JPS63126890A

JPS63126890A - 抗生物質ａ／１６６８６フアクターａ↓１

Info

Publication number: JPS63126890A
Application number: JP62142398A
Authority: JP
Inventors: ブルーノ・カバルレリ; エンリコ・セルヴア
Original assignee: Gruppo Lepetit SpA; Lepetit SpA
Current assignee: Gruppo Lepetit SpA
Priority date: 1980-08-16
Filing date: 1987-06-09
Publication date: 1988-05-30
Also published as: AU7355381A; ES8205416A1; FI66022B; GR74561B; HK97986A; AU548780B2; AR225540A1; IE811869L; FI812496L; PT73526B; KR840001255B1; US4427656A; DK362681A; PH17270A; EP0046201B1; JPS6254432B2; PT73526A; DE3163075D1; MY8700106A; IL63478A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、任意に抗生物質Ａ／１６６８６ファクターＡ
２と命名した抗生物質と同時に製造される抗生物質Ａ／
１６６８６ファクターＡ１およびＡ、に関する。

本質的に純粋な形で提供される抗生物質Ａ／１６６８６
ファクターＡ２は塩素含有抗生物質であり、この抗生物
質は、分類学的に７クチノプラネス（Ａ　ｃｔｉｎｏｐ
ｌａｎｅｓ）属の新規な種として特徴づけられた、従来
記載されていない菌株を培養することによって製造され
る。

インドのバグハルボッド（Ｖ　ａｇｌ＋ａ　Ｉ　ｂｏｄ
　）で収集した土の試料から単離した、この菌株の培養
物は、１９７９年１月３０日１こＡＴＣＣ（アメリカン
・タイプ・カルチャー・コレクション−米国メリーラン
）’州２０８５２０ツクビルφパークロース・ドライブ
１２３０１）の永久培養物収集所に寄託され、受は入れ
番号ＡＴＣＣ３３０７６が付された。また、本菌株は昭
和５５年４月５日に工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託され、微生物受託番号［微工研菌寄第５４７７号」
として保管されている。

この培養物により製造される主要なファクターである抗
生物質Ａ／１６６８６ファクターＡ２のほかに、他の２
種類の少量の個々の抗生物質ファクターが、新規なＡ　
ｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓの培養により製造された発酵培
養物から単離および分離された。

これらの個々の抗生物質を任意に抗生物質Ａ／１６６８
６ファクターＡ１お上りＡ、と命名する。抗生物質Ａ／
１６６８６ファクターＡ２は、菌株Ａｃｔｉｎｏｐｌａ
ｎｅｓ　　ｓｐ、　Ａ　Ｔ　ＣＣ３３０７６を、液中（
ｓｕｂａｔｅｒｇｅｄ）好気発酵条件下に、実質的なレ
ベルの抗生活性（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　　ａｃｔｉｖ
ｉｔｙ）が生成するまで、培養することによって製造さ
れる。

抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡｔは、極性有機溶
媒で培養液および菌糸体の両者を抽Ｗすることにより、
ファクターＡＩおよびＡ、との抗生物質錯体（ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃ　ｃｏｍｐｌｅｘ）として回収され、次い
でクロマトグラフ技術、たとえば、ＨＰ　Ｌ　Ｃ，カラ
ムクロマトグラフィーおよび分取薄層クロマトグラフィ
ーにより、Ａ／１６６８６錯体から分離され、かつ本質
的に純粋な単一の抗生物質化合物として単離される。ま
た、同じ技術は、同時に製造されるファクターＡ、およ
びＡ。

の分離にも有効である。

抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ２、ならびに同時
に製造されるファクターＡ１およびＡ。

は塩基の特性をもち、それゆえ酸付加塩を形成できる。

抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ、の生理学的に許
容しうる酸付加塩、ならびに抗生物質Ａ／１６６８６フ
アクターＡ、およびＡ３　のそれらは、本発明の一部分
であることを意図する。

１生理学的に許容しうる”酸付加塩は、製薬学的に許容
しうる塩、すなわち化合物の全体としての毒性が非塩の
形に関して増加しない塩でもある。

代表的なかつ適当な酸付加塩は、有機または無機の酸、
たとえば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、酒
石酸、酢酸、乳酸、グルタル酸、メタンスルホン酸など
との付加塩である。

この分野において普通に用いられている方法に従い、Ａ
／１６６８６フアクターＡ、　、Ａ２およびＡ、の遊離
塩基を対応する酸付加塩から製造することができ、ある
いは逆にＡ／１６６８６フアクターＡＩ　、Ａ２および
Ａ、を酸付加塩として対応する遊離塩基から製造するこ
とができる。抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡＩ　
、Ａ２およびＡ、の遊離塩基は、対応する酸付加塩から
、たとえば、酸付加塩の溶液を水酸化バリウムで処理す
ることにより得られ、一方、遊離塩基を選択した有機ま
たは無機の酸と不活性溶媒溶液中で反応させると、対応
する酸付加塩が得られる。

