JPS61139394A - 新規な抗生物質ｓｓ４３４０５ｄ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄ及びその製造
法に関する。

〔従来の技術〕

従来、微生物が生産する撞々の抗生物質が知られている
。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は医薬品として有用な新規抗生物質を得ることを
目的とする。

〔問題Ａを解決するための手段〕

本発明者らは天然の土壌より数多くの微生物を単離し、
その生産物について檜々研究を行なった結果、長野県諏
訪郡の土壌から分離した菌株が、新規な抗生物質ＳＳ４
３４０５Ｄを生産することを見い比し、本発明を完成し
た。

すなわち、本発明は新規な抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄ及
びその製造法を提供するものである。

本発明の抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄを生産する８４３４
０５株は次のような菌学的性質を有する。

（１）形態 各種寒天老雄で２８℃、ｌＯ〜１４日培誓し、３４３４
０５株の形態を光学顕＊＊あ、るいは電子顕４Ｉ１．幌
で破談した結果、以下の特徴を示したう 気菌糸より胞子形成菌糸が単純分枝し、その先端部は直
耐状又は波状をなしている。これは、イースト・麦芽寒
天培地、オートミール寒天培地、スターチ寒天培地等で
良く武略できるう車軸分枝は観察されない。オートミー
ル寒天培地で成熟した分生胞子を観察すると１０個以上
の胞子連鎖を認め、個々の胞子の形は楕円形〜円筒形で
、その大きさは０．５〜０、７　Ｘ　０．８〜１．３μ
ｍである。胞子の表面構造ば平滑である。各種寒天培地
で生育した本菌株について観察を行なったが、胞子のり
、鞭毛胞子、菌核などの特殊な構造物を認めなかった。

また、基中陶糸の分断も認めなかった。

■）各種培地における生育状〜 ８４３４０５株の各種培地での生育状態は次表のとお９
である。°覗祭は２８℃、１４日培養後に行なった。な
お、色の記載は、日本色研早業■発行（昭和５６年）「
色名小事典」の系統色名で行なった。また、表中括弧内
は色標番号を示す。

・し下金に （３）生珪的性質 ■　生育温度範四（イースト・麦芽寒天培地、１４日培
養） 生育至適温度　２５〜３５℃ 生育可能温度　１２〜３５℃ ■　ゼラチンの液化　　　　　陰性 ■　スターチの加水分解　　　陽性 ■　脱脂牛乳の凝固　　　　　陰性 脱脂牛乳のペゾトン化　　陽性 ■　メラニン様色素の生成　　陰性 ■　硝酸塩の還元　　　　　　陰性 ■　セルロースの分解　　　　陰性 （４）炭素源の同化性（デリドハム・ゴドリープ寒天培
地、２８℃、１４ 日培養） Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−フラクトース、イノシトール、Ｌ−ラムノース、ラ
フィノース、Ｄ−マンニットを利用し、シュクロースは
利用しない。

６）　全菌体中のシアミノピメリン酸 全菌体中のシアミノピメリンｆ１１を分析した結果、Ｌ
Ｌ−ジアミノピメリン＃！、を検出した。

以上の形態的特徴及びＬＬ−シアミノピメリンｔＩｌ′
ｔ−含むことにより、８４３４０５株は、ストレプトミ
セス属に属する一菌株である。

８４３４０５株の歯学的性質を要約すると、次のように
なる。気菌糸の先端は直線状又は波状で、その分生胞子
は１０１１５以上の胞子が連鎖し、その個々の胞子表面
は平滑である。

気菌糸の色はレッドカラーシリーズ、裏面の色はイエロ
ーからブラウンまたはオレンジであり、グリセリン・硝
酸塩寒天培地にてわずかにインディケータ一様の裏面の
色を認める。

可溶性色素は概ねかすかなブラウンからレッドであるが
、グリセリン・硝酸塩寒天培地にてｐＨによねかすかに
変化する可溶性色素を認める。メラニン様色素は生成し
ないつ以上の諸性質をもとに、シャーリングとゴツトリ
ープのＩ　ＳＰＳ報告「インターナショナル・ジャーナ
ル・オプ・システィマチック・バクテリオロゾ−（Ｉｎ
ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｓｙｓ
ｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）　Ｊ第
１８巻、６９頁、２７９頁（１９６８年）、同１９巻、
３９１ｓ（１９６９年）、同２２巻、２６５頁（１９７
ｚ年）及びｒノ之−シーズ・マニュアル・オプ・デイタ
ーミネイティブ・ノ２クテリオロシ−（Ｂｅｒｇｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）　Ｊ第８版よね検索した結
果、次の４種が８４３４０５株の近縁種として挙げられ
る。

