JPH05331181A - ファルネシルトランスフェラーゼ阻害物質ｏｈ−４６５２物質およびその製造法 - Google Patents
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害物質ｏｈ−４６５２物質およびその製造法Info
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 低分子のファルネシルトランスフエラーゼ阻
害物質及びそれを製造する方法を得るものである。 【構成】 ファルネシルトランスフエラーゼ阻害活性を
有するＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、
ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−
４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質
（以下、ＯＨ−４６５２物質と総称する）、ストレプト
マイセス属に属するＯＨ−４６５２生産菌を培地に培養
し、その培養物からＯＨ−４６５２物質を採取すること
により、ＯＨ−４６５２を製造する方法である。 【効果】 ファルネシルトランスフエラーゼ阻害物質Ｏ
Ｈ−４６５２物質は強い酵素阻害活性を有しかつ毒性が
低いことからｒａｓ遺伝子による癌化の過程を防止でき
る物質であるので、制癌物質として有用である。
害物質及びそれを製造する方法を得るものである。 【構成】 ファルネシルトランスフエラーゼ阻害活性を
有するＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、
ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−
４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質
（以下、ＯＨ−４６５２物質と総称する）、ストレプト
マイセス属に属するＯＨ−４６５２生産菌を培地に培養
し、その培養物からＯＨ−４６５２物質を採取すること
により、ＯＨ−４６５２を製造する方法である。 【効果】 ファルネシルトランスフエラーゼ阻害物質Ｏ
Ｈ−４６５２物質は強い酵素阻害活性を有しかつ毒性が
低いことからｒａｓ遺伝子による癌化の過程を防止でき
る物質であるので、制癌物質として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒト及びマウス由来の
ファルネシルトランスフェラーゼの活性を阻害する新規
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害物質ＯＨ−４６５
２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物
質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質また
は／およびＯＨ−４６５２Ｆ物質（以下、総称してＯＨ
−４６５２物質という）およびその製造法に関する。
ファルネシルトランスフェラーゼの活性を阻害する新規
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害物質ＯＨ−４６５
２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物
質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質また
は／およびＯＨ−４６５２Ｆ物質（以下、総称してＯＨ
−４６５２物質という）およびその製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】これまでに数多くの抗癌剤が開発されて
きているが、その殆どはまだ完全な治療薬とは言えない
のが現状である。また、発癌の機構についても充分な解
析はなされていないが、いわゆる癌遺伝子と称される遺
伝子について、その癌化への関連性が明らかにされてい
る例がある。例えばｒａｓ遺伝子と呼ばれているものが
それで、この遺伝子は酵母からヒトに至るあらゆる真核
生物の染色体に保存されていることが数多くの研究例か
ら証明されている。
きているが、その殆どはまだ完全な治療薬とは言えない
のが現状である。また、発癌の機構についても充分な解
析はなされていないが、いわゆる癌遺伝子と称される遺
伝子について、その癌化への関連性が明らかにされてい
る例がある。例えばｒａｓ遺伝子と呼ばれているものが
それで、この遺伝子は酵母からヒトに至るあらゆる真核
生物の染色体に保存されていることが数多くの研究例か
ら証明されている。
【０００３】この遺伝子と癌化との関連は、以下のよう
に説明されている。ｒａｓ遺伝子の産物である分子量２
１０００のタンパク質（ｒａｓｐ２１）は、そのカルボ
キシル末端から４番目のアミノ酸残基であるシステイン
残基がファルネシルトランスフェラーゼによって脂質の
一種であるファルネシル基が付加することによって活性
化され、更にプロセシングされて癌化を引き起こすとさ
れている。そこで、このｒａｓｐ２１の活性化への第一
段階であるファルネシル基の付加を阻止することができ
れば少なくともｒａｓ遺伝子産物であるタンパク質の活
性化が抑えられ、その結果、発癌は抑制できることが期
待される。
に説明されている。ｒａｓ遺伝子の産物である分子量２
１０００のタンパク質（ｒａｓｐ２１）は、そのカルボ
キシル末端から４番目のアミノ酸残基であるシステイン
残基がファルネシルトランスフェラーゼによって脂質の
一種であるファルネシル基が付加することによって活性
化され、更にプロセシングされて癌化を引き起こすとさ
れている。そこで、このｒａｓｐ２１の活性化への第一
段階であるファルネシル基の付加を阻止することができ
れば少なくともｒａｓ遺伝子産物であるタンパク質の活
性化が抑えられ、その結果、発癌は抑制できることが期
待される。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記と同様の作用をす
る物質としては合成ペプチドの例が知られている。〔ジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル ケミストリー、第２
２６巻、第１５５７５頁（１９９１）〕。しかしなが
ら、これらいずれのペプチドも細胞内で直ちに加水分解
され、安定な活性を発現するに至らないのが現状であ
る。かかる実情において、本発明はヒトの医学上または
社会問題の解決策としてきわめて重要であることに鑑み
て研究開発されたものである。従って、本発明はより安
定でかつ毒性が低く、しかも該酵素阻害活性の強い物質
を提供することを目的とするものである。
る物質としては合成ペプチドの例が知られている。〔ジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル ケミストリー、第２
２６巻、第１５５７５頁（１９９１）〕。しかしなが
ら、これらいずれのペプチドも細胞内で直ちに加水分解
され、安定な活性を発現するに至らないのが現状であ
る。かかる実情において、本発明はヒトの医学上または
社会問題の解決策としてきわめて重要であることに鑑み
て研究開発されたものである。従って、本発明はより安
定でかつ毒性が低く、しかも該酵素阻害活性の強い物質
を提供することを目的とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは上
記のごとき課題を解決すべく、新規なファルネシルトラ
ンスフェラーゼ阻害物質の探索を目的として種々の土壌
から菌株を分離し、その生産物について研究を続けた結
果、栃木県那須町の牧場の土壌から分離した放線菌ＯＨ
−４６５２菌株の培養中にファルネシルトランスフェラ
ーゼ活性を阻害する物質が産生されることを見出した。
記のごとき課題を解決すべく、新規なファルネシルトラ
ンスフェラーゼ阻害物質の探索を目的として種々の土壌
から菌株を分離し、その生産物について研究を続けた結
果、栃木県那須町の牧場の土壌から分離した放線菌ＯＨ
−４６５２菌株の培養中にファルネシルトランスフェラ
ーゼ活性を阻害する物質が産生されることを見出した。
【０００６】次いで、該培養物からファルネシルトラン
スフェラーゼ阻害活性物質を分離、精製した結果、後記
の理化学的性質を有する物質は従来全く知られていない
