JPS597320B2 - フェガノマイシン群抗生物質の製造法 - Google Patents

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【発明の詳細な説明】 本発明は一般式（１） ＣＨ３ＮＨ２ ＣＨ３−Ｃ−ＣＨ３（ＣＨ２）４ 一ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏ−ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏ−Ｒ２１）（式
中、Ｒ１は水素原子または水酸茶を、Ｒ２は水酸基、ア
スパラギン酸残基、アスパルチル・アルギニン残基また
はアスパルチル・グリシル・プロリル・スレオニン残基
を示す。

）で表わされるフエガノマイシン群抗生物質の発酵法に
よる製造法に関するものである。本発明者らは上記一般
式α）に訃いて、Ｒ１｝よびＲ２が共に水酸基で表わさ
れる化合物をフエガノマイシン（以下「ＰＨＧ」という
。

）、Ｒ１が水酸基、Ｒ２がアスパラギン酸残基で表わさ
れる化合物をフエガノマイシンＤ（以下「ＰＨＧ一田と
いう。）、Ｒ１が水酸基、Ｒ２がアスパルチル・アルギ
ニン残基で表わされる化合物をフエガノマイシンＤＲ（
以下「ＰＨＧ−ＤＲ］という。）、Ｒ１が水酸基、Ｒ２
がアスパルチル・グリシル・プロリル・スレオニン残基
で表わされる化合物をフエガノマイシンＤＧＰＴ（以下
「ＰＨＧ−ＤＧＰＴ」という。）、Ｒ１が水素原子、Ｒ
２がアスパラギン酸残基で表わされる化合物をデオキシ
フエガノマイシンＤ（以下「デオキシＰＨＧ一司という
。）と命名した。これらはすべて新規抗生物質である。

な卦本発明ではこれらの化合物を総称してフエガノマイ
シン群抗生物質という。本発明で使用される生産菌はス
トレプトミセス属に属するフエガノマイシン群抗生物質
生産菌であり、その代表的なものとして財団法人微生物
化学研究所において昭和４７年９月、山梨県河口湖の土
壌から分離したストレプトミセス・シラートウスＭＤ２
２７−Ａ９（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｃｉｒｒａ−Ｔ
ｕｓＭＤ２２７−Ａ９）（以下「ＭＤ２２７Ａ９株」と
いう。

）（工業技術院微生物工業技術研究所受託番号第３５８
６号、ＦＥＲＭ−Ｐ黒３５８６）があげられる。以下に
ＭＤ２２７−Ａ９株の菌学的性状を示す。

１ 形態 ＭＤ２２７−Ａ９株は顕微鏡下で分枝した基中菌糸より
蝶旋状の気菌糸を形成し、輪生枝はみとめられない。

成熟した胞子鎖は１０個以上の胞子の連鎖をみとめ、胞
子の大きさは０．６〜０．８×１．０〜１．２ミクロン
位で胞子の表面は平滑である。２各種培地にふ・ける生
育状態 色の記載について〔〕内に示す標準はコンテイナ一・コ
ーポレーシヨン・オブ・アメリカのガラ，．ハ，モニイ
．マニユアル（ＣＯｎｔａｉｎｅｒＣＯｒｐＯｒａｔｌ
ＯｎＯｆＡ］Ｍｅｒｉｃａ（：！）ＣＯｌＯｒＨａｒｍ
Ｏｎｙｍａｎｕａｌ）を用いた。

（１）シユクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）無
色の発育上に、茶白〜ピック白の気菌糸をうつすらと着
生し、溶解性色素はみとめられない〜 （２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２ｒＣ培養
）発育は無色〜うす茶、気菌糸は着生せず、溶解性色素
もみとめられない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ培地
５，２７℃培養）うす黄茶の発育上に、うすピック〔６
ｅｃ，Ｐ０ｗｄｅｒＲ０ｓｅ］〜ピック灰〔６ｇｅｐＲ
０ｓｅＧｒａｙ〕〜赤昧灰の気菌糸を着生し、溶解性色
素はかすかに茶色昧を｝びる程度である。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ一培地４，２
７℃培養）無色〜うす黄の発育上に、う十ピック〔５ｅ
ｃ，ＤｕｓｔｙＰｅａｃｈ〕〜うす赤茶の気菌糸を着生
し、溶解性色素はかすかに茶色味をおびる程度である。

