JPH0418079A - 新規物質ｂｔ―３８物質及びその製造法並びにそれを有効成分とする抗黴剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、杭機活性を有する新規物質及びその製造法並
びにそれを有効成分とする杭機剤に関する。

〔発明の背景〕

リンゴ腐乱病は、糸状菌Ｖａｌｓａ　ｃｅｒａｔｏｓｐ
ｅｒｍａが感染することにより樹皮及び木質部が腐敗し
、そのた杓にリンゴ樹が枯死するものであり、近年全国
の産地で多発し、大きな問題となっている病害である。

上記リンゴ腐乱病に関して防除方法や有効薬剤の探索が
行われ、特開昭５５−５９１０２号には、２−　（２−
ヒドロキシエチルアミン）−３−ベンゾイルプロピオン
酸エステル又はその塩、特開昭５７−８１４０４号には
Ｎ−置換ビスアニリノジスルフィド誘導体、特開昭６２
−２２１６０７号には無機硫黄と１．１′−イミニオジ
（オクタメチレン）ジグアニジウムトリアセテートをそ
れぞれ有効成分とする薬剤が開示されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明の目的は、杭機活性、特にリンゴ腐乱病菌に対す
る抗菌活性を有する新規物質、その製造法、及びそれを
有効成分とする杭機剤を提供することである。

〔課題を解決するた約の手段〕

本発明は次の一般式（１）で示される新規物質ＢＴ−３
８、その製造法、及びそれを有効成分とする杭機剤を提
供するものである。

以下本発明の詳細な説明する。

本発明のＢＴ−３８物質は、ストレプトミセス属に属す
るＢＴ−３８物質生産菌を培養し、培養物よりＢＴ−３
８物質を分離・精製することにより有利に製造すること
ができる。ＢＴ−３８物質生産菌としては、ストレプト
ミセス属に属し、ＢＴ−３８物質生産能を有するもので
あれば、いずれも使用できる。具体的には、ストレプト
ミセス・エクスホリエタス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
　ｅｘｆｏｌｉａｔｕｓ）ＢＴ−３８株（以下ｒＢＴ−
３８株」という）が有利に使用できる。また、抗生物質
生産菌単離の常法によって適当なものを自然界より分離
することも可能である。また、ＢＴ−３８株を含めてＢ
Ｔ−３８物質の生産菌を放射線照射その他の変異処理に
付して、ＢＴ−３，８物質の生産能を高めたものも使用
できることはいうまでもない。

ＢＴ−３８株 ＢＴ−３８物質生産能を有するストレプトミセス属の菌
株として本発明者らの見い出しているＢＴ−３８株は、
下記の内容のものである。

Ｉ）由来および寄託番号 ＢＴ−３８株は、長野県松本市の土壌から分離された放
線菌であり、平成２年５月１日に工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託されて「微工研条寄第２８８１号Ｊ　
　（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２８８１）の番号を得ている。

２）菌学的性状 ＢＴ−３８株の菌学的性状は以下の通りである。

放線菌ＢＴ−３８株の“特徴づけ”は、「特許庁産業別
審査基準Ｊの記載方法に従って行った。

本菌株の基中菌糸は分岐しながら、伸長し、菌糸の分断
は観察されない。基中菌糸から短い空中菌糸が伸び、ふ
さ状に胞子鎖を形成する。

胞子鎖は、通常直線的又は少し波うって長く伸長し５０
個以上の胞子を着生する。胞子表面は平滑で、１．１〜
１．７ｘＯ，５〜Ｏパμｍの長楕円形または円筒形を呈
する。

胞子のう、鞭毛胞子、菌核などの特殊形態は観察されな
い。細胞壁化学型はＩ型である。

培養性状は表１に示す。集落表面の菌叢色は灰色系列を
呈し、裏面色は紅茶色から黒条色を呈し酸性で赤味を増
し、塩基性で青味を増加する。拡散性色素は暗紫色から
暗紅色で裏面色と同様なｐＨ感受性を示す。

生理的活性は表２に示す。本菌株の形態的性状と細胞壁
化学型から本菌株は、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ）属に位置する。

