JPH0360840B2

JPH0360840B2 -

Info

Publication number: JPH0360840B2
Application number: JP60201183A
Authority: JP
Inventors: Kosho Kyo; Shakuryo Sho; Teruyoshi Marunaka; Akira Kajitani; Eiji Matsushima; Yoshinori Minami
Original assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1985-09-10
Filing date: 1985-09-10
Publication date: 1991-09-17
Also published as: JPS6261999A

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野本発明は医薬として有用な新規化合物に関す
る。従来の技術本発明の化合物は、文献未載の新規化合物であ
る。発明が解決しようとする問題点本発明は、抗菌作用、殊にスタフイロコツカス
属、サルジナ属、バチイルス属等のグラム陽性
菌、マイコバクテリウム属等の抗酸性菌等に対し
て抗菌作用を有する新規物質を提供することを目
的とする。問題点を解決するための手段本発明者は、ストレプトミセス属に属する菌株
の培養液中に抗菌作用を有する135物質と称する
抗生物質が生産されていることを見出し、さらに
詳細なる研究の結果、135物質より性状類似の４
つの新規抗生物質135−A₁，135−A₂、135−C₁及
び135−C₂を分離することに成功し、本発明を完
成した。即ち本発明は、酢酸塩が下記理化学的性質を有
する135物質及びその塩に係る。 (イ) 外観：白色粉末。 (ロ) 融点：明瞭な融点を示さない。 (ハ) 分子量：1170〜1440（フアーストアトム
ボンバードメントマススペクトル法）。 (ニ) 溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキ
シド、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難
溶。アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、エ
ーテルに不溶。 (ホ) 呈色反応：ビウレツト反応、トレンス反応、
キサントプロテイン反応、坂口反応に陽性。ニ
ンヒドリン反応、モリツシユ反応、ベネデイク
ト反応、アンスロン反応、パウリ反応、エール
リツヒ反応、ニトロプルシド反応に陰性。 (ヘ) 元素分析値：Ｈ；6.62〜7.12％、Ｃ；45.65〜
46.40％、Ｎ；14.99〜15.41％。 (ト) 塩基性、酸性、中性の区別：中性。 (チ) 構成成分：グリシン、アラニン、スレオニ
ン、アスパラギン酸及び１種の未知アミノ酸を
含み、更に式で表わされる化合物を含む（酸加水分解によ
る）。 (リ) 紫外吸収スペクトル：λ220nmに末端吸収を
示す。 (ヌ) 赤外吸収スペクトル：ν3400，1655，1520cm
^-1にペプチド特有の吸収を示す。（ル）高速液体クロマトグラフイ：下記分析条
件において保持時間5.0〜13.0分にピークを与
える。分析条件カラム；「マイクロボンダパツク（μ−
Bondapak）C₁₈」（3.9×300mm）（ウオーター
ズ社製、商標）。移動相；35％アセトニトリル／0.1M 塩化アンモニウム溶液。流速；2.0ml／分。検出；uv−220nm。 135物質は、A₁，A₂，C₁及びC₂の４種の物質
を総称するものであり、これら４種の物質は、そ
れぞれスタフイロコツカスアウレウス 209P
（Staphylococcus aureus 209P）、サルジナル
テイア（Sarcina lutea）、バチイルスズブテイ
リス 6633（Bacillus subtilis 6633）及びマイコ
バクテリウム 607（Mycobacterium 607）に
対して抗菌作用を示した。従つて、135物質は医
薬として有用である。 135物質は、その理化学的研究の結果、塩基性
のペプチド抗生物質に属し、グリシン、アラニ