ストレプトミセス・ピナセウス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｖｉｎａｃｅｕｓ　）
ストレプトミセス・ローザ （Ｓｔｒｅｐｔｇｍｙｃｅ＠　ｒｏｓａ　）ストレプト
ミセス・モデラタス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｍｏｄｅｒａｔａａ　
）ストレプトミセス・カリポルニカス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ＠ｓ　　ｃａｌｆ　ｆｏｒｎｉ
ｃｕｓ　）上記４ｍと８４３４０５株を比較すると、ス
トレプトミセス・ピナセウスは４肖醒埴を還元しゼラチ
ンを液化する点、また、Ｌ−アラビノース、イノシトー
ル、Ｌ−ラムノース、ラフィノースを利用せず裏面が特
徴的な紫色を釡する点で異なる。ストレプトミセス・ロ
ーザは螺旋形成が認められる点及びＤ−７ラクトース、
イノシトール、ラフィノースを利用しない点で異なる。

ストレプトミセス・モデラタスは、栄養寒天培地で白い
気菌糸がみられ、リンゴ酸・石灰寒天培地でブラウン、
栄養寒天培地でピンクの可溶性色素が認められる点、ま
た、硝酸塩を還元し、シュクロースをわずかに利用する
点、及び裏面が ８４３４０５株のような特徴的な赤みのオレンジ色を示
さない点で異なる。

ストレプトミセス・カリホルニカスは硝は塩を還元する
点、及びＬ−アラビノース、イノシトール、Ｌ−ラムノ
ース、ラフィノースを利用せず、裏面が特徴的な紫色を
呈する点で異なる。

以上のように８４３４０５株はいずれの種とも一致しな
いので、本発明者らは８４３４０５株を公知の菌株と区
別するために、ストレプトミセス　エスピー　Ｓ　４３
４０５　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓｓｐ、５４３４０
５）と命名し、工業技術院微生物工業技術研究所に微工
研ｌ１１１″＃Ｍ７９５６号（ＦＥＢＭ　Ｐ−７９５６
）として寄託した。

本発明の抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄは上記菌株を栄養源
含有培地に接種し、好気的に培養することにより製造さ
れる。抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄ生差株としては、上記
８４３４０５株はもとより、その人工変異株あるいは自
然変異株であっても抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄを生産す
る能力を有するものであればすべて本兜明に使用するこ
とができる。上記 ８４３４０５株の人工変異株は、他の放線菌の場合同様
、例えば紫外線照射、コバルト６０照射、化学変異誘起
剤添加等により容易に得ることができる。

つぎに、抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄの製造における菌株
の培養について説明する。すなわち、ストレプトミセス
属に属する抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄ、生産株の培養に
は：Ｉｌ！ｉ常の放線菌の培養法が用いられる。

栄養培地としては、資化しうる炭素源、窒素源、無機物
などを適当に含有する眠抄、合成培地、半合成培地、あ
るいは天然培地のいずれでも使用可能である。

炭素源としては、例えばグルコース、フラクトース、マ
ンニット、澱粉、ＩＩＭ蜜吟が単独または組合せて用い
られる。きらに菌の資化性によっては、炭化水素、アル
コール類、有機酸等も用い得る。窒素源としては、Ｓ機
もしくは有機窒業化合物、例えば塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素、硝酸ナトリ
ウム、グルタミン酸ナトリウムなど、または天然物、例
えば大豆粉、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、乾燥酵
母、綿実粕、デロテオースペデトン、カザミノ酸、コー
ン・スチーブ・リカーなどが単独または組合せて用いら
れる。無機物としては、例えば炭酸カルシウム、塩化す
）　ＩＪウム、硫酸鋼、塩化マンガン、塩化亜鉛等が単
独または組合せて用いられる。その他８４３４０５株の
発育を助けＳＳ４３４０５Ｄの生産を促進する物質ある
いはシリコン油又はアデカノール（商品名）等の一般的
消泡剤を適宜培地に添加することもできる。

培養法としては一般の抗生物質の生産に用いられる方法
が採用されるが、液体培養法、特に深部攪拌培養法が最
も適している。培養は好気的な条件で行なわれ、培養に
適当な温度は２５〜３５℃であるが、一般に２７℃付近
で培養するのが好ましい。抗生物ａＳＳ４３４０５Ｄは
振盪培養、深部攪拌培養の倒れの場合もその生産量は３
〜５日間の培養で最高に達する。培養液中の抗生物質Ｓ
Ｓ４３４０５Ｄの蓄積量が最高に達した時に培養を停止
し、培養液中から目的物５ｆＬを単離して精製する。培
９！液中からＳＳ４３４０５Ｄの単離は、後記実施例に
示す如く、本抗生物質の理化学的性状を考慮して種々の
方法を単独で、あるいは適宜組合せることによって行な
われる。