ことから、本物質をＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６
５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ
物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質およびＯＨ−４６５２Ｆ物
質と称することにした。本発明はかかる知見に基いて完
成されたものである。
スフェラーゼ阻害活性物質を分離、精製した結果、後記
の理化学的性質を有する物質は従来全く知られていない
ことから、本物質をＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６
５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ
物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質およびＯＨ−４６５２Ｆ物
質と称することにした。本発明はかかる知見に基いて完
成されたものである。
【０００７】本発明は、ＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−
４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５
２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質およびＯＨ−４６５２
Ｆ物質からなる群より選ばれたＯＨ−４６５２物質を提
供するものである。
４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５
２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質およびＯＨ−４６５２
Ｆ物質からなる群より選ばれたＯＨ−４６５２物質を提
供するものである。
【０００８】更に、本発明は、ストレプトマイセス属に
属し、ＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、
ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−
４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質を
生産する能力を有する微生物を培地に培養して培養物に
ＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−
４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５
２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質を蓄積せ
しめ、該培養物からＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６
５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ
物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６
５２Ｆ物質を採取することを特徴とするＯＨ−４６５２
Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物
質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質およ
び／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質の製造法を提供するも
のである。
属し、ＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、
ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−
４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質を
生産する能力を有する微生物を培地に培養して培養物に
ＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−
４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５
２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質を蓄積せ
しめ、該培養物からＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６
５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ
物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６
５２Ｆ物質を採取することを特徴とするＯＨ−４６５２
Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物
質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質およ
び／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質の製造法を提供するも
のである。
【０００９】ＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ
物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、
ＯＨ−４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６５２Ｆ
物質を生産する能力を有する微生物（以下、ＯＨ−４６
５２物質生産菌と称する）は、ストレプトマイセス属に
属するが、例えば本発明者らが分離したストレプトマイ
セス属に属するＯＨ−４６５２菌株は、本発明の最も有
効に使用される菌株の一例であって、本菌株の菌学的性
状を示すと次の通りである。
物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、
ＯＨ−４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６５２Ｆ
物質を生産する能力を有する微生物（以下、ＯＨ−４６
５２物質生産菌と称する）は、ストレプトマイセス属に
属するが、例えば本発明者らが分離したストレプトマイ
セス属に属するＯＨ−４６５２菌株は、本発明の最も有
効に使用される菌株の一例であって、本菌株の菌学的性
状を示すと次の通りである。
【００１０】本発明のＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４
６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２
Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質または／およびＯＨ−４
６５２Ｆ物質（以下、総称してＯＨ−４６５２物質とい
う）を生産するために使用される菌株としては、例えば
本発明者らによつて栃木県那須町の牧場の土壌から分離
されたストレプトマイセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＯＨ−４６５２株が挙げられる。
６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２
Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質または／およびＯＨ−４
６５２Ｆ物質（以下、総称してＯＨ−４６５２物質とい
う）を生産するために使用される菌株としては、例えば
本発明者らによつて栃木県那須町の牧場の土壌から分離
されたストレプトマイセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＯＨ−４６５２株が挙げられる。
【００１１】（Ｉ）形態的性質 栄養菌糸は各種寒天培地上でよく発達し、分断は観察さ
れない。気菌糸は酵母エキス・麦芽エキス寒天、スター
