JPS5834112B2 - 新抗生物質ｓｆ−１５４０−ｂ物質及びそれの製造法並びに農業用抗カビ剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質、その製造方法及びそれを含有する組
成物に関する。

更に詳しく述べると、ストレプトミセス属に属する菌を
培地に培養し培養物から得られた新抗生物質５Ｆ−１５
４０−Ｂ物質及びその含有物に関するものである。

本発明者らは、先にストレプトミセス・ハイグロスコピ
クス５Ｆ−１５４０株と命名した菌株の培養物質中にカ
ビ類及びダラム陽性菌に有効な抗生物質５Ｆ−１５４０
物質が蓄積され、これを採取し得ることを見出した（特
願昭５０ １５７４６９）。

更に研究を進めた結果、５Ｆ１５４０物質とは生物学的
性状及び物理学的性状を異にする新抗生物質５Ｆ−１５
４０−Ｂ物質が同一菌株によって生産されることを見出
し、その有効物質を培養物中から純粋に単離しその性状
を調べた結果、既知の物質とは異なる新抗生物質である
ことを確かめ、この有効物質を５Ｆ−１５４０Ｂ物質と
命名して本発明を完成した。

本発明の方法で使用される５Ｆ−１５４０−Ｂ物質生産
菌の例としては、ストレプトミセス・ハイグロスコピク
ス５Ｆ−１５４０（工業技術院微生物工業技術研究所に
微生物受託番号、微工研寄第２６０７号として寄託）が
あり、その菌学的性状は次の通りである。

■、形態 気菌糸はスターチ寒天、オートミール寒天、イースト・
麦芽寒天及びチロシン寒天等で良好に着生し胞子形成も
豊富である。

分枝は単純分枝で車軸分枝はみもれない。

気菌糸の先端はコ※※ ノパクトな閉鎖型のらせん糸か又は短かい開放型らせん
糸となる。

菌核形成は認められない。電子顕微鏡による胞子の表面
構造はワーテイ（イボ状）である。

胞子は隋円と短円筒型で、胞子の連鎖数は１０胞子以上
である。

胞子の大きさは０．８〜］、、ＩＸｌ、１〜１．４ミク
ロンである。

■、各種培地上の生育状態 ■、生理的性質 （１）生育温度範囲：スターチ・イースト寒天培地にお
いて１５〜４０℃の温度範囲で良好な生育をする。

（２）ゼラチンの液化：２０℃にて３０日間培養で液化
する。

（３）スターチの加水分解：陽性 （４）脱脂乳の凝固：陰性（２８℃、３７℃）脱脂乳め
ペプトン化：陽性（２８℃、３７℃）（５）メラニン色
素の生成：陰性 ■、炭素源の利用性（プリートノ・ム・ゴツトリープ寒
天培地） （１）利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、
Ｄ−マンニトール、■−イノシ トール、Ｌ−アラビノース、ラムノー ス （２）利用が疑わしい：Ｄ−キシロース、ラフィノース （３）利用しない：シュクロース 上記から５Ｆ−１５４０株の菌学的特徴を要約すると、
気菌糸はらせん糸を形成し、胞子表面構造はワーテイ（
イボ状）である。

発育色調は淡黄色〜黄褐色〜灰黄色となる。

気菌糸は灰褐色で、次第にハイグロスコピックとなる。

５Ｆ−１５４０株のこのような性状はストレフトミセス
層のストレプトミセス・ハイグロスコピクス（Ｓ ｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ）
の性状とよ（一致している。

即ち、ストレプトミセス・ハイグロスコピクスの特徴と
されている次の３点が５Ｆ−１５４０株に認められる。

（１）らせん糸を形成する。

（２）灰褐色の気菌糸を着生する。

（３）気菌糸がハイグロスコピックとなる。ワックスマ
ンの記載（ワックスマン：ザ・アクチノミセテス、２巻
、２３０〜２３１頁、１９６１年）によるストレプトミ
セス・ハイグロスコピクスと５Ｆ−１５４０株を比較す
るとシュクロース・硝酸塩寒天及びグルコース・アスパ
ラギン寒天での可溶性色素の生成等に相違が認められる
が、その性状はほぼよく一致している。

以上より、５Ｆ−１，５４０株はワックスマンの記載と
は相違する点が認められるが、上記３点の特徴をそなえ
ていることからストレプトミセス・ハイグロスコピクス
の種に属させるのが妥当であり、本発明者らは５Ｆ−１
５４０株をストレプトミセス・ハイグロスコピクス５Ｆ
−１５４０（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏ
ｓｃｏｐｉｃｕｓ ５Ｆ−１５４０）と命名し、公知の
菌株と区別することにした。

５Ｆ−１５４０株は他のストレプトミセスの場合にみも
れるように、その性状が変化しやすく、例えば紫外線、
エックス線、高周波、放射線、薬品等を用いる人工的手
段で変異し得るものである。

