JPS58319B2 - 新抗生物質ｓｆ−１９１７物質とその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新抗生物質５Ｆ−１９１７物質及びその製造法
に関するものであり、更に詳しく述べると、ミクロモノ
スポラ属に属する５Ｆ−１９１７物質生産菌を培地に培
養し、得られた培養物から採取した新抗生物質５Ｆ−１
９１７物質及びその製造法に関するものである。

本発明者らはミクロモノスポラ属に属する成る菌株の培
養物中に糸状菌類に対して抗菌力を示す物質が生産され
ていることを見出し、その有効物質を培養物質から純粋
に単離し、その性状を調べた結果、既知の物質とは異な
る新抗生物質であることを確かめ、この有効物質を５Ｆ
−１９１７物質と命名して本発明を完成した。

すなわち、第１の本発明は、ミクロモノスポラ属に属す
る５Ｆ−１９１７物質生産菌を培養し、その培養物中に
５Ｆ−１９１７物質を生成せしめこれを採取することを
特徴とする抗生物質５Ｆ−１９１７物質の製造法を要旨
とするものである。

本発明の方法で使用されるミクロモノスポラ属の５Ｆ−
１９１７物質生産菌の１例としては、本発明者らによっ
て和歌山県那智勝浦の土壌から新たに分離されたミクロ
モノスポラ・エスピー・５Ｆ−１９１７株がある。

この菌株は微生物工業技術研究所に寄託されている（微
工研 微生物受託番号第３５５９号）。

ミクロモノスポラ・エスピー・５Ｆ−１９１７株（Ｍｉ
ｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ Ｓｐ、 ５Ｆ−１９１７）
の菌学的性質は次の通りである。

■、形態 ５Ｆ−１９１７株は一般に使用されている各種の寒天培
地上で気菌糸を着生しない。

スターチ寒天、イースト麦芽寒天等の寒天表面を顕微鏡
で観察すると、長く伸長した基中菌糸の各所に胞子が１
個づつ着生しているのが見られる。

電子顕微鏡で観察すると胞子はほぼ球型で直径は０．６
〜０．７ミクロンであり、胞子表面は平滑である。

■、各種培地上の生育状態 各種培地上における５Ｆ−１９１７株の生育状態を第１
表に要約して示す。

第１表における色調コードはカラー・ハーモニー・マニ
ュアル（コンテイナー・コーポレイション・オブ・アメ
リカ社製）による色の分類にしたがったものである。

■、生理的性質 （１）至適性前温度 ：２６〜３８℃ （２）至適性前ｐＨ：６．８〜８．４ （３）ゼラチンの液化：陽性（室温、２５日）（４）澱
粉の加水分解：陽性 （５）脱脂乳に対する作用：３７℃ではペプトン化も凝
固も陽性だが２８℃ではいずれも陰性（６）メラニン様
色素の生成：陰性 ■、炭素源の利用性（培地：酵母エキス０．５％、炭酸
カルシウム０．１％、寒天１．５％）Ｄ−グルコース、
Ｄ−フラクトース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース
、シュクロース及びメリビオースを利用するが、Ｄ−マ
ンニトール、■−イノシトール、ラムノース、ラフィノ
ース及びセルロースを利用しない。

５Ｆ−１９１７株は寒天培地において気菌糸を形成せず
、基中菌糸に胞子を単一着生する中温菌であり、ホール
セル（Ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ）の分析によりメン・ディ
アミノピメリン酸（Ｍｅｓｏ−ＤＡＰ）を有することか
らミクロモノスポラ属に属する菌株である。

以上より、５Ｆ−１９１７株をミクロモノスポラ・エス
ピー・ＳＦ−１９１７（Ｍｉｃｒｏ−ｍｏｎｏｓｐｏｒ
ａ Ｓｐ、 ５Ｆ−１９１７）と称することにした。

５Ｆ−１９１７株は他のミクロモノスポラ属の菌株の場
合にみられるように、その性状が変化しやすく、例えば
、紫外線、エックス線、高周波、放射線、薬品等を用い
る人工的変異手段で変異しうるものであり、このような
変異株であっても５Ｆ−１９１７物質の生産能を有する
ミクロモノスポラ属の菌はすべて本発明の方法に使用す
ることが出来る。

本発明の方法では前記菌株を通常の微生物が利用しうる
栄養物を含有する培地で培養する。

栄養源としては、従来、放線菌の培養に利用されている
公知のものが使用できる。

例えば、炭素源としてグルコース、シュクロース、澱粉
、グリセリン、水あめ、糖みつ、大豆油等を使用しうる
。

また窒素源として大豆粉、小麦胚芽、肉エキス、ペプト
ン、乾燥酵母、コーンステイープリカー、硫酸アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム等を使用しうる。