チ・無機塩寒天等で豊富に着生し、白色からグレイ系の
色調を呈する。顕微鏡下の観察では、気菌糸はらせん状
を呈し、２０ケ以上の胞子の連鎖が認められる。胞子の
大きさは１．１×０．６μｍである。胞子の表面は平滑
である。菌核、胞子のうおよび遊走子は見出されない。
れない。気菌糸は酵母エキス・麦芽エキス寒天、スター
チ・無機塩寒天等で豊富に着生し、白色からグレイ系の
色調を呈する。顕微鏡下の観察では、気菌糸はらせん状
を呈し、２０ケ以上の胞子の連鎖が認められる。胞子の
大きさは１．１×０．６μｍである。胞子の表面は平滑
である。菌核、胞子のうおよび遊走子は見出されない。
【００１２】（II）各種培地上での性状 イー・ビー・シャーリング〔Ｅ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎ
ｇ〕とデー・ゴツトリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の
方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システ
ィマティック・バクテリオロジー、第１６巻、第３１３
頁、１９６６年）によって調べた本生産菌の培養性状を
表１、表２、表３に示す。色調は標準色として、カラー
・ハーモニー・マニュアル第４版（コンテナー・コーポ
レーション・オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を
用いて決定し、色票名とともに括弧内にそのコードを併
せて記した。以下は特記しない限り、２７℃、２週間目
の各培地における観察結果である。
ｇ〕とデー・ゴツトリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の
方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システ
ィマティック・バクテリオロジー、第１６巻、第３１３
頁、１９６６年）によって調べた本生産菌の培養性状を
表１、表２、表３に示す。色調は標準色として、カラー
・ハーモニー・マニュアル第４版（コンテナー・コーポ
レーション・オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を
用いて決定し、色票名とともに括弧内にそのコードを併
せて記した。以下は特記しない限り、２７℃、２週間目
の各培地における観察結果である。
【００１３】
【表１】
【００１４】
【表２】
【００１５】
【表３】
【００１６】 （III)生理学的性質 （１）メラニン色素の生成 （イ）チロシン寒天 陽性 （ロ）ペプトン・イースト鉄寒天 陰性 （ハ）グルコース・ペプトン・ゼラチン培地 陰性 （２１〜２３℃） （ニ）トリプトン・イースト液 陰性 （２）チロシナーゼ反応 陽性 （３）硫化水素の生産 陰性 （４）硝酸塩の還元 陰性 （５）ゼラチンの液化（２１〜２３℃） 陰性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）
【００１７】 （６）スターチの加水分解 陽性 （７）脱脂乳の凝固（３７℃） 擬陽性 （８）脱脂乳のペプトン化（３７℃） 陰性 （９）生育温度範囲 １０〜３７℃ （１０）炭素源の利用性 （プリーダム・ゴトリーブ寒天培地） 利用する；グルコース、アラビノース、キシロース、ラフィノース、 マンニトール、ラムノース やや利用する；メリビオース、フラクトース、シュークロース 利用しない；イノシトール （１１）セルロースの分解 陰性
【００１８】（IV）細胞壁組成 細胞壁のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。以上、本
菌の菌学的性状を要約すると次の通りである。細胞壁中
のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。気菌糸の形態は
ラセン状で、長い胞子鎖を形成する。胞子の表面は平滑
である。培養状の諸性質としては、栄養菌糸はアイボリ
ー系の色調を呈し、気菌糸はグレイあるいは白色系の色
調を呈する。可溶性色素はチロシン寒天で、メラニン色
素を生産する。
菌の菌学的性状を要約すると次の通りである。細胞壁中
のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。気菌糸の形態は
ラセン状で、長い胞子鎖を形成する。胞子の表面は平滑
である。培養状の諸性質としては、栄養菌糸はアイボリ
ー系の色調を呈し、気菌糸はグレイあるいは白色系の色
調を呈する。可溶性色素はチロシン寒天で、メラニン色
素を生産する。
【００１９】これらの結果から、本菌株はストレプトマ
イセス属に属する菌種であり、プリドハムとトレスナー
の分類（バージズ・マニュアル・オブ・デターミネーテ
ィブ・バクテリオロジー、第八版、第７４８〜８２９
頁、１９７４年）によるグレイあるいはホワイトシリー
ズに属する菌種であると考えられる。なお、本菌株は、
ストレプトマイセス エスピーＯＨ−４６５２（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＯＨ−４６５２として工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託されている。（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１２７４０号）。
イセス属に属する菌種であり、プリドハムとトレスナー
の分類（バージズ・マニュアル・オブ・デターミネーテ
ィブ・バクテリオロジー、第八版、第７４８〜８２９
頁、１９７４年）によるグレイあるいはホワイトシリー
ズに属する菌種であると考えられる。なお、本菌株は、
ストレプトマイセス エスピーＯＨ−４６５２（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＯＨ−４６５２として工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託されている。（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１２７４０号）。
【００２０】以上、ＯＨ−４６５２物質生産菌について
説明したが、放線菌の一般的性状として菌学上の性状は
きわめて変異し易く、一定したものではなく、自然的に
あるいは通常行われる紫外線照射またはＸ線照射または
変異誘導剤などを用いる人工的変異手段により変異する
ことは周知の事実であり、このような人工的変異株は勿
論、自然変異株も含め、ストレプトマイセス属に属し、
ＯＨ−４６５２物質を生産する能力を有する菌株はすべ
て本発明に使用することができる。又、細胞融合、遺伝
子操作などの細胞工学的に変異させた菌株も物質ＯＨ−
４６５２物質生産菌として包含される。
説明したが、放線菌の一般的性状として菌学上の性状は
きわめて変異し易く、一定したものではなく、自然的に
あるいは通常行われる紫外線照射またはＸ線照射または
変異誘導剤などを用いる人工的変異手段により変異する
ことは周知の事実であり、このような人工的変異株は勿
論、自然変異株も含め、ストレプトマイセス属に属し、
ＯＨ−４６５２物質を生産する能力を有する菌株はすべ
て本発明に使用することができる。又、細胞融合、遺伝
子操作などの細胞工学的に変異させた菌株も物質ＯＨ−
４６５２物質生産菌として包含される。
【００２１】本発明においては、先ずストレプトマイセ
ス属に属するＯＨ−４６５２物質を生産する能力を有す
る生産菌が培地に培養される。培地としては、通常の放
線菌の培養に適する炭素源、資化し得る窒素源および無
機物、さらに必要に応じてその他の栄養物をほどよく含
有する合成培地または天然培地を使用することができ
る。培地に使用される炭素源および窒素源としては、使
用菌株の利用可能なものならばいずれの種類でもよい。
ス属に属するＯＨ−４６５２物質を生産する能力を有す
る生産菌が培地に培養される。培地としては、通常の放
線菌の培養に適する炭素源、資化し得る窒素源および無
機物、さらに必要に応じてその他の栄養物をほどよく含
有する合成培地または天然培地を使用することができ
る。培地に使用される炭素源および窒素源としては、使
用菌株の利用可能なものならばいずれの種類でもよい。
【００２２】すなわち、炭素源としては、グルコース、
