．３．　２
   ４．１．　２０．０．　１９．．８．　１８．６゜９．
   ４ Ｑ”ｎ核磁気共鳴スペクトル （ＣＤ３０Ｄ）： δ（ｐｐｍ）　：　７．０４（ＩＨ，ｓ）、６．９１（
   ＩＨ，ｂｒ、　ｅ、）。 ６．２７（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝１６Ｈｚ）、　５．５７（
   ＩＨ，ｍ）＋　５．２５（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）
   、４．１５（ＩＨ，ｍ）、３．７６（ＩＢ、。 ｍ　）、３．６０　（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝１．８Ｈｚ　）
   、３．５７（ＬＨ，ｄ。 Ｊ＝１３Ｈｚ）、３．３５（ＩＨ，ｍ）、３．１８’（
   ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝１６．１１１（ｚ　）、２．６２　（
   ＩＨ＋　ｄｄ、Ｊ−１６，４，５Ｈｚ　）　。 ２．５２（３Ｈ，ｓ）、２．４７（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１０
   Ｈｚ）、２．０１（３Ｈ，ｓ）、１．８１（３Ｈ，ｄ、
   Ｊ＝６．３）（ｚ）、１．６３（３Ｈ。 ｓ）＋　１．５２（３Ｈ，ｓ）、１．３９（３Ｈ，ｓ）
   、１．３０（３Ｈ。 ｄ、　、７＝６．３Ｈｚ　） ＠薄層クロマトグラフィー