JPS5945894A - 補酵素ｑ↓１↓０の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （１）発明の背景 本発明は、微生物による補酵素ＱＩＯの製造法に関する
。さらに具体的には、本発明は、使用する微生物が新ａ
ｒｔｙｘに属するものである点に主要な特徴を有する、
補酵素ＱＩＯの製造法に関する。

補酵素Ｑは、広く動植物界に分布している生理活性物質
であって、生体内の末端電子伝達系に関与するキノン誘
導体であり、その一般式は下記の（１）　　　　　　　
　　　　　−へ−通りであるとされている。

の一種であって、上式においてイソプレイド鎖の長さｎ
が１０である物質である。ＵＱｌｄま医療としての用途
が既に開発されあるいは開発されつつあり、特に、たと
えば、心臓疾患に対する治療薬として期待されているも
のである。この場合に興味のあることは、ｎが１０以外
のものはヒトに対して重要な生理活性を示すことが少な
いということである。

上式においてｎの値は起源によって異なるようであって
、細菌にけＵＱｌｏを含有するものがあまり見出されて
いない。

〔璽〕発明の概要 翌−五 本発明は、海草から分離された、噺１エリスロパクター
属に属する、好気的にノ々クテリオクロロフィルを産生
する細菌がＵＱｌｏを産生ずるとの発見に基くものであ
る。

従って、本発明による補酵素ＱＩＯの製造法は、（２） エリスｏ　Ａフタ−（Ｅｒｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）　
属に属し、補酵素ＱＩＯを産生する能力を有する微生物
を適当な栄養培地で培養して補酵素ＱＩＯを産生させ、
産生された補酵素Ｑ１ｏを採取すること、な特徴とする
ものである。

効果 このように、本発明では特定の細菌ｉＣＵＱＩＯを産生
させるのであるが、この細菌によればＵＱ、１０が選択
的に産生される。すなわち、起源生体によっては前記一
般式のｎが１０以外のものも併産されろことが多いが、
不発明菌によれば産生されるものは薄層クロマトグラフ
ィー（ＴＬＣ）上ＵＱ１０（’″）単一スポットしか認
められない。

そして、この細菌によろＵＱｌ−生に際しての副成物は
主としてカロチンイドである。カロチンイドは溶解度の
差によってＵＱｌｏと選択的に分離することができる。

そのうえ、この細菌はＵＱｌ−生能が一般に大きい。

従って、これらの点から、本発明によれば効率よ＜ＵＱ
ＩＱを製造することができる。

本発明で使用する細菌は、その由来から明らかなように
一般に耐塩性である。従って、この性質ケ利用して培養
の際の滅菌または雑菌の増殖の防止を有利に行なうこと
ができる可能性がある。

〔■〕発明の詳細な説明 １、使用細菌 １）起源および他細菌との比較 本発明で使用する細菌は、エリスロパクター属に属する
ＵＱ１０ＰＩ生菌である。

エリスロ・々フタ−属は、芝らが神奈川県油壷湾のウス
パアオノリから分離した株ＯＣｈ　１０１および０Ｃｈ
ｌ１４に基いて設けられた属である（Ｉｎｔ、Ｊ。

Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、工、２
１１−２１７　（１９８２））。

この属に属する細菌は、一般に、好気的に・々クテリオ
クロロフィルを産生する。従来使用されていたロドシュ
ードモナス属などの光合成菌は、その生育には本来光の
存在および嫌気条件が適しているが、工業的な生産のた
め好気的な培養が行なわれており、そのためノ々クテリ
オクロロフィルの生成が抑えられている。これに対して
、エリスロノ々クター属の細菌は嫌気的には生育できず
、しかも光の存在下に好気的に培養するとノζクテリオ
クロロフィルを生成する。このノ々クテリオクロロフィ
ルはそれに光を与えると電子の流れが生じるという性質
を有することが見出されているが、その意味は未だ明ら
かではない。

現在エリスロノ々クター属の細菌は１１株見出されてい
る。これらのうちでｏｃｈｉｏｉ株は、エリスロノ々ク
ター・ロンガス（Ｅ、　ｌｏｎｇｕｓ　）として一つの
種をなすとされている（上記文献参照）。また、０Ｃｈ
ｌ１４株は、ノ々クテリオクロロフイル産生能の大きい
株である。

２）菌学的性質 ０Ｃｈｌ０１株およびＯＣｈ　１１４株について、その
菌学的性質の一部を示せば下記の通りである。なお、他
の性質については、上記文献を参照することができる。

（９） ３）寄託 ＯＣｈ　１０１株は、工業技術院微生物工業技術研究所
（以下、微工研という）に受託番号「微工研菌寄第６７
１２号」（昭和５７年９月９日）の下に寄託されている
。本株は、財団法人醗酵研究所にも受託番号ＩＦ０１４
１２６号の下で寄託されている。

０Ｃｈｌ１４株は、微工研に受託番号「微工研菌寄第６
７１３号」（昭和５７年９月９日）の下に寄託されてい
る。

２、培　養 エリスロノ々クター属細菌の培養は、培地の種類および
培養条件を含めて合目的的な任意のものでありうる。

培地の炭素源としては、対象菌株が同化しうる〔　１０
） あらゆるものが使用可能である。具体的には、たト気は
、Ｉ”ルコース、シュクロース、キシロース、マンノー
ス、デンゾン加水分解物、廃糖蜜、亜硫酸パルプ廃液、
酢酸、２ルピン酸、酪酸、クエン酸、グルタミン酸、コ
ハク酸、マレイン酸、乳酸などの有機酸などの外に、該
菌株が利用しうろ各種の合成または天然炭素源がある。