グリセロール、フラクトース、マルトース、マンニッ
ト、キシロース、ガラクトース、リボース、澱粉または
その加水分解物等の種々の炭水化物が使用できる。その
濃度は通常、培地に対して０．１〜５％が好ましい。ま
たグルコン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各種有機
酸、グリシン、グルタミン酸、アラニン酸等の各種アミ
ノ酸、さらにはメタノール、エタノール等のアルコール
類やノルマルパラフイン等の各種の非芳香属系炭化水
素、あるいは植物もしくは動物性の各種油脂等も使用可
能である。
グリセロール、フラクトース、マルトース、マンニッ
ト、キシロース、ガラクトース、リボース、澱粉または
その加水分解物等の種々の炭水化物が使用できる。その
濃度は通常、培地に対して０．１〜５％が好ましい。ま
たグルコン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各種有機
酸、グリシン、グルタミン酸、アラニン酸等の各種アミ
ノ酸、さらにはメタノール、エタノール等のアルコール
類やノルマルパラフイン等の各種の非芳香属系炭化水
素、あるいは植物もしくは動物性の各種油脂等も使用可
能である。
【００２３】窒素源としては、例えばアンモニア、塩化
アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニウム塩類、尿
素、ペプトン、ＮＺ−アミン、肉エキス、酵母エキス、
乾燥酵母、コーンスチーブリカー、カゼイン加水分解
物、フイッシュミールあるいはその消化物、大豆粉ある
いはその消化物、脱脂大豆あるいはその消化物、加水分
解物などの含窒素有機物、さらにはグリシン、グルタミ
ン酸、アラニン等の各種アミノ酸が使用可能である。
アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニウム塩類、尿
素、ペプトン、ＮＺ−アミン、肉エキス、酵母エキス、
乾燥酵母、コーンスチーブリカー、カゼイン加水分解
物、フイッシュミールあるいはその消化物、大豆粉ある
いはその消化物、脱脂大豆あるいはその消化物、加水分
解物などの含窒素有機物、さらにはグリシン、グルタミ
ン酸、アラニン等の各種アミノ酸が使用可能である。
【００２４】無機物としては、例えば各種リン酸塩、硫
酸マグネシウム、食塩、さらに微量の重金属塩が使用さ
れる。また、栄養要求性を示す変異株を用いる場合に
は、当然その栄養要求を満足させる物質を培地に加えな
ければならないが、この種の栄養素は、天然物を含む培
地を使用する場合にはとくに必要としない場合がある。
酸マグネシウム、食塩、さらに微量の重金属塩が使用さ
れる。また、栄養要求性を示す変異株を用いる場合に
は、当然その栄養要求を満足させる物質を培地に加えな
ければならないが、この種の栄養素は、天然物を含む培
地を使用する場合にはとくに必要としない場合がある。
【００２５】培養は、通常振とうまたは通気攪拌培養な
どの好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気
攪拌培養が好ましい。培養のｐＨはたとえば５．０〜
８．０であるが、中性付近で培養を行うのが好ましい。
培養温度は例えば２０〜４０℃で行い得るが、通常はた
とえば２６〜３２℃（好ましくは２７℃付近）とする。
培養時間は、液体の場合、通常３〜６日間培養を行い、
培養物中のＯＨ−４６５２物質蓄積量が最大に達したと
きに培養を終了すればよい。
どの好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気
攪拌培養が好ましい。培養のｐＨはたとえば５．０〜
８．０であるが、中性付近で培養を行うのが好ましい。
培養温度は例えば２０〜４０℃で行い得るが、通常はた
とえば２６〜３２℃（好ましくは２７℃付近）とする。
培養時間は、液体の場合、通常３〜６日間培養を行い、
培養物中のＯＨ−４６５２物質蓄積量が最大に達したと
きに培養を終了すればよい。
【００２６】これらの培地組成、培地の液性、培養温
度、攪拌速度、通気量などの培養条件は使用する菌株の
種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節、選択されることはいうまでもない。液
体培養において、発泡があるときは、シリコン油、植物
油、界面活性剤などの消泡剤を適宜使用できる。
度、攪拌速度、通気量などの培養条件は使用する菌株の
種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節、選択されることはいうまでもない。液
体培養において、発泡があるときは、シリコン油、植物
油、界面活性剤などの消泡剤を適宜使用できる。
【００２７】このようにして得られた培養物に蓄積され
るＯＨ−４６５２物質は、通常は培養濾液中に生成され
る。培養濾液からＯＨ−４６５２物質を採取するには、
通常微生物の培養物から代謝物を採取するのに用いられ
る手段を単独あるいは任意の順序に組み合わせて、また
は反復して用いられる。
るＯＨ−４６５２物質は、通常は培養濾液中に生成され
る。培養濾液からＯＨ−４６５２物質を採取するには、
通常微生物の培養物から代謝物を採取するのに用いられ
る手段を単独あるいは任意の順序に組み合わせて、また
は反復して用いられる。
【００２８】すなわち、例えば、濾過、遠心分離、透
析、濃縮、乾燥、凍結、吸着、脱着、各種溶媒に対する
溶解度の差を利用する方法（例えば、沈澱、結晶化、再
結晶、転溶、向流分配等）、クロマトグラフイー等の手
段が用いられる。ＯＨ−４６５２物質は菌体内および培
養濾液の双方に生成蓄積されるので、本物質を分離採取
するには、菌体を含む全培養液から採取すればよい。
析、濃縮、乾燥、凍結、吸着、脱着、各種溶媒に対する
溶解度の差を利用する方法（例えば、沈澱、結晶化、再
結晶、転溶、向流分配等）、クロマトグラフイー等の手
段が用いられる。ＯＨ−４６５２物質は菌体内および培
養濾液の双方に生成蓄積されるので、本物質を分離採取
するには、菌体を含む全培養液から採取すればよい。
【００２９】例えば、菌体を含む全培養濾液から、クロ
ロホルムや酢酸エチルなどの有機溶剤などで抽出する。
抽出液を濃縮した後セファデックスＬＨ−２０、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフイー等によって本ＯＨ−４６
５２物質を個々の成分、即ちＯＨ−４６５２Ａ物質、Ｏ
Ｈ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４
６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質および／またはＯ
Ｈ−４６５２Ｆ物質に単離することができる。
ロホルムや酢酸エチルなどの有機溶剤などで抽出する。
抽出液を濃縮した後セファデックスＬＨ−２０、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフイー等によって本ＯＨ−４６
５２物質を個々の成分、即ちＯＨ−４６５２Ａ物質、Ｏ
Ｈ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４
６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質および／またはＯ
Ｈ−４６５２Ｆ物質に単離することができる。
【００３０】次に、本発明のＯＨ−４５６２Ａ物質、Ｏ
Ｈ−４５６２Ｂ物質、ＯＨ−４５６２Ｃ物質、ＯＨ−４
６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質およびＯＨ−４６
５２Ｆ物質の理化学的性状について述べる。 〔１〕ＯＨ−４６５２Ａ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９２６（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ56Ｎ5 Ｏ11Ｃl （４）融点；１３６〜１３８℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−９８．９°（ｃ＝０．
３メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（エタノール中）；図１に
