JPH0363288A - 新規抗生物質ｍｋ３９９０およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は抗菌活性を有する新規な抗生物質およびその製
造法に関するものである。

従来の技術および発明が解決しようとする問題点 従来、数多くの抗生物質が発見され、医薬品、動物用薬
品、農薬などの分野で実用化されている。しかしながら
、まだ有効な物質が見いだされないため、解決されてい
ない医療あるいは産業分野が多く残されている。例えば
、抗菌剤の分野においても、新しい作用をもつ新規の抗
菌抗生物質を提供することは常に要望されている。

本発明者らは以上のような点に着目し、新規な抗菌抗生
物質を提供すると共に、その製造法を確立することによ
って、これを解決しようとするものである。

問題を解決するための手段 本発明者らは、上述の期待に応えるべく抗菌活性を有す
る物質の探索を続けていたところ、バシデイオポルス属
に属するある菌株の培養液中に、抗菌活性を有する物質
が生産されていることを見いだし、有効物質■３９９０
を単離し、その理化学的性状および生物学的性状を確定
することにより、本発明を完成した。

従って、本発明は、後述の理化学的性状を有する新規抗
生物質ＭＫ３９９０、およびバシディボルス属に属する
抗生物質■３９９０生産菌を培養し、その培養物から抗
生物質ＭＫ３９９０を採取することを特徴とする抗生物
質Ｍに３９９０の製造法を提供するものである。

以下、本発明を説明する。

本発明の抗生物質■３９９０生産閑の各極性状は下記の
通りである。

（１）　　新規抗生物質■３９９０生産閑の微生物学的
性状 本発明の方法に使用される新規抗生物質ＭＫ３９９０　
（以下、ｒ　ＭＫ３９９０物質」という。）生産菌は、
バシデイオポルス属（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）に属
する微°生物であって、その培養物中に採取するに充分
な量のＭＫ３９９０物質を生産する能力を有するもので
あればいかなるものであってもよい。このような菌株の
例としては、本発明者らにより土壌より新たに分離され
たＭ−１５４０株（以下、「本菌株」という。）がある
。

本菌株の微生物学的性状は以下に示す通りである。

（イ）各種培地上における培養上の特徴及び形態的性質
。

１．　ジャガイモ・デキストロース欠天培地（ＰＤＡ）
上、３０℃、５日間ＪΔ養。

コロニーは、はじめ白色で、のちに黄 灰色を呈し、直径４〜５　ａｍに拡がる。栄養菌糸は分
枝して直径３０μｍに至り、隔壁が挿入して分節菌体（
ｈｙｐｔ＋ａ　ｌ　ｓｅｇｍｅｎｔ）を形成する。

分生子柄は分節菌体から項生するが、 分枝しない。

その１１】は９．０〜１３．６μｍで、先端が槍形状に
膨潤して、その先端に１個の出芽型分生子（第一次分生
子）を形成する。

膨潤部は長さ４１〜６０μｍで、１１］は１６．８〜３
１．０μｍである。第一次分生子の形は球形〜亜球形又
は洋ナシ型で、色は無色である。そして長さは３７〜 ５１．８μｍ、また直径は３２．７〜４２．７μｍで、
時々分生子基部に微小な突出部を有する。分生子は能動
的に射出する。

射出分生子は発芽して菌糸を生じるか、又は第二次分生
子もしくは粘着性分生子（＾ｄｈｅｓｉｖｅ　ｃｏｎｉ
ｄｉａ）を生じる。

第二次分生子は第一次分生子とは）゛同形同大であるが
、粘着性分生子は第一次分生子から生じた毛細管状の長
い柄の先端に形成され、長さ３４．０〜６３．０μｍ１
巾９．３〜１７．４μｍの無色の長楕円形である。更に
粘着性分生子は脱落性があり、先端に粘着性物質を沈着
する。また時々粘着性分生子はさらに毛細管状の柄を生
じ、同一の分生子形成をくり返す。