上述の諸性状を基に［細菌名承認リスト、１９８０Ｊ及
びそれ以後の「有効芯リスト」、国際ストレプトミセス
・プロジェクト　（ＩＳＰ）の記載より検索し、近縁の
２種を選出した（表３に示す）。

最近出版された「バージエイ氏細菌系統分類学便覧４巻
」のストレプトミセス属に関するウィリアムス等の記述
によれば、最も近縁と考えられるストレプトミセス・リ
トモシジニはストレプトミセス・エクスホリエタスの異
名とされている。本菌株と、ストレプトミセス・パーペ
オフスカスとは裏面色、可溶性色素が異なっており、そ
の色素はｐＨで変化しない。

ストレプトミセス・リトモシジニの特性について比較す
ると糖の利用性に僅少の差異が認められるが、種を分け
るほどの差異とは考えられない。従って、ウィリアムス
等の分類に従い、本菌株は、ストレプトミセス・υトモ
シジニを含んでいるストレプトミセス・エクスホリエタ
スの一菌株と位置づけ、本菌株をストレプトミセス・エ
クスホリエタス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｅｘｆｏ
ｌｉ−ｔｕｓ）ＢＴ−３８株と称する。

表２　　ＢＴ−３８株の生理的性状 生育温度範囲　　　　　　　　　　２０〜３０℃最適温
度　　　　　　２０〜３０℃ メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地　　　　　　　　　十ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地　　十トリプトン・イースト液体培地
　　　十硝酸の還元性　　　　　　　　　　　　十スタ
ーチの加水分解　　　　　　　　　十脱脂牛乳のペプト
ン化　　　　　　　　−脱脂牛乳の凝固　　　　　　　
　　　　−ゼラチンの液化　　　　　　　　　　　十炭
素源の同化性 Ｌ−アラビノース　　　　　　　　　＋Ｄ−キシロース
　　　　　　　　　　十〇−グルコース　　　　　　　
　　　＋Ｄ−フラクトース　　　　　　　　　−シュク
ロース　　　　　　　　　　　−イノシトール　　　　
　　　　　　　−Ｌ−ラムノース　　　　　　　　　　
　−ラフィノース　　　　　　　　　　　　＋Ｄ−マン
ニット　　　　　　　　　　　−表３ 培養／ＢＴ−３８物質の生産 ＢＴ−３８物質は、ストレプトミセス属に属するＢＴ−
３８物質生産菌を適当な培地で好気的に培養し、培養物
から目的物を分離・精製することによって製造すること
ができる。

培地は、ＢＴ−３８物質生産菌が利用しつる任意の栄養
素を含有するものである。具体的には、炭素源として例
えばグルコース、マルトース、スターチおよび油脂類な
どが使用でき、窒素源として大豆粉、綿実粕、乾燥酵母
、酵母エキスおよびコーンステイープリカーなどの有機
物ならびにアンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硝酸
アンモニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニウム
などの無機物が利用できる。また、必要に応じて、塩化
ナトリウム、塩化カリウム、燐酸塩、重金属塩など無機
塩類を添加することができる。醗酵中の発泡を抑制する
ために、常法に従って適当な消泡剤、例えばシリコン油
を添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
方法と同じく、好気的液体培養法が最も適している。培
養温度は２０〜３０℃が適当である。この方法でＢＴ−
３８物質の生産量は振盪培養で培養３〜４日間、通気撹
拌培養で培養７０〜９０時間で最高に達する。

このようにしてＢＴ−３８物質が蓄積した培養物が得ら
れる。培養物中では、ＢＴ−３８物質は大部分が培養液
中に存在する。

このような培養物からＢＴ−３８物質を精製するには、
合目的的な任意の方法が利用可能である。

そのひとつの方法は抽出の原理に基づくものである。具
体的には、ＢＴ−３８物質が蓄積した培養物を濾過、遠
心分離して得た培養上清をクロロホルム、酢酸エチルな
どの水不混和性の溶媒で抽出する方法がある。菌体を分
離せずに培養物をそのまま上記の抽出操作に付すことも
できる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出の範囲に
入れることができる。