このような変異株であっても、５Ｆ−１５４０Ｂ物質の
生産能を有するものは全て本発明の方法に使用すること
が出来る。

本発明の方法では、前記菌株を通常微生物が利用しうる
栄養物を含有する培地で培養する。

栄養源としては、従来ストレプトミセス属の菌の培養に
利用されている公知のものが使用できる。

例えば、炭素源としてグルコース、スターチ、クリセリ
ン、デキストリン、シュクロース、水アめ、糖みつ、大
豆油等を使用しつる。

また窒素源として、大豆粉、コーンステイープリカー、
小麦胚芽、コツトンシードミール、硫酸アンモン、硝酸
ソーダ等を使用しうる。

その他必要に応じて炭素カルシウム、塩化ナトリウム、
塩化カリ、燐酸塩等の無機塩を添加するほか、菌の発育
を助け、５Ｆ１５４０−Ｂ物質の生産を促進するごとき
有機及び無機物を適当に添加することが出来る。

培養法としては、一般の抗生物質生産の方法と同じ（液
体培養法、特に深部培養法が最も適している。

培養は好気的条件下で行われ、培養に適当な温度は２５
〜３５℃であるが、多（の場合２８℃付近で培養する。

かくして５Ｆ−１５４０−Ｂ物質の生産は振盪培養、タ
ンク培養共に２〜５日で最高に達する。

以上述べた培養条件は使用される生産菌株の特性に応じ
てそれぞれの最適条件を選択して適用することができる
。

５Ｆ−１５４０−Ｂ物質は菌体及び培養ろ液の両方に含
まれるので、両者から別別に抽出できる外、醗酵液をろ
過することなく弱酸性にすれば溶液中の５Ｆ−１５４０
−Ｂ物質は菌体に吸着乃至沈殿するので菌体部分のみを
抽出することが可能である。

実際の抽出に当っては、５Ｆ−１５４０−Ｂ物質は後記
の理化学的性状によって明らかな様に、・脂溶性物質で
あり、培養中から脂溶性天然物の採取に用いられる公知
方法がすべて適用される。

一例を示すと、ストレプトミセス・ハイグロスコピクス
５Ｆ−１５４０株の培養ろ液及び培養菌体の含水メタノ
ール抽出液がらメタノールを除去した水溶液を水と混ら
ない有機溶剤、例えば、酢酸エチルで抽出すれば、５Ｆ
−１５４０−Ｂ物質は有機溶剤層に抽出される。

抽出液を減圧濃縮するとシラツブ状になる。

これにシクロヘキサンを加えると、５Ｆ−１５４０−Ｂ
物質の粗物質が沈殿する。

この５Ｆ−１５４０−Ｂ物質を含む沈殿物をカラム・ク
ロマトグラフィー、例えばベンゼン・アセトン（２０：
１）を展開剤としたシリカゲル・カラムクロマトグラフ
ィー及びメタノール、酢酸エチル等の有機溶剤を展開剤
としたセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）
で精製することができる。

本発明の方法で得られた５Ｆ−１５４０−Ｂ物質の淡黄
白色無定形粉末の理化学的性状は次の通りである。

（１）元素分析 炭素 ６６．３１％、水素 ８．７６％、酸素２４．９
３％（差により） （２）分子量 約６００（蒸気圧法で測定） （３）融点 ８５〜９０℃ （４）比旋光度 （ロ）ド＋３９°（Ｃ１１クロロホルム）（５）紫外部
吸収スペクトル メタノール溶液の紫外部吸収スペクトルを第１図に示す
。

（６）赤外部 臭化カリ錠剤法による赤外部吸収スペクトルを第２図に
示す。

主要な吸収バンド位置は３３８０．１７２０゜１２６０
．１１００．９８０Ｃｒｎ−１である。

（７）核磁気共鳴スペクトル 重クロロホルム中の１００ＭＨｚ フロトンＮＭＲス
ペクトルを第３図に示す。

主要な吸収シグナル位置は０．８９．１．９４．１．９
９．２．０６．３．２６．６．８６ ｐｐｍである。

（８）溶剤に対する溶解性 メタノール、エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル
、ベンゼン、アセトン、クロロホルム、四塩化炭素、エ
チルエーテルに可溶。

水、シクロヘキサンに不溶。

（９）安定性 酸、アルカリに不安定である。

（１０）各種クロマトグラフィーにおけるＲｆ値５Ｆ−
１５４０−Ｂ物質のシリカゲル薄層（メルク社製）クロ
マトグラフィーでは、クロ＊＊ ロホルム・メタノール
（５：１）の展１ａ−Ｃ−Ｒｆ値０．１７、ベンゼン・
アセトン（２：１）でＲｆ値０．０５、酢酸エチルでＲ
ｆ値ｏ、ｏｓの単一スポットを示した。

