JPS63102690A - 補酵素q↓1↓2の製造方法 - Google Patents
補酵素q↓1↓2の製造方法Info
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- JPS63102690A JPS63102690A JP62226567A JP22656787A JPS63102690A JP S63102690 A JPS63102690 A JP S63102690A JP 62226567 A JP62226567 A JP 62226567A JP 22656787 A JP22656787 A JP 22656787A JP S63102690 A JPS63102690 A JP S63102690A
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は微生物による補酵素(h2の製造法に関する。
補酵素Qとは下記の構造式
で示される一群の化合物の総称である。これら一群の補
酵素Qの化合物は生体内では電子伝達系の一要素として
重要な役割を果しており、また従ってそれらは各種疾病
に対して秀れた薬理作用を示すものとして期待されてい
る。
酵素Qの化合物は生体内では電子伝達系の一要素として
重要な役割を果しており、また従ってそれらは各種疾病
に対して秀れた薬理作用を示すものとして期待されてい
る。
上記構造で示される補酵素Qのうち、n=12である補
酵素Q12はネズミあるいはある種の罎物中に存在する
ことが知られているが、いずれも工業的規模で補酵素Q
12を生産する原料として満足できるものではない。ま
たn:13である補酵素Q1sは従来その存在が現実に
は知られていなかった新規な物質である。
酵素Q12はネズミあるいはある種の罎物中に存在する
ことが知られているが、いずれも工業的規模で補酵素Q
12を生産する原料として満足できるものではない。ま
たn:13である補酵素Q1sは従来その存在が現実に
は知られていなかった新規な物質である。
本発明者等は微生物の醗詳伝により補酵素Q12及び補
酵素Q1st生産することを目標として植種検討した結
果、ある種の細菌中にこれらの物質が蓄積さnること全
見出し、不発明全完成するに至つ念ものである。
酵素Q1st生産することを目標として植種検討した結
果、ある種の細菌中にこれらの物質が蓄積さnること全
見出し、不発明全完成するに至つ念ものである。
本発明の目的はシュードモナス属に属する細菌ま友はプ
ロタミノバクタ−属に属する細菌を用いることによシ効
率的に補酵素Q12及び補酵素Q13.を得る方法を提
供しようとするものである。
ロタミノバクタ−属に属する細菌を用いることによシ効
率的に補酵素Q12及び補酵素Q13.を得る方法を提
供しようとするものである。
本兜明方法において便用さnる菌株としては、シュード
モナスN842(微工研菌寄第3154号、%開昭52
−47990号参照)、シュードモナスN842−M1
6(微工研菌寄第3155号S%願昭53−15051
3号参照)、シュードモナスCニー36(微工研菌寄第
5209号、特願昭54−124727号参照)、シュ
ードモナスAM工(NCより 9133)、シュードモ
ナスM27□□□Cより 9686) 、プロタミノバ
クタ−・ルーバー〔「日本農芸化学会誌」第52巻第4
77頁(1978)参照〕などが適当である。なおプロ
タミノバクタ−・ルーパーは公定菌ではないが、保存研
究室よ、り入手しうるものである。
モナスN842(微工研菌寄第3154号、%開昭52
−47990号参照)、シュードモナスN842−M1
6(微工研菌寄第3155号S%願昭53−15051
3号参照)、シュードモナスCニー36(微工研菌寄第
5209号、特願昭54−124727号参照)、シュ
ードモナスAM工(NCより 9133)、シュードモ
ナスM27□□□Cより 9686) 、プロタミノバ
クタ−・ルーバー〔「日本農芸化学会誌」第52巻第4