このようにして得られたＢＴ−３８物質を含む溶液を減
圧濃縮すれば、ＢＴ−３８物質の粗標品が得られる。

このようにして得られるＢＴ−３８物質の粗標品を更に
精製するためには、吸着法やゲル濾過法などを必要に応
じて組合せて必要回数行なえばよい。たとえば、シリカ
ゲルなどの吸着剤、「トヨパールＨ’＃−４０Ｊ　　（
トーソー社製）などのゲル濾過剤を用いたカラムクロマ
トグラフィーなどを適宜組合せて実施することができる
。

かくして得られたＢＴ−３８物質は、下記の物理化学的
性質を有するものであり、各種スペクトルデータ解析の
結果、前記式（１）で示される化学構造を有することが
わかった。

（１）外　観　　橙色　針状結晶 （２）融　点　　２９４〜２９６℃（分解）（３）分子
式　　Ｃ、、Ｈ，２０４Ｎ　２〔４〕　　高分解能　Ｅ
Ｔマススペクトル　ｍ／ｚ２８４．０８２５　　（Ｍ＋
）実測値 ２８４、０８５３　　　　　理論値 （５）溶解性 クロロホルム、メタノール、酢酸エチル、アセトニトリ
ル、ジメチルスルホキシドに可溶水、ｎ−へキサンに不
溶 （６）紫外吸収スペクトルλｍａｘ　ｎｍ４００　（４
２０００）　、２３８　（７５０００）（メタノール中
） （７）赤外吸収スペクトル（ＫＢｒディスク法）第１図
に示す。

（ｃｍ−’）　３３１０．１７００．１６２０．１５８
０．１５２０．１１８０（８）プロトン核磁気共鳴スペ
クトル（５００メガヘルツ、重ジメチルスルホキシド中
） ２．２２（３Ｈ）、　４．５９（２Ｈ）、　６．４６（
ＩＨ）、　７．５１（ＬＨ）。

７．５６（ＩＨ）、　７．７５（ＩＨ）、　８．２５（
ＩＨ）、　９．６８（ＩＨ）。

（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル（１２５メガヘル
ツ、重クロロホルム及び重メタノール混液中）第２図に
示す。

２４．７（ｑ）、　　６３．４（ｔ）、　　１０４．３
（ｄ）１１４．３（ｄ）、　　１１６．４（ｄ）、　　
１２７．８（ｄ）１３１．１（ｄ）、　　１３３．９（
ｓ）、　　１３７．４（ｓ）１４０．０（ｓ）、　　１
４２．７（ｓ）、　　１４８．９（ｓ）１４９、９　（
ｓ）　、　　１７０．６　（ｓ）　、　　１８０．１　
（ｓ）ａＯＲｆ値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ２Ｓ
４Ｊ使用 クロロホルム−メタノール（１０：　１）　０．５３本
発明のＢＴ−３８物質は種々の植物病害菌に対する抗菌
活性を有し、特にリンゴ腐乱病菌（Ｖａｌｓａ　ｃｅｒ
ａｔｏｓｐｅｒｍａ）に対してＥＤ５０７０μｇ／ｍβ
（菌糸成長阻害）の活性を示した（試験は寒天希釈法に
より行い、試験培地としてニッスイ製ポテトテキストロ
ースアガー培地を用いた）。従って、本発明のＢＴ−３
８物質は種々の植物病害菌、特にリンゴ腐乱病菌に対す
る杭機剤として使用することができる。

杭機剤として使用する場合、ＢＴ−３８物質をそのまま
用いてもよいが、通常は補助剤を用いて農薬製造分野に
おいて一般に行われる方法により、粉剤、粒剤、水和剤
、フロアブル等に製剤して用いることが好ましい。農薬
補助剤としては固体担体、液体担体、界面活性剤、分散
剤、安定剤などが挙げられる。

固体担体としては、例えばベントナイト、タルク、クレ
ー、珪藻土、ホワイトカーボン等、又はこれらの混合物
が挙げられ、液体担体としては、例えばメチルアルコー
ル等のアルコール類、水等、又はこれらの混合物が挙げ
られる。界面活性剤としては、非イオン界面活性剤、例
えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシ
エチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタ
ンモノラウレート等が挙げられる。また分散剤、安定剤
としては、例えばポリビニルアルコール等の非イオン性
水溶性高分子化合物が挙げられる。

本発明のＢＴ−３８物質を杭機剤として用いる場合、水
和剤、フロアブル剤は水で希釈して散布し、粉剤、粒剤
等はなんら希釈することなくそのまま散布する。使用量
は、ＢＴ−３８物質として通常１アール当り１０〜１５
０ｇ、好ましくは１５〜１００ｇであり、通年散布を行
えばよい。

次に製剤例を示す。

製剤例Ｉ ＢＴ−３８物質３０重量部、ホワイトカーボン３重量部
、クレー６７重量部を均一に粉砕混合して粉剤を得る。

製剤例２ ＢＴ−３８物質４０重量部、ポリオキシエチレンアルキ
ルエーテル５重量部、クレー５５重量部を粉砕混合して
水和剤を得る。

実施例 １）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解してｐＨ６，２に調整したものである。

グルコース　　　２５．０　ｇ 大　　　豆　　　粉　　　　　　　１５．０　ｇ乾燥酵
母　　　２．０ｇ 炭酸カルシウム　　　　　　４．０　ｇ上記培地１００
ｍ１を５００ｍ１のイボ付三角フラスコへ分注し、殺菌
後、ストレプトミセスＢＴ−３８株をスラントより１白
金耳接種し、２７℃にて２日間震盪培養したものを種母
とした。

２）培　養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解してｐＨ６，２に調整したものである。

グルコース　　　２５．０　ｇ 大　　　豆　　　粉　　　　　　　１５．０　ｇ乾燥酵
母　　　２．０ｇ 炭酸カルシウム　　　　　　４．０ｇ 上記培地を３０リツトルずつ５０１Ｊットル容ジャーフ
ァーメンタ−に分注殺菌し、そこへ、種母６００　ｍｌ
を添加し、２７℃にて７０時間、４０Ｏｒｐｍ、通気量
３０ｊ！／ｍｉｎの通気撹拌培養を行った。

３）ＢＴ−３８物質の精製 上記の条件で培養後、培養液（６０’Ｊ・ン）ル）を遠
心分離して得た培養上清を、「ダイヤイオンＨＰ−２０
Ｊ（三菱化成社製）に吸着させた。

ついで、濾過及び水洗後、「ダイヤイオンＨＰ−２０」
にメタノールを加えて撹拌し濾過して得たメタノール溶
液を減圧濃縮した。その後、水及びクロロホルムを加え
て撹拌し、活性画分をクロロホルム層に抽出した。次に
、クロロホルム層を減圧濃縮した後、シリカゲル「ワコ
ーゲルＣ３００Ｊ　　（和光紬薬社製）のカラム（φ３
、４　ｃｍＸ　３４　ｃｍ）に吸着させ、クロロホルム
−メタノール（４０：１）で活性画分を溶出させた。次
に、減圧濃縮後、「トヨパールＨＷ−４０Ｊ（トーソー
社製）のカラム（φ２ｃｍＸ８０ｃｍ）に付し、クロロ
ホルム−メタノール（１：　１）で活性画分を溶出させ
た。その後、減圧濃縮し、カラムｒＳＨ−３４３−５Ｊ
　　（ＹＭＣ社製）を用い、アセトニトリル４０％の条
件で高速液体クロマトグラフィーを行い、活性画分を溶
出した。次に、減圧濃縮した後、熱クロロホルムに溶解
させ結晶化させて３０．８ｍｇのＢＴ−３８物質の純品
を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＢＴ−３８物質の赤外吸収スペクトルであり
、第２図は、ＢＴ−３８物質の炭素１３核磁気共鳴スペ
クトルである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）次式（ I ）で示される新規物質ＢＴ−３８物質
   。 （ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼
2. （２）式（ I ）で示されるＢＴ−３８物質を有効成分
   とする抗黴剤。
3. （３）ストレプトミセス属に属するＢＴ−３８物質生産
   菌を培養し、培養物よりＢＴ−３８物質を分離・精製す
   ることを特徴とするＢＴ−３８物質の製造法。