有用性についての考察を簡単にするため、Ａ／１６６８
６フアクターＡＩ　、Ａ！およびＡ３、および対応する
非毒性の生理学的に許容しうる酸付加塩から成る群より
選ばれた化合物を、Ａ／　１６６８６化合物という用語
で表わす。

Ａ／１６６８６化合物はある種の病原性細菌、ことにグ
ラム陽性細菌の生育を生体外で抑制する。

その上、Ａ／１６６８６化合物を非経口に投与すると、
マウスにおける実験的感染に対する高度の保護が得られ
る。さらに、Ａ／１６６８６化合物は虫歯（ｄｅｎｔａ
ｌ　　ｃａｒｉｅｓ）の予防および処置に有用である。

前述のように、抗生物質Ａ／１６６８６は、Ａｃｔｉｎ
ｏｐｌａｎｅｓ属のＡｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ　ｓｐ。

ＡＴＣＣ３３０７６と命名される新規な菌株を培養する
ことによって製造される。この菌株の特性を以下に説明
する。

形態この菌株は、オレンジ色の基生（ｓｂｂｓｔｒａｔｅ）
菌糸体を有する種々の培地でよく生長する。それは色素
を生成しない。気（ａｅｒｉａｌ）菌糸体は常うはジャ
ガイモ寒天でのみわずかに形成し、そして非常に不規則
な表面と５．０〜９．０μｍの範囲の直径をもつ球状で
ある。胞子のうの放出は、胞子のうの壁の破烈後に観察
される。不完全球状胞子は運動性である（直径１．０〜
１６５μｍ）。細胞壁の成分を分析すると、メリージア
ミノピメリン酸とＤ型の糖パターンが明らかとなる（Ｌ
ｅｃｈｅｖａ−１ｉｅｒ　ｅｔ　　ａｌ、−Ｃｈｅｍｉ
ｃａｌ　　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｓ　　ａ　　ｃｒ
ｉｔｅｒｉｕｍ　　ｉｎ　　ｔｆｉｅ　　ｃｌａｓｓｉ
ｆｉｃａ−ｔｉｏｎ　　ｏｆ　　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅ
ｔｅｓ、Ａｄｖ、ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｑ）’＊　１　ｊＬ　１９７１．ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒ
ｅｓｓ、Ｎ、Ｙ、）。

培養特性表１は、シャーリング（Ｓｈ　ｉ　ｒ目ｎｇ）およびゴ
ツトリーブ（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）　　（Ｉｎｔｅｒｎ、
Ｊ、Ｓｙｓｔｅｍ。

Ｈａｃｔ、１６，３１３−３４０．１９６６）が示唆す
る。

徨々の標準培地およびワクスマン（Ｗａ　ｋ　ｓｍａ　
ｎ　）（Ｔｈｅ　Ａｃｔ　ｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、　Ｖ
ｏｌ、　’ｆＪ−’Ｉ’ｈｅ　Ｗｉ　ｌ　Ｉ　ｉ−ａｍ
ｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋｉｎｓ　Ｃｏ、　１９６１）　　
が推奨する他の培地で培養したＡｃｔｉｎｏｐｌａｎｅ
ｓ　ＡＴＣＣ３３０７６の培養特性を報告するものであ
る。培養特性は３０℃で６〜１４日間の培養後に決定し
た。

表　　　Ｉ培養特性培地のいくつかの番号は、シャーリングおよびゴツトリ
ープ（Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｆｏｒ　　ｃｈａｒａｃｔｅ
ｒｉ−ｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
　５ｐｅｃｉｅｓ　−Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｊ、　Ｓｙｓｔ
ｅｍ、　Ｂａｃｔ、　１６．３１３−３４０゜１９６６
）が与えたものである。

