JPS5824118B2 - シンコウセイブツシツｓｆ −１５４０ ブツシツノセイゾウホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はストレプトミセス属に属ｔ’６８Ｆ−１５４０
物質生産菌を培地に培養し、得られた培■、各種培地上
の生育状態 養物から新抗生物質５Ｆ−１５４０物質を分離、採取す
ることからなる新抗生物質５Ｆ−１５４０物質の製造法
に関するものである。

本発明の方法は、ストレプトミセス属に属する５Ｆ−１
５４０物質生産菌を好気的条件下で培養し、培養物中に
生産されたカビ類に強い発育阻止作用を示す有効物質５
Ｆ−１５４０物質を培養物中から採取することを特徴と
するものである。

更に本発明者らは、この有効物質を純粋単離し、その性
状を調べた結果、既知の物質とは異なる新抗生物質であ
ることを確かめ、この有効物質を５Ｆ−１５４０物質と
命名して本発明を完成した。

このようなストレプトミセス属に属する５Ｆ−１５４０
物質生産菌の１例としては、本発明者らによってストレ
プトミセス・ハイグロスコピクス５Ｆ−１５４０と命名
される菌株があり、その菌学的性状は次の通りである。

又、この菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微生
物受託番号・微工研菌寄第２６０７号として寄託されて
いる。

■、形態 気菌糸はスターチ寒天、オートミル寒天、イースト・麦
芽寒天及びチロシン寒天等で良好に着、生し、胞子形成
も豊富である。

分枝は単純分枝で車軸分枝はみられない。

気菌糸の先端はコンパクトな閉鎖型のらせん糸か又は短
い開放型らせん糸となる。

菌核形成は認められない。

電子顕微鏡による胞子の表面構造はワーテイ（イボ状）
である。

胞子は楕円と短円筒型で、胞子の連鎖数は１０胞子以上
である。

胞子の大きさは０．８〜１．１ Ｘ １．１−１．４ミ
クロンである。

（注） 培養温度はすべて２８°Ｃである。

■、生理的性質 （１）生育温度範囲：スターチ・イースト寒天培地にお
いて１５〜４０’Ｃの温度範囲で良好な生育をする。

（２）ゼラチンの液化＝２０℃にて３０日間培養、 で
液化する。

（３）スターチの加水分解：陽性 （４）脱脂乳の凝固：陰性（２８°Ｃ９３７°Ｃ）〃
のペプトン化：陽性（２８℃、３７°Ｃ）６）メラ＝ン
色素の生成：陰性 ■、炭素源の利用法（ブリードハム・ゴツトリーブ寒天
培地） （１）利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、
Ｄ−マンニトール、■− イノシトール、Ｌ−アラビノ− ス、ラムノース （２） 利用力ｕ）；、しい：Ｄ−キシロース、ラフ
ィノース （３）利用しない：シュクロース 上記から５Ｆ−１５４０株の菌学的特徴を要約すると、
気菌糸はらせん糸を形成し、胞子表面槽・造はワーテイ
（イボ状）である。

発育色調は淡黄色〜黄褐色〜灰黄巳となる。

気菌糸は灰褐色で、次第にハイグロスコピックとなる。

５Ｆ−１５４０株のこのような性状はストレプトミセス
属のストレプトミセス・ノ督グロスコピクス（Ｓ ｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ）
の性状とよく一致している。

即ち、ストレプトミセス・ハイグロスコピクスの特徴と
されている次の３点が５Ｆ−１５４０株に認められる。

■）らせん糸を形成する。

２）灰褐色の気菌糸を着生する。

３）気菌糸がノ・イグロスコピツクとなる。ワックスマ
ンの記載（ワックスマン：ザ・アクチノミセテス、２巻
、２３０〜２３１頁、１９６１年）によるストレプトミ
セス・ハイグロスコピクスと５Ｆ−１５４０株を比較す
ると、シュクロース・硝酸塩寒天及びグルコース・アス
パラキン寒天での可溶性色素の生成等に相違が認められ
るが、その性状はほぼよく一致している。

以上より、５Ｆ−１５４０株はワックスマンの記載とは
相違する点も認められるが、上記３点の特徴を備えてい
ることから、ストレプトミセス・ハイグロスコピクスの
種に属させるのが妥当であり、本発明者らは５Ｆ−１５
４０株をストレプトミセス・ハイグロスコピクスＳＦ−
１５４０（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃ
ｏｐｉｃｕｓ Ｓ Ｆ −１５４０）と命名し、公知の
菌株と区別することにした。

５Ｆ−１５４０株は他のストレプトミセスの場合にみら
れるように、その性状が変化しゃすく、例えば紫外線、
エンクス線、高周波、放射線、薬品等を用いる人工的手
段で変異しうるものであり、このような変異株であって
も５Ｆ−１５４０物質の生産能を有するものは全て本発
明の方法に使用することが出来る。

