JPS6321651B2 - - Google Patents
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- JPS6321651B2 JPS6321651B2 JP55081685A JP8168580A JPS6321651B2 JP S6321651 B2 JPS6321651 B2 JP S6321651B2 JP 55081685 A JP55081685 A JP 55081685A JP 8168580 A JP8168580 A JP 8168580A JP S6321651 B2 JPS6321651 B2 JP S6321651B2
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- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は微生物による補酵素Q13の製造方法お
よび補酵素Q13に関する。 補酵素Qとは下記の構造式 で示される一群の化合物の総称である。これら一
群の補酵素Qの化合物は生体内では電子伝達系の
一要素として重要な役割を果しており、また従つ
てそれらは各種疾病に対して秀れた薬理作用を示
すものとして期待されている。 上記構造で示される補酵素Qのうち、n=12で
ある補酵素Q12はネズミあるいはある種の植物中
に存在することが知られているが、いずれも工業
的規模で補酵素Q12を生産する原料として満足で
きるものではない。またn=13である補酵素Q13
は従来その存在が現実には知られていなかつた新
規な物質である。 本発明者等は微生物の醗酵法により補酵素Q13
を生産することを目標として種種検討した結果、
ある種の細菌中にこれらの物質が蓄積されること
を見出し、本発明を完成するに至つたものであ
る。 本発明の目的はシユードモナス属に属する細菌
はプロタミノバクター属に属する細菌を用いるこ
とにより効率的に補酵素Q12及び補酵素Q13を得
る方法を提供しようとするものである。 本発明方法において使用される菌株としては、
シユードモナスN842(微工研菌寄第3154号、特開
昭52−47990号参照)、シユードモナスN842―
M16(微工研菌寄第3155号、特願昭53−150513号
参照)、シユードモナスCI−36(微工研菌寄第
5209号、特願昭54−124727号参照)、シユードモ
ナスAMI(NCIB9133)、シユードモナスM27
(NCIB9686)、プロタミノバクター・ルーバー
〔「日本農芸化学会誌」第52巻第477頁(1978)参
照〕などが適当である。なおプロタミノバクタ
ー・ルーバーは公定菌ではないが、保存研究室よ
り入手しうるものである。 本発明方法において使用される培養培地は特に
制限はなく、たとえば炭素源としてはグルコース
等の含水炭素、くえん酸等の有機酸、メタノー
ル、グリセリン等のアルコール類等が使用でき、
窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ア
ンモニウム、燐酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、アンモニアガス等、無機物としては燐酸塩、
マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン
塩、その他必要に応じて微量金属塩等が使用でき
る。更に必要に応じて生育促進物質としてアミノ
酸、ビタミン、大豆蛋白加水分解物、酵母エキ
ス、ペプトン、カザミノ酸等を使用することもで
きる。 培養に当つてはPH5〜8で20〜40℃において2
〜10日間程度好気的に振盪または撹拌培養する。
培養液から常法により遠心法または過法などで
菌体を分離する。ここで得られた菌体中には補酵
素Q12およびQ13が含有されている。 補酵素Q12および補酵素Q13の単離のための出
発物質である菌体は生菌体または乾燥菌体もしく
は菌体処理物のいずれでも使用できる。補酵素
Q12および補酵素Q13を単離する方法の一例を示
すと、まずけん化するためにメタノール、苛性ソ
ーダおよびピロガロールの混液を菌体含有液に添
加しそして60〜90℃において1〜5時間還流加熱
しつつ抽出する。次いで抽出液をn―ヘキサン等
の溶媒で抽出し、溶媒層を水洗および脱水後に濃
縮し、濃縮液をシリカゲル等のカラムに添加し、
次いで吸着物をベンゼンなどで展開すると補酵素
Q12およびQ13を含む画分が溶出する。この画分
を濃縮乾固し、更に多孔性樹脂カラムクロマトグ
ラフイー、逆相薄層クロマトグラフイー等により
補酵素Q12または補酵素Q13を単離する。これを