培　地　　　　　　培養特性培地Ａ２（酵母抽出物　　おびただしい生長、し−モル
ト寒天　　　　　　わのある表面、うすかっ色１２Ｈ１
２培地高３（オートミー　　わずかな生長、薄い淡ル寒天
）　　　　　　　　オレンジ９Ｂ６培地４４　（８機塩
−で　　中程度の生長、外皮のんぶん寒天）　　　　　
　ある表面、オレンジ］ｌＬ１２培地扁５（グリセロ−わずかの生長、ヒアリルーアスパ
ラギン寒天）　　ｙ　（ｈｙａｌｉｎｅ）培地１６６（
ペプトン−わずかの生長、ヒアリ酵母抽出液−鉄寒天）
　　ンないし淡かっ色培地４６（チロシン寒　　わずか
の生長、なめら天）　　　　　　　　　　かな表面、か
っ色Ｄ１１オートミール寒天（ワ　　おびただしい生長、しクスマ
ン（Ｗａ　ｋ　ｓｍａ　ｎ　）　　　　わのある表面、
オレンによる）　　　　　　　　　ジないしかっ色２Ｃ
１０ヒツキー（Ｈｉｃｋｅｙ）　　　　おびただしい生長、
外およびトレスナー　　　　皮のある表面、オレン（Ｔ
ｒｅｓｎｅｒ）の寒天　　　　ジ１１Ｇ８ザベツク（Ｃ
ｚａｐｅｃｋ）　　　　中程度の生長、外皮のグルコー
ス寒天　　　　　ある表面、オレンジグルコースアスパ
ラギ　　わずかの生長、外皮のン寒天　　　　　　　　
　るる表面、淡オレンジ栄養寒天　　　　　　　　中程
度の生長、なめらかな表面、オレンジジャガイモ寒天　　　　　おびただしい生長、しわのあ
る表面、こはくないしかっ色１２Ｅ１０ペネツ）　（Ｂｅｎｎｅｔｔ）　　　　おびただしい生
長、しの寒天　　　　　　　　　わのある表面、オレン
ジ１１０８リンゴ酸カルシウム寒　　中程度の生長、なめら天　　
　　　　　　　　　かな表面、淡オレンジ　０Ｃ６スキムミルク寒天　　　　おびただしい生長、しわのあ
る表面、オレンジ９Ｌ２ンアベツク（Ｃｚａｐｅ−中程度の生長、外皮のｃｋ）
寒天　　　　　　　　ある表面、オレンジ０Ｄ７卵寒天　　　　　　　　　中程度の生長、なめらかな表
面、ヒアリンないしうすオレンジペプトングルコース寒　　おびただしい生長、し天　　
　　　　　　　　　わのある表面、オレンジ１１Ｇ１１寒天　　　　　　　　　　非常にわずかの生長、なめら
かな表面、ヒアリンレフラー　　　　　　　　非常にわずかの生長、（Ｌｏ
ｅｆｆｌｅｒ）血清　　　なめらかな表面、オレンジジャガイモ　　　　　　　わずかの生長、外皮のある、
淡かっ色ゼラチン　　　　　　　　わずかの生長、淡オレンジセルロース　　　　　　　非常にわずかの生長、薄い、
ヒアリン文字および番号は、メルノ（Ｍａｅｒｚ）およびポウＡ
／　（Ｐａｕｌ）−Ａ　ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ＋′　ｏ
ｆ　　ｃｏｆｏｒ−Ｍｃ（）ｒａｗ　Ｈｉ　ＩＩ　　Ｉ
ｎｃ、、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９５０−に従って決
定した色である。

炭素の利用表■は、プリドハム（Ｐｒ　ｉｄｈａｍ）およびゴツト
リープ（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）（Ｊ、Ｂａｃｔ、５６，１
０７゜１９４８）の方法に従って検査した炭素の利用を
報告するものである。

表　　　【Ｉ炭素源　　　　　　利用性イノシトール　　　　　　　　　　　ナフルクトース　
　　　　　　　　　　　＋ラムノース　　　　　　　　
　　　　　＋マンニトール　　　　　　　　　　　−キ
シロース　　　　　　　　　　　　　＋ラフィノース　
　　　　　　　　− アラビノース　　　　　　　　　＋セルロース　　　　　　　　　　− スクロース　　　　　　　　　　＋グルコース　　　　　　　　　　＋マンメース　　　　　　　　　　＋ラクトース　　　　　　　　　　− サルシン　　　　　　　　　　　＋＋　＝　陽性の利用性 −＝　生長せず表■は、該菌株の生理学的特性を報告するものである。

表　　　　■ 試　　験　　　　　　　　　　　　　　　　　　結　果
でんぷんの加水分解　　　　　　　　　　陽　性Ｈ７Ｓ
の生成チロシン反応　　　　　　　　　　　　　陰　注力ゼイ
ンの加水分解　　　　　　　　　　陽　性リンゴ酸カル
シウムの可溶化　　　　　　陰　性ゼラチンの液化　　
　　　　　　　　　陽　性セルロースの分解他の有機体を用いる場合のように、Ａ　／１６６８６フ
アクタ−Ａ２生成菌株Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ　ｓｐ
。

ＡＴＣＣ３３０７６を変異に付する。たとえば、ＡＴＣ
Ｃ３３０７６菌株の人工変異体および突然変異体は、種
々の突然変異原、たとえば、紫外線、Ｘ線、高周波、放
射線および化学物質で処理して得ることができる。この
Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ橿に属しかつ抗生物質Ａ／１
６６８６フアクターＡ、を生成する天然および人工の変
異体および突然変異体のすべてを、本発明において使用
できる。