接合胞子は近接した分節菌体の接合に よって形成される。これは直径３０〜 ４２μｍの球形〜亜球形で、内部に加温状物質を含有す
る。接合胞子壁は２．７〜４．５μｍで、平滑である。

また、本菌株はホモタリック種である。

２、　サブロー寒天培地」二、３０℃、５日間の培養。

本培地上での培養上、及び形態上の特 徴は上記ＰＤＡ上での性質と類似する。

（ｎ）生理学的性質 １、　生育温度（ＰＤＡ培地、５日間の培養）生育の範
囲：１５〜４０℃、１０℃ 及び４５℃では生育せ ず。

最適生育温度：２５〜３７℃ ２、　生育ｐｔｌ（ＬＣＡ培地） 生育ｐＨ：　　３〜９ 最適ｐＨ：、５〜７ （ハ）分類学的考察 １、　属レベルの同定。

本菌株の特徴は、ｌ）基底菌糸が隔壁の挿入により分節
菌体（ｈｙｐｈａｌ　ｓｅｇｍｅｎｔ）を形成する、２
）分生子柄の先端は長い槍形状に膨潤する、３）分生子
は先端の膨潤部より出芽によって常に１個形成される、
４）分生子は能動的に射出される、５）有性生殖は隣接
した分節菌体の接合（配佃子嚢接合）による、６）ホモ
タリック種である、という点に存すると考えられる。

これらの諸性質はＣ６口ｒｅｃｈｓｌｅｒ、　Ｊｏｕｒ
。

Ｗａｓｈ、＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、、　４５　、４９−５６
　（１９５５）及びＪ、Ｃｏｒｅｍａｎｓ−Ｐｅｌｓｅ
ｎｅｅｒ、　Ａｃｔａ　Ｚｏｏ−１ｏｇｉｃａ　ｅｔ　
Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ、　　６０．１−１４３（１９
７４）に記載されているバシデイオポルス属（Ｂａ５ｉ
ｄｉｏｂｏｌｕｓ）の特徴によく合致した。

よって本菌体は、接合菌亜門−接合菌 綱−ハエカビ目−バシデイオポルス科−バシディオボル
ス属（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）に帰属するものと考
えられた。

２、　種レベルの同定。

Ｃ０口ｒｅｃｈｓｌｅｒ、　　Ｊｏｕｒ、Ｗａｓｈ、＾
ｃａｄ、５ｃｉ１４５　、４９−５６　（１９５５）　
、　　Ｒ，に、Ｂｅｎｊａｍｉｎ。

Ａ１１ｓｏ、　　５．　　（２）　、　２２３−２３３
　（１９６２）。

ロ、Ｌ、Ｇｒｅａｒ　　＆　　Ｌ、Ｆｒｉｅｄｍａｎ、
　　５ａｂｏｕｒａｕｄｉａ。

４、２３１−２４１　（１９６６）　＋’　　Ｍ、Ｃ，
５ｒｉｎｉｖ−ａｓａｎ　＆　Ｍ、Ｔ、Ｔｈｉｒｕｍａ
ｌａｃｈａｒ、　Ｍｙｃｏｐａｔｈ。

Ｍｙｃｏｌｏｇ＋ａ　　Ａｐｐｌｉｃａｔａ　　、　　
３３　　、　５６　−　６４（１９６７）およびＪ、　
Ｃｏｒｅｍａｎｓ−Ｐｅｌｓｎｅｅｒ。

へｃｔａ　　Ｚｏｏｌｏｇｉｃａ　　ｅｔ　　Ｐａｔｈ
ｏｌｏｇｉｃａ、　　　６０　　。

１−１４３　（１９７４）のバシデイオポルス属（Ｂａ
ｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）に関する分類学的文献によれば
、木屑には５種（［１，ｒａｎａｒｕｍ。