示すとおりであり、２０５、２２５、２８２（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図２に示すと
おりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶媒に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
Ｈ−４５６２Ｂ物質、ＯＨ−４５６２Ｃ物質、ＯＨ−４
６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質およびＯＨ−４６
５２Ｆ物質の理化学的性状について述べる。 〔１〕ＯＨ−４６５２Ａ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９２６（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ56Ｎ5 Ｏ11Ｃl （４）融点；１３６〜１３８℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−９８．９°（ｃ＝０．
３メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（エタノール中）；図１に
示すとおりであり、２０５、２２５、２８２（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図２に示すと
おりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶媒に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
【００３１】〔２〕ＯＨ−４６５２Ｂ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９２６（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ56Ｎ5 Ｏ11Ｃl （４）融点；１３４〜１３７℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−１２４．２°（ｃ＝
０．３５、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図３に
示すとおりであり、２０４、２２５、２８０（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図４に示すと
おりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶媒に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ56Ｎ5 Ｏ11Ｃl （４）融点；１３４〜１３７℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−１２４．２°（ｃ＝
０．３５、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図３に
示すとおりであり、２０４、２２５、２８０（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図４に示すと
おりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶媒に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
【００３２】〔３〕ＯＨ−４６５２Ｃ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９２４（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ56Ｎ5 Ｏ11Ｃl （４）融点；１２５〜１２７℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−１５１．９°（ｃ＝
０．８、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図５に
示すとおりであり、２０４、２２５、２８０（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図６に示すと
おりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ56Ｎ5 Ｏ11Ｃl （４）融点；１２５〜１２７℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−１５１．９°（ｃ＝
０．８、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図５に
示すとおりであり、２０４、２２５、２８０（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図６に示すと
おりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
【００３３】〔４〕ＯＨ−４６５２Ｄ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；８７４（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ55Ｎ5 Ｏ10 （４）融点；１３７〜１３９℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−２１２．３°（ｃ＝
０．３、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図７に
示すとおりであり、２０３、２２５、２８１（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図８に示すと
おりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ55Ｎ5 Ｏ10 （４）融点；１３７〜１３９℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−２１２．３°（ｃ＝
０．３、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図７に
示すとおりであり、２０３、２２５、２８１（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図８に示すと
おりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
【００３４】〔５〕ＯＨ−４６５２Ｅ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９０８（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ54Ｎ5 Ｏ10Ｃl （４）融点；１４３〜１４６℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−２０７°（ｃ＝０．
８、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図９に
示すとおりであり、２０５、２２５、２８２（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図１０に示す
とおりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性 （１０）元素分析；Ｃ＝６３．０９％；Ｈ＝６．１７
％；Ｎ＝７．０４％；Ｃｌ＝３．７１％ （１１）アミノ酸分析値；グルシン：セリン：チロシン
＝１：１：１ （１３）プロトン核磁気共鳴スペクトル（バリアンＸＬ
−４００、４００ＭＨｚ）；図１１に示すとおり
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ54Ｎ5 Ｏ10Ｃl （４）融点；１４３〜１４６℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−２０７°（ｃ＝０．
８、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図９に