Ａ／１６６８６抗生物質を製造するため、菌株Ａｃｔｉ
ｎｏｐｌａｎｅｓ　ｓｐ、ＡＴＣＣ３３０７６を、好気
条件下に、同化可能な炭素源、同化可能な窒素源および
無機塩類を含有する水性栄養培地中で培養する。この培
地は発酵分野で通常用いられている多数の栄養培地のい
ずれづあってもよいが、ある種の培地が好ましい。即ち
、たとえば、好ましい炭素源は種々の純度の等級のグル
コース、フルクトース、マンノース、スクロースなどで
アル。

好ましい窒素源は、大豆ミール、ペプトン、肉エキス、
酵母エキス、トリプトン、アミノ酸などである。珊地中
に混和できる無機塩類には、ナトリウム、カリウム、鉄
、亜鉛、コバルト、マグネシウム、カルシウム、アンモ
ニウム、塩素、炭酸、硫酸、硝酸などのイオンを生成し
うる普通の可溶性塩類がある。通常、抗生物質生成菌株
は振とりフラスコ内で予備培養し、次いでこの培養物を
びん発酵器に接種して、実質的量のＡ／１６６８６抗生
物質を製造する。予備培養に使用する培地は、大型の発
酵に使用するものと同一であることができるが、他の培
地を使用することもできる。

Ａ／１６６８６生成菌株は、約り０℃〜約３７℃、好ま
しくは約２８〜３０℃の温呟において生長させることが
できる。

発酵の間、抗生物質の製造に引き続いて、培養液または
菌糸状固体の抽出液の試料を抗生物質活性について試験
できる。

Ａ／１６６８６抗生物質について感受性であることが知
られている有機体は、この目的に有用でちる。１つのこ
とに有用な検定有機体は、５ａｒｃｉｎａ　　１ｕｔｅ
ａ　ＡＴＣＣ９３４１である。バクオアツセイは、寒天
板上の寒天拡散法により好都合に実施される。抗生活性
の最大の生成は、一般に約３日目〜５日目の間に起こる
。菌株Ａｃｔｉ−ｎｏｐｌａｎｅｓ　ｓｐ、ＡＴＣＣ３
３０７６の発酵の間に生成した抗生物質は、主として菌
糸体塊に見い出される。したがって、Ａ／１６６８６抗
生物質の好ましい回収法は、分離した菌糸体の抽出によ
る方法である。

菌糸体塊の抽出はメタノールを用いて最もよく実現され
るが、他のアルコール類およびアセトンも適当である。

Ａ／１６６８６抗生物質は、抽出溶媒から日常の方法に
より回収して、Ａ／１６６８６抗生物質の混合物すなわ
ちＡ／１６６８６錯体が得られる。Ａ／１６６８６錯体
はさらにｆｉ＃製し、次いで個々のファクターを互いに
分離する。Ａ／１６６８６＆ｉ体の単一成分への分離は
、本質的にクロマトグラフィ一手段を含む種々のよく知
られた方法により達成できる。ファクターを最適に分離
するために、逆相ＨＰＬＣが好ましい。この上うなＨＰ
ＬＣ分離において、好ましいカラムはμ−ポ、ダパク（
Ｂｏｎｄａｐａｃｋ■）ｃｌ、であり、そして好ましい
移動相は変化する比の水性ＨＣＯＯＮＨ。

とＣＨ，ＣＮとの混合物である。抗生物質Ａ／１６６８
６フアクターＡ、の大規模分離には、カラムクロマトグ
ラフィーを使用することが好ましい。このようなカラム
分離において、好ましい吸着剤１ｄ７７バーライト（Ａ
ｍｂｅｒｌｉｔｅ■）ＸＡＤであり、そして好ましい溶
媒系は水とアセトニトリルとの混合物およびアンモニウ
ムホルミエート（ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｆｏｒｍｉａｔｅ
）　　とアセトニトリルの混合物である。カラムクロマ
トグラフィーによる少量のＡ１およびＡ、の分離は実施
できるが、それＦｉ濃縮したフラクションの引き続くカ
ラム分離を必要とする。再びアンバーライトＸＡＤ■は
好ましい吸着剤であり、そして水とアセトニトリルとの
混合物およびアンモニウムホルミエートとアセトニトリ
ルとの混合物は好ましい溶媒系である。

Ａ／１６６８６フアクターＡ２Ａ／１６６８６フアクターＡ、は、約２１０〜２２０℃
において分解しながら溶融する白色非晶質粉末である。

Ａ／１６６８６フアクターＡ、は、水、ジメチルホルム
アミド、水性メタノールおよび０．１ＮＨＣＩ　　に非
常に可溶性であり：無水のエタノールおよびブタノール
に難溶性であシ：そしてＮａＨＣＯ，で飽和した溶液の
添加により水溶液から沈殿する。

不活性雰囲気中で約１４０’で前もって乾燥したＡ／１
６６８６Ａ、ファクターＡ２の元素分析は次の大体の百
分率組成（平均）を示す：炭素５４．５７係、水素６．
１９係、窒素１０．８８係。