る。

これらの５種はｌ）気中菌糸の発達程度、２）ストレプ
トマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）臭の有無、３
）３７℃の生育の可否、４）ミクロコニディア（ｍｉｃ
ｒｏｃｏｎｉｄｉａ）の有無、５）接合胞子細胞壁の構
造（平滑か波状構造か）によって各々識別されている。

本菌株は、１）各種培地上で気中菌糸は旺盛、２）スト
レプトマイセス−臭を欠く、３）３７℃での生育良好、
４）ミクロコニディアを形成しない、５）接合胞子の細
胞壁は平滑の特徴を有することから、Ｃ９０ｒｅｃｈｓ
ｌｅｒ、　　Ｊｏｕｒ、Ｗａｓｈ、へｃａｄ、５ｃｉ１
　４５゜４９−５６　（１９５５）に記載されているバ
シデイオポルス・メリストスボルス（Ｄａｓｉｄｉｏｂ
ｏｌｕｓ　　ｍｅｒｉｓｔｏｓｐｏｒｕｓ　）に一致し
た。

従って、本菌株はバシデイオポルス・ メリストスボルス（口ａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ　　ｍｅ
−ｒｉｓｔｏｓｐｏｒｕｓ　）と同定された。

本菌株は、工業技術院微生物主菜技術 研究所に微工研閑寄第１０８３１号 （Ｆｅｒｍ　Ｐ−１０８３１）として受託されている。

本菌株は他の微生物の場合にみられるようにその性状が
変化しやすい。例えば本菌株の、またはこの株に由来す
る突然変異株（自然発生または誘発性）、形質接合体ま
たは遺伝子組換え体であっても、ＭＫ３９９０物質の生
産能を有するバシデイオポルス属（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏ
ｌｕｓ）の閑はすべて本発明の方法に使用することがで
きる。

本発明においては、前記の菌を通常の微生物が利用しう
る栄養物を含有する培地で培養する。

栄養源としてはグルコース、水アメ、デキストリン、シ
ュクロース、デンプン、糖蜜、勅・植物油等を使用でき
る。また窒素源として大豆粉、小麦胚芽、コーンステイ
ープ・リカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキ
ス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用でき
る。その他必要に応じて、ナトリウム、カリウム、カル
シウム、マグネシウム、コバルト、塩素、リン酸、硫酸
及びその他のイオンを生成することのできる無機塩類を
添加することは有効である。

また菌の生育を助けＭＫ３９９０物質の生産を促進する
ような有機及び無機物を適当に添加することができる。

培養法としては、好気的条件下での培養法、特に深部培
養法が最も適している。培養に適当な温度は１０〜３０
℃であるが、多くの場合、２０〜２７℃付近で培養する
。■３９９０物質の生産は培地や培養条件により異なる
が、振とう培養、タンク培養とも通常３〜■０日の間で
その蓄積が最高に達する。培養物中のＭ　Ｋ　３９９０
物質の蓄積量が最高になった時に培養を停止し、培養液
から目的物質を単離精製する。

ＭＫ３９９０物質を培養物から採取するにあたっては、
活性炭、アルミナ、シリカゲル、紅どの吸着剤、ダイヤ
イオンＨＰ　−２０などの合成吸着剤およびイオン交換
樹脂、イオン交換ゲル濾過剤などのカラムクロマトグラ
フィーや酢酸エチル、ブタノールなどによる溶剤抽出法
が使用される。

以上のような方法により、あるいはこれらを適宜組み合
わせることにより、高純度のＭＫ３９９０物質が得られ
る。得られる■３９９０物質の理化学的性状は次の通り
である。

１）外　観：無色板状結晶〔酢酸エチル／クロロホルム
溶液より析出したどきの 外観〕 ２）融　点：１７３−１７５℃ ３）紫外部吸収スペクトル： Ｍに３９９０物質のメタノール溶液（メタノール、メタ
ノール−０，０１Ｎ塩酸溶液およびメタノール−０，０
ＩＮ水酸化ナトリウム溶液）中での紫外部吸収スペクト
ルのλｍａｘは、下記に示す通りである。