示すとおりであり、２０５、２２５、２８２（肩）ｎｍ
に極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図１０に示す
とおりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性 （１０）元素分析；Ｃ＝６３．０９％；Ｈ＝６．１７
％；Ｎ＝７．０４％；Ｃｌ＝３．７１％ （１１）アミノ酸分析値；グルシン：セリン：チロシン
＝１：１：１ （１３）プロトン核磁気共鳴スペクトル（バリアンＸＬ
−４００、４００ＭＨｚ）；図１１に示すとおり
【００３５】〔６〕ＯＨ−４６５２Ｆ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９４２（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ53Ｎ5 Ｏ10Ｃl2 （４）融点；１４３〜１４６℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−１９３．５°（ｃ＝
０．７、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図１２
に示すとおりであり、２０３、２２５、２８２（肩）ｎ
ｍに極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図１３に示す
とおりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ53Ｎ5 Ｏ10Ｃl2 （４）融点；１４３〜１４６℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−１９３．５°（ｃ＝
０．７、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）；図１２
に示すとおりであり、２０３、２２５、２８２（肩）ｎ
ｍに極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）；図１３に示す
とおりであり、３３８０、３２５０、２９５０、２９２
０、１７３５、１６７０、１６２０cm-1付近に特徴的な
吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応；ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性
【００３６】次に、ＯＨ−４６５２物質のファルネシル
トランスフェラーゼ阻害物質作用について説明する。公
知の反応系〔サイエンス、第２４５巻、第３７９頁（１
９８９）〕に準じて酵素反応を行った。反応液中にはフ
ァルネシルトランスフェラーゼの他に〔3 Ｈ〕ファルネ
シルピロリン酸、ｐ２１タンパク質、ＭｇＣl2、ＤＤＴ
およびトリス・塩酸緩衝液（pH７．５）を含む。
トランスフェラーゼ阻害物質作用について説明する。公
知の反応系〔サイエンス、第２４５巻、第３７９頁（１
９８９）〕に準じて酵素反応を行った。反応液中にはフ
ァルネシルトランスフェラーゼの他に〔3 Ｈ〕ファルネ
シルピロリン酸、ｐ２１タンパク質、ＭｇＣl2、ＤＤＴ
およびトリス・塩酸緩衝液（pH７．５）を含む。
【００３７】その結果、マウス及びヒト由来のファルネ
シルトランスフェラーゼに対するＩＣ５０はそれぞれ
０．５μＭおよび１．１μＭであり、対照として同様の
作用を有する合成ペプチドＣＶＬＳの６．２５μＭに対
しきわめて強い阻害活性を示した。またベロ細胞に対す
る細胞毒性を調べたところ、１mg／ml添加によっても何
ら細胞の増殖および形態に影響は見られず、きわめて毒
性の低いことが確認された。
シルトランスフェラーゼに対するＩＣ５０はそれぞれ
０．５μＭおよび１．１μＭであり、対照として同様の
作用を有する合成ペプチドＣＶＬＳの６．２５μＭに対
しきわめて強い阻害活性を示した。またベロ細胞に対す
る細胞毒性を調べたところ、１mg／ml添加によっても何
ら細胞の増殖および形態に影響は見られず、きわめて毒
性の低いことが確認された。
【００３８】
【発明の効果】以上のように、本ＯＨ−４６５２物質
は、同様の作用を有する従来の合成ペプチドに比べて著
しく強い酵素阻害活性を有し、かつ毒性が低いことから
ｒａｓ遺伝子による癌化の過程を阻止できる物質と推定
されることから、制癌物質として有用である。
は、同様の作用を有する従来の合成ペプチドに比べて著
しく強い酵素阻害活性を有し、かつ毒性が低いことから
ｒａｓ遺伝子による癌化の過程を阻止できる物質と推定
されることから、制癌物質として有用である。
【００３９】次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明する。
明する。
【実施例】５００ml容三角フラスコにグルコース０．１
％、馬鈴薯デンプン２．４％、ペプトン０．３％、肉エ
キス０．３％、酵母エキス０．５％、炭酸カルシウム
０．４％を含む液体培地（ｐＨ７．０）１００mlを分注
し、１２１℃で１５分間蒸気滅菌し、これにグリセロー
ル１．０％、カゼイン０．０３％、硝酸カリウム０．２
％、塩化ナトリウム０．２％、燐酸二カリウム０．２
％、硫酸マグネシウム０．００５％、炭酸カルシウム
０．００２％、硫酸第二鉄０．００１％、寒天１．８％
を含む寒天斜面培地上で２７℃で培養したストレプトマ
イセス エスピーＯＨ−４６５２株の斜面培地から１白
金耳づつ植菌し、回転式振とう機を用いて、２７℃で３
日間振とう培養し、種培養液を得た。
％、馬鈴薯デンプン２．４％、ペプトン０．３％、肉エ
キス０．３％、酵母エキス０．５％、炭酸カルシウム
０．４％を含む液体培地（ｐＨ７．０）１００mlを分注
し、１２１℃で１５分間蒸気滅菌し、これにグリセロー
ル１．０％、カゼイン０．０３％、硝酸カリウム０．２
％、塩化ナトリウム０．２％、燐酸二カリウム０．２
％、硫酸マグネシウム０．００５％、炭酸カルシウム
０．００２％、硫酸第二鉄０．００１％、寒天１．８％
を含む寒天斜面培地上で２７℃で培養したストレプトマ
イセス エスピーＯＨ−４６５２株の斜面培地から１白
金耳づつ植菌し、回転式振とう機を用いて、２７℃で３
日間振とう培養し、種培養液を得た。
【００４０】一方、３０l ジヤーフアーメンター１基に
グルコース２．０％、アスパラギン０．５％、硫酸マグ
ネシウム０．０１％、リン酸一カリウム０．０７％、酵
母エキス０．１％を含む液体培地（ｐＨ７．０）２０l
に仕込み、１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。これに種
培養液４本分を移植し、攪拌速度２５０ｒｐｍ、通気量
１５l ／分で２７℃で９６時間通気攪拌した。培養液２
０l にクロロホルム１０l を加え攪拌し、これをシャー
プレスで遠心分離して（１００００ｒｐｍ）菌体と水層
とクロロホルム層に分別した。
グルコース２．０％、アスパラギン０．５％、硫酸マグ
ネシウム０．０１％、リン酸一カリウム０．０７％、酵
母エキス０．１％を含む液体培地（ｐＨ７．０）２０l
に仕込み、１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。これに種
培養液４本分を移植し、攪拌速度２５０ｒｐｍ、通気量
１５l ／分で２７℃で９６時間通気攪拌した。培養液２
０l にクロロホルム１０l を加え攪拌し、これをシャー
プレスで遠心分離して（１００００ｒｐｍ）菌体と水層
とクロロホルム層に分別した。
【００４１】得られたクロロホルム層に無水硫酸ナトリ
ウム５００ｇを加え、脱水した後、粗物を得た。クロロ
ホルム層を減圧濃縮し、油状物質１．６ｇを得た。クロ
ロホルムに懸濁シタシリカゲル（約４０ｇ）を充填した
カラム上端に、上記の油状物質をしょうりゅおのシリカ
ゲルとともに負荷し、クロロホルム／メタノール（１０
０：５、Ｖ／Ｖ）１００mlでカラムを洗ったあたクロロ
ホルム／メタノール（１００：６．５、Ｖ／Ｖ）で活性
物質を溶出した。
ウム５００ｇを加え、脱水した後、粗物を得た。クロロ
ホルム層を減圧濃縮し、油状物質１．６ｇを得た。クロ
ロホルムに懸濁シタシリカゲル（約４０ｇ）を充填した
カラム上端に、上記の油状物質をしょうりゅおのシリカ
ゲルとともに負荷し、クロロホルム／メタノール（１０
０：５、Ｖ／Ｖ）１００mlでカラムを洗ったあたクロロ
ホルム／メタノール（１００：６．５、Ｖ／Ｖ）で活性