エタノール等から結晶化すると純粋な補酵素Q結
晶が得られるが、包接化合物による分離、分子蒸
留等を行うことも効果的である。 次に補酵素Q12および補酵素Q13の物性につき
述べる。 補酵素Q12は黄色結晶では融点は54.0℃である。
補酵素Q12のエタノール溶液中での紫外部吸収ス
ペクトルは275nmに吸収ピークを有し、この吸収
ピークはNaBH4で還元すると290nmにシフトす
る。マススペクトルの分子イオンピークは998で
あり、その他に主なフラグメントイオンピーク
983(M+−15)、235、197および69が存在する。薄
層クロマトグラフイー、逆相薄層クロマトグラフ
イーおよび高速液体クロマトグラフイーでの挙動
は第1表に要約されている。 補酵素Q13のエタノール溶液中での紫外部吸収
スペクトルは275nmに吸収ピークを有しこの吸収
ピークはNaBH4で還元すると290nmにシフトす
る。マススペクトルの分子イオンピークは1066で
あり分子式C74H114O4に相当する。その他に主な
フラグメントイオンピーク1051(M+−15)、235、
197および69が存在する。薄層クロマトグラフイ
ー、逆相薄層クロマトグラフイーおよび高速液体
クロマトグラフイーでの挙動は第1表に要約され
ている。 次に掲げる表1において、薄層クロマトグラフ
イー(TLC)溶媒はベンゼン―クロロフオルム
(4:1)であり、逆相薄層クロマトグラフイー
溶媒はアセトン―水(97.5:2.5)であり、そし
て高速液体クロマトグラフイー(HPLC)条件は
μ―ボンダパツクC184.5×300mmカラムおよびメ
タノール―イソプロピルエーテル(85:15)溶媒
を用いて流速1ml/min、検出275nmとした。
よび補酵素Q13に関する。 補酵素Qとは下記の構造式 で示される一群の化合物の総称である。これら一
群の補酵素Qの化合物は生体内では電子伝達系の
一要素として重要な役割を果しており、また従つ
てそれらは各種疾病に対して秀れた薬理作用を示
すものとして期待されている。 上記構造で示される補酵素Qのうち、n=12で
ある補酵素Q12はネズミあるいはある種の植物中
に存在することが知られているが、いずれも工業
的規模で補酵素Q12を生産する原料として満足で
きるものではない。またn=13である補酵素Q13
は従来その存在が現実には知られていなかつた新
規な物質である。 本発明者等は微生物の醗酵法により補酵素Q13
を生産することを目標として種種検討した結果、
ある種の細菌中にこれらの物質が蓄積されること
を見出し、本発明を完成するに至つたものであ
る。 本発明の目的はシユードモナス属に属する細菌
はプロタミノバクター属に属する細菌を用いるこ
とにより効率的に補酵素Q12及び補酵素Q13を得
る方法を提供しようとするものである。 本発明方法において使用される菌株としては、
シユードモナスN842(微工研菌寄第3154号、特開
昭52−47990号参照)、シユードモナスN842―
M16(微工研菌寄第3155号、特願昭53−150513号
参照)、シユードモナスCI−36(微工研菌寄第
5209号、特願昭54−124727号参照)、シユードモ
ナスAMI(NCIB9133)、シユードモナスM27
(NCIB9686)、プロタミノバクター・ルーバー
〔「日本農芸化学会誌」第52巻第477頁(1978)参
照〕などが適当である。なおプロタミノバクタ
ー・ルーバーは公定菌ではないが、保存研究室よ
り入手しうるものである。 本発明方法において使用される培養培地は特に
制限はなく、たとえば炭素源としてはグルコース
等の含水炭素、くえん酸等の有機酸、メタノー
ル、グリセリン等のアルコール類等が使用でき、
窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ア
ンモニウム、燐酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、アンモニアガス等、無機物としては燐酸塩、
マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン
塩、その他必要に応じて微量金属塩等が使用でき
る。更に必要に応じて生育促進物質としてアミノ
酸、ビタミン、大豆蛋白加水分解物、酵母エキ
ス、ペプトン、カザミノ酸等を使用することもで
きる。 培養に当つてはPH5〜8で20〜40℃において2
〜10日間程度好気的に振盪または撹拌培養する。
培養液から常法により遠心法または過法などで
菌体を分離する。ここで得られた菌体中には補酵
素Q12およびQ13が含有されている。 補酵素Q12および補酵素Q13の単離のための出
発物質である菌体は生菌体または乾燥菌体もしく