77頁(1978)参照〕などが適当である。なおプロ
タミノバクタ−・ルーパーは公定菌ではないが、保存研
究室よ、り入手しうるものである。
本発明方法において便用さnる培養培地は特に制限はな
く、たとえば炭素源としてはグルコース等の含水炭素、
くえん酸等の有機酸、メタノール、グリセリン等のアル
コール類等が使用でき、窒素源としては硫酸アンモニウ
ム、尿素、硝酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、塩化
アンモニウム、アンモニアガス等、無機物としては燐酸
塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩1マンガン塩
、その他必要に応じて微量金属塩等が便用できる。更に
必要に応じて生育促進物質としてアミノ酸、ビタミン、
大豆蛋白加水分解物、酵母エキス、投プトン、カザミノ
酸等を使用することもできる。
く、たとえば炭素源としてはグルコース等の含水炭素、
くえん酸等の有機酸、メタノール、グリセリン等のアル
コール類等が使用でき、窒素源としては硫酸アンモニウ
ム、尿素、硝酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、塩化
アンモニウム、アンモニアガス等、無機物としては燐酸
塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩1マンガン塩
、その他必要に応じて微量金属塩等が便用できる。更に
必要に応じて生育促進物質としてアミノ酸、ビタミン、
大豆蛋白加水分解物、酵母エキス、投プトン、カザミノ
酸等を使用することもできる。
培養に当ってはI)H5〜8で20〜40℃において2
〜10日間程度好気的にS盪または攪拌培養する。培養
液から常法にょ9遠心法ま之は濾過法などで菌体を分離
する。ここで得られた菌体中には補酵素Q12またはQ
13またはその両方が含有されている。
〜10日間程度好気的にS盪または攪拌培養する。培養
液から常法にょ9遠心法ま之は濾過法などで菌体を分離
する。ここで得られた菌体中には補酵素Q12またはQ
13またはその両方が含有されている。
補酵素Q12および補酵素Qj5の単離の几めの出発物
質である菌体は生菌体または乾燥菌体もしくは菌体処理
物のいずnでも1更用できる。補酵素Q12および補酵
素Q15を単離する方法の一例を示すとSまずけん化す
るためにメタノール、苛性ソーダおよびピロガロールの
混液を菌体含有液に添力りしそして60〜90℃におい
て1〜5時間還流加熱しつつ抽出する0次いで佃出液を
n−ヘキサン等の浴娯で佃出し1溶媒層を水洗および脱
水後に1縮し、α縮収をシリカゲル等のカラムに添加し
、次いで吸着物をベンセンなどで展開すると補酵素Q1
2ま几は補酵素Q、13もしくはその両方を含む画分が
溶出する。この画分td縮乾固し、更に多孔性樹脂カラ
ムクロマトグラフィー、逆相薄看クロマトグラフィー等
によシ補酵素Q12ま念は補酵素Q13を単離する。
質である菌体は生菌体または乾燥菌体もしくは菌体処理
物のいずnでも1更用できる。補酵素Q12および補酵
素Q15を単離する方法の一例を示すとSまずけん化す
るためにメタノール、苛性ソーダおよびピロガロールの
混液を菌体含有液に添力りしそして60〜90℃におい
て1〜5時間還流加熱しつつ抽出する0次いで佃出液を
n−ヘキサン等の浴娯で佃出し1溶媒層を水洗および脱
水後に1縮し、α縮収をシリカゲル等のカラムに添加し
、次いで吸着物をベンセンなどで展開すると補酵素Q1
2ま几は補酵素Q、13もしくはその両方を含む画分が
溶出する。この画分td縮乾固し、更に多孔性樹脂カラ
ムクロマトグラフィー、逆相薄看クロマトグラフィー等
によシ補酵素Q12ま念は補酵素Q13を単離する。
これをエタノール等から結晶化すると純粋な補酵素Q結
晶が得らnるが、包接化合物による分離、分子蒸留等を
行うことも効果的である0次に補酵素Q12および補酵
素Q15の物性につき述べる。
晶が得らnるが、包接化合物による分離、分子蒸留等を