λ二：：’ｎｍ　（Ｂｉｂ、）　　　　　２８０（７１
）、２８９（５４）λ：Ｈ：Ｈ４ＣＬｎｍ　（ｏｉｌ、
　）　　２８０（７１）、２８９（５４）λ二：：　）
１　′−）Ｉ　ａ　ＯＩＩ　ｎ　ｍ　（Ｂ　ｊ″ｙｃ、
　）　　２４５（ｓｈ、８５）。

２８０　（７３）　、　２８９　（６３）４）赤外部吸
収スペクトル： 臭化カリウム鈴生で測定したＭ　Ｋ　３９９　（ｌ物質
の赤外部吸収スペクトルの主な吸収は下記に示す通りで
ある。

ｖ早’、　ｃｍ−’　　３３２０．２９５０．　１？３
５．　１６５０゜１５４５、　１５２０．　１４５５．
　１３８０゜１２４０、７５０ ５）’＋１核磁気共鳴スペクトル： ＭＫ３９９０均質の重アセトン中での１１１核磁気共鳴
スペクトルにおいて、メチル基を示すピークの化学シフ
トは次に示す通りである。

δ（ｐｐｍ）　：　０．８７（ｄ）、　０．９７（ｄ）
、　０．９９（ｄ）。

１、０９　（ｄ）、　１．４７　（ｄ）　、　２．０４
　（ｓ）６）＋３Ｃ核磁気共鳴スペクトル： ＭＫ３９９０物質の重アセトン中での＋３Ｃ核磁気共鳴
スペクトルにおいて、化学シフトは次に示す通りである
。

δ（ｐｐｍ）　：　１９．１．１９．２．１９Ｊ、　２
１．５．２２．８゜２３．６．２５．４．２６，４．３
３．３．３６，７゜３９．５．４０．７．５０．４．５
１．４．５３．９゜５３．９．５４．５．５７．２．６
２．５．６４．１゜１０７．９．１１２．９．１１６．
４．１１８．２゜１１９．９．１２２．３．１２４．８
．１２７，３゜１２７．８．１２８．５．１２８，７，
１３０，５゜１３０．７．１３６．７．１３７，１．１
５７，４．。

１６８．６．１７１．７．１７１，８．１７２．３゜１
？２Ｊ、　１７２．８．１７２．９．１７３．２７）分
子式： ％式％ ）： ） ： ： ） ）： メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、ジメ
チルスルホキシドに可溶、水、クロロホルム、エチルエ
ーテルに難溶。

１２）呈色反応： １０％硫酸、モリブデン酸、過マンガン酸カリウム、グ
レイン・リーバツク試薬に陽性で、ニンヒドリン試薬に
陰性である。

１３）薄膜クロマトグラフィーのＲｆ値：　　０．３３
〔薄膜シリカゲル・プレート（メルク社製。

Ａｒｔ、　５７１５）上で、クロロホルム：メタノール
（１０：　１）で展開したときのＲｆ値〕１４）酸性、
中性、塩基性の区別：　中性〔実施例〕 以下に本発明の有効成分である■３９９０物質の製造方
法の１例を示すが、これらは単なる一例であって本発明
を限定するものではない。ここに例示しなかった多くの
変法あるいは修飾手段を用い得ることはもちろんのこと
である。

実施例１ （培養） 水飴４．０％、大豆油０．３％、大豆粉２，０％、綿実
粕１．０％、サングレイン０．５％、炭酸カルシウム０
．３％、硫酸鉄７水塩０．００１％、塩化コバルト６水
塩０．０００１％および塩化ニッケル６水塩０．０００
１％を含有する培地（ｐＨ６、０）を４０ｒｎｌずつ２
００ｔｌ！三角フラスコＩＯ本に分注し、１２１ｔ：に
おいて２０分間高圧滅菌する。