すなわち、抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄ＃−ｉ通常培養液
及び菌体中に存在するので培養物を遠心分離又は濾過等
によって菌体を分離し、その菌体及び培養Ｆ液から逼常
の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法、グ
ル濾過法、吸着又は分配カラムクロマト法、透析法、沈
澱法などを単独で、又は適宜組合せて抗生物質ＳＳ４３
４０５Ｄ！−分岨・精製する。

好ましい分離・精製の例としては、次の方法が畠げられ
る。発酵を終了した培養物を遠心分離し、Ｆ叡と菌体く
分ける。

菌体はアセトン・メタノール等適当な溶媒で抽出し、こ
れを減圧下に濃縮して溶媒を除き、水溶液とする。前述
の菌体を除去した掖−と菌体を処理して得られた液とを
、適当な鉱酸例えば塩酸でｐＨ２〜４とし、適当な溶媒
、例えば酢酸エチル等で抽出する。次に抽出液を減圧１
１１４後、はぼ１／２容の水を加えさらに濃アンモニア
水でｐＨ９〜１０とし転溶させる。水層を適当な鉱酸、
例えば塩酸でｐＨ２〜４とし適当な溶媒、例えば酢酸エ
チル等で抽出する。抽出液の溶媒を留去し、残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーに付す。

次に適当攻溶離液、例えばクロロホルム・メタノール混
液等で浴出したのち活性画分を集め、減圧濃ｍ後、残渣
を適当な溶媒、例えば酢酸エチル、ｎ−ヘキサン混液等
て再砧晶すると抗生物質８８４３４０５Ｄの黄色結晶が
得られるう以上の如くして得られた抗生物質ＳＳ４３４
０５Ｄは次のような理化学的性質を有する。

■　元素分析 ＣＨ 実験値％＞　　　６７．８２　　４．５２理論値（％’
ｌ　　　６７．９８　　４．４６■　分子式 ％式％ ■融点 １７０℃（分解） ■　紫外−吸収スペクトル 第１図 ｅＯＨ λ　　（ε）　２３８（５６，５００）、２６４ａｘ （２５，９００）、４１０（８，６００）■　赤外線吸
収スペクトル（ＫＢｒ法）第２図 （りＩＨ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ　）重クロロ
ホルム溶液中、７ＭＳｉ基準物質として測定した。

第３図 第３図に示す以外にも、δｌ　２．８０（ＩＨ，ｓ）の
シグナルを示す。

■　＃！解性 クロロホルム、ジメチルスルホキシド、アルカリ水に９
溶。

ｎ−ヘキサン、水に繕浴。

■　塩基性・酸性・中性の区別 酸　　性 ■　物質の色及び性状 黄色結晶 ［相］　蝋色反応 塩化第２鉄反応において陽性つ 瞑り　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカグルプレートＦ！ｍｓ　　（メルク社＃り 以下余白 ｑ枠　構造式 上記の理化学的測定値より、本発明の抗生物質ＳＳ４３
４０５ｍ）は下記構造式を有すると推定されるう 以上の理化学的性質及び推定構造式より、本発明の抗生
物質ＳＳ４３４０５Ｄは新規な化合物である。

〔作　用〕

本発明の抗生物質ＳＳ４３４０５Ｄは次のような生物学
的性質を何する。

■　抗菌作用 抗菌作用の測定法は、細菌は栄養寒天培地、真菌はサブ
ロー寒天培地におけるカップ法により抗菌阻止径を測定
した。

・　ζ　・ｊ−し−１ 〔発明の効果〕 これらの抗菌作用からみて、抗生物質５ｓ４３４０５Ｄ
は医薬品として有用である。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて説明する。

実施例 溶性デンプンＬ　Ｏ％　、綿実粕２．０％、コーン・ス
チーデφリカーｉ、ｏｓ、炭酸カルシクム０．３　％の
組成を有する液体培地をｐＨ６，２とし、５０〇−容坂
ロフラスコＫＩ　ＯＯｄ分注して滅菌する。これにスト
レゾトミセスエスビ　８４３４０５株（微工研醒寄第７
９５６Ｍ）を接種し、２７℃で２日間振盪培養して種培
養液を作成する。

グルコース１．０％、溶性デンプン６．０慢、綿実粕２
００．コーン・スチーゾ・リカー〇、ＳＳ、酵母エキス
Ｏ，ＳＳ、炭酸カルシウム０．３％、硫酸鋼０．０００
５％、塩化マノガンｏ−ｏｏｏｓｓ、硫ｅｉ１亜鉛０．
００５１Ｄｆｄ成ヲＷする液体培地をｐＨ７，０とし３
０１容のゾヤーファメンターに１８ｊ仕込み滅−する。

これに前記の株培養液１００−をｉ［Ｌ培養温度２７℃
、攪拌数４０Ｏｒｐｍ、通気量１８１／分の条件下で１
２０時間培養を行なう。

培養終了後、培養液を遠心分離し、得られたＦ液を５規
定塩酸でｐＨ２に調整し等量の酢酸エチルで２回抽出し
たう 一方菌体にはメタノール５ｊを加えて攪拌後濾過し、得
られたＦ液を４０℃で約１／１０まで減圧＃＃ｌＬ、九
。次いでこの濃縮液を５規定塩酸でｐＨ２Ｋ：調整し等
量の酢酸エチルで２１ｇＩ抽出した。

先の抽出液と合わせて４０℃で約２１まで　４゜減圧浸
種し念。次いでこの棲絹液に約１１の水を加え侵アンモ
ニア水でｐＨ１０とじ転溶させたつ水層を再び５硯定塩
酸にてｐＨ２に調整し約２！の酢酸エチルで２１！ＩＩ
！ｌ抽出した。

抽出液の溶媒を４０℃で減圧留去し粗抽出物１０Ｆを得
友。この粗抽出物をシリカゲル（メルク社１１Ｋｉｅｓ
ｅｌ　Ｇｏｌ　６０．２３０−４００メツシユ）カラム
クロマトグラフィー（５，５（１）　Ｘ　４４　ｃｐｓ
　）に付し、クロロホルム／メタノール（４９：ｌｖ／
ｖ）で溶出し、活性画分を集めｔｏかくして得られた活
性画分を′ａ稲後、昨鍍エチルーｎ−ヘキサン混液によ
り再結晶することＫより、ＳＳ４３４０５Ｄの黄色結晶
１５０ｍｇを得友。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抗生物質３８４３４０５Ｄの紫外線吸
収スペクトル、第２図は同赤外線吸収スペクトル、第３
図は同’Ｅｌ−ＮＭＲスペクトルであるう 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性質を有する抗生物質ＳＳ４３４０
   ５Ｄ。 （１）元素分析 　　　　　　　　Ｃ　　　　　Ｈ 実験値（％）　６７．８２　４．５２ 理論値（％）　６７．９８　４．４６ （２）分子式 Ｃ＿２＿３Ｈ＿１＿３Ｏ＿７ （３）融点 １７０℃（分解） （４）紫外線吸収スペクトル 第１図 λ＾Ｍ＾ｅ＾Ｏ＾Ｈ＿ｍ＿ａ＿ｘ（ε）２３８（５６，
   ５００）、２６４（２５，９００）、４１０（８，６０
   ０） （５）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 （６）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨ＿ｚ）重ク
   ロロホルム溶液中、ＴＭＳを基準物質 として測定した。 第３図 第３図に示す以外にも、δ１２．８０ （１Ｈ、ｓ）のシグナルを示す。 （７）溶解性 クロロホルム、ジメチルスルホキシド、 アルカリ水に可溶。 ｎ−ヘキサン、水に難溶。 （８）塩基性、酸性、中性の区別 酸性 （９）物質の色及び性状 黄色結晶 （１０）呈色反応 塩化第２鉄反応において陽性。 （１１）薄層クロマトグラフィー 担体：シリカゲルプレートＦ＿２＿５＿４（メルク社製
   ） ▲数式、化学式、表等があります▼ ２、構造が次の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるものである特許請求の範囲第１項記載の抗
   生物質ＳＳ４３４０５Ｄ。 ３、ストレプトミセス属に属する新規抗生物質ＳＳ４３
   ４０５Ｄ生産菌を培養し、その培養物から抗生物質ＳＳ
   ４３４０５Ｄを採取することを特徴とする抗生物質ＳＳ
   ４３４０５Ｄの製造法。 ４、ＳＳ４３４０５Ｄ物質生産菌がストレプトミセスエ
   スピーＳ４３４０５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ
   ．Ｓ４３４０５）（微工研菌寄第７９５６号）である特
   許請求の範囲第３項記載の製造法。