行うことも効果的である0次に補酵素Q12および補酵
素Q15の物性につき述べる。
補酵素Q12は黄色結晶で融点は54.0 ℃である。
補酵素Q12のエタノール溶液中での紫外部吸収スはク
トルは275nmに吸収ピークt−NL、この吸収ピー
クはNaBH4で還元すると290nmにシフトする。
トルは275nmに吸収ピークt−NL、この吸収ピー
クはNaBH4で還元すると290nmにシフトする。
マススペクトルの分子イオンピ−りは998であり、そ
の他に主なフラグメントイオンピーク983(M−15
)、235.197および69が存在する。薄jクロマ
トグラフィー、逆相tiil/mクロマトグラフィーお
よび高速液体クロマトグラフィーでの挙動は第1表に要
約されている◎ 補酵素Q15のエタノール溶液中での紫外部吸収スはク
トルは275nmに吸収ピークを肩しこの吸収ピークは
NaEH4で還元すると290nmにシフトする。マス
スはクトルの分子イオンピークは1066でお9分子式
C74H11aoaに相当する0その他に主なフラグメ
ントイオンピーク11051(+−15)、235.1
97および69が存在する0薄層クロマトグラフィー、
逆相薄島クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグ
ラフィーでの挙動は第1表に要約さnている。
の他に主なフラグメントイオンピーク983(M−15
)、235.197および69が存在する。薄jクロマ
トグラフィー、逆相tiil/mクロマトグラフィーお
よび高速液体クロマトグラフィーでの挙動は第1表に要
約されている◎ 補酵素Q15のエタノール溶液中での紫外部吸収スはク
トルは275nmに吸収ピークを肩しこの吸収ピークは
NaEH4で還元すると290nmにシフトする。マス
スはクトルの分子イオンピークは1066でお9分子式
C74H11aoaに相当する0その他に主なフラグメ
ントイオンピーク11051(+−15)、235.1
97および69が存在する0薄層クロマトグラフィー、
逆相薄島クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグ
ラフィーでの挙動は第1表に要約さnている。
次に掲げる表1において、薄1クロマトグラフィー(T
LC)溶媒はベンゼン−クロロフォルム(4:1)でア
シ、逆相薄層クロマトグラフィー溶媒はアセトン−水(
97,5:2.5)であり、そして高速液体クロマトグ
ラフィー(HPLC)条件はμmボンタパツクCIB
4.5X300mカラムおよびメタノール−イソフロビ
ルエーテル(85:15)溶媒を用いて流速1 ml
/ m i n%検出275 nmとし九。
LC)溶媒はベンゼン−クロロフォルム(4:1)でア
シ、逆相薄層クロマトグラフィー溶媒はアセトン−水(
97,5:2.5)であり、そして高速液体クロマトグ
ラフィー(HPLC)条件はμmボンタパツクCIB
4.5X300mカラムおよびメタノール−イソフロビ
ルエーテル(85:15)溶媒を用いて流速1 ml
/ m i n%検出275 nmとし九。
表 1
TLCのRf値 α43 0.45逆相
TLCのRf値 0.52 0.44HPL
Cでの保持時間(分) 23.4 30.
6冥施例 1 グ/l/ コース2%、Na2SO4no 5 %、M
gSO4・7H20α01%、KH2PO4Q、1%、
x2apo4Q、1%、コーンステイープリカー0.3
%および残部は水からなる培地CPH&5 ) 15t
に、シュードモナスCニー36(微工研菌寄第5209
号)をグルコース2%、はプトン1%、イーストエキス
1%および残i・は水からなる培地(pH6,5)30
0−で培養した層を液を種菌として接種し几。30を容
ジャーファーメンタ−を用いて30℃で毎分1sto空
気を通気して4日間攪拌培養した後、培養物を遠心分離
することによ911体ば一スト’2得た。
TLCのRf値 0.52 0.44HPL
Cでの保持時間(分) 23.4 30.