その他、必要に応じて炭酸カルシウム、食塩、塩化カリ
、燐酸塩等の無機塩類を添加するほか菌の発育を助け、
５Ｆ−１９１７物質の生産を促進するごとき有機及び無
機物を適当に添加することが出来る。

培養法としては、一般抗生物質生産の方法と同じく、液
体培養法、特に深部培養法が最も適している。

培養は好気的条件下で行われ、培養に適当な温度は２５
〜３５℃であるが、多くの場合２８℃付近で培養する。

５Ｆ−１９１７物質の生産は振盪培養、タンク培養共に
２〜８日で最高に達する。

以上述べた培養条件は使用される生産菌株の特性に応じ
てそれぞれの最適条件を選択して適用することができる
。

５Ｆ−１９１７物質は後記するような理化学性状を有す
るので、５Ｆ−１９１７物質の採取に当っては、その性
状を利用して抽出、精製することができる。

即ち、培養液中に蓄積された５Ｆ−１９１７物質は水と
混らない有機溶剤、例えばｎ−ブタノールで抽出すれば
５Ｆ−１９１７物質は有機溶剤層に抽出される。

又、活性炭及びアンバーライトＸＡＤ−２（ローム・ア
ンド・バース社）、ダイヤイオンＨＰ−１０，ＨＰ−２
０，（三菱化成）等の非イオン性の交叉結合したポリス
チレン重合体の吸着樹脂に吸着され、水とアセトン、ア
ルコール類などの有機溶剤との混液で容易に溶出するこ
とができる。

５Ｆ−１９１７物質はその水溶液から陽イオン交換樹脂
、陰イオン交換樹脂などのイオン交換樹脂には実質的に
吸着されにくいので、夾雑物の除去のためにこれらイオ
ン交換樹脂を組合せ処理を適宜性なうことができる。

５Ｆ−１９１７物質をさらに精製するにはシリカゲル、
アルミナ等の吸着剤やセファデックスＧ−１０などを用
いるクロマトグラフィー法が有効で、５Ｆ−１９１７物
質はメタノール・水から針状結晶として純粋に単離する
ことができる。

５Ｆ−１９１７物質の理化学性質は以下の通りである。

１、性 状 ：無色針状結晶の中性物質 ２、融 点 ：２１３〜２１４℃で湿潤しながら褐変す
る。

４、紫外部吸収スペクトル：水溶液中の紫外部吸収スペ
クトルを第１図に示す。

ｎｍ及び２６１ ｎｍに肩を有する。

０．１Ｎ塩酸２３８ｎｍ及び２５２ｎｍに肩を有する。

０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液中では、２２８大を示し
、２６７ｎｍに肩を有する。

５、光外部吸収スペクトル：臭化カリ錠剤法による光外
部吸収スペクトルを第２図に示す。

６、核磁気共鳴スペクトル：重水中の１００ＭＨｚ核磁
気共鳴スペクトルを第３図に示す。

７、元素分析値：炭素４５．８５、水素６．４８、窒素
１３．０３、酸素３０．３３％ ８、分子量：５３０（蒸気圧法） ９、溶解度：ピリジン、酢酸に易溶、水、メタノール、
エタノール、に可溶、ｎ−ブタノール、イソプロパツー
ルに難溶、酢酸エチル、クロロホルム、エチルエーテル
に不溶。

１０、呈色反応：塩化鉄、硫酸、グレイグーレアバック
（Ｇｒｅｉｇ−Ｌｅａｂａｃｋ）反応、過マンガン酸カ
リ反応は陽性。

ニンヒドリン、硝酸銀反応は陰性。

１１．安定性： ｐＨ５〜８の間で安定。

１２、シリカゲル薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ
値 ５Ｆ−１９１７物質の検定に当っては、次の方法が用い
られる。

検定培地としてポテト・グルコース寒天を用いる。

検定菌としてはペリクラリア・ササキを用いる。

５Ｆ−１９１７物質はこれを用いた検定に於て、２００
０ｍｃｇ／ｍｌ〜２５０ｍｃｇ／ｍｌに於て菌糸の伸長
を他の部分より遅らせ菌核が出来ない褐色のゾーンを示
し、それぞれ６１．３ｍｍ〜２２．７ｍｍのゾーンを与
える（ペーパーディスク平板法）。