は菌体処理物のいずれでも使用できる。補酵素
Q12および補酵素Q13を単離する方法の一例を示
すと、まずけん化するためにメタノール、苛性ソ
ーダおよびピロガロールの混液を菌体含有液に添
加しそして60〜90℃において1〜5時間還流加熱
しつつ抽出する。次いで抽出液をn―ヘキサン等
の溶媒で抽出し、溶媒層を水洗および脱水後に濃
縮し、濃縮液をシリカゲル等のカラムに添加し、
次いで吸着物をベンゼンなどで展開すると補酵素
Q12およびQ13を含む画分が溶出する。この画分
を濃縮乾固し、更に多孔性樹脂カラムクロマトグ
ラフイー、逆相薄層クロマトグラフイー等により
補酵素Q12または補酵素Q13を単離する。これを
エタノール等から結晶化すると純粋な補酵素Q結
晶が得られるが、包接化合物による分離、分子蒸
留等を行うことも効果的である。 次に補酵素Q12および補酵素Q13の物性につき
述べる。 補酵素Q12は黄色結晶では融点は54.0℃である。
補酵素Q12のエタノール溶液中での紫外部吸収ス
ペクトルは275nmに吸収ピークを有し、この吸収
ピークはNaBH4で還元すると290nmにシフトす
る。マススペクトルの分子イオンピークは998で
あり、その他に主なフラグメントイオンピーク
983(M+−15)、235、197および69が存在する。薄
層クロマトグラフイー、逆相薄層クロマトグラフ
イーおよび高速液体クロマトグラフイーでの挙動
は第1表に要約されている。 補酵素Q13のエタノール溶液中での紫外部吸収
スペクトルは275nmに吸収ピークを有しこの吸収
ピークはNaBH4で還元すると290nmにシフトす
る。マススペクトルの分子イオンピークは1066で
あり分子式C74H114O4に相当する。その他に主な
フラグメントイオンピーク1051(M+−15)、235、
197および69が存在する。薄層クロマトグラフイ
ー、逆相薄層クロマトグラフイーおよび高速液体
クロマトグラフイーでの挙動は第1表に要約され
ている。 次に掲げる表1において、薄層クロマトグラフ
イー(TLC)溶媒はベンゼン―クロロフオルム
(4:1)であり、逆相薄層クロマトグラフイー
溶媒はアセトン―水(97.5:2.5)であり、そし
て高速液体クロマトグラフイー(HPLC)条件は
μ―ボンダパツクC184.5×300mmカラムおよびメ
タノール―イソプロピルエーテル(85:15)溶媒
を用いて流速1ml/min、検出275nmとした。
【表】
実施例 1
グルコース 2%、Na2SO4 0.05%、
MgSO4・7H2O 0.01%、KH2PO4 0.1%、
K2HPO4 0.1%、コーンステイーブリカー 0.3%
および残部は水からなる培地(PH6.5)15に、
シユードモナスCI―36(微工研菌寄第5209号)を
グルコース2%、ペプトン1%、イーストエキス
1%および残部は水からなる培地(PH6.5)300ml
で培養した培養液を種菌として接種した。30容
ジヤ―フアーメンターを用いて30℃で毎分15の
空気を通気して4日間撹拌培養した後、培養物を
遠心分離することにより湿菌体ペーストを得た。
このペーストは乾燥菌体として75gであり、この
菌体には乾物1g当り補酵素Q1236μgおよび補
酵素Q131.5μg含まれていた。 ジヤーフアーメンター4本分の湿菌体を合わ
せ、これを水1.2、メタノール8、ピロガロ
ール160gおよび水酸化ナトリウム1.2Kgと混合し
て85℃で1時間加熱還流した。放冷後8のn―
ヘキサンで2回抽出し、n―ヘキサン層を取り、
これを水洗後芒硝で乾燥しそして混縮乾固した。
乾固物のアセトン可溶部を取り、アセトンを留去
しそして残渣をn―ヘキサンに溶解した。この溶
液をシリカゲルカラム上でエーテル―n―ヘキサ
ン混合物でクロマトグラフ処理して補酵素Q12お
よび補酵素Q13を含む画分を採取する。この溶液
により溶媒を留去した後少量のイソプロピルエー
テルに溶解し、多孔性樹脂カラムに負荷し、次に
メタノール―アセトン混合物で展開して補酵素
Q12および補酵素Q13を含む画分をそれぞれ採取
する。 それぞれを濃縮乾固した後、更に逆相薄層クロ
マトグラフイーにより精製して純粋な補酵素
Q124mgおよび純粋な補酵素Q130.15mgを得た。 実施例 2 実施例1と同様の培地を用い、実施例1と同様
の操作でシユードモナスN842―M16(微工研菌寄
第3155号)を培養して湿菌体ペーストを得た。こ
れは乾燥菌体として80gであり、この菌体には乾
物1g当り補酵素Q1215μgおよび補酵素Q130.75μ
g含まれていた。 ジヤーフアーメンター4本分の湿菌体を合わせ
て実施例1と同様の操作で抽出精製を行つて補酵