これにバシデイオポルス・メリストスポルス（［１ａｓ
ｉｄｉｏｂｏｌｕｓ　　ｍｅｒｉｓｔｏｓｐｏｒｕｓ　
）　Ｍ−１５４０株を１白金耳ずつ植菌し、２６℃にお
いて４日間、２１　Ｏｒ、ｐ、ｍにて振とう培養する。

別にコーンスターチ２．０％、クルコース０．５％、大
豆油５％、大豆粉６．２５％、綿実粕２．０％、スタミ
ノール０．２％および炭酸カルシウム１．０％を含有す
る培地（ｐＨ６，０）を８０ｒｄずつ５００−三角フラ
スコ５０本に分注し、１２１℃において２０分間高圧滅
菌する。各フラスコに上記の方法で得られた前培養物を
４ｒｎ！！ずつ接種し２６℃において６日間、２１　Ｏ
ｒ、ｐ、ｍにて振とうｊ？ζ４％する。

得られた培養物を遠心分離して、上清　３．５１と培養
菌体を得た。

実施例２ 実施例１で得られた菌体抽出液３．５１を減圧濃縮する
ことにより、アセトンを除去し容積を１ｊ２とした。こ
の濃縮液に酢酸二チル１１を加えよく攪はんして有効成
分を抽出し、酢酸エチル層を減圧濃縮し、黄色粉末１．
７１　ｇを（４）た。

この粉末をクロロホルム−メタノール（３０：１）の混
液に溶解し、あらかじめ同溶媒で充填したシリカゲルＣ
−２００（和光純薬工業社製）１００ｒｙｄ！のカラム
にかけ、同溶液で溶離を行い、活性画分を得た。得られ
た活性画分を減圧濃縮し、白色の粉末５８０　ｍｇを得
た。この粉末をクロロホルム−酢酸エチルより結晶化し
て、ＭＫ３９９０物質の無色板状結晶３２０■を得た。

本物質は前記の理化学的性状を有していた。

尚、本実施例で得られたＭＫ３９９０物質の紫外部吸収
スペクトル、赤外部吸収スペクトル、１１１核磁気共鳴
スペクトルおよび＋３［核磁気共鳴スペクトルを、それ
ぞれ第１図、第２図、第３図および第４図に示した。

これらの理化学的性状に加え、アミノ酸分析およびマス
スペクトルの解析から、ＭＫ３９９０物質の構造は下記
のごとく推定された。

発明の効果 本発明によるＭＫ３９９０物質の各種細菌に対する最小
発育阻止濃度を第１表に、また各柚嫌気性閑に対する最
小発育阻止濃度を第２表に示す。

この結果から明らかなように、ＭＫ３９９０物質は、グ
ラム陽性細菌および嫌気性菌に対して生育阻害活性を有
しており、抗菌剤としての右用性が期待される。

Ｍに３９９０物質をマウス腹腔内に投与した場合の急性
毒性（ＬＤＳＯ）は、１００ｍｇ／ｋｇ以上であった。

第１表　ＭＫ３９９０物質の抗菌活性 ５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｕｒｅｕｓ　　２
０９Ｐ＞　　１００