6冥施例 1 グ/l/ コース2%、Na2SO4no 5 %、M
gSO4・7H20α01%、KH2PO4Q、1%、
x2apo4Q、1%、コーンステイープリカー0.3
%および残部は水からなる培地CPH&5 ) 15t
に、シュードモナスCニー36(微工研菌寄第5209
号)をグルコース2%、はプトン1%、イーストエキス
1%および残i・は水からなる培地(pH6,5)30
0−で培養した層を液を種菌として接種し几。30を容
ジャーファーメンタ−を用いて30℃で毎分1sto空
気を通気して4日間攪拌培養した後、培養物を遠心分離
することによ911体ば一スト’2得た。
このは−ストは乾燥画体として752であ!l11この
菌体には乾物12当り補酵素Q、1236μgおよび補
酵素Q131.5μgが含まれていた。
菌体には乾物12当り補酵素Q、1236μgおよび補
酵素Q131.5μgが含まれていた。
ジャーファーメンタ−4本分の湿面体を合わせ、これを
水t 2 t 1メタノール8t1ピロガロール160
tおよび水酸化ナトリウム1.2 kPと混合して85
℃で1時間別熱還流した。放冷後8tのn−ヘキサンで
2回抽出し、n−ヘキサン層を取υ、こn6水洗後芒硝
で乾燥しそして混縮乾固した。乾固物のアセトン可溶部
を取り、アセトンを留去しセして残渣in−ヘキサンに
溶解した。この溶液金シリカゲルカラム上でエーテル−
n−ヘキサン混合物でクロマトグラフ処理して補酵素Q
12および補酵素Q1s’r含む画分全採取する。この
溶液より溶媒を留去し之後少童のイソフロビルエーテル
に溶解し、多孔性樹脂カラムに負荷し、次にメタノール
−アセトン混合物で展開して補酵素Q12および補酵素
Q15を含む画分をそnぞn採取する。
水t 2 t 1メタノール8t1ピロガロール160
tおよび水酸化ナトリウム1.2 kPと混合して85
℃で1時間別熱還流した。放冷後8tのn−ヘキサンで
2回抽出し、n−ヘキサン層を取υ、こn6水洗後芒硝
で乾燥しそして混縮乾固した。乾固物のアセトン可溶部
を取り、アセトンを留去しセして残渣in−ヘキサンに
溶解した。この溶液金シリカゲルカラム上でエーテル−
n−ヘキサン混合物でクロマトグラフ処理して補酵素Q
12および補酵素Q1s’r含む画分全採取する。この
溶液より溶媒を留去し之後少童のイソフロビルエーテル
に溶解し、多孔性樹脂カラムに負荷し、次にメタノール
−アセトン混合物で展開して補酵素Q12および補酵素
Q15を含む画分をそnぞn採取する。
そnぞat″磯縮乾固しt後、更に逆相薄層クロマトグ
ラフィーにより精製して純粋な補酵素Q124■および
純粋な補酵素Q130.15mgを得た。
ラフィーにより精製して純粋な補酵素Q124■および
純粋な補酵素Q130.15mgを得た。
実施例 2
実施例1と同様の培地を用い、実施例1と同様の操作で
シュードモナスN842−M16(微工研菌寄第315
5号)全培養して湿園体は−ストを得之にnは乾燥菌体
として802であり、この菌体には乾物17当シ補酵素
q、121sμgおよび補誦素Q150.75μg含ま
nていた。
シュードモナスN842−M16(微工研菌寄第315
5号)全培養して湿園体は−ストを得之にnは乾燥菌体
として802であり、この菌体には乾物17当シ補酵素
q、121sμgおよび補誦素Q150.75μg含ま
nていた。
ジャーファーメンタ−4本分の湿菌体で会わせて実施例
1とP1憬の操作で抽出精製を行って補酵素Q122’
M9および補酵素Ch 30− I R9’lr: 得
f−0実施例 6 実施例1と同様の培地を用い且つ実施例1と同様の操作
でシュードモナスN842(微工研菌寄第3154号)
を培養して湿菌体ペーストを得た〇こnは乾燥N体とし
て862でめジ、この(至)体には乾物12桶ジ補酵素
Q120.2μgが含まれてい念。
1とP1憬の操作で抽出精製を行って補酵素Q122’
M9および補酵素Ch 30− I R9’lr: 得
f−0実施例 6 実施例1と同様の培地を用い且つ実施例1と同様の操作
でシュードモナスN842(微工研菌寄第3154号)
を培養して湿菌体ペーストを得た〇こnは乾燥N体とし
て862でめジ、この(至)体には乾物12桶ジ補酵素
Q120.2μgが含まれてい念。
ジャーファーメンタ−4本分の湿菌体貴台わせて実施例
1と同様の方法で抽出精製を行い補酵素Q120.03
JI9を得た。
1と同様の方法で抽出精製を行い補酵素Q120.03
JI9を得た。
実施例 4
NH4H2PO40,4%、KH2PO40,2%、N
a 2 HPO4・12i(200,3%、MgSO4
−7H200,02%、CaC22”2H200,00
1%、 FeSO4・7H200,0005%、MnS
O4”nH2O0,0005%、C!0SO4−7H2