素Q122mgおよび補酵素Q130.1mgを得た。 実施例 3 NH4H2PO4 0.4%、KH2PO4 0.2%、
Na2HPO4・12H2O 0.3%、MgSO4・7H2O 0.02
%、CaCl2・2H2O 0.001%、FeSO4・7H2O
0.0005%、MnSO4・nH2O 0.0005%、CoSO4・
7H2O 0.0001%、メタノール1%そして残部は水
よりなる培地(PH7.2)100mlにシユードモナス
AMIを接種しそして500ml三角コルベンを用いて
5日間培養した。菌体に含有される補酵素Q12の
定量値は乾燥菌体1g当り0.2μgであり、そして
補酵素Q13の定量値は乾燥菌体1g当り0.01μgで
あつた。 実施例 4 実施例3と同様の培地を用い且つ実施例3と同
様の操作でシユードモナスM27を培養した。菌体
に含有される補酵素Q12の定量値は乾燥菌体1g
当り1.1μg、そして補酵素Q13の定量値は乾燥菌
体1g当り0.15μgであつた。 実施例 5 実施例4と同様の培地を用い且つ実施例4と同
様の操作でプロタミノバクター・ルーバーを培養
した。菌体に含有される補酵素Q12の定量値は乾
燥菌体1g当り0.36μgであり、そして補酵素Q13
の定量値は乾燥菌体1g当り0.02μgであつた。
MgSO4・7H2O 0.01%、KH2PO4 0.1%、
K2HPO4 0.1%、コーンステイーブリカー 0.3%
および残部は水からなる培地(PH6.5)15に、
シユードモナスCI―36(微工研菌寄第5209号)を
グルコース2%、ペプトン1%、イーストエキス
1%および残部は水からなる培地(PH6.5)300ml
で培養した培養液を種菌として接種した。30容
ジヤ―フアーメンターを用いて30℃で毎分15の
空気を通気して4日間撹拌培養した後、培養物を
遠心分離することにより湿菌体ペーストを得た。
このペーストは乾燥菌体として75gであり、この
菌体には乾物1g当り補酵素Q1236μgおよび補
酵素Q131.5μg含まれていた。 ジヤーフアーメンター4本分の湿菌体を合わ
せ、これを水1.2、メタノール8、ピロガロ
ール160gおよび水酸化ナトリウム1.2Kgと混合し
て85℃で1時間加熱還流した。放冷後8のn―
ヘキサンで2回抽出し、n―ヘキサン層を取り、
これを水洗後芒硝で乾燥しそして混縮乾固した。
乾固物のアセトン可溶部を取り、アセトンを留去
しそして残渣をn―ヘキサンに溶解した。この溶
液をシリカゲルカラム上でエーテル―n―ヘキサ
ン混合物でクロマトグラフ処理して補酵素Q12お
よび補酵素Q13を含む画分を採取する。この溶液
により溶媒を留去した後少量のイソプロピルエー
テルに溶解し、多孔性樹脂カラムに負荷し、次に
メタノール―アセトン混合物で展開して補酵素
Q12および補酵素Q13を含む画分をそれぞれ採取
する。 それぞれを濃縮乾固した後、更に逆相薄層クロ
マトグラフイーにより精製して純粋な補酵素
Q124mgおよび純粋な補酵素Q130.15mgを得た。 実施例 2 実施例1と同様の培地を用い、実施例1と同様
の操作でシユードモナスN842―M16(微工研菌寄
第3155号)を培養して湿菌体ペーストを得た。こ
れは乾燥菌体として80gであり、この菌体には乾
物1g当り補酵素Q1215μgおよび補酵素Q130.75μ
g含まれていた。 ジヤーフアーメンター4本分の湿菌体を合わせ
て実施例1と同様の操作で抽出精製を行つて補酵
素Q122mgおよび補酵素Q130.1mgを得た。 実施例 3 NH4H2PO4 0.4%、KH2PO4 0.2%、
Na2HPO4・12H2O 0.3%、MgSO4・7H2O 0.02
%、CaCl2・2H2O 0.001%、FeSO4・7H2O
0.0005%、MnSO4・nH2O 0.0005%、CoSO4・
7H2O 0.0001%、メタノール1%そして残部は水
よりなる培地(PH7.2)100mlにシユードモナス
AMIを接種しそして500ml三角コルベンを用いて
5日間培養した。菌体に含有される補酵素Q12の
定量値は乾燥菌体1g当り0.2μgであり、そして
補酵素Q13の定量値は乾燥菌体1g当り0.01μgで
あつた。 実施例 4 実施例3と同様の培地を用い且つ実施例3と同
様の操作でシユードモナスM27を培養した。菌体
に含有される補酵素Q12の定量値は乾燥菌体1g
当り1.1μg、そして補酵素Q13の定量値は乾燥菌
体1g当り0.15μgであつた。 実施例 5 実施例4と同様の培地を用い且つ実施例4と同
様の操作でプロタミノバクター・ルーバーを培養
した。菌体に含有される補酵素Q12の定量値は乾
燥菌体1g当り0.36μgであり、そして補酵素Q13