物質を溶出した。
【００４２】これを減圧下で濃縮することによって褐色
の粗粉末７７０mgを得た。この粗粉末を少量のエタノー
ルに溶解し、あらかじめエタノールで平衡化したセファ
デックスＬＨ−２０カラム（１．５cm×１００cm）の上
端に負荷しエタノールにて溶出した。活性画分を集め、
減圧下濃縮することによって淡褐色の粗粉末４６０mgを
得た。これを４．６mlのメタノールに溶かし、０．２ml
づつ高速液体クロマトグラフイー用逆相カラム（資生
堂：Ｃｌ８ＳＧ１２０タイプ（２０×２５０mm）に供
し、５０％アセトニトリル水で溶出（流速：１１ml／
分）した。
の粗粉末７７０mgを得た。この粗粉末を少量のエタノー
ルに溶解し、あらかじめエタノールで平衡化したセファ
デックスＬＨ−２０カラム（１．５cm×１００cm）の上
端に負荷しエタノールにて溶出した。活性画分を集め、
減圧下濃縮することによって淡褐色の粗粉末４６０mgを
得た。これを４．６mlのメタノールに溶かし、０．２ml
づつ高速液体クロマトグラフイー用逆相カラム（資生
堂：Ｃｌ８ＳＧ１２０タイプ（２０×２５０mm）に供
し、５０％アセトニトリル水で溶出（流速：１１ml／
分）した。
【００４３】異なる保持時間で溶出されてくるそれぞれ
の活性画分を集め、減圧乾固し、保持時間１１．４、１
２．３、１６．７、１９．３、２１．６及び２８．９分
で溶出される物質がそれぞれＯＨ−４６５２Ａ、ＯＨ−
４６５２Ｂ、ＯＨ−４６５２Ｃ、ＯＨ−４６５２Ｄ、Ｏ
Ｈ−４６５２ＥおよびＯＨ−４６５２Ｆ物質である。上
記一回のクロマトグラフイーでこれら各物質をそれぞれ
０．７、１．４、２．７、３．７、３．０及び１．１mg
を得た。
の活性画分を集め、減圧乾固し、保持時間１１．４、１
２．３、１６．７、１９．３、２１．６及び２８．９分
で溶出される物質がそれぞれＯＨ−４６５２Ａ、ＯＨ−
４６５２Ｂ、ＯＨ−４６５２Ｃ、ＯＨ−４６５２Ｄ、Ｏ
Ｈ−４６５２ＥおよびＯＨ−４６５２Ｆ物質である。上
記一回のクロマトグラフイーでこれら各物質をそれぞれ
０．７、１．４、２．７、３．７、３．０及び１．１mg
を得た。
【図１】ファルネシルトランスフェラーゼＯＨ−４６５
２Ａ物質の紫外線吸収スペクトルである。
２Ａ物質の紫外線吸収スペクトルである。
【図２】ＯＨ−４６５２Ａ物質の赤外線吸収スペクトル
である。
である。
【図３】ファルネシルトランスフェラーゼＯＨ−４６５
２Ｂ物質の紫外線吸収スペクトルである。
２Ｂ物質の紫外線吸収スペクトルである。
【図４】ＯＨ−４６５２Ｂ物質の赤外線吸収スペクトル
である。
である。
【図５】ファルネシルトランスフェラーゼＯＨ−４６５
２Ｃ物質の紫外線吸収スペクトルである。
２Ｃ物質の紫外線吸収スペクトルである。
【図６】ＯＨ−４６５２Ｃ物質の赤外線吸収スペクトル
である。
である。
【図７】ファルネシルトランスフェラーゼＯＨ−４６５
２Ｄ物質の紫外線吸収スペクトルである。
２Ｄ物質の紫外線吸収スペクトルである。
【図８】ＯＨ−４６５２Ｄ物質の赤外線吸収スペクトル
である。
である。
【図９】ファルネシルトランスフェラーゼＯＨ−４６５
２Ｅ物質の紫外線吸収スペクトルである。
２Ｅ物質の紫外線吸収スペクトルである。
【図１０】ＯＨ−４６５２Ｅ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図１１】ＯＨ−４６５２Ｅ物質のプロトン核磁気共鳴
スペクトルである。
スペクトルである。
【図１２】ファルネシルトランスフェラーゼＯＨ−４６
５２Ｆ物質の紫外線吸収スペクトルである。
５２Ｆ物質の紫外線吸収スペクトルである。
【図１３】ＯＨ−４６５２Ｆ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ディディエ・バンデルピル 東京都港区白金５丁目９番１号 社団法人 北里研究所内
Claims (5)
- 【請求項１】 下記の理化学的性質を有するＯＨ−４６
５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ
物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質お
よびＯＨ−４６５２Ｆ物質からなる群より選ばれたＯＨ
−４６５２物質。 〔Ｉ〕ＯＨ−４６５２Ａ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９２６（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ56Ｎ5 Ｏ11Ｃl （４）融点；１３６〜１３８℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−９８．９°（ｃ＝０．
３、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（エタノール中）；２０
５、２２５、２８２（肩）ｎｍに極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）：３３８０、３
２５０、２９５０、２９２０、１７３５、１６７０、１
６２０cm-1付近に特徴的な吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応：ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性 〔２〕ＯＨ−４６５２Ｂ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９２６（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ56Ｎ5 Ｏ11Ｃl （４）融点；１３４〜１３７℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−１２４．２°（ｃ＝
０．３５、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（エタノール中）；２０
４、２２５、２８０（肩）ｎｍに極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）：３３８０、３
２５０、２９５０、２９２０、１７３５、１６７０、１
６２０cm-1付近に特徴的な吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応：ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性 〔３〕ＯＨ−４６５２Ｃ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９２４（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ54Ｎ5 Ｏ11Ｃl （４）融点；１２５〜１２７℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−１５１．９°（ｃ＝
０．８、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（エタノール中）；２０
４、２２５、２８０（肩）ｎｍに極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）：３３８０、３
２５０、２９５０、２９２０、１７３５、１６７０、１
６２０cm-1付近に特徴的な吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応：ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性 〔４〕ＯＨ−４６５２Ｄ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；８７４（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ55Ｎ5 Ｏ10 （４）融点；１３７〜１３９℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−２１２．３°（ｃ＝
０．３、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（エタノール中）；２０
