JPS5831197B2 - シンコウセイブツシツ ｓｆ−１９０２ ブツシツノセイゾウホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はストレプトミセス属の菌株を培養することによ
って得られる新抗生物質５Ｆ−１９０２物質の製造法に
関するものである。

本発明者らはストレプトミセス属に嘱する一菌株の培養
物中に主としてダラム陰性細菌に対して抗菌力を示す新
規な抗生物質が生産され、これを培養物中から採取しう
ることを知り、本発明を完成した。

そしてこの新規抗生物質は５Ｆ−１９０２物質と命名さ
れた。

本発明の方法で使用されるストレプトミセス属の菌株の
一例としては、本発明者らによって兵庫県明石布の土壌
から新たに分離され、ストンブトミセス・ハイグロスコ
ピクス・５Ｆ−１９０２と命名された菌株がある。

この菌株は微生物工業技術研究所にストレプトミセス・
エスピー・５Ｆ１９０２として寄託されている（微工研
菌寄第３２７７号）。

ストレプトミセス・ハイグロスコピクス・５Ｆ−１９０
２株の菌学的性質は次の通りである。

■、形態 気菌糸はスターチ寒天、オートミール寒天等で豊富に着
生し、胞子形成も良好である。

分枝は単純分枝で車軸分枝はみられない。

気菌糸の先端はらせん状となる。

培養後期（１４〜２１日培養）に気菌糸上に湿った黒色
の部分（いわゆる）・イグロスコピツクエリア）が出現
する。

菌核形態は認められない。

電子顕微鏡で観察すると胞子の表面構造はしわ状（ｗａ
ｒｔｙ ）である。

胞子の区切りが不明なため、個々の胞子の形状はわから
ない。

胞子の巾は０．５〜０．７ミクロンである。

連鎖数も数えられないが１０胞子以上は連鎖していると
思われる。

■、各種培地上の生育状態 次表に示す通りである。

裏面の巳及び呵鹸性巳素はｐＨで変化しない。

スターチ寒天、オートミール寒天及びイーストスターチ
寒天等で培養後基の気菌糸がノ・イグロスコピンクとな
る。

■、生理的性質 （１）生育温度範囲：イーストスターチ寒天培地におい
て２０〜３９℃の温 度範囲で生育する。

（２）ゼラチンの液化＝２０°Ｃ１２１日培養で液化す
る。

（３）スターチの加水分解：陽性（２８°Ｃ）（４）脱
脂乳のペプトン化：陽性（２８°Ｃ）陰性（３７°Ｃ） 〃 の凝固：陰性（２８°Ｃ２３７°Ｃ）（５）メラニ
ン様色素の生成：陰性 ■、炭素源の利用性（ブリード・・ム・ゴツトリーブ寒
天培地）：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−キ
シロース、Ｄ−マンニトール、■−インシトール、Ｌ−
アラビノース、ラムノース、シュクロース及びラフィノ
ースを全て利用して生育する。

上記のことから５Ｆ−１９０２株の菌学的特徴を要約す
ると、気菌糸はらせん糸を形成し、胞子表面構造はしわ
状（ｗａｒｔｙ ）である。

裏面の色調は淡黄色〜黄褐色で特殊な色調はみられない
。

気菌糸は灰色〜灰褐色で、培養後期にはノ・イグロスコ
ピツクエリアが観察される。

グリセロール・アスパラギン寒天及びグルコース・アス
パラギン寒天で黄色の可醇性色素の生成かみられる。

有機培地でのメラニン様色素は生成されない。

５Ｆ−１９０２株のこのような性状はストレフトミセス
属の菌種の中でストレプトミセス・ハイグロスコピクス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ
ｕｓ）の性状と最も近似している。

即ち、ストレプトミセス・ハイグロスコピクスの特徴と
されている次の３点がＳＦ、−１９０２株に認められる
。

（１）らせん糸を形成する、（２）灰褐色の気菌糸を着
生する、（３）気菌糸がハイグロスコピックとなる。

ｌ５Ｐ（インターナショナル・ストレプトミセス・プロ
ジェクト）の記載（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ ２２巻、３０７〜３１１頁、１９７２
年）によるストレプトミセス・ハイグロスコピクスと５
Ｆ−１９０２株を比較すると、シュクロース及びラフィ
ノースの利用性に相違点が認められるが、その曲の性状
は極めてよく一致している。