の定量値は乾燥菌体1g当り0.02μgであつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 シユードモナス属に属する細菌を培養して一
般式 で表わされる補酵素Q13を菌体内に蓄積せしめ、
かくして蓄積された補酵素Q13を菌体より採取す
ることを特徴とする、前記一般式で表わされる
補酵素Q13の製造方法。 2 式 で表わされる補酵素Q13。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP8168580A JPS578788A (en) | 1980-06-17 | 1980-06-17 | Preparation of coenzyme q |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP8168580A JPS578788A (en) | 1980-06-17 | 1980-06-17 | Preparation of coenzyme q |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP62226567A Division JPS63102690A (ja) | 1987-09-11 | 1987-09-11 | 補酵素q↓1↓2の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS578788A JPS578788A (en) | 1982-01-18 |
JPS6321651B2 true JPS6321651B2 (ja) | 1988-05-09 |
Family
ID=13753206
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP8168580A Granted JPS578788A (en) | 1980-06-17 | 1980-06-17 | Preparation of coenzyme q |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS578788A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH024857U (ja) * | 1988-06-24 | 1990-01-12 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ITMO20050075A1 (it) * | 2005-04-01 | 2006-10-02 | Keiper Holding S R L | Metodo e composizione per produrre un manufatto. |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5138977A (en) * | 1974-09-30 | 1976-03-31 | Fujitsu Ltd | Shotsukokunyoru chokusenjopataanno keiseihoho |
JPS5741903A (en) * | 1980-08-27 | 1982-03-09 | Matsushita Electric Works Ltd | Manufacture of decorative veneer |
-
1980
- 1980-06-17 JP JP8168580A patent/JPS578788A/ja active Granted
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5138977A (en) * | 1974-09-30 | 1976-03-31 | Fujitsu Ltd | Shotsukokunyoru chokusenjopataanno keiseihoho |
JPS5741903A (en) * | 1980-08-27 | 1982-03-09 | Matsushita Electric Works Ltd | Manufacture of decorative veneer |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH024857U (ja) * | 1988-06-24 | 1990-01-12 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS578788A (en) | 1982-01-18 |
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