５Ｆ−１９１７物質の各種糸状菌に対する抗菌スペクト
ルは次表に示す通りである。

上表から明らかなように５Ｆ−１９１７物質は糸状菌に
のみ特異的に抗菌力を有する特性を有している。

５Ｆ−１９１７物質を５０ｍｇ／ｋｇマウスに静脈注射
すると金側生存した。

以上のような理化学的、生物学的性状を有するものは他
の既知抗生物質に該当するものがないので新抗生物質と
認められる。

それ故、第２の本発明は前記の通り新規で有用な抗生物
質として５Ｆ−１９１７物質を要旨とするものである。

次に実施例を示すが、本発明において、ここに例示しな
い多くの変形成いは修飾手段を用いることは勿論である
。

実施例 １ ミクロモノスポラ・エスピー・５Ｆ−１９１７株（微工
研菌寄第３５５９号）の胞子を含む菌体をグルコース２
．０％、ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．３％、
大豆粉０．２％、牛肉エキス０．２％、炭酸カルシウム
０．１％（ｐＨ７，０）の液体培地６０ｍｌ（１００ｍ
ｌ容三角フラスコ３本）に接種し、２８℃で４８時間振
盪培養し、その培養物５０ｍ１を上記培地２１（５００
ｍｌ容三角フラスコ、２０本）に接種し、同じく、２８
℃、４８時間培養したものを種母とする。

水あめ４．０％、大豆油０．３係、大豆粉２．０％、フ
ァーマメディア１．０％、サングレイン（ウィスキー蒸
留かす）０．５％、炭酸カルシウム０．２％、硫酸第１
鉄０．００１％、塩化コバルト０．０００１％、塩化ニ
ッケル０．０００１％（ｐＨ７，５）の組成からなる液
体培地３５１（５０１ジャーファーメンタ−）に前記の
種母を約５．５％接種し２８℃で５日間通気攪拌培養し
た。

培養液（ｐＨ７，６）を濾過助剤（ハイフロス−パーセ
ル）を加えて濾過し、得られた培養濾液１４１をダイヤ
イオンＨＰ−１０（三菱化成）のカラム（樹脂量１．５
１）を通過せしめると、５Ｆ−１９１７物質は樹脂に吸
着される。

７．５１の水で洗浄後、６０％アセトン水５１で溶出し
、活性溶出区分を減圧濃縮すると２１の水溶液が得られ
、回収率は８０％であった。

５Ｆ−１９１７物質を含む水溶液２１をｎ−ブタノール
（４１）で抽出すると７０％の５Ｆ−１９１７物質が抽
出されｎ−ブタノール肩を２１の水で水洗後ｎ−ブクノ
ール層を濃縮乾固し３．５ｇの褐色粉末を得た。

５Ｆ−１９１７物質の粗粉末２．０ｇをシリカゲルにま
ぶし、シリカゲル（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ・Ｃｈｅ
ｍｉｃａｌ−Ｗｏｒｋｓ社製ＵＳＡ）のカラム（２１、
クロロホルムにて充填）の上にのせ、クロロホルム・メ
タノール（２０：１）及び（１０：１）各２１で展開後
、クロロホルム・メタノール（５：１）２１で展開する
と、５Ｆ−１９１７物質の活性区分（４５０ｍｌ）が得
られ、減圧下で濃縮乾固すると淡黄色粉末２２１ｍｇ（
純度９０％）を得た。

これを少量の水・メタノールに溶かし、室温で一昼夜放
置すると５Ｆ−１９１７物質の針状結晶８３ｍｇを得た
。

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｆ−１９１７物質の紫外部吸収スペクトル図
であり、第２図は５Ｆ−１９１７物質の赤外部吸収スペ
クトル図（ＫＢｒ錠剤法）であり、第３図は重水中での
５Ｆ−１９１７物質の１００ＭＨｚで測定した核磁気共
鳴スペクトル図である。 （６） （７） （８）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ミクロモノスポラ属に属する５Ｆ−１９１７物質生
   産菌を培養し、その培養物から５Ｆ−１９１７物質を採
   取することからなる、抗生物質５Ｆ−１９１７物質の製
   造法。 ２ 無色針状結晶の抗生物質であり、比旋光度が〔α）
   ２０Ｄ＋１１７°（ｃｏ、５、メタノール）、平均元素
   組成が重量比で炭素４５．８５、水素６．４８、窒素１
   ３０３、酸素３０．３３であり、添付図面の第１図に示
   す紫外部吸収スペクトルを有し、第２図に示す光外部吸
   収スペクトル（臭化カリ錠剤法）を有し、第３図に示す
   プロトン核磁気共鳴吸収スペクトル（重水中）を有し、
   ピリジン、酢酸に易溶、水、メタノール、エタノールに
   可溶、ｎ−ブタノール、イソプロパツールに難溶、酢酸
   エチル、クロロホルム、エチルエーテルに不溶であり、
   塩化鉄、過マンガン酸カリ、硫酸、グレイグーレアバッ
   ク反応が陽性で、ニンヒドリン、硝酸銀反応が陰性であ
   ることを特徴とする新抗生物質、５Ｆ−１９１７物質。