以上より、５Ｆ−１９０２株はＩＳＰの記載株とは細部
で若干相違するものの、基本性状がよく一致することか
らストレプトミセス・ハイグロスコピクスの種に嘱させ
ることは妥当であり、従って本発明者らは、５Ｆ−１９
０２株をストレプトミセス・ハイグロスコピクス・５Ｆ
−１９０２（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏ
ｓｃｏｐｉｃｕｓ Ｓ Ｆ−１９０２’。

と命名した。

３Ｆ−１９０２株は池のストンブトミセス属の菌株の場
合にみられるようにその性状が変化しやすく、例えば、
紫外線、エックス線、高周波、放射線、薬品等を用いる
人工的変異手段で変異しうるものであり、このような変
異株であっても５Ｆ−１９０２物質の生産能を有するス
トレプトミセス属の菌はすべて本発明の方法に使用する
ことが出来る。

本発明の方法では前記菌株を通常の微生物が利用しつる
栄養物を含有する培地で培養する。

栄養源としては、従来ストレフトミセス属の菌の培養に
利用されている公知のものが使用できる。

例えは、炭素源としてグルコース、ンユウクロース、数
分、グリセリン、水あめ、糖みつ、大豆油等を使用しつ
る。

また窒素源として大豆粉、小麦胚芽、肉エキス、ペプト
ン、乾燥酵母、コーンスプイープリカー、硫酸アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム等を使用しつる。

その曲、盛装に応じて、炭酸カルシウム、食塩、塩化カ
リ、燐酸塩等の無機塩類を添加するほか、菌の発育を助
け５Ｆ−１９０２物質の生産をは進するととき有機及び
無機物を適当に添加することが出来る。

培養法としては、一般抗生物質生産の方法と同じく、液
体培養法、特に深部培養法が最も適している。

培養は好気的条件下で行われ、培養で適当な温度は２５
〜３５°Ｃであるが、多くの場合２８℃付近で培養する
。

５Ｆ−１９０２物質の生産は振盪培養、タンク培養共に
２〜８日で蓄積が最高に達する。

５Ｆ−１９０２物質の検定に当っては、次の方法が用い
られる。

検定用培地としてマイシンアッセイ寒天培地を用いる。

検定菌としてはエシェリヒア・コリＩＡＭ１２６８株を
用いる。

５Ｆ−１９０２物質はこれを用いた検定において１５．
０〜２００ ｍｃｇ ／ｒｕｌにおいて濃度の対数と阻
止円径との関係は直線関係を示し、それぞれ１１．５〜
１９．６ｍｍの阻止円を与える（ペーパーディスク平板
法）。

５Ｆ−１９０２物質は後記するような理化学性状を有す
るので、５Ｆ−１９０２物質の採取に当っては、その性
状を利用して抽出、精製することが出来る。

即ら、培養によって生産された５Ｆ−１９０２物質は菌
体を含む固型部分及び炉別された液体部分に存在し、培
養ろ液中の５Ｆ−１９０２物質は酢酸エチル、酢酸ブチ
ル、クロロホルム、ｎ−ブタノール等の水と１ざらない
有機酸媒で抽出することが出来る。

一方、固型部分中のＳＦｌ ９０２物ａはメタノール、
エタノール、アセトン等で抽出でき、また菌体を炉別す
ることなく、培養液から直接に有機晦媒に乾酪すること
も出来る。

有機酸媒中の有効成分は減圧下に濃縮乾固した後、５Ｆ
−１９０２物質を酵解する有機醇媒にて抽出し、不藩物
を除いたり、ｎ−ヘキサン等の如く、５Ｆ−１９０２物
質を酵解し難い有機尚媒で洗滌したり、捷た５Ｆ−１９
０２物質を酵解した有機尋媒にｎ−ヘキサン等を添カロ
して５Ｆ−１９０２物質を沈澱させることにより、さら
に純度を向上することかできる。