【図面の簡単な説明】

第１図は■３９９０物質のメタノール溶液中で測定した
紫外部吸収スペクトルを示す図面である。 第２図は■３９９０物質のＫＢｒ錠で測定した赤外部吸
収スペクトルを示す図面である。 第３図は■３９９０物質の重アセトン中で測定した１１
１核磁気共鳴スペクトルを示す図面である。 第４図はＭＫ３９９０物質の重アセトン中で測定した　
＋３ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す図面である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の理化学的性質を有する抗生物質ＭＫ３９９０１
   ）外観：無色板状結晶 ２）融点：１７３−１７５℃ ３）紫外部吸収スペクトル： 抗生物質ＭＫ３９９０のメタノール溶液中での紫外部吸
   収スペクトルのλｍａｘは、下記に示す通りである。 ▲数式、化学式、表等があります▼２８０（７１）、２
   ８９（５４） ▲数式、化学式、表等があります▼２８０（７１）、２
   ８９（５４） ▲数式、化学式、表等があります▼２４５（ｓｈ、８５
   ）、 ２８０（７３）、２８９（６３） ４）赤外部吸収スペクトル： 臭化カリウム錠中で測定した抗生物質ＭＫ ３９９０の赤外部吸収スペクトルの主な吸収は下記に示
   す通りである。 ▲数式、化学式、表等があります▼３３２０、２９５０
   、１７３５、１６５０、１５４５、１５２０、１４５５
   、１３８０、１２４０、７５０ ５）＾１Ｈ核磁気共鳴スペクトル： 抗生物質ＭＫ３９９０の重アセトン中での＾１Ｈ核磁気
   共鳴スペクトルにおいて、メチル基を 示すピークの化学シフトは次に示す通りで ある。 δ（ｐｐｍ）：０．８７（ｄ）、０．９７（ｄ）、０．
   ９９（ｄ）、１．０９（ｄ）、１．４７（ｄ）、２．０
   ４（ｓ）６）＾１＾３Ｃ核磁気共鳴スペクトル： 抗生物質ＭＫ３９９０の重アセトン中での＾１＾３Ｃ核
   磁気共鳴スペクトルにおいて、化学シフ トは次に示す通りである。 δ（ｐｐｍ）：１９．１、１９．２、１９．３、２１．
   ５、２２．８、２３．６．２５．４、２６．４、３３．
   ３、３６．７、３９．５、４０．７、５０．４、５１．
   ４、５３．９、５３．９、５４．５、５７．２、６２．
   ５、６４．１、１０７．９、１１２．９、１１６．４、
   １１８．２、１１９．９、１２２．３、１２４．８、１
   ２７．３、１２７．８、１２８．５、１２８．７、１３
   ０．５、１３０．７、１３６．７、１３７．１、１５７
   ．４、１６８．６、１７１．７、１７１．８、１７２．
   ３、１７２．３、１７２．８、１７２．９、１７３．２
   ７）分子式： Ｃ＿４＿８Ｈ＿６＿０Ｎ＿８Ｏ＿１＿０ ８）分子量： ９０８（ＳＩ−ＭＳ、￥ｍ￥／￥Ｚ￥９０９ＭＨ＾＋）
   ９）元素分析値： Ｃ＿４＿８Ｈ＿６＿０Ｎ＿８Ｏ＿１＿０・２Ｈ＿２Ｏと
   して理論値：炭素６１．００％水素６．８３ 窒素１１．８６ 分析値：炭素６１．２４％水素６．８５ 窒素１１．８９ １０）比旋光度： 〔α〕＿Ｄ＾２＾０＝＋７０．４゜（￥Ｃ￥０．３，Ｍ
   ｅＯＨ）１１）溶解性： メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、ジメ
   チルスルホキシドに可溶、水、クロロホルム、エチルエ
   ーテルに難溶。 １２）呈色反応： １０％硫酸、モリブデン酸、過マンガン酸カリウム、グ
   レイグ・リーバック試薬に陽性で、ニンヒドリン試薬に
   陰性である。 １３）薄膜クロマトグラフィーのＲｆ値：０．３３〔薄
   膜シリカゲル・プレート（メルク社製、Ａｒｔ．５７１
   ５）上で、クロロホルム：メタノール（１０：１）で展
   開したときのＲｆ値〕 １４）酸性、中性、塩基性の区別：中性 ２、バシディオボルス属に属する抗生物質ＭＫ３９９０
   生産菌を培養し、得られた培養物から抗生物質ＭＫ３９
   ９０を採取することを特徴とする、請求項１に記載の抗
   生物質ＭＫ３９９０の製造法。