ン、スレオニン、アスパラギン酸を含む他に、１
種の未知アミノ酸と式で表わされる化合物を含有する新規抗生物質群で
あることが確認された。 135物質の理化学的性質を下記に示す。 (i) 135−A₁物質（酢酸塩） (イ) 外観：白色粉末。 (ロ) 融点：明瞭な融点を示さない。 (ハ) 分子量：1227（フアーストアトムボンバ
ードメントマススペクトル法）。 (ニ) 溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキ
シド、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難
溶。アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、エ
ーテルに不溶。 (ホ) 呈色反応：ビウレツト反応、トレンス反応、
キサントプロテイン反応、坂口反応に陽性。ニ
ンヒドリン反応、モリツシユ反応、ベネデイク
ト反応、アンスロン反応、パウリ反応、エール
リツヒ反応、ニトロプルシド反応に陰性。 (ヘ) 元素分析値：Ｈ；6.62％、Ｃ；45.65％、
Ｎ；15.16％。 (ト) 塩基性、酸性、中性の区別：中性、但し遊離
体は塩基性。 (チ) 構成成分：グリシン、アラニン、スレオニ
ン、アスパラギン酸及び１種の未知アミノ酸を
含み、更に式で表わされる化合物を含む（酸加水分解によ
る）。 (リ) 紫外吸収スペクトル：λ220nmに末端吸収を
示す。メタノール中、0.900mg／10mlの濃度で
測定したチヤートを、第１図に示す。 (ヌ) 赤外吸収スペクトル：ν3400，1655，1520cm
^-1にペプチド特有の吸収を示す。チヤートを第
５図に示す。（ル）高速液体クロマトグラフイ：下記分析条
件において保持時間5.0〜6.0分にピークを与え
る。分析条件カラム；「マイクロボンダパツク（μ−
Bondapak）C₁₈」（3.9×300mm）（ウオーター
ズ社製、商標）。移動相；35％アセトニトリル／0.1M 塩化アンモニウム溶液。流速；2.0ml／分。検出；uv−220nm。 (ii) 135−A₂物質（酢酸塩） (イ) 外観：白色粉末。 (ロ) 融点：明瞭な融点を示さない。 (ハ) 分子量：1170（フアーストアトムボンバ
ードメントマススペクトル法）。 (ニ) 溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキ
シド、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難
溶。アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、エ
ーテルに不溶。 (ホ) 呈色反応：ビウレツト反応、トレンス反応、
キサントプロテイン反応、坂口反応に陽性。ニ
ンヒドリン反応、モリツシユ反応、ベネデイク
ト反応、アンスロン反応、パウリ反応、エール
リツヒ反応、ニトロプルシド反応に陰性。 (ヘ) 元素分析値：Ｈ；6.78％、Ｃ；46.11％、
Ｎ；14.99％。 (ト) 塩基性、酸性、中性の区別：中性、但し遊離
体は塩基性。 (チ) 構成成分：グリシン、アラニン、スレオニン
及び１種の未知アミノ酸を含み、更に式で表わされる化合物を含む（酸加水分解によ
る）。 (リ) 紫外吸収スペクトル：λ220nmに末端吸収を
示す。メタノール中、0.930mg／10mlの濃度で
測定したチヤートを、第２図に示す。 (ヌ) 赤外吸収スペクトル：ν3400，1655，1520cm
^-1にペプチド特有の吸収を示す。チヤートを第
６図に示す。（ル）高速液体クロマトグラフイ：上記(i)に示
した条件において保持時間6.5〜7.5分にピーク
を示す。 (iii) 135−C₁物質（酢酸塩） (イ) 外観：白色粉末。 (ロ) 融点：明瞭な融点を示さない。 (ハ) 分子量：1440（フアーストアトムボンバ
ードメントマススペクトル法）。 (ニ) 溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキ
シド、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難