５Ｆ−１９０２物質をさらに精製するには、ンリカゲル
等の吸着剤やセファテックスＬＨ−２０などを用いるク
ロマトグラム法か有効で、これらにより５Ｆ−１９０２
物質は白色粉末として純粋に単離することができる。

５Ｆ−１９０２物質の理化学性状を以下に述べる。

１、外観： 無色無定形粉末 アセトニトリル又は含水アセトニトリル （４０％〜９０％）から結晶化すると、無色針状晶（融
点１１５〜１１７℃）が得られる。

２、融点： １０５〜１０８６Ｃ ３、比旋光度（２０℃）： 上記の無定形粉末の比旋光度＋６° （ｃｌ、５゜クロ
ロホルム） ４、尚解性： クロロホルム アセトン 酢酸エチル、メタノール、エ
タノールに可尚。

但し水、ヘキサンに難溶。

５、呈色反応： Ｌｅｍｉｅｕｘ ＋ Ｉ ２ ｒ Ｇｒｅｉｇ−Ｌｅａ
ｂａｃｋ反応に陽性。

ニンヒドリン、硫酸、塩化鉄反応に陰性。６、シリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値： Ｒｆ値 展 開 尚 媒 ０．６８ メチルエチル ケトン−エタノール（５：１
） ０．４５ クロロホルム−メタノール（５：１）０．４
３ アセトン−ベンゼン（２：１）７、紫外線吸収スペ
クトル： 末端吸収のみである（メタノール中）。

８、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）：第１図に
示す通りであり、次の波数に主要ピークが認められる。

３３５０，２９４０゜２９７０．１７４０，１７６０，
１６６０゜１５６０及び１２１０ｃｍ−１ ９、核磁気共鳴吸収スペクトル： 第２図に示す通りである。

曲線Ａは１００メガヘルツで重クロロホルム中にてテト
ラメチルシラン内部標準を入れて測定した５Ｆ １９０２物質のＮ、Ｍ、Ｒスペクトルであり、曲ＩＢは
１００メガヘルツで重クロロホルム十重水中で重水素交
換した後の５Ｆ−１９０２物質について測定したＮ、Ｍ
、Ｒスペクトルである。

１０、分子量： 約６５０（蒸気圧法） １１、元素分析値： Ｃ５６，９８；Ｈ８６５；Ｎ１０．３７％１２、含有す
る元素： 炭素、水素、窒素、酸素。

５Ｆ−１９０２物質の抗菌スペクトルは次表に示す通り
である。

エシェリヒア・コリＩＡＭ１２６８ ｔｔ ／／ Ｎ Ｉ ＨＪ ｏ、３９ １２．５ 〃〃に１□ （Ｒ因子保有株） ２−５ 〃 〃 ホスホマイシン耐性菌 １．５６ シゲーラ・ゾンネ ３．１２サ
ルモネラ・チフィ ６．２５クレ
フジーラ・ニューモニア ２５．０セラチア・
マルセツセンス ２００シユードモナス・エア
ルギノーサ ２００プロテウス・ブルガリス
〉２００バチルス・スブチリス ＡＴＣＣ６６３３１００ スタヒ１−Ｊコックス・オーレウス ２０９Ｐ ２００ サルシナ・ルテア ＞２００（注）使用
培地はブイヨン培地である。

上表から明らかなように５Ｆ−１９０２物質はダラム陽
性菌よりもダラム陰性菌に対する抗菌力が憂れている。

５Ｆ−１９０２物質の動物毒性は、マウスを用いた急性
毒性の試験では、腹腔的注射の場合、１００■／ｋｙ、
または経口投与の場合５００ｒｎ９／ｋｇで金側生存し
、その後の経過もすべて正常であった。

５Ｆ−１９０２物質の大腸菌ＮＩＨＪＪＣ−２株感染Ｉ
ＣＲマウスに対する治療効果は次表の通りである。

以上の理化学的性質及び抗菌スペクトルから５Ｆ−１９
０２物質は既知抗生物質の中に一致するものがなく、従
って５Ｆ−１９０２物質は新規な抗生物質と認められる
。

次に実施例を示す。

実施例 １ ストレプトミセス・ハイグロスコピクス・５Ｆ−１９０
２株（微工研申請書受理番号第３２７７号）の胞子を澱
粉１．０咎、大豆粉３．０％（ｐＨ７，０の液体培地６
０ｒＩｌｌ（試験管６本）に接種し、２８°Ｃで４８時
間振盪培養し、その培養物を種母とする。

澱粉２．５俤、大豆粉２．０幅、小麦胚芽１．０％、ソ
リュープル・ベジタブル・プロティン０．１係、大豆油
０３饅、食塩０１係（ｐＨ７，０）の組成からなる液体
培地４１（坂ロフラスコ５０本）に前記の種母を１％の
割で接種し、２８°Ｃで４日間振盪培養した。

培養液（ｐＨ７，５）を沢過し、菌体を含む固型部分と
ろ液部分に分けると、５Ｆ−１９０２物質は約３＝１の
割合で両方に存在する。

固型部分は２１のアセトンにて抽出し、減圧下にアセト
ンを除去して得られる水酸液とろ液部分を混合（３１）
し、等量の酢酸エチルで抽出する。

酢酸エチル層を６００１ｎｌの蒸留水で洗った後、芒硝
にて脱水し減圧下に３０ｒｕｌ捷で濃縮する。

この濃縮液にｎ−ヘキサン３００ｒＩＬｌを添加すると
５Ｆ−１９０２物質を含む沈澱が生ずる。

沈澱を戸別し、５Ｆ１９０２物質の粗粉末（褐色）、９
３０ｍｌ１（純度的３０％）を得た。

かくして得られた粗粉末を少量の酢酸エチルに醇解し、
シリカゲル（５ｉｌｉｃｉｃ ａｃｉｄ、１００メツシ
ユ、ＡＲｇｒａｄｅ ｐ Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ
ＣｈｅｍｉｃａｌＷｏｒｋｓ Ｕ Ｓ Ａ製）のカラム
’（１００ｍｌ、酢酸エチルにて充填）に通し、酢酸エ
チル・メタノール（２５：１）で展開した。

活性区分（３００ｍ０を減圧下に２〜３ｍ１ｔで濃縮し
、次にこれをセファデックスＬＨ−２０のカラム（３０
０ｍ０にのせ、メタノールで展開し、５ｇづつ採取した
。

フラクションＡ２６〜３０を濃縮し、さらにこのセファ
デックスＬＨ−２０のカラムクロマトグラフィーを２回
繰返すことにより５Ｆ−１９０２物質の白色粉末（純度
１００％）２５０■を得た。

実施例 ２ ストレプトミセス・−・イグロスコピクス・５Ｆ−１９
０２株（微工研申請書受理番号第３２７７号）の胞子を
澱粉１．０咎、大豆粉３，０φ（ｐＨ７，０）の液体培
地５００ｍ１（坂ロフラスコ、５本に接種し、２８°Ｃ
で７０時間振盪培養したものを種母とする。

水あめ４０％、大豆粉２．０％、ファーマメティア１．
０％、ソリュープル・ベジタブルプロテイン０．５％、
大豆油０．３俤、硫酸第１鉄０．００１％（ｐＨ７，０
）の組成からなる液体培地２０１に前記の種母を接種し
、２８°Ｃで４８時間通気攪拌培養した（３Ｍジャーフ
ァーメンタ−使用）。

得られた培養物から実施例１に示したのと同じ方法で抽
出、精製し、５Ｆ−１９０２物質の白色粉末４５０■を
得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｆ−１９０２物質の赤外部吸収スペクトル図
（ＫＢｒ錠剤法）であり、第２図は重クロロホルム中で
５Ｆ−１９０２物質の１００ＭＨｚで測定した核磁気共
鳴スペクトル図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトミセス属に嘱する５Ｆ−１９０２物質生
   産菌を培養して、その培養物から５Ｆ１９０２物質を採
   取することを特徴とする、抗生物質５Ｆ−１９０２物質
   の製造法。