窒素源としても同様に、麦芽エキス、ペプトン、大豆抽
出液、肉エキス、酵母エキス、コーンスチープリカー、
尿素、その他の有機窒素含有物火はじめ、該菌株の利用
可能な各種の合成または天然物が使用可能である。

微生物培養の常法ｊ／（従って、食塩、リン酸塩等の無
機塩類、カルシウム、マグネシウム、鉄等の金属の塩類
、ビタミン、アミノ酸、核酸、塩基等の微量栄養物質も
、必要に応じて添加することができる。

このような成分からなる培地は、合成培地および天然倍
増のいずれでもよく、また培地は液体および固体のいず
れでもよい。

培養操作も、合目的的な仕置のものでありうる。

液体培地の場合は、静置、振盪および通気攪拌培養のい
すねでもよい。培養は好気的に行なうべきであるが、通
気の程度の大きなより好気的な条件が好ましい。培養温
度は一般に５〜３５℃、好ましくは５〜３０℃、程度の
範囲がふつうであり、ｐＨは５．００−１０．０、好ま
しくは７．０〜８．０１程度の範囲が好ましい。培養時
間は、１０時間〜７日間程度がふつうである。

菌体の分離および生成ＵＱ１ｏの採取も、常法に従って
行なうことができる。すなわち、菌体を遠心分離、沢過
などの方法で培養液と分離し、菌体を生菌体の状態で、
あるいは乾燥菌体または菌体処理物の状態、その他の状
態で、ＵＱ　１Ｐ離の常法に従って、たとえば、水親和
性のあるアルコール類、アセトンその他の溶媒で抽出し
、次にｎ−ヘキサン、石油エーテルその他の水に溶けな
い溶媒に転溶し、精製をアルミナ、シリカゲル、フロリ
ジル等によって行なうことによって、また必要に応じて
再結晶をくり返すことによって、ＵＱｌｏの純粋な結晶
ケ得ることができる。

得られたＵＱｌ（ｆ′）同定は、ベーノぐ−クロマトグ
ラフイー、ＴＬＣ１高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）元素分析、融点測定、ＩＲおよびＵＶ吸収スペク
トル、毘質量分析などの手法を組合せることによって行
なうことができる。

３、実験例 実施例１ 培地組成 ポリペプトン（大王栄養）４１ プロテオースペット７４３　（Ｄｉｆｃｏ）　　　　　
　２１ノツトイーストエキストラクト（Ｄｉｆｃｏ）　
　　　　２　Ｆバクトソイトｙ　（Ｄｉｒｃｏ）　　　
　　　　２１％クエン酸鉄　　　　　　　　　　１００
呼上記を水１００ｙｙ＋Ｉに溶解させ、エイジＰ・シー
・ウォーター９００ｍＪ＋’＆加えて、合計１リツトル
の培地を得る。

ＯＣｈ　１１４株のスラントから１白金耳を１０−の上
↓ 記培地に接種し、暗所で５℃２〜３日前培養する。

前培養液１０−を培地１リツトルに加えて、好気的（１
３） に３日間振盪培養し、培養後、遠心分離またはｒ過で菌
体５１（湿潤）％−得た。同様にして集めた菌体（湿潤
）１００％をアセトン１リツトルに懸濁させ、１夜放置
後、アセトンと菌体な遠心分離し、菌体な再びアセトン
で抽出する操作を２回くり返す。このアセトン抽出液を
合せて（３リツトル）減圧濃縮して、約５００ｍ９とす
る。

アセトン５００増に水５００ｄ’Ｙ加え、ｎ−ヘキサン
５００＋ｙ＋Ｊづつで３回抽出ケ行ない、抽出液１５０
０ｍを約１０−まで減圧濃縮する。

ｎ−ヘキサン濃縮液を一助℃で１夜放置後、析出したカ
ロチノイドをｔ別する。カロチノイドの結晶を冷ｎ−ヘ
キサンで洗い、もとのｎ−ヘキサンと合せる。

１０ｙ−の酸性アルミナ（メルク社）に水０．７ｙ−を
加えてカラムを作り、ｎ−ヘキサン溶液中のＵＱｌ。

を吸着させて、ベンゼン・ヘキサｙｉｉ（１：　４’）
で溶出させ、ＵＱ、Ｑ’に含む両分をあっめて溶出液を
減圧除去し、ＵＱｌ（ＩＹ温エタノールに溶解し、　−
２０℃にしてＵＱｌｏを析出させる。必要ならば、温エ
タン　１ＡＡ −ル、温アセトンで再結なくり返す。菌体１００ｐ（湿
潤）から、ＵＱｌｏ　３０　ｍｙが得られた。

実Ｈｒ、例２ 培地組成 グルタミン酸　　　　　　　　４１− グルコース　　　　　　　　１ｚ ビオチ″７１０１ｔｇ−／ｌ ニコチン酸アミド　　　　　　　　１　ｍｙ　／　Ｌザ
イアミン　　　　　　　１＃／ｌ イーストエキス　　　　　１００η／を上記を［エイシ
ト・シー・ウォーターＪ　１０１００Ｏに溶解させてな
る培地でＯＣｈ　１０１株？：２５℃で３日間撮盪培養
し、遠心分離により菌体３ｙ−（湿潤）を得た。

菌体を突流例１のアセトンのかわりにメタノールによっ
て処理し、以下同様の千カ直により、菌体６０１（湿潤
）よりＵＱ１ｏ’　１８　ｎ　’？得た。

出願人代理人　　猪　　股　　　　　清（１５） ５２９−

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. エリスロＡクター（Ｅｒｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　）属
   に属し、補酵素ＱＩＯを産生する能力を有する微生物を
   適当な栄養培地で培養して補酵素ＱＩＯを産生させ、産
   生された補酵素ＱＩＯを採取することを特徴とする、補
   酵素ＱＩＯの製造法。