３、２２５、２８１（肩）ｎｍに極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）：３３８０、３
２５０、２９５０、２９２０、１７３５、１６７０、１
６２０cm-1付近に特徴的な吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応：ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性 〔５〕ＯＨ−４６５２Ｅ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９０８（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ54Ｎ5 Ｏ10Ｃl （４）融点；１４３〜１４６℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−２０７°（ｃ＝０．
８、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（エタノール中）；２０
５、２２５、２８２（肩）ｎｍに極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）：３３８０、３
２５０、２９５０、２９２０、１７３５、１６７０、１
６２０cm-1付近に特徴的な吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応：ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性 〔６〕ＯＨ−４６５２Ｆ物質 （１）性状；白色粉末 （２）分子量；９４２（Ｍ＋Ｈ、高分解能高速原子衝撃
マススペクトルによる） （３）分子式；Ｃ49Ｈ53Ｎ5 Ｏ10Ｃl2 （４）融点；１４３〜１４６℃ （５）比旋光度；〔α〕D 26＝−１９３．５°（ｃ＝
０．７、メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル（エタノール中）；２０
３、２２５、２８２（肩）ｎｍに極大吸収を有する （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）：３３８０、３
２５０、２９５０、２９２０、１７３５、１６７０、１
６２０cm-1付近に特徴的な吸収帯を有する （８）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、クロロホルムに可溶、水、ヘキサンに難溶 （９）呈色反応：ヨウ素、バニリン反応に陽性、ニンヒ
ドリン反応に陰性 - 【請求項２】 ストレプトマイセス属に属するＯＨ−４
６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２
Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質
および／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質を生産する能力を
有する微生物を培地に培養し、培養物中にＯＨ−４６５
２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物
質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質およ
び／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質を蓄積せしめ、該培養
物からＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、
ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−
４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質を
採取することを特徴とするＯＨ−４６５２Ａ物質、ＯＨ
−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ物質、ＯＨ−４６
５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質および／またはＯＨ
−４６５２Ｆ物質の製造法。 - 【請求項３】 ストレプトマイセス属に属するＯＨ−４
６５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２
Ｃ物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質
および／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質を生産する能力を
有する微生物がストレプトマイセス エスピーＯＨ−４
６５２（ＦＥＲＭ Ｐ−１２７４０）である請求項２記
載の製造法。 - 【請求項４】 ストレプトマイセス属に属しＯＨ−４６
５２Ａ物質、ＯＨ−４６５２Ｂ物質、ＯＨ−４６５２Ｃ
物質、ＯＨ−４６５２Ｄ物質、ＯＨ−４６５２Ｅ物質お
よび／またはＯＨ−４６５２Ｆ物質を生産する能力を有
する微生物。 - 【請求項５】 微生物がストレプトマイセス エスピー
ＯＨ−４６５２である請求項４記載の微生物。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4135383A JPH05331181A (ja) | 1992-05-27 | 1992-05-27 | ファルネシルトランスフェラーゼ阻害物質ｏｈ−４６５２物質およびその製造法 |
| PCT/JP1993/000681 WO1993024643A1 (en) | 1992-05-27 | 1993-05-24 | Farnesyltransferase inhibitors oh-4652 and production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4135383A JPH05331181A (ja) | 1992-05-27 | 1992-05-27 | ファルネシルトランスフェラーゼ阻害物質ｏｈ−４６５２物質およびその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05331181A true JPH05331181A (ja) | 1993-12-14 |
Family
ID=15150427
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4135383A Pending JPH05331181A (ja) | 1992-05-27 | 1992-05-27 | ファルネシルトランスフェラーゼ阻害物質ｏｈ−４６５２物質およびその製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05331181A (ja) |
| WO (1) | WO1993024643A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994026723A2 (en) | 1993-05-14 | 1994-11-24 | Genentech, Inc. | ras FARNESYL TRANSFERASE INHIBITORS |
| DK0677513T3 (da) * | 1994-04-15 | 2000-03-27 | Takeda Chemical Industries Ltd | Octahydro-2-naphthalencarboxylsyrederivat, dets fremstilling og anvendelse |
-
1992
- 1992-05-27 JP JP4135383A patent/JPH05331181A/ja active Pending
-
1993
- 1993-05-24 WO PCT/JP1993/000681 patent/WO1993024643A1/ja active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1993024643A1 (en) | 1993-12-09 |
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