溶。アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、エ
ーテルに不溶。 (ホ) 呈色反応：ビウレツト反応、トレンス反応、
キサントプロテイン反応、坂口反応に陽性。ニ
ンヒドリン反応、モリツシユ反応、ベネデイク
ト反応、アンスロン反応、パウリ反応、エール
リツヒ反応、ニトロプルシド反応に陰性。 (ヘ) 元素分析値：Ｈ；7.07％、Ｃ；46.02％、
Ｎ；15.41％。 (ト) 塩基性、酸性、中性の区別：中性、但し遊離
体は塩基性。 (チ) 構成成分：グリシン、アラニン、スレオニ
ン、アスパラギン酸及び１種の未知アミノ酸を
含み、更に式で表わされる化合物を含む（酸加水分解によ
る）。 (リ) 紫外吸収スペクトル：λ220nmに末端吸収を
示す。メタノール中、1.122mg／10mlの濃度で
測定したチヤートを、第３図に示す。 (ヌ) 赤外吸収スペクトル：ν3400，1655，1520cm
^-1にペプチド特有の吸収を示す。チヤートを第
７図に示す。（ル）高速液体クロマトグラフイ：上記(i)に示
した条件にて保持時間10.0〜11.0分にピークを
示す。 (iv) 135−C₂物質（酢酸塩） (イ) 外観：白色粉末。 (ロ) 融点：明瞭な融点を示さない。 (ハ) 分子量：1383（フアーストアトムボンバ
ードメントマススペクトル法）。 (ニ) 溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキ
シド、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難
溶。アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、エ
ーテルに不溶。 (ホ) 呈色反応：ビウレツト反応、トレンス反応、
キサントプロテイン反応、坂口反応に陽性。ニ
ンヒドリン反応、モリツシユ反応、ベネデイク
ト反応、アンスロン反応、パウリ反応、エール
リツヒ反応、ニトロプルシド反応に陰性。 (ヘ) 元素分析値：Ｈ；7.12％、Ｃ；46.40％、
Ｎ；15.11％。 (ト) 塩基性、酸性、中性の区別：中性、但し遊離
体は塩基性。 (チ) 構成成分：グリシン、アラニン、スレオニン
及び１種の未知アミノ酸を含み、更に式で表わされる化合物を含む（酸加水分解によ
る）。 (リ) 紫外吸収スペクトル：λ220nmに末端吸収を
示す。メタノール中、1.040mg／10mlの濃度で
測定したチヤートを、第４図に示す。 (ヌ) 赤外吸収スペクトル：ν3400，1655，1520cm
^-1にペプチド特有の吸収を示す。チヤートを第
８図に示す。（ル）高速液体クロマトグラフイ：上記(i)に示
した条件にて保持時間11.5〜13.0分にピークを
示す。本発明の135物質は、135物質生産菌を培地に培
養し、得られる培養物から、135物質を分離、採
取することにより製造することができる。 135物質生産菌の一例として、発明者らが中華
人民共和国広東省湛江市の土壌から新たに分離し
たストレプトミセス属に属する菌株を挙げること
ができる。この135物質生産菌の菌学的性質は次
の通りである。Ａ形態学的性質 (a) 胞子形成菌糸の分枝法：単純分枝。 (b) 胞子形成の形態：直鎖状、あるいは鉤状、輪
生枝は認められない。 (c) 胞子の数：約３〜18個。 (d) 胞子の表面構造：平滑。 (e) 胞子の大きさ：0.5〜0.8×0.8〜1.0ミクロン。 (f) 鞭毛胞子の有無：認められない。 (g) 胞子のうの有無：認められない。 (h) 胞子柄の着生位置：気菌糸上。 (i) 菌核形成性の有無：認められない。Ｂ各種培地上の性状および生態学的性質 (a) シユクロース・硝酸塩寒天培地発育：良好。気中菌糸の色：わずかに淡紅色を帯びた淡黄白
色。基生菌糸の色：明るい赤味茶。可溶性色素：わずかに赤味茶を帯びる程度。 (b) グルコース・アスパラギン寒天培地発育：普通。気中菌糸の色：着生せず。基生菌糸の色：薄黄茶。可溶性色素：産生せず。 (c) グリセリン・アスパラギン寒天培地（ISP
No.５）発育：普通。気中菌糸の色：着生せず。基生菌糸の色：薄黄茶。可溶性色素：産生せず。 (d) スターチ・無機塩寒天培地（ISP No.４）発育：貧弱。気中菌糸の色：わずかに白色。基生菌糸の色：無色。可溶性色素：産生せず。 (e) チロシン寒天培地（ISP No.７）発育：良好。気中菌糸の色：わずかに淡紅色を帯びた淡黄白