塩素分析は次の百分率を示す：塩素１．３７％。

ヌジョ−ｐｙ　（ｎｕｊｏｌ）中でのＡ／１６６８６フ
アクターＡ２の赤外吸収スペクトルを添付の第１図に示
す。次の吸収極大が観測される：３２９０゜２９３０、
および２８６０　（ｎｕｊｏｌ）、　１７６５　。

１６３５．１５１０．１４５５および１３７５（ｎｕｊ
ｏｌ）、１２４０，１１７５，１１３０゜１０６０．１
０１５，９７５，８４０および８１５　ｃｍ　’　：Ａ／１６６８６フアクターＡ２の紫外線吸収スペクトル
は添付の第２図に示すとおりであり、次の吸収極大を示
す・：ａ）　中性メタノール中ｂ）　　０．１ＮＨＣＩを含有するメタノール中ｃ　）
　　０．Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨを含有するメタノール９約３
００ｎｍ　（肩）Ａ／１６６８６フアクターＡ２は、パルス・フォーリア
ー・トランスフオーム・ブルーカー（Ｐｕｌｓｅ　Ｆｏ
ｕｒｉｅｒ　Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ　Ｂｒｕｋｅｒ）ＷＨ
２７０低温スペクトロメーターでＤＭＦ−ｄ。

／Ｄ、０　１　：　１　（Ｖ／Ｖ）溶液（内部標準とし
てＴＭ８．δ０．００ｐｐｍ）中で記録Ｌ７’Ｃ１２Ｃ
１２７ＯのＩＨＮＭＲスペクトル、第３図、において次
の信号を与える。

■　特にほぼ１．５３　ｐ　ｐｍ　（Ｊ＝７Ｈｚ）、１
．２０１）ｐｍ　（Ｊ＝６Ｈｚ）および１．０７ｐｐｍ
（Ｊ＝５Ｈｚ）　　を中心とする二重線の、約５１の脂
肪族プロトンに相当する０、５〜３ｐｐｍにおける信号
のグループ。

（１１）特にほぼ５．６２ｐｐｍの一重線の、約４３の
オレフィン型のプロトンまたは異種原子に結合した炭素
のプロトンに相当する３〜６．５ｐｐｍにおける信号の
グループ。

Ｇ１１）　　特にほぼ７．６０　ｐ　ｐｍ　（Ｊ＝８Ｈ
ｚ　）　、　７．４９ｐｐｍ（Ｊ＝８Ｈｚ）および６．
４６　ｐｐｍ　（Ｊ＝８Ｈｚ）を中心とする二重線の、
約３９の芳香族型のプロトンに相当する６、５〜３ｐｐ
ｍにおける信号のグループ。

８　ｐｐｍ　、　２．８５　ｐｐｍおよび３．０１ｐｐ
ｍにおける一重線と、４．７３ｐｐｍにおける一重線は
、溶媒混合物中に存在するそれぞれＤＭＦおよびＨＤＯ
に相当する。

Ａ／１６６８６フアクターＡ、は、比旋光度ムぴ６°＝
＋７３±４°（ｑ＝０．４９、Ｈ，Ｏ）　　を有する。

Ａ／１６６８６フアクターＡ、の検出有機体としてＢ、
５ｕｂｔｉｌｌｉｓ　ＡＴＣＣ６６３３を用いる穆々の
ペーパークロマトグラフィー系におけるＲ、値は、次の
表に記載するとおりである。