00,0001%、メタノール1%そして残部は水より
なる培地(pH7,2) 100mにシュードモナスA
M工’i接種しそして500−三角コルベンを用いて5
日間培養した。菌体に含有される補酵素Q12の定量値
は乾燥菌体1?当り0.2μgであり、そして補酵素Q
13の定量イL1は乾燥N体12当す0,01μgであ
つ之。
a 2 HPO4・12i(200,3%、MgSO4
−7H200,02%、CaC22”2H200,00
1%、 FeSO4・7H200,0005%、MnS
O4”nH2O0,0005%、C!0SO4−7H2
00,0001%、メタノール1%そして残部は水より
なる培地(pH7,2) 100mにシュードモナスA
M工’i接種しそして500−三角コルベンを用いて5
日間培養した。菌体に含有される補酵素Q12の定量値
は乾燥菌体1?当り0.2μgであり、そして補酵素Q
13の定量イL1は乾燥N体12当す0,01μgであ
つ之。
実施例 5
実施例4と同様の培地を用い且つ夷柿例4と同様の操作
でシュードモナスM 27を培養した。
でシュードモナスM 27を培養した。
菌体に含Mさnる補酵素Q12の定量値にだ燥函体12
当91.1μg1そして補酵素Q13の定量値は乾燥N
体19 当; cl、15μgテS ツ7’C6実施例
6 実施例4と同様の培地を用い且つ実施例4と同様の操作
でプロタミノバクタ−・ルーバーを珊養し念。菌体に含
有てれる補酵素Q12の定量値は乾燥N体11当ジα3
6μgであり、そして補酵素Q13の定量値は乾燥函体
12当シα02μgでるつ九〇 特許出Jへ 日清製粉株式会社 外2名
当91.1μg1そして補酵素Q13の定量値は乾燥N
体19 当; cl、15μgテS ツ7’C6実施例
6 実施例4と同様の培地を用い且つ実施例4と同様の操作
でプロタミノバクタ−・ルーバーを珊養し念。菌体に含
有てれる補酵素Q12の定量値は乾燥N体11当ジα3
6μgであり、そして補酵素Q13の定量値は乾燥函体
12当シα02μgでるつ九〇 特許出Jへ 日清製粉株式会社 外2名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 シュードモナス属又はプロタミノバクター属に属する細
菌を培養して一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼( I ) で表わされる補酵素Q_1_2を菌体内に蓄積せしめ、
かくして蓄積された補酵素Q_1_2を菌体より採取す
ることを特徴とする、前記一般式 I で表わされる補酵
素Q_1_2の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62226567A JPS63102690A (ja) | 1987-09-11 | 1987-09-11 | 補酵素q↓1↓2の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62226567A JPS63102690A (ja) | 1987-09-11 | 1987-09-11 | 補酵素q↓1↓2の製造方法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP8168580A Division JPS578788A (en) | 1980-06-17 | 1980-06-17 | Preparation of coenzyme q |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63102690A true JPS63102690A (ja) | 1988-05-07 |
JPH0413999B2 JPH0413999B2 (ja) | 1992-03-11 |
Family
ID=16847184
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP62226567A Granted JPS63102690A (ja) | 1987-09-11 | 1987-09-11 | 補酵素q↓1↓2の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS63102690A (ja) |
-
1987
- 1987-09-11 JP JP62226567A patent/JPS63102690A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0413999B2 (ja) | 1992-03-11 |
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