住υ 呈色反応 陽性：過マンガン酸カリ、硫酸、レミュー陰性：ニンヒ
ドリン ５Ｆ−１５４０−Ｂ物質の検定に当っては、次の方法が
用いられる。

検定培地としてポテト・グルコース寒天を用いる。

検定菌としてはピリクラリア・オリゼを用いる。

５Ｆ−１５４０−Ｂ物質はこれを用いた検定に於て１２
５■／１ｒＬｌ〜８■／就において濃度の対数と阻止円
との関係は直線関係を示し、それぞれ５３．６〜３９．
６ｍｍの阻止円を与える。

（ペーパーディスク平板法）ＳＦ−１５４０−Ｂ物質の
各種微生物に対する抗菌スペクトルは次表に示す通りで
ある。

上表から明らかなように５Ｆ−１５４０−Ｂ物質はダラ
ム陰性菌には抗菌力を示さないが、ダラム陽性菌、酵母
及びカビに対して抗菌力を示す特性を有している。

５Ｆ−１５４０−Ｂ物質を５■／ｋｑマウスに腹腔投与
すると５匹中全例生存した。

以上のような理化学的、生物学的性状を有するものは他
の既知抗生物質に該当するものがないので、新抗生物質
と認められる。

以上のように５Ｆ−１５４０−Ｂ物質は新抗生物質と判
定されたが、５Ｆ−１５４０−Ｂ物質は抗カビ活性、と
りわけ植物病原性のカビに有効なので、農薬として有用
である。

次に実施例を示すが、本発明においてここに例示しない
多くの変形成いは、修飾手段を用いることは勿論である
。

実施例 １ ストレプトミセス・ハイグロスコピクス５Ｆ１５４０株
（寄託受理番号２６０７号）の胞子をスターチ１％、大
豆粉３％（ｐＨ７）の液体培地１４（坂ロフラスコ１０
本使用）に接種し、２８℃で４０時間振盪培養したもの
を種母とする。

グルコース２．５％、小麦胚芽２，０％、ソリューフル
・ベジタブルプロテイン０．５％、食塩０．２５％（ｐ
Ｈ７）の組成から成る液体培地３５．ｆｆに前記の種母
を接種し、２８℃で７６時間通気攪拌培養した。

（５０，！ジャーファーメンター２基使用）この培養物
を６規定塩酸でｐＨ３〜４に調整すると、培養液中の５
Ｆ−１５４０−Ｂ物質は菌体区分に移項する。

そこにハイフロス−パーセルラ加えてろ過し菌体を集め
メタノール９Ｌで抽出する。

菌体をろ過して含水メタノール溶液１１Ｌを得る。

そのメタノール水溶液を減圧濃縮すると、３０グの茶褐
色粉末を得た。

この５Ｆ−１５４０Ｂ物質を含む茶褐色粉末をシクロヘ
キサンで抽出すると、シクロヘキサン不溶部に粗５Ｆ１
５４０−Ｂ物質を含む褐色粉末９．３１を得た。

この粉末９．３５’を少量のアセトンに溶かしベンゼン
にて充填したシリカゲルカラム（８００ＴＬｌ）の上に
のせ、ベンゼン・アセトン（２０：１）を展開液として
クロマトグラフィーを行う。

１５Ｐ分画でピリクラリア・オリゼに対して活性を示す
分画Ａ３３０〜３７０を集め減圧濃縮すると純度６０％
の５Ｆ−１５４０−Ｂ物質の淡黄色粉末２２７■を得た
。

この淡黄色粉末１００■を少量のアセトンに溶解し、ベ
ンゼンにて充填したシリカゲルカラム（ｌｏｏｍｏにの
せ、再度ベンゼン・アセトン（２０：１）にて展開しク
ロマトグラフィーを行う。

１０１分画で活性を示す分画煮３６２〜３８８を集め減
圧下で濃縮すると、５Ｆ＝１５４０−Ｂ均質の淡黄白色
粉末２３■を得た。

実施例 ２ 実施例１で得た純度６０％の５Ｆ−１５４０Ｂ物質の淡
黄色粉末２２７ｍ９のうち、１００１ｎ９を少量の酢酸
エチルに溶かし、酢酸エチルで充填したセファデックス
ＬＨ−２０カラム（３００ｍＯの上にのせ、酢酸エチル
で展開しクロマトグラフィーを行う。

５グ分画で分画すると分画Ａ２７〜３０でシリカゲル薄
層クロマトグラフィー（ベンゼン・アセトン−２：１）
において５Ｆ−１５４０Ｂ物質の単一スポットを示した
。

分画な減圧濃縮すると淡黄白色粉末１７■を得た。

本発明の５Ｆ−１５４０−Ｂ物質は農業用殺菌剤として
、特に稲いもち病防除剤として有用であり、次にその実
験例を示す。

実験例 １ 稲いもち病に対する防除効果試験 直径９ｃｒｒＬの素焼鉢に栽培した水稲（品種十石）の
４葉期の苗に所定濃度に調製した薬液を、ターンテーブ
ル上圧力２ｋｇ／ｃａのスプレーガンで２鉢当り３５ｍ
１宛散布し、風乾後２５℃の温室に入れ稲いもち病菌（
Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉｏｒ ｏｒｙｚａｅ ）の胞子懸
濁液を噴霧接種した。

一夜湿室内に保った後人工気象室内に移し、５日後に葉
面に形成された病斑数を計数し、次式に従って防除価で
算出した。

その結果は次表に示す通りである。

実験例１に示した通り、本発明の５Ｆ−１５４０Ｂ物質
は広い濃度範囲にわたって稲いもち病の防除に極めて優
れた効果を有し、しかも薬害がなく、有用な農業用殺菌
剤を提供するものである。

本発明になる５Ｆ−１５４０−Ｂ物質を農業用殺菌剤と
して用いるには、５Ｆ−１５４０−Ｂ物質をそのまま、
あるいは適当な担体と混合し、水利剤、粉剤、粒剤、微
粒剤、乳剤等の形態にして使用することができ、また他
の農業用殺菌剤、殺虫剤、殺線虫剤、除草剤、植物成長
調整剤、肥料等と混用して使用することもでき、特定の
組み合せによる使用法に限定されない。

本発明の５Ｆ−１５４０−Ｂ物質を液剤として使用する
場合には散布液中の濃度が５〜５００ｐｐｍの範囲にな
るようにして用いることが望ましく、粉剤の場合には０
．１〜３％の範囲で含有することが望ましい。

また土壌あるいは田面に施用する場合には５Ｆ−１５４
０−Ｂ物質が１０アール当り３０〜５０Ｍ’の割合とな
るよう適用することが望ましい。

次に５Ｆ−１５４０−Ｂ物質を農業用殺菌剤として使用
する場合の実施例を示す。

実施例中「部」は重量部を示す。

実施例 ３ 水利剤 ５Ｆ−１５４０−Ｂ物質５部、カオリン５７部、珪藻土
３０部、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル
５部、リグニンスルホン酸ソータ３部を均一に混合し、
使用に際しては適当な濃度になるように水に懸濁し散布
液として、あるいは田面施用液として使用する。

実施例 ４ 粉剤 ５Ｆ−１５４０−Ｂ物質０．５部、メルク９９．５部を
均一に粉砕混合して粉剤とする。

本則はそのまま使用する。

実施例 ５ 粒剤 ５Ｆ−１５４０−Ｂ物質３部、リグニンスルホン酸ソー
ダ３．５部、クレー９３．５部に水２２部を加えて練合
、造粒、成型し、乾燥して粒剤とする。

本則はこのまま円面に散布して使用する。

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｆ−１５４０−Ｂ物質のメタノール０、 Ｉ
Ｎ苛性ソーダ、メタノール、０． Ｉ Ｎ塩酸メタノ
ール中での紫外部吸収曲線、第２図は５Ｆ１５４０−Ｂ
物質の臭化カリウム錠剤法での赤外部吸収曲線、さらに
第３図は５Ｆ−１５４０−Ｂ物質の重クロロホルム溶液
中でのプロトン核磁気共鳴スペクトル（１００ＭＨｚ）
である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の特性を有する新抗生物質である５Ｆ１５４０
   −Ｂ物質： クロロホルム中での比旋光度（ロ）ｐ−＋３９°；元素
   分析値炭素６６．３１％、水素８．７６％、酸素２４．
   ９３％（差による）；メタノール中の紫外部吸収極太２
   ４７ｎｍ（Ｅ’％４２０ ）： ２７７ｎｍＣｒｒＬ （Ｅ１％２５０）；赤外部吸収スペクトル（臭化ｃＩＩ
   Ｌ カリ錠剤法）：３３８０．１７２０．１６７０．１２６
   ０．１１００．９８０ｃｒＩＬ ’、重クロロホルム中
   の主要なプロトン核磁気共鳴吸収シグナル：０．８９、
   ■、９４．１．９９．２．０６．３．２６．６゜８６ｐ
   ｐｍ。 ２ ストレプトミセス・ハイグロスコピクス５Ｆ１５４
   ０又はその生産性変異株を好気的に培養し、その培養中
   に生じた５Ｆ−１５４０−Ｂ物質を分離、採取すること
   からなる新抗生物質５Ｆ１５４０−Ｂ物質の製造法。 ３ ８Ｆ−１５４０−Ｂ物質を活性成分として含有する
   農業用抗カビ剤。