JPS5830038B2 - 補酵素ｑ↓１↓０の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、微生物による補酵素Ｑ１ｏの製造法に関する
もので、さらに詳しくは、メタノール資化性能を有し、
かつ補酵素Ｑ１ｏ生産能を有するシュードモナス属に属
する微生物を、メタノールを炭素源とする培地に培養し
、補酵素ＱＩＯを蓄積せしめ、これを採取する方法に関
する。

補酵素ＱＩＯは下記の構造式で示される化合物であり、
生体内では電子伝達系の一要素として極めて重要な役割
を果している。

本物質が各種疾病に対して秀れた薬理作用、生理作用を
示すことは、すでに明らかにされているが、これを動物
心臓筋肉等から抽出することは、原料が高価なうえ、大
規模に生産することは困難であり、合成法によっても収
率が低く、工業的に満足するものではない。

この点、微生物を用いる補酵素Ｑｌｏの製造法は、その
方法によっては経済的なものとなりうるものである。

本発明者らは、微生物を培養して補酵素Ｑ１ｏを製造す
るにあたり、多数の補酵素ＱＩＯ生産菌についてメタノ
ールの資化性を研究した。

その結果、シュードモナス属細菌のいくつかの菌株がメ
タノールを炭素源とする培地で良好に生育し、補酵素Ｑ
ｒｏを多量に生産することを見い出した。

このようにメタノールを原料として補酵素ＱＩＯを製造
することに成功したことは、最近、石油化学の発達によ
り、メタノールが安価にして多量に供給されるようにな
ったことと合せ、工業的意義は極めて大きい。

本発明は、上記の知見に基づき、さらに研究を重ねた結
果完成されたもので、使用される細菌はメタノールを唯
一の炭素源として生育し、補酵素Ｑ１ｏを生産しつるシ
ュードモナス属ならばどのようなものであってもよい。

このような細菌の代表例としては、シュードモナスＡＭ
Ｉ（ＮＣＩＢ９１３３）があげられる。

（ＮＣＩＢ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
ｏｆ ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＢａｃ ｔｅｒ ｉａ
＋Ａｂｅｒｄｅｅｎ 、Ｓｃｏ ｔ １ａｎｄ）このシ
ュードモナスＡＭＩの菌学的性質についてはバイオケミ
カルジャーナル（ＢｉｏｃｈｅＢｉｃａｌ Ｊｏｕ、ｒ
ｎａｉ第８１巻第４６５〜４６９頁（１９６１年）に記
載されている。

またこの生産菌株は微工研菌寄第６８８５号として工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託されている。

本発明においては、上記したような菌株がメタノールを
炭素源とし、その他該菌の生育に必要な栄養源を含有す
る培地で好気的条件下に培養される。

窒素源としては、たとえば、アンモニウム塩類、硝酸塩
類などの無機窒素化合物、コーンステイープリカー、ア
ミノ酸、酵母エキスなどの有機窒素含有物等が用いるれ
る。

その他力ルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、リ
ン酸塩、硫酸塩、マンガン塩、鉄塩などの無機塩および
必要に応じてビタミン類、その他エキス類などの成長促
進因子を添加してもよい。

上記のような培地に菌株を接種し、ｐＨ５〜８．２０〜
３７℃、２日〜１０日間、好気的に通気攪拌培養する。

培養液から常法により遠心法または濾過法などで菌体を
分離する。

こ＼で得られた菌体中には、補酵素Ｑ１ｏが豊富に含有
されるので、本菌体を適当に処理後、菌体と共に補酵素
Ｑ１ｏを栄養剤、医薬、飼料に供することもできる。

また補酵素Ｑ１ｏの単離のための出発物質である菌体は
、生菌体または乾燥菌体、菌体処理物のいずれでも使用
できる。

補酵素Ｑ１ｏの単離の方法の一例を示すと、メタノール
、苛性ソーダ、ピロガロールの混液を菌体含有液に添加
し、６０〜９０℃にて１〜２時間、還流加熱抽出する。

次いで本抽出液をｎ−ヘキサン等の溶媒で抽出し、溶媒
層を水洗、脱水後、濃縮し、これをシリカゲル等のカラ
ムに添加し、ベンゼンなどで展開すると、補酵素Ｑ１ｏ
が溶出する。

本画分を濃縮乾固し、エタノール可溶部分を冷却放置す
ると、赤黄色のＣ３ＱＩＯの粗結晶が得られ、さらに再
結晶を繰返すと、補酵素Ｃ３Ｑｌｏの純粋な結晶が得ら
れる。

次に本発明の実施例を挙げて説明する。

実施例 ＮＨ４ＣＡ！０．５％、ＫＨ２Ｐ ０４０．１％、に２
ＨＰ０゜０．１％、Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ２００，０１％ｙ
Ｎａ２ Ｓ ０４０．０５％、コーンステイープリカ
ー０．１％（ｐＨ６、５） カ； す７：、培地１５７
を３０１容ジャーファーメンタ−に入れ、加圧滅菌後、
メタノール７５ｇを加え、メタノール０．５％を含む上
記の培地３００ｒＬｌに３日間前培養したシュードモナ
スＡＭＩ（ＮＣＩＢ ９１３３）を接種し、３０℃、
１５１／分の通気を行い、攪拌しながら培養した。

培養開始後２日目に７５ｆｌ、３日目、４日目、５日目
にそれぞれ１５０ｇずつメタノールを追加し、６日間培
養を行った。

培養中の培養液のｐＨはアンモニア水でこれをｐＨ６，
５に調節した。

培養後、遠心分離により湿菌体を採取した（乾燥菌体と
して８７ｇであり、この菌体には乾物１ｇ当り０．５５
■の補酵素Ｑ１ｏが含まれていた）。

得６れた湿菌体を水３００ｍ１、メタノール２１、ピロ
ガロール４０ｇ、水酸化ナトリウム３００ｇと混合し、
８５℃で１時間加熱還流した。

放冷後、２１のｎ−ヘキサンで２度抽出し、ｎ−ヘキサ
ン層をとり、水洗後、芒硝で乾燥し、濃縮乾固した。

乾固物のアセトン可溶部をとり、アセトンを留去し、残
渣をｎ−ヘキサンに溶解する。

この溶液をシリカゲルヲラムを用いて、エーテル、ｎ−
へキサン混合物で展開し、補酵素Ｑｌｏを含む画分を採
取する。

この溶出液より溶媒を留去し、残渣を少少のエタノール
に溶解して冷所に放置すると、補酵素Ｑ１ｏの粗結晶が
析出した。

エタノールから再結晶を３度繰返して補酵素Ｑ１ｏの結
晶２０■を得た。

本結晶のｎ−プロパツール：水（４： １ 、）、ジメ
チルフォルムアミドをそれぞれ展開溶媒とする逆相ペー
パークロマトグラフィー、およびアセトン：水（９５：
５）を展開溶媒とする逆相薄層クロマトグラフィーでは
単一スポットを与え、標品の補酵素Ｑ１ｏと全く一致し
た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ メタノール資化性能を有し、かつ補酵素Ｑ１゜生産
   能を有するシュードモナス属に属する微生物を、メタノ
   ールを炭素源とする培地に培養し、補酵素ＱＩＯを蓄積
   せしめ、これを採取することを特徴とする補酵素Ｑｌｏ
   の製造法。