表　　■ Ａ／１６６８６フアクターＡ２のクロマトグラフィーの
挙動〔ホワットマｙ　（Ｗｈａｔｍａｎ）Ｉ＆ｌペーパ
ー）Φ 溶離系　　　　　　　　　　　　　Ｒｆ値１）　　ゼー
レンセン（Ｓδｒｅｎｓｅｎ）緩衝剤、ｐＨ６，０で飽
和したｎ− ブタノール　　　　　　　　　　　０．００２１　　２
％のｐ−トルエンスルホン酸を含有する水で飽和したｎ
−ブタノール　　　　　　　　　　　　０．００３）　　２
４の水酸化アンモニウムを含有する水で飽和したｎ−ブ
タノール　　　　　　　　　　　　　０．００４）　　　ｎ
−ブタノールで飽和したゼーレンセン緩衝剤、ｐ）１６
．ｏ　　　　　Ｏ，０５５）　　　ｎ−ブタノール：メ
タノール：水　　　４：１：２　　　　　　　　　　　
０．４８６）　　水で飽和した酢酸エチル　　　　　０
．００７）　　　ｎ−ブタノール：酢酸：水２：１：１　　　　　　　　　　　０．４４≠　下降ク
ロマトグラフィーＲｍ：４ｏ個ｇ：Ｈ２Ｏ：ＣＨ，ＣＮ　１：１（Ｖ／Ｖ）中に溶けた
５０μｍの化合物（２ｍ９／ｊＩｊ）棟々の薄層クロマ
トグラフィー系におけるＡｌ１６６８６フアクターＡ２
のＲｆ値を、下表に記載する（条件は表の下に示す）：表　　■ 溶離系（Ｖ：Ｖ：Ｖ）　　　　　　　Ｒ，値１）　水性
２．５係ＨＣＯＯＮＨ４：ＣＨ，ＣＮ６５：３５＊　　
　　　　　　　　　０．３６２）　　　ｎ−ブタノール
：酢酸：水４：２：５　　　　　　　　　　　０．８０３）　　　
ｎ−ブタノール：酢酸：水４：２：５　　　　　　　　　　　０．５２４）　　ｎ
−プロパツール：ｎ−ブタノール：　ＩＮ　ＮＨ４０Ｈ２：３：４（上層）　　　　　　　　　０．１２５）　
　ｎ−ブタノール：酢酸：水４：１：５　　　　　　　　　　　０．１５Ｒｍ：約１
４０＋ｍｇ　：　ＣＨ，ＣＮ：Ｈ，０１：　１　（Ｖ／Ｖ）中の
溶液（１ｔａｐ／ｍ　）の２〜５μを可視化：ａ）　ヨ
ウ素蒸気ｂ）　　２５４ｍの紫外線：１）、２）□シラン化したシリカゲル６０Ｆ□４板（Ｍ
ｅｒｃｋ）：可視化ａ）、ｂ）　：３）、４）、５）−シリカゲル６
０Ｆｔｓａ板（Ｍｅｒｃｋ）：可視化ａ）。

（＊　内部標準：カフェイン’ｆＬ（０，６０：　　コ
ーチシンＲ１０，３５：デクサメタゾーンＲｆ０．３０）。

Ａ／１６６８６フアクターＡ２は次の特性反応を示す二ニンヒドリン（３憾のエタノール溶液）　　　　　　　　　　　　　　陽　性モリツシ（
Ｍｏｌｉｓｈ）　　　　　　　　　陽　性ビウレット　
　　　　　　　　　　　　　　陽　性ミロン　　　　　
　　　　　　　　　　陰　性１　％　ｒｅ　Ｃｌ　、−
１１に、　Ｆｅ　（ＣＮ）６水性　　緑　色ＫＭｎＯ，
（酸性）　　　　　　　　　陽　性Ｈ，８０４濃　　　
　　　陰性１１０℃における６時間の６Ｎ塩酸中の酸性加水分解後
のＡｌ１６６８６フアクターＡ２のアミノ酸分析は少な
くとも次のアミノ酸の存在を示す：アラニン、ロイシン
、グリシン、アスパラギン酸、フェニルアラニン、オル
ニチン、ｐ−ヒドロキシフェニルグリシン、およびヒド
ロキシ、クロロ置換フェニルグリシン。

２Ｎ　Ｈ，８０，中の１００℃において２時間後の、Ａ
／１６６８６フアクターＡ２の酸加水分解物の分析は、
中性炭水化物であるＤ−マンノースの存在を示す。

μｍボンダパック（Ｂｏｎｄａｐａｃｋ■）Ｃ５８カラ
ム（内径３．９ｗＸ　３００ｍ＋＋）および流速２履ｊ
／分の移動相として混合物ＨＣ（ＪＯＮＨ４０，０２５
Ｍ／ＣＨ，ＣＮ　６０／　４０　（ｖ／　ｖ　）を用い
る抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ２のＨＰＬＣ分
析は、該化合物が保持時間（ｔＢ）＝４’　９９／１０
０“を有することを示しｆｃ（内部標準：アントラセン
ｔＢ３５”１８／１００“：　α−ニトロナフタレンｔ
Ｂ、１１’１４／１００“：トルエンｔＨ，８’　６４
／１００”）。

Ａ／１６６８６フアクターＡ１は約２１０〜２２０℃で
分解しながら溶融する白色非晶質粉末である。それは水
、ジメチルホルムアミドおよび水性メタノールに非常に
可溶性であり：メタノールおよびエタノール中に可溶性
であるが：しかしエチルエーテル、石油エーテルおよび
ベンゼン中に不溶性である。不活性雰囲気中で約１４０
℃において前もって乾燥したＡ／１６６８６フアクター
Ａ、の元素分析は次の百分率組成（平均）を示す：炭素
５０．３１係、水素６．００係、窒素９．９２憾、残留
物６．０７係。