本発明の方法では、前記菌株を通常微生物が利用しうる
栄養物を含有する培地で培養する。

栄養源としては、従来ストレプトミセス属の菌の培養に
利用されている公知のものが使用できる。

例えば炭素源としてグルコース、スターチ、グリセリン
、デキストリン、シュクロース、水あめ、糖みつ、大豆
油等を使用しうる。

また窒素源として大豆粉、コーンステイープリカー、小
麦胚芽、コツトンシードミール、硫酸アンモン、硝酸ソ
ーダ等を使用し得る。

その他必要に応じて炭酸カルシウム、塩化ナトリツム、
塩化カリ、燐酸塩等の無機塩を添加するほか、菌の発育
を助けＳ Ｆ−１５４０物質の生産を促進するごとき有
機及び無機物を適当に添加することが出来る。

培養法としては、一般抗生物質生産の方法と同じく液体
培養法、特に深部培養法が最も適している。

培養は好気的条件下で行われ、培養に適当な温度は２５
〜３５℃であるが、多くの場合、２８℃付近で培養する
。

かくして５Ｆ−１５４０物質の生産は振とう培養、タン
ク培養共に２〜５日で最高に達する。

以上述べた培養条件は、使用される生産菌糸の特性に応
じてそれぞれの最適条件を選択して適用することができ
る。

５Ｆ−１５４０物質は菌体及び培養ろ液の両方に含まれ
るので、両者から別々に抽出できる外、醗酵液をろ過す
ることなく弱酸性にすれば溶液中の５Ｆ−１５４０物質
は菌体に吸着及全沈殿するので苗木部分のみを抽出す′
ることか可能である。

実際の抽出に当っては、５Ｆ−１５４０物質は後記の理
化学的性状によって明らかな様に、脂宕性物質であり、
培養物中から脂溶性天然物の採取に用いられる公知方法
がすべて適用される。

一例を示すと、ストレプトミセス・ハイグロスコピクス
５Ｆ−１５４０株の培養ろ液及び培養菌体の含水メタノ
ール抽出液からメタノールを除去した水溶液を水と混ら
扮有機溶剤、例えば酢酸エチルで抽出すれば５Ｆ−１５
４０物質は有機溶剤層に抽出−Ｊｇ抽出液を減圧濃縮す
るとシラツブ状になる。

これにシクロヘキサンを加えると、５Ｆ−１５４０物質
の粗物質が沈殿する。

この５Ｆ−１５４０物質を含む沈殿物をカラム・クロマ
トグラフィー、例ｔばベンゼン・アセトン（２０：１）
を、展開剤としたシリカゲル、−′カラムクロマトグラ
フィー及びメタノール、酢酸エチル等の有機啓剤を展開
剤としたセファデックスＬＪ（−２０（ファルマシア製
）で精製することができる。

本発明の方法で得られた５Ｆ−１５４０物質の淡黄色粉
末の理化学的性状は次の通りである。

ｌ） 元素分析 炭素 ６５．１６係、 水素 ８．２４％。

窒素 ２．１７係 酸素 ２３．７９係。

２） 分子量 ６００ （蒸気圧法で測定） 元素分析値及び分子量より分子式は ｃｓａ Ｈ２Ｓ ＮＯＩ Ｏが妥当と考えられる。

３）融点 １３１〜１３３°Ｃ ４） 比旋光度 ５） 紫外部吸収スペクトル メタノール容液の紫外部吸収スペクトル を第１図に示す。

６） 赤外部吸収スペクトル 臭化カリ錠剤法による赤外部吸収スペク トルを第２図に示す。

７） 核磁気共鳴スペクトル 重クロロホルム中の１００ＭＨｚプロト ンＮＭＲスペクトルを第３図に示す。

８） 溶剤に対する溶解性 メタノール、エタノール、ｎ−ブタノー ル、酢酸エチル、ベンゼン、アセトン、 クロロホルム、四塩化炭素、 −１−ｆルエ−−ｒ ル
Ｋ 可啓水、シクロヘキサンに不溶９） 安定性 ０．０２規定塩酸及び０．０２規定カセイソーダ中で約
７０％の抗菌力が減少する。

酸、アルカリ性にやや不安定である。

ＩＯ） 各種りａマドグラフィーにおけるＲｆ値５Ｆ−
１５４０物質のシリカゲル薄層 （メルク社製）クロマトグラフィーでは クロロホルム・メタノール（５：１）の 展開でＲｆ値０．６８．ベンゼン・アセトン（２：１）
でＲｆ値３．５．酢酸エチルでＲｆ値０．３１の単一ス
ポットを示した。

５Ｆ−１５４０物質の検定に当っては、次の方法が用い
られる８検宇培地としてポテト・グルコンース・寒天を
用いる。

検定菌としてはピリクラリア・オリゼを用いる。

５Ｆ−１５４０物質はこれを用いた検定に於て３２ｍｃ
ｇ／ｍＡ〜２ｍｃｇ／ｍｔにおいて濃度の対数と阻止
円との関係は直線関係を示し、それぞれ５２．６〜３１
．２Ｍの阻止円を与える（ペーパーディスク平板法）。

５Ｆ−１５４０物質の各種微生物に対する抗菌スペクト
ルは次表に示す通りである。

上表から明らかなように５Ｆ−１５４０物質はダラム陰
性細菌にはほとんど抗菌力を示さないが、ダラム陽性菌
、酵母及び糸状菌に対して抗菌力を示す特性を有してい
る。

以上のような理化学的性質及び生物学的性質を有するも
のは、他の既知物質に該当するものがないので、新抗性
物質と認められる。

次に実施例を示すが、本発明においてここに例示しない
多くの変形成いは修飾手段を用いることは勿論である。

実施例 ｌ ストレフトミセス・ハイグロスコピクス５Ｆ−１５４０
株（受託番号２６０７号）の胞子をスターチ１％、大豆
粉３％（ｐＨ７）の液体培地１ｔ（坂ロフラスコ１０本
使用）に接種し、２８°Ｃで４０時間振とう培養したも
のを種母とする。

グルコース２．５％、小麦胚芽２．０％、ンリューブル
、ベジタブルプロテイン０．５％２食塩０．２５％（ｐ
Ｈ７，０）の組成から成る液体培地３５ｔに前記の種母
を接種し、２８°Ｃで７６時間通気攪拌培養した（５０
ｔジャーファーメンタ−２基使用）。

この培養物を６規定塩酸でｐＨ３〜４に調整すると、培
養液中の５Ｆ−１５４０物質は菌体区分に移行する。

そこに、沖過助剤・・イフロスーパーセルを加えて濾過
し菌体を集めメタノール９して抽出する。

菌体をｐ過して含水メタノール酢液１１Ｌを得る。

そのメタノール水溶液を減圧濃縮すると、２．５Ｌの水
溶液を得た。

これに酢酸エチル（２，５Ｌ）で３回抽出すると、５Ｆ
−１５４０物質は大部分酢酸エチル層に移った。

この酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後減
圧濃縮すると、３０、？の茶褐色粉末を得た。

この５Ｆ−１５４０物質を含む茶褐色粉末をシクロヘキ
サンで抽出すると、シクロヘキサン不溶部に粗５Ｆ−１
５４０物質を含む褐色粉末９．３ｇを得た。

この粉末９．３ｇを少量のアセトンに醇かし、ベンゼン
にて充填したシリカゲルカラム（３００ｒｒＬｔ）の上
にのせ、ベンゼン、アセトン（２０：１）を展開液とし
てりａマドグラフィーを行う。

１５Ｉ分画でピリクラリア・オリゼに対して活性を示す
分画Ａ３８５〜４７０を集め減圧濃縮すると純度８０係
の５Ｆ−１５４０物質の淡黄色粉末７２８ｍｇを得た。

この淡黄色粉末３５−Ｏｍｇを少量のアセトンに溶解し
ベンゼンにて充填したシリカゲルカラム（１００ｍｌ）
Ｋのせ、再度ベンゼン・アセトン（２ｏ：Ｉ）Ｋて展開
しクロマトグラフィーを行う。

ｌＯｇ分画で活性を示す分画Ａ４２１〜４４３を集め減
圧下で濃縮すると、５Ｆ−１５４０物質の淡黄色粉末６
５ｍ９を得た。

実施例 ２ 実施例１で得た純度８０％の５Ｆ−１５４０物質の淡黄
色粉末７２８ｒｒＬｇのうち、３５０ＴＬＩを少量の酢
酸エチルに啓かし、酢酸エチルで充填したセファテック
スＬＨ−２０カラム（３００ｍｌ）の上にのせ、酢酸エ
チルで展開しクロマトグラフィーを行う。

５ｇ分画で分画すると、分画羨１７〜２０でシリカゲル
薄層クロマトグラフィー（ベンゼン・アセトン＝２：１
）において５Ｆ−１５４０物質の単一スポットを示した
。

この分画を減圧濃縮すると淡黄色粉末１６８ｍｇを得た
。

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｆ−１５４０物質のメタノール中での紫外部
吸収曲線、第２図は５Ｆ−１５４０物質の臭化カリツム
錠剤法での光外部吸収曲線、さらに第３図は５Ｆ−１５
４０物質の重クロロホルム溶液中での核磁気共鳴スペク
トル（１００ＭＨｚ）である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトミセス属に属する５Ｆ−１５４０物質生
   産菌を培地に培養し、得られた培養物から５Ｆ−１５４
   ０物質を分離・採取することを特徴とする新抗性物質５
   Ｆ−１５４０物質の製造法。