色。基生菌糸の色：明るい赤味茶。可溶性色素：わずかに赤味茶を帯びる程度。 (f) 栄養寒天培地発育：良好。気中菌糸の色：着生せず。基生菌糸の色：薄黄茶。可溶性色素：産生せず。 (g) イースト・麦芽寒天培地（ISP No.２）発育：良好。気中菌糸の色：わずかに淡紅色を帯びた淡黄白
色。基生菌糸の色：明るい赤味茶。可溶性色素：わずかに赤味茶を帯びる程度。 (h) オートミール寒天培地（ISP No.３）発育：中等度。気中菌糸の色：白色。基生菌糸の色：無色。可溶性色素：産生せず。 (i) クラシニコフNo.１寒天培地発育：良好。気中菌糸の色：淡黄白色。基生菌糸の色：明るい黄橙。可溶性色素：産生せず。 (j) ベネツト寒天培地発育：良好。気中菌糸の色：淡黄白色。基生菌糸の色：明るい赤味茶。可溶性色素：産生せず。Ｃ生理学的諸性質 (a) 生育温度範囲：15〜37℃（至適温度：27〜30
℃）。 (b) ゼラチンの液化（グルコース・ペプトンゼラ
チン培地上）：陰性。 (c) スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天
培地上）：陽性。 (d) セルロースの分解：陽性。 (e) 脱脂乳の凝固：陽性（弱い）。 (f) 脱脂乳のペプトン化：陽性（強い）。 (g) 硝酸塩の還元：陽性。 (h) メラニン様色素の生成（チロシン寒天培地及
びペプトン・イースト鉄寒天培地上）：いずれ
も陰性。 (i) 硫化水素の産生（ペプトン・イースト鉄寒天
培地上）：陰性。Ｄ各炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリーブ
寒天培地上） (a) Ｌ−アラビノース：＋。 (b) Ｄ−キシロース：＋。 (c) Ｄ−グルコース：＋。 (d) Ｄ−フラクトース：＋。 (e) シユクロース：＋。 (f) イノシトール：＋。 (g) Ｌ−ラムノース：＋。 (h) ラフイノース：＋。 (i) Ｄ−マンニツト：＋。上記において、＋は利用することを示す。Ｅ全菌体加水分解物中にＬ，Ｌ−ジアミノピメ
リン酸が存在する。以上のような菌学的性質を有する135物質生産
菌について、シエーリングらのインターナシヨナ
ルジヤーナルシステマテイクバクテリオロ
ジー（International Journal Systematic
Bacteriology）16、313−340、1966、同じく18、
342、1968、同じく19、447、1969、同じく22、
296、1972、ワツクスマンのアクチノマイセテス
（The Actinomycetes）２、1961、バツハマンの
バージーズマニユアルオブデイタミネイテ
イブバクテリオロジー第８版（Bergey′s
Manual of Determinative Bacteriology，8th
edition）により検索した。その結果、135物質生
産菌は、ストレプトミセス属に属することが明ら
かになつた。また、135物質生産菌に特に近縁す
るものとしては、ストレプトミセスロンジスポ
ロフラバス（Streptomyces longisporoflavus）、
ストレプトミセスロンジシミス
（Streptomyces longissimus）及びストレプトミ
セスフルビシミス（Streptomyces
fulvissimus）が挙げられるが、これらと135物質
生産菌とは以下の諸点において異なることも明ら
かになつた。これらの各菌の比較を下記第１表に示す。

【表】

【表】第１表中の炭素源の利用性において、＋は利用
することを、±はおそらく利用することを、−は利
用しないことを、それぞれ示す。第１表から明らかな通り、135物質生産菌は、
ストレプトミセスロンジスポロフラバスとの比
較では胞子形成の形態、ゼラチンの液化、炭素源
の利用性（シユクロース、ラフイノース）におい
て、ストレプトミセスロンジシミスとの比較で
はメラニン様色素の生成（ペプトン・イースト鉄
寒天培地）、可溶性色素の産生において、またス
トレプトミセスフルビシミスとの比較ではメラ
ニン様色素の生成（ペプトン・イースト鉄寒天培
地）、硫化水素の産生、炭素源の利用性（Ｄ−キ
シロース、ラフイノース）において、それぞれ明
確に相違している。これらの結果から、本発明者は、135物質生産
菌をストレプトミセス属に属する新種であると認
め、ストレプトミセスポリカルボフイルスノ
ーベルスピーシーズ（Streptomyces
polycarbophilus novel species）と命名した。
この135物質生産菌は、工業技術院微生物工業技
術研究所に受託番号微工研条寄第788号（FERM
BP−788）として寄託されている。本発明で使用
する上記135物質生産菌は、例えばＸ線、紫外線
等の照射処理やナイトロジエンマスタード、アザ
セリン、亜硝酸、Ｎ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ
−ニトログアニジン（NTG）、２−アミノプリン
等の変異誘起剤処理、形質導入、形質転換、接合
等の通常用いられる変異処理によつて135物質の
生産能力を高めることができる。次に、本発明の135物質を例えば上記のような
ストレプトミセス属に属する135物質生産菌を培
地に培養することによつて製造する場合について
説明する。培養方法は、原則的には一般微生物の培養方法
に準ずるが、通常は液体培地による撹拌通気培養
法が有利である。培養に用いられる培地としては
135物質生産菌が利用し得る栄養源を含有する培
地であればよい。すなわち、合成培地、半合成培
地或いは天然培地が使用できる。培地の組成は、
炭素源としては例えばグルコース、マンノース、
グリセリン、シユクロース、糖蜜、澱粉、液化澱
粉等が用いられ、窒素源としては肉エキス、カザ
ミノ酸、ペプトン、グルテンミール、コーンミー
ル、綿実油、大豆粉、コースチープリカー、乾燥
酵母、リン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、
尿素等が用いられる。また、例えばリン酸水素二
ナトリウム、リン酸二水素カリウム、炭酸カルシ
ウム、塩化マグネシウム等の金属のリン酸塩、炭
酸塩、塩化物等の無機塩も必要に応じて添加され
る。また、培養中発泡の著しい時には、例えば大
豆油、亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール、
テトラデカノール、ヘプタデカノール等の高級ア
ルコール類、シリコン化合物等の消泡剤を適宜添
加してもよい。135物質生産菌は、20〜37℃で生
育する。135物質の産生のためには、25〜37℃の
範囲で培養するのが好ましい。本培養の培養時間
は、50〜100時間程度が適当であり、培地の濃厚
化に従つて培養時間を更に延長してもよい。撹拌
通気培養で通常行なわれるように培地へ滅菌空気
を吹き込むのがよい。微生物の効率的生育のため
には、タンク培養に用いる空気量を１分間あたり
栄養培地１容量部に対して0.3〜0.6容量部程度用
い、毎分200〜400回転程度で撹拌すればよい。以上述べた培養条件は使用菌株の特性に応じて
それぞれ最適の条件を選択して適用される。次に、このようにして得られた135物質生産菌
の培養物から135物質を分離、精製する方法につ
いて述べる。135物質の分離、精製は、微生物の
培養物から抗生物質を分離、精製する公知の手段
を適宜選択し組合せることにより行なうことがで
きる。すなわち減圧濃縮、凍結乾燥、溶媒抽出、
液性交換例えば陽イオン交換樹脂、陰イオン交換
樹脂、非イオン交換性吸着樹脂等の樹脂による処
理、活性炭、けい酸、シリカゲル、アルミナ等の
吸着剤による処理、あるいは結晶化、再結晶等の
各種手段を単独あるいは任意の順序に組合せまた
反復して用いることにより、135物質の分離、精
製を行なうことができる。 135物質は遊離体または各種塩の形態とするこ
とができる。135物質に用いられる塩としては、
医薬上で通常用いる塩を意味し、例えばナトリウ
ム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カ
ルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属
塩、及びトリメチルアミン、トリエチルアミン等
の有機アミン塩等を、また用いられる酸としては
塩酸、硝酸、硫酸等の無機酸塩あるいはギ酸、酢
酸、シユウ酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、
パラトルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の
有機酸塩等を挙げることができる。実施例次に、実施例及び参考例を挙げて本発明をより
具体的に説明する。参考例１中華人民共和国広東省湛江市にて地表より５〜
15cmの深さの土壌約１〜２ｇを採取した。この土
壌0.5ｇを試験管に入れ、５mlの滅菌生理食塩水
を加えてよく振り混ぜ、静置した後、上清液１滴
を滅菌生理食塩水１mlの入つたシヤーレに加え
た。更にあらかじめ加温溶解して約45℃に調整し
たマルトース−酵母エキス寒天培地10mlを加えて
よく混和し、放冷凝固させた。この平板を27℃で
４日間培養し、顕微鏡下で放線菌を選択して採取
し、寒天培地で27℃で純培養を行ない、135物質
生産菌（ストレプトミセスポリカルボフイルス
ノーベルスピーシーズ、微工研条寄第788号）
を得た。実施例１グルコース1.0％、大豆粉1.0％、塩化ナトリウ
ム0.5％、炭酸カルシウム0.1％の組成を有する液
体培地100mlに上記ストレプトミセスポリカル
ボフイルスノーベルスピーシーズを接種し、
28℃で72時間振盪培養し、前培養液を作製した。魚粉1.5％、グルコース1.0％、スターチ1.0％、
硫酸アンモニウム0.5％、塩化ナトリウム0.5％、
炭酸カルシウム0.5％の組成を有する液体培地100
を200容の醗酵槽に入れ、これに前記の前培
養液１を接種し、28℃で96時間培養を行なつ
た。通気量は60／分、回転数は250r.p.mであ
る。以下、スタフイロコツカスアウレウス
209Pに対する抗菌活性を指標として、活性物質
を分離した。培養終了後、培養物をシユウ酸でPH2.0に調整
し、激しく撹拌した。過した後、5N水酸化ナ
トリウム溶液にてPH6.5に調整し、沈殿物を除去
した。液を陽イオン交換樹脂「ダウエツクス
50W×８」（ダウケミカル社製、商標）のカラム
に通じ活性物質を吸着させた。少量の水にて洗浄した後、0.4％の酢酸を含む
アセトンにて活性物質を溶出させた。アセトンを
減圧留去した後再度5N水酸化ナトリウム溶液に
てPH3.2に調整し、遠心分離にて沈殿物を除去し
た。更に、この上清液を5N水酸化ナトリウムに
てPH7.5に調整ししばらく放置すると、活性物質
が析出した。沈澱物を別し、0.05N塩酸に再溶
解して不溶物を除いた。この酸性溶液に陰イオン
交換樹脂「アンバーライトIRA−411」（OH型）
（ロームアンドハース社製、商標）を加えて
PH4.0に調整し、溶液を凍結乾燥して白色粗粉末
3.25ｇを得た。実施例２実施例１で得られた粗粉末１ｇを陽イオン交換
樹脂「CM−トヨパール」（NH₄ ⁺型）（東洋曹達
工業(株)製、商標）のカラムに通じ、塩化アンモニ
ウムの0.1Nから1.0Nまでの勾配溶出を行なうと、
活性のみられるＡ画分とＣ画分がそれぞれ分離し
て溶出した。Ａ画分及びＣ画分をそれぞれ独立に
クロマトグラフイ用樹脂「MCI gel CHP−20p」
（三菱化成工業(株)製、商標）に通じて吸着させた。
水洗した後0.25％のトリフルオロ酢酸を含む70％
アセトニトリル水溶液にて溶出するとＡ画分から
は135−A₁物質と135−A₂物質とが分離して溶出
し、またＣ画分からは135−C₁物質と135−C₂物
質とが分離して溶出した。これら４つの活性物質
をそれぞれ集めて、凍結乾燥し135−A₁物質30
mg、135−A₂物質20mg、135−C₁物質50mg及び135
−C₂物質20mgをそれぞれトリフルオロ酢酸塩と
して得た。実施例３実施例１で得られた粗粉末１ｇを前記「CM−
トヨパール」のカラムに通じ、塩化アンモニウム
の0.1Nから1.0Nまでの勾配溶出により活性のみ
られるＡ画分とＣ画分の粗精製品を得た。これら
をそれぞれ30％アセトニトリル水溶液にて10mg／
mlの濃度に溶解し、高速液体クロマトグラフに対
して活性のみられるピークを分取精製した。用い
た分取条件は次の通りである。カラム：「ラジアルパツク（Radial−pak）
C₁₈」（ウオーターズ社製、商標）（８×100
mm）。移動相：25％アセトニトリル／0.1M塩化アンモ
ニウム（Ａ画分の場合）。32％アセトニトリ
ル／0.1M塩化アンモニウム（Ｃ画分の場合）。流速：1.5ml／min。検出：uv−220nm。Ａ画分については12〜14分及び14〜16分の溶出
液を分取し、それぞれA₁画分及びA₂画分とした。
またＣ画分については11〜13分及び13〜15分の溶
出液を分取し、それぞれC₁画分およびC₂画分と
した。これら４種の溶出液は、ロータリーエバポ
レータにてアセトニトリルを留去した後、それぞ
れ独立に前記「MCIgel CHP−20p」のカラムに
通じて吸着させた。水洗を十分に行なつた後、ア
セトニトリル／酢酸／水（40：0.5：60）にて活
性成分をそれぞれ溶出させた。各溶出液をロータ
リーエバポレータにてアセトニトリルを留去した
後、凍結乾燥することにより、135−A₁物質10
mg、135−A₂物質６mg、135−C₁物質16mg及び135
−C₂物質８mgをそれぞれ酢酸塩として得た。

【図面の簡単な説明】

第１〜４図は、それぞれ135−A₁物質、135−
A₂物質、135−C₁物質及び135−C₂物質の各酢酸
塩のメタノール中での紫外吸収スペクトルを示
す。第５〜８図は、それぞれ135−A₁物質、135
−A₂物質、135−C₁物質及び135−C₂物質の各酢
酸塩の臭化カリウム錠で測定した赤外吸収スペク
トルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１酢酸塩が下記理化学的性質を有する135物質
及びその塩。 (イ) 外観：白色粉末。 (ロ) 融点：明瞭な融点を示さない。 (ハ) 分子量：1170〜1440（フアーストアトム
ボンバードメントマススペクトル法）。 (ニ) 溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキ
シド、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難
溶。アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、エ
ーテルに不溶。 (ホ) 呈色反応：ビウレツト反応、トレンス反応、
キサントプロテイン反応、坂口反応に陽性。ニ
ンヒドリン反応、モリツシユ反応、ベネデイク
ト反応、アンスロン反応、パウリ反応、エール
リツヒ反応、ニトロプルシド反応に陰性。 (ヘ) 元素分析値：Ｈ；6.62〜7.12％、Ｃ；45.65〜
46.40％、Ｎ；14.99〜15.41％。 (ト) 塩基性、酸性、中性の区別：中性。 (チ) 構成成分：グリシン、アラニン、スレオニ
ン、アスパラギン酸及び１種の未知アミノ酸を
含み、更に式で表わされる化合物を含む（酸加水分解によ
る）。 (リ) 紫外吸収スペクトル：λ220nmに末端吸収を
示す。 (ヌ) 赤外吸収スペクトル：ν3400，1655，1520cm
^-1にペプチド特有の吸収を示す。（ル）高速液体クロマトグラフイ：下記分析条
件において保持時間5.0〜13.0分にピークを与
える。分析条件カラム；「マイクロボンダパツク（μ−
Bondapak）C₁₈」（3.9×300mm）（ウオーター
ズ社製、商標）。移動相；35％アセトニトリル／0.1M 塩化アンモニウム溶液。流速；2.0ml／分。検出；uv−220nm。２分子量が1227、元素分析値がＨ；6.62％、
Ｃ；45.65％、Ｎ；15.16％で、且つ高速液体クロ
マトグラフイの保持時間が5.0〜6.0分である特許
請求の範囲第１項に記載の135物質及びその塩。３分子量が1170、元素分析値がＨ；6.78％、
Ｃ；46.11％、Ｎ；14.99％で、且つ高速液体クロ
マトグラフイの保持時間が6.5〜7.5分である特許
請求の範囲第１項に記載の135物質及びその塩。４分子量が1440、元素分析値がＨ；7.07％、
Ｃ；46.02％、Ｎ；15.41％で、且つ高速液体クロ
マトグラフイの保持時間が10.0〜11.0分である特
許請求の範囲第１項に記載の135物質及びその塩。５分子量が1383、元素分析値がＨ；7.12％、
Ｃ；46.40％、Ｎ；15.11％で、且つ高速液体クロ
マトグラフイの保持時間が11.5〜13.0分である特
許請求の範囲第１項に記載の135物質及びその塩。