Ａ／１６６８６フアクターＡ、の塩素分析は次の結果を
示す；塩素（合計金り１．ｓｌ係、塩素イオン０．９０
係。

ヌジョール中でのＡ／１６６８６フアクターＡ。

の赤外吸収スペクトルを添付の第４図に示す。

３２９０．２９３０および２８６０　（ｎｕｊｏｌ）　
。

１７６５　、１６３０　、１５１０　、１４５５　（ｎ
ｕｊｏｌ）。

１２６０．１２３５，１１７５．１１５０゜１１３０．
１０６０．１０１５，１３７５，９７５゜８４０および
８１０　ｃｍ−”。

Ａ／１６６８６フアクターＡ１の紫外吸収スペクトルは
添付の第５図に示すとおりであり、次の吸収極大を示す
：ａ）　中性メタノール中ｂ）　　ｏ、ＩＮＨｃｌを含有するメタノール中ｃ　）
　　０．ＩＮ　ＮａＯＨを含有するメタノール巾約２９
０ｎｍ（肩）Ａ／１６６８６フアクターＡ１は比旋光度、７″ａｊ”
　　＝＋５７±４°（ｃｍ０．５１　、　ＨｔＯ）を有
りする。

検出有機体としてＢ、　５ｕｂｔｉｌｉｓ　ＡＴＣＣ６
６３３’に用いる種々のペーパークロマトグラフィー系
におけるＡ／１６６８６フアクターＡ１のａ、値を下表
に記載する。

表　　■ Ａ／１６６８６フアクターＡ１のクロマトグラフィー挙動（ボワットマンＩ＆１ペーパー）＋溶離系　　　　　　　　　　　　　　Ｒｆ値１）　ゼー
レンセン緩衝剤、ｐＨ６，０で飽和したｎ−ブタノール
　　　　　　０．００２）２９６のｐ−）ルエンスルホ
ン酸ヲ含有する水で飽和したｎ−ブタノール　　　　　　　　　　　　　　０．００３）　２４
の水酸化アンモニウムを含有する水で飽和したｎ−ブタ
ノール　　０．００４）　　ｎ−ブタノールで飽和した
ゼーレンセン緩衝剤、ｐＨ６，００，０５５）　　ｎ−ブタノール：メタノール：水４　二　１：
２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
０．４８６）水で飽和した酢酸エチル　　　　　　０．
００７）　　ｎ−ブタノール：酢酸：水２：１：１　　　　　　　　　　　　０．４４す　下降
クロマトグラフィーＲｍ：４０ｃｎ量　：　Ｈ，Ｏ：　ＣＨ，ＣＮ　１　：　１　ｖ／ｖ中
に溶けた５０μ２の化合物（２１１ｖ種々の薄層クロマトグラフィー系におけるＡ／１６６８
６フアクターＡ、のＲ，値を下表に記載する（条件は表
の下に記載する）：表　　Ｖｌ溶離系（Ｖ：Ｖ：Ｖ）　　　　　　　　Ｒ，（値１）水
性２．５憾ＨＣＯＯＮＨ４：ＣＨ，ＣＮ：＊６５　二　３５　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　０．４０２）　　ｎ−ブタノール：酢
酸：水４：２：５　　　　　　　　　　　　０．８０３）　　
ｎ−ブタノール：酢酸：水４　：　２　二　５　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　０．５２４）ｎ−プロパツール：ｎ−
ブタノール：　ＩＮ　ＮＨ４０Ｈ２：３二４（上相）　　　　　　　　　０．１２５）　
　ｎ−ブタノール：酢酸：水４：１：５　　　　　　　　　　　　０．１５Ｒｍ：約
１４０圏量　：　ＣＨ，ＣＮ：Ｈ，０１：　１　（Ｖ／Ｖ）中の
溶液の２〜５μを可視化ａ）ヨウ素蒸気ｂ）ｚ５４ｎｍｔｖ紫外ａ１）、２）→ラン化シリカゲル６０　Ｆ　２８４板（Ｍ
ｅｒｃｋ）：可視化ａ）、ｂ）：３）、４）、５）−シリカゲ／ｌ／６０Ｆ２．４板（Ｍ
ｅｒｃｋ）：可視化ａ）。

（＊　内部標準：カフェインＲｆ０．６０：コーチゾン
Ｒ１Ｏ，３５：デクサメタゾーンＲ［０，３０）。

１１０℃における６時間の６Ｎ塩酸中の酸性加水分解後
のＡ／１６６８６フアクターＡ、のアミノ酸分析は少な
くとも次のアミノ酸の存在を示す：アラニン、ロイシン
、グリシン、アスパラギン酸、フェニルアラニン、オル
ニチン、ｐ−ヒドロキシ−フェニルグリシン、およびヒ
ドロキシ、りｏｏ置換フェニルグリシン。