（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ一培地７，２７℃培養
）灰色黄茶〜黄茶の発育上に、うすピック〔７ｅｃ？Ｒ
ＯｓｅＭｉｓｔ〕ゞピック灰〔６ｇｅ９Ｒ０ｓｅＧｒａ
ｙ〕の気菌糸を着生し、暗い茶の溶解性色素を産生する
。

（６）栄養寒天培地（２ｒＣ培養） 発育は灰昧黄茶〜茶色、気菌糸は着生せず、茶色の溶解
性色素を産生する。

（７）イースト・麦芽寒天培地（ＳＰ一培地２，２７゜
Ｃ培養）うす黄茶〜黄茶の発育土に、うすピック〔７ｅ
ｃ，Ｒ０ｓｅＭｉｓｔ〕〜ピック灰〔６ｇｅ，Ｒ０ｓｅ
Ｇｒａｙ〕〜赤味灰の気菌糸を着生し、溶解性色素はみ
とめられない。

（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ一培地３，２７℃
培養）無色の発育上に、うすピック〔６ｅｃ， Ｐ０ｗｄｅｒＲ０ｓｅ〕〜うす赤茶の気菌糸を着生し、
溶解性色素はみとめられない。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）無色
の発育上に、茶白の気菌糸をうつすらと着生し、溶解性
色素はみとめられない。

（１０）スターチ寒天培地（２７℃培養）無色〜うす黄
、あるいはうすオリーブの発育上にうすピック〜うす赤
茶の気菌糸を着生し、溶解色素はかすかに黄色味を卦び
る程度である。

０１）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）無色の発育
上に、白の気菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素はみ
とめられない。

（１２）セルロース（２７゜Ｃ培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめら
れない。

０３）ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２『Ｃ培養）では、無色〜うす黄茶
の発育上に、白の気菌糸をうつすらと着生し、茶の溶解
性色素を産生する。

グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）で
は、発育は灰昧黄茶、気菌糸は着生せず、溶解性色素は
暗い茶を呈する。０４）脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうす黄茶〜黄茶、わずかな白色の気菌糸を着生し
、明るい茶〜茶色の溶解性色素を産生する。

３生理的性質 （１）生育温度範囲 グルコース・アスパラギン寒天を用い、２００Ｃ，２４
゜Ｃ，２７゜Ｃ，３００Ｃ，３７゜Ｃ，５００Ｃの各温
度で試験の結果、５００Ｃを除いて、伺れの温度でも生
育するが、最適温度は２７゜Ｃ〜３０′Ｃと思われる。

（２）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチ
ン培地、２ｒＣ培養ぶよび１５０！）単純ゼラチン培地
、２『Ｃ培養）単純ゼラチン培地の場合は液化はみとめ
られない。

グルコース・ペプトン・ゼラチン培地では、培養後１４
日目項から液化が始まり、その作用は中等度〜弱い方で
ある。（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒
天培地ふ・よびスターチ寒天培地、何れも２７゜Ｃ培養
）培養後５日目項から水解性がみとめられ、その作用は
中等度〜強い方である。

（４）脱脂牛乳の疑固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７゜
Ｃ培養）疑固しないで培養後１０日目項からペプトン化
が始まり、１４日目項には完了する。

その作用は中等度〜強い方である。（５）メラニン様色
素の生成（トリフトン・イースト・プロス、ＩＳＰ一培
地１、ペプトン・イースト・鉄寒天、ＩＳＰ一培地６；
チロシン寒天ＩＳＰ一培地７、何れも２７℃培養）何れ
の培地でもみとめられる。

（６）炭素源の利用性（プリド・・ム・ゴトリーブ寒天
培地、ＩＳＰ一培地９，２ｒＣ培養）グルコース、Ｌ−
アラビノース、Ｄ−フラグドーズを利用して発育し、シ
ユクロース、イノシトール、ラムノース、ラフイノース
、Ｄ−マンニトールは利用しない。

Ｄ−キシロースは｝そらく利用しない。（７） リンゴ
酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天、２７℃培養）培養後
１０日目項から発育周辺のリンゴ酸石灰を溶解し、その
作用は中等度〜強い方である。

（８）硝酸塩の還元反応（１．０％硝酸ソーダ含有ペプ
トン水、Ｓｐ一培地８，２７℃培養）陽性である。

以上の性状を要約するとＭＤ２２７−Ａ９株はストレプ
トミセス属に属し、気菌糸は螺旋形成をみとめ、輪生枝
はみられず、胞子の表面は平滑である。

種々の培地で無色〜うす黄茶あるいは黄茶の発育上に、
うすピック〜ピック灰あるいはうす赤茶の気菌糸を着生
し、溶解性色素はほとんどみとめられない。

メラニン様色素は陽性、蛋白分解力、スターチの水解性
は中等度〜強い方である。これらの性状よりＭＤ２２７
−Ａ９株に近縁の既知菌種を検策するとＩＳＰ記載から
ストレプトミセス．シラートウス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙ
ｃｅｓＣｉｒｒ−Ａｔｕｓ）文献１）Ｎｔｅｒｎａｔｉ
ＯｒｌａｌＪＯｕｒｎａｌＯｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢ
ａｃｔｅｒｌＯｌＯｇｙ，２２巻〜２８４頁）１９７２
年；文献２）ＴｈｅＪＯｕｒｎａｌＯｆＡｎｔｉｂｌＯ
ｔｉｃｓ，Ｓｅｒ．Ａ，ｌ６巻、黒２，５９頁、１９６
３年）とストレプトミセス・グリゼオラベンドウス（Ｓ
ｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅＯｌａｖｅｎｄｕｓ
，ＩｎｔｅｒｒｌａｔｉＯｎａｌＪＯｕｒｎａｌＯｆＳ
ｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｌＯｌＯｇｙ，ｌ９巻
、４３４頁、１９６９年）があげられる。次に実際にこ
れら２種の菌株を入手し、ＭＤ２２７−Ａ９株と比較検
討した成績の｝如くである。表にみられる如くＭＤ２２
７−Ａ９株とストレプトミセス・シラートウスＩＳＰ５
４７９株とは、硝酸塩の還元反応、牛乳の凝固およびＤ
−キシロースの利用性を除いてほぼ一致している。

ストレプトミセス・シラートウスの牛乳の凝固性は文献
２）には陰極と記載されている如く極く弱いもので、又
硝酸塩の還元反応の相異は一般的に余ジ重要とはみとめ
難く、Ｄ−キシロースの利用性が一番大きな相異点と判
断される。

他方ストレプトミセス・グリゼオラベンドウスＩＳＰ５
３８５株とは、蝶旋形成の有無、牛乳の凝固、さらにＬ
−アラビノースおよびＤ−フラグドーズの利用性でも相
異点をみとめる。これらの相異点の中、螺旋形成につい
てはストレプトミセス・グリゼオラベンドウスは文献に
よると気菌糸の先端が鉤状あるいはループ状になる場合
が記載されているが、この比較実験ではＩＳＰの培地上
では螺旋形成は全くみとめられず、牛乳の凝固、Ｌ−ア
ラビノースの利用と併せてＭＤ２２７−Ａ９株との大き
な相異点と判断される。これらの点からＭＤ２２７−Ａ
９株はストレプトミセス・シラートウスに最も近縁の種
と考えられ、ストレプトミセス・シラートウスＭＤ２２
７一Ａ９と同定した。

放線菌は人工的に、又自然界で変異をおこし易いが、本
発明にいうＭＤ２２７−Ａ９はそれらの変異菌のすべて
を包括する。本発明にいうこれらの菌種はフエガノマイ
シン群抗生物質を生産し、本菌種およびその変異菌と明
確に区別されない菌はすべてこれを包含する。本発明に
より、フ、エガノマイシン群抗生物質を製造するには、
先ず前記菌株を放線菌が利用し得る栄養物を含有する培
地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から放線
菌の培養に利用されている公知のものが使用でき、例え
ば、炭素源としてはグルコース、デンプン、マルトース
、デキストリン、シェークロース、水飴（デンプン麦芽
糖化物）、大豆油などを単独または組み合わせて用いる
ことができる。無機および有機窒素源としては塩化アン
モニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム
、硝酸ソーダ、ペプトン、肉工キズ、酵母工キズ、乾燥
酵母、コーンスチープリカ一、大豆粉、綿実油ガス、カ
ザミノ酸、バクトソイトン、ソリユブルベジタブルプロ
テインなどを単独または組み合わせて用いることができ
る。その他必要に応じて食塩、硫酸マグネシウム、硫酸
銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩化マンガン、炭酸カルシウム
、燐酸塩などの無機塩類を加えることができるほか本菌
の生育やフエガノマイシン群抗生物質の生産を促進する
有機物、たとえばアミノ酸類や無機物を適当に添加する
ことができる。培養法としては液体培養法、特に深部撹
拌培養法が最も適している。培養温度は２５℃〜４０℃
、ＰＨが中性ないし微酸性で培養を行うことが望ましい
。液体培養では通常３日ないし１０日間培養を行うとフ
エガノマイシン群抗生物質が培養液中に生成蓄積される
。培養液中の生成量が最大に達したとき培養を停止し、
菌体を瀘別し、得られる培養瀘液中より目的物を精製単
離する。培養瀘液から本物質の精製単離には一般に微生
物代謝生産物をその培養液から単離するために用いられ
る分離精製の方法が利用される。

フエガノマイシゾ詳抗生物質は水によく溶けるがメタノ
ール、エタノール、アセトンをはじめとする一般有機溶
媒には不溶ないし、溶けにくい物質で、その精製はいわ
ゆる水溶性塩基性物質の精製に用いられる方法により行
われる。すなわちカチオン交換樹脂、アンバーライト０
ＸＡＤ−２訃よび活性炭末による吸脱着法、セフアデツ
クス２Ｇ−１０，ＣＭセフアデツクス２Ｃ−２５のカラ
ムクロマトグラフイ一などの方法を適当に組み合わせて
用いることができる。例えば培養瀘液をＰＨ６．５に調
整した後、アンバーライト９ＸＡＤ−？に吸着させ、水
洗後５００／）メタノールで溶出し、活性区分を濃縮後
凍結乾燥する。得られた茶褐色の粗粉末をメタノールで
可溶部分を除去し、不溶物を乾燥後水に溶解し、活性炭
末カラムに吸着後水洗し、０．１規定塩酸：アセトン（
１容：１容）で溶出し、得られた活性区分を弱塩基性樹
脂ダウエツクス４４４（０Ｈタイプ）で中和した後濃縮
凍結乾燥し、灰褐色のフエガノマイシン群抗生物質（混
合物）を含有する粗粉末を得る。これを少量の０．０５
Ｍ食塩水に溶かし、ＣＭセフアデツクス［有］Ｃ−２５
のカラムに吸着させ、０．０５Ｍ〜１．０Ｍの食塩水で
濃度勾配溶出を行うと、０．０５Ｍ−０．１Ｍの濃度で
ＰＨＧ−ＤＧＰＴ，ＰＨＧ−Ｄ、デオキシＰＨＧ−Ｄが
、０．４Ｍ付近でＰＨＧが、また０．５Ｍ付近でＰＨＧ
−ＤＲがそれぞれ溶出される。これらをアンバーライト
Ｃ反ＡＤ−２に吸着させ、水洗後５０％メタノール水で
溶出することにより脱塩し、凍結乾燥する。ここに得ら
れたそれぞれの粗粉末を少量の水に溶かし、セフアデツ
クス９Ｇ−１０カラムに吸着させ水で展開し、着色物質
を除去し、活性区分を濃縮し凍結乾燥する。淡黄色のＰ
ＨＧ−ＤＧＰＴ，ＰＨＧ−Ｄ１デオキシＰＨＧ−Ｄの混
合物を少量の水に溶かし、ＣＭセフアデツクス９Ｃ−２
５のカラムを用い、０．０５Ｍ食塩水で溶出するとＰＨ
Ｇ−ＤＧＰＴ，ＰＨＧ−Ｄ、デオキシＰＨＧ−Ｄの順で
溶出される。各活性区分を前述の方法で脱塩を行い、そ
れぞれの無色粉末を得る。

次に以上の占うにして得たフエガノマイシン群抗生物質
の理化学的性状を示す。

１外 観：無色の粉末 ※ 塩酸塩として測定したものである。

１融 点：フエガノマイシン群抗生物質は明瞭な融点ま
たは分解点を示さないがＰＨＧ−Ｄ，ＰＨＧ−ＤＲ、デ
オキシＰＨＧ−Ｄは２３０℃以上で、またＰＨＧ，ＰＨ
Ｇ−ＤＧＰＴは２１０℃よね徐々に分解する。

５比旋光度： Ｓ紫外線吸収スベクトルリフエガノマイシン群抗生物質
の紫外線吸収スペクトルを第１図に示す。

ＰＨＧ，ＰＨＧ−Ｄ，ＰＨＧ−ＤＲ，ＰＨＧ−ＤＧＰＴ
は２８２ｎｍに肩を有し、２８８ｎｍに吸収極大を有す
る。

それらのＥ１″はそれぞれ２７．２，２２．４，１７．
６，１ＣＴＩＬ◆ ９ り ● ９１６４
２である。

またデオキシＰＨＧ−Ｄは２７７ｎｍ（Ｅ１″１４．５
）と２８３ｎｍ（Ｅｌ７ｌρＭｌＣπ１４．３）に二つ
の吸収極大を有している。

７赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム錠として測定し
たＰＨＧ，ＰＨＧ−Ｄ，ＰＨＧ−ＤＲ，ＰＨＧ−ＤＧＰ
Ｔ訃よびデオキシＰＨＧ−Ｄの赤外線吸収スペクトルを
第２図ないし第６図に示す。

各化合物の吸収極大値（波数？−１ ）を以下に示す。
８溶剤に対する溶解性：フエガノマイシン群抗生物質は
メタノール、エタノール、プロパノール、アセトン、酢
酸エチル、酢酸ブチル、エーテルち・よびベンゼンなど
の有機溶媒にはほとんど溶けない。

またＰＨＧ，ＰＨＧ−ＤＲ，ＰＨＧ−ＤＧＰＴは水によ
く溶けるがＰＨＧＤ卦よびデオキシＰＨＧ−Ｄはこれら
に比して溶解度が小さい。

９呈色反応：フエガノマイシン群抗生物質は、ニンヒド
リン反応、ライドンスミス反応、ベンタシアノアクオフ
エリエイト反応、パウリ反応は陽性、テトラゾリウムク
ロライド反応、工ールリツヒ反応は陰性を示す。

坂口反応はＰＨＧＤＲのみ陽性で他は疑陽性を示す。１
０酸加水分解生成物：フエガノマイシン群抗生物質を６
規定塩酸、１０５゜Ｃ、１７時間封管中で加水分解後ア
ミノ酸分析を行いそのモル比をもとめた。

その結果を第２表に示す。以上のことから本発明のフエ
ガノマイシン群抗生物質は新規化合物であると判断した
。

次に本発明のフエガノマイシン群抗生物質の抗菌スペク
トルを第３表訃よび第４表に示す。

フエガノマイシン群抗生物質は、第３表ち・よび第４表
に示す如くグラム陽性菌訃よび陰性菌、カビ、酵母類に
対してはほとんど活性を示さない。しかし抗酸性菌に抗
菌活性を示し、そのうちでＰＨＧ−ＤＲは最も強く阻止
した。また既知抗生物質耐性マイコバクテリウム６０７
に対し交差耐性を示さなかつた。フエガノマイシンＤＲ
のマウスに対する毒性（ＬＤ５Ｏ）は４００ｍｇ／Ｋｇ
（１．ｖ．）以上で、毒性の弱いことを示した。

フエガノマイシン群抗生物質は以上の結果から明らかな
ように抗結核剤として期待できるものである。以下、本
発明の実施例を示すが、これは単なる一汐１示であつて
何等本発明を限定するものではなく、種々の変法が可能
である。

実施例 １ ０ータリ一型振盪機用５００ｍ１容バツフル付き三角フ
ラスコに、デンプン１％、グルコース１％、大豆粉１。

５％、第２燐酸カリウム０．１（Ｆｔ）、硫酸マグネシ
ウム０．１（：ｆ）、食塩０．３％、硫酸銅０．０００
７％、硫酸鉄０．０００１３％、塩化マンガン０．００
０８％、硫酸亜鉛０．０００２％、消泡剤としてシリコ
ンＫＭ７Ｏ（信越化学製）：大豆油（局法）（１：１）
０．０５％、ＰＨ６．８，ｌ２Ｏ℃、２０分間オートク
レーブ滅菌した培地１２０ｍ１をとり、これにＭＤ２２
７−Ａ９株（微工研菌寄第３５８６号）１白金耳を接種
し、２８℃、１８０回転／分、２日間振盪培養した。

これとは別に前記同様の三角フラスコに水飴５％、ポリ
ペプトン０，５％、肉工キズ０．５％、酵母工キズ０．
３％、食塩０．３％、硫酸マグネシウム０．１０１，、
硫酸銅０．０００７（ｆ）、硫酸鉄０．０００１３％、
塩化マンガン０．０００８％、硫酸亜鉛０．０００２％
、消泡剤としてシリコンＫＭ−７０：大豆油（局法）（
１：１）０．０５％ＰＨ６．８，ｌ２Ｏ℃、２０分間、
オートクレーブ滅菌した培地１２０ｍ１をとり、これに
前記培養液２〜３ｍ１を移植し、前記と同じ条件下で５
日間振盪培養した。培養液はＰＨ６．５で瀘過し、瀘液
１０１を得た（培養力価２５ｍｃｇ力価／［Ｎｇ）。ア
ンバーライトＣ父ＡＤ−２１１を充填したカラムにこの
瀘液を通し、フエガノマイシン群抗生物質（混合物）を
吸着させ、水洗後５００１）メタノール水で溶出した。
活性区分を集め、減圧下で濃縮し、凍結乾燥し、焦茶色
の粉末５．９０９（３８ｍｅｇ／Ｍｇ）を得た。これを
２５０ｍ１のメタノールで処理し、可溶部を除去した後
、不溶部を減圧下で乾燥し、３．８２９（５５ｍｅｇ力
価／Ｉｎｇ）の褐色粗粉末を得た。これを水３８２ｍ１
に溶かし、活性炭末１００ｍ１のカラムに吸着させ、水
洗した後、０，１規定塩酸：アセトン（１：１）で溶出
し、活性区分をダウエツクス２４４（（０Ｈ−）で中和
し、減圧下で濃縮凍結乾燥した。得られた灰色粗粉末１
．４０９（９０ｍｅｇ／ｎ］ｇ）を０．０５Ｍ食塩水５
０ｍ１に溶かし、予め０．０５Ｍ食塩水で平衡化したＣ
Ｍセフアデツクス９Ｃ−２５５００ｍ１のカラムに吸着
させ、０．０５Ｍ食塩水５００ｍ１で溶出した後、０．
３および０．７Ｍの食塩水各２１の直線濃度匂配法で溶
出した。０．０５ＭでＰＨ（ｌ｝−ＤＧＰＴ，ＰＨＧＤ
ｌデオキシＰＨＧ−Ｄの混合物、０．４Ｍ付近でＰＨＧ
，Ｏ．５Ｍ付近でＰＨＧ−ＤＲの順序で溶出された。

各活性区分をアンバーライト［有］ＸＡＤ−２３０ｍ１
に吸着せしめ、水洗した後、５０％メタノール水で溶出
する脱塩操作によね得られた活性区分を減圧下で濃縮凍
結乾燥し、それぞれ淡黄白色を｝びた粉末８７ｒＤｇ（
２８７ｍｃｇ力価／Ｍｇ）、無色の粉末１０ｍｇ（１０
０ｍｃｇ力価／Ｍｇ）、無色の粉末５０［０ｇ（１００
０ｍｃｇ力価／ＲＤｇ）を得た。淡黄色を有するＰＨＧ
−ＤＧＰＴ，ＰＨＧ−Ｄ１デオキシＰＨＧ−Ｄを含有す
る混合物８７０１ｇを水３〜５ｍ１に溶かし、予め水で
膨潤化したセフアデツクス９Ｇ−１０３００ｍ１のカラ
ムを通過させ着色物質を除去し、活性区分を集め３〜５
ｍ１に減圧下で濃縮し、直ちに予め０．０５Ｍ食塩水で
平衡化したＣＭセフアデツクス２Ｃ−２５２００ｍ１の
カラムに吸着させ、０．０５Ｍ食塩水で溶出し、ＰＨＧ
−ＤＧＰＴ，ＰＨＧ−Ｄ１デオキシＰＨＧ一Ｄの順序で
活性区分を得た。次に前述した脱塩操作により脱塩し、
純粋のＰＨＧ−ＤＧＰＴ２Ｏｍｇ（２５０ｍｃｇ力価／
Ｎｌｇ）、ＰＨＧ−Ｄ２ＯｒＯｇ（５００ｍｃｇ力価／
［ｒ！ｇ）、デオキシＰＨＧ−ＤｌＯｍｇ（５００ｍｃ
ｇ力価／ＲＤｇ）の無色粉末を得た。実施例 ２ 実施例１と同様にしてＭＤ２２７−Ａ９株（微工研菌寄
第３５８６号）を培養して得た前培養液３１を実施例１
記載の生産培地１２０１を仕込んだ２００１容ステンレ
ス製発酵槽に移植し、２８℃４日間通気攪拌方式（回転
数３８０回／分通気量１２０１／分）により培養を行つ
た。

フエガノマイシン群抗生物質（混合物）の生成濃度、１
５ｍｃｇ力価／ｍｌ（ＰＨＧ−ＤＲｌＯＯＯｍｃｇ力価
／ｎ］ｇ）を含む培養液１００１に瀘過助剤ダイカライ
ト９〔ダイカライト・オリエント（株））〕３ｋｇを加
え、菌体を瀘別した。瀘液８０１を１規定の苛性ソーダ
ーでＰＨ６．５に調整し、アンバーライト９ＸＡＤ−２
１０１のカラムに通し、目的成分混合物を吸着させた。
カラムを水洗後５０％メタノール水で溶出し、活性区分
を集め、減圧下で濃縮凍結乾燥し、８０９の焦茶色の粗
粉末（１３ｍｃｇ力価／Ｍｇ）を得た。次にこの粗粉末
８０９をメタノール３１で処理し可溶部を除去した後、
不溶部を減圧下で乾燥し、焦茶色の粗粉末４０ｙ（２０
ｍｃｇ力価／０！ｇ）を得た。

この粉末を８００ｍ１の水に溶かし、活性炭末１１のカ
ラムに通し、フエガノマイシン群抗生物質（混合物）を
吸着させ、水洗後、０，１規定塩酸：アセトン（１容：
１容）で溶出し、活性区分をダウエツクス９４４（０Ｈ
−）で中和し、濃縮凍結乾燥した。得られた褐色粗粉采
１３９（５０ｍｃｇ力価／０１ｇ）を０．０５Ｍ食塩水
２００ｍ１に溶かし、予め０．０５Ｍ食塩水で平衡化し
たＣＭセフアデツクス９Ｃ−２５３１のガラ に吸着さ
せ、０．０５Ｍ食塩水６ｊで溶出した後、０．３Ｍ，０
．４′ Ｍ，Ｏ．５Ｍの食塩水各６１でステップワイス
に溶出した。０．０５Ｍ濃度でＰＨＧ−ＤＧＰＴ，ＰＨ
Ｇ−Ｄ１デオキシＰＨＧ−Ｄの混合物、０．３〜０．４
Ｍ濃度付近にＰＨＧ，Ｏ．５Ｍ濃度でＰＨＧ−ＤＲの各
成分が溶出された。

各活性区分を実施５例１と同様の脱塩法で脱塩し、減圧
下で濃縮、凍結、乾燥し、ＰＨＧ−ＤＧＰＴ，ＰＨＧ−
Ｄ１デオキシＰＨＧ−Ｄの淡黄白色をおびた混合物４５
０［Ｎｇ（３６６ｍｃｇ力価／Ｍｇ）、ＰＨＧの無色粉
末５０ｎ］ｇ（１００ｍｅｇ力価／Ｍｇ）およびＰＨＧ
−９ＤＲ無色粉末２５０ｍｇ（１０００ｍｃｇ力価／―
を得た。次に淡黄色をおびた混合物４５００１ｇを水２
０ｍ１に溶かし、予め水で膨潤化したセフアデツクス９
Ｇ−１０１．５１のカラムを通過させ着色物質を除去し
、活性区分を減圧下で１０〜１５ｍ１に濃縮し、それを
直ちに０．０５Ｍ食塩水で平衡化したＣＭ−セフアデツ
クス２Ｃ−２５１１のカラムに吸着させ、０．０５Ｍ食
塩水で溶出するとＰＨＧ−ＤＧＰＴ，ＰＨＧ−Ｄ１デオ
キシＰＨＧ−Ｄの順に溶出された。それぞれの活性区分
を前述の脱塩操作により脱塩し、純粋のＰＨＧ−ＤＧＰ
Ｔｌ５ＯＷ！ｇ（２５０ｍｃｇ力価／Ｍｇ）、ＰＨＧ−
Ｄｌ５Ｏｍｇ（５００ｍｃｇ力価／Ｏ］ｇ）、およびデ
オキシＰＨＧ−Ｄ５Ｏｍｇ（５００ｍｃｇ力価／Ｍｇ）
の無色粉末を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、フエガノマイシン、フエガノマイシンＤ１フ
エガノマイシンＤＲｌフエガノマイシンＤＧＰＴおよび
デオキシフエガノマイシンＤの紫外線吸収スペクトルを
、第２図ないし第６図は臭化カリウム錠として測定した
フエガノマイシン、フエガノマイシンＤ１フエガノマイ
シンＤＲｌフエガノマイシンＤＧＰＴｌデオキシフエガ
ノマイシンＤのそれぞれの赤外線吸収スペクトルを示し
たものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ストレプトミセス属に属するフエガノマイシン群抗
   生物質生産菌を培地に培養し、フエガノマイシン群抗生
   物質を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
   る一般式▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１は水素原子または水酸基を、Ｒ＿２は水
   酸基、アスパラギン酸残基、アスパルチル・アルギニン
   残基またはアスパルチル・グリシル・プロリル・スレオ
   ニン残基を示す。 ）で表わされるフエガノマイシン群抗生物質の製造法。