２〜．Ｈ，Ｓｏ、　中の１００℃において２時間後のＡ
／１６６８６フアクターＡ２の酸加水分解物の分析は、
中性の炭水化物であるＤ−マンノースの存在を示す。

μｍポ／ダパックＣｌ１ｌカラム（内径３．９順Ｘ　３
００　ｍ　）および流速２Ｍ／分の移動相として混合物
ＨＣＵＯＮＨ，０，０２５Ｍ／Ｃｌ−１，ＣＮ６０／４
０（Ｖ／Ｖ）？用いる抗生物質Ａ／１６６８６フアクタ
ー人、のＨＰＬＣ分析は分析したとき、ｔＲ＝３’　８
４／１００“を与える（内部標準：アントラセン１１．
３５’　１８／１００“：　α−ニトロナフタレンｔＢ
１１’　１４／１００“：トルエンｔ　Ｒｇ　／６４／
１００“）。

Ａ／１６６８６フアクターＡ３Ａ／１６６８６フアクターＡ、は約２２０℃において分
解しながら溶融する白色非晶質粉末である。それは、水
、ジメチルホルムアミドおよび水性メタノールに非常に
可溶性であり：メタノールおよびエタノールに可溶性で
あるが：しがしエチルエーテル、石油エーテルおよびベ
ンゼンに不溶性である。不活性雰囲気中で約１４０℃に
おいて前もって乾燥したＡ／１６６８６フアクターＡ。

の元素分析は次の近似百分藁組成（平均）を示す：炭素
４８．４１４、水素５．８４係、？素９．０９４、残留
物９．１係。塩素分析は次の結果を与える：１．６８４
の塩素（合計含量）１．６８４、塩素イオン１．１６係
。

ヌジョール中でのＡ／１６６Ｂ６フアクターＡ３の赤外
吸収スペクトルを添付のオ６図に示す３次の吸収極大が
観測さする：３２９０．２９５０および２８６０　（ｎ
ｕｊｏｌ）、１７６５．１６３５．１５１０．１４５５
および１３７５　（ｎｕｊｏｌ）、１２６０．１２４０
．１１７５．１１００％１０６０．１０２０．９７５，
８４０，８０５（至）　　　。

Ａ／１６６８６フアクターＡ、の紫外吸収スペクトルは
添付のオフ図に示すとおシでｈＦ）、次の吸収極大を示
す：ａ）中性メタノール中１％２３４ｎｍ　　（１！：１（Ｂ−１４７）１％２６７ｎｍ　　（Ｅｌｌ−７４）ｂ）α１ＮＨｃｔを含有するメタノール中１　％２３２ｎｍ　　（Ｅｌ、−１３２）２７　Ｑ　ｎｍ　　（Ｅ　’％−７６）１儂Ｃ）α１Ｎ　ＮａＯＨを含有するメタノール中２５０　
ｎｍ　　（Ｅ　’％−２０２）１ｃｍ約２９５ｎｍ（肩）Ａ／１６６８６フアクターＡ３は比旋光度、（ａ　］　
ｎ　−＋　ｓ　ｏ±４（ｃ−α４８、ＨＣｔＮ／１００
）を有する。

検印有機体と１．−（Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ　Ａ’ｒｃ
ｃ６６３３を用いる、種々のペーパークロマトグラフィ
ー系におけるＡ／１６６８６フアクターＡ３のＲｆ値を
下表に記載する。

溶離系　　　　　　Ｒｆ値１）ゼーレンセン緩衝剤、ｐＨ６，０、で飽和し７’ｃ
ｎ−ブタノール　　　　　　　０．００溶離系　　　　
　　Ｒｆ値する水で飽和したｎ−ブタノール　　　　α００５）２
％の水酸化アンモニウムを含有する水で飽和したｎ−ブ
タノール　　　　　　α００４）ｎ−ブタノールで飽和
したゼーレンセン緩衝斉１．　ｐＨ＆ｏ　　　　　　　
　　　　α０５５）ｎ−ブタノール：メタノール：水４：１：２　　　　　　　　　　　　　　　α４８６）
水で飽和した酢酸エチル　　　　　　　　α００下降ク
ロマトグラフイーＲｍ：　　４ｏｅ量：　　）１２０：ＣＨ，ＯＮ　　１　：　１　（Ｖ／
Ｖ）中に浴け７ｔ５０μ２の水金物（２η／ｒＩＬｔ）
種々の薄ノΔクロマトグラフィー系におけるＡ／１６６
８５ファクターＡ３のＲｆ値を下表に記載する（条件は
衣の下に示す）。

表　　ｌＸ６５：３５＊　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　０．５２２）ｎ−ブタノール：酢酸：水４：２：５　　　　　　　　　　　　　　　　α８０３
）　ｎ−ゲタノール：酢酸：水４　：２：　５　　　　　　　　　　　　　　　　　α
５２４）ｎ−プロパノール：ｎ−シタノール：１Ｎ　　
ＮＨ４ＯＨ（上層）　　　　　　　　　Ｑ、１２Ｒｍ：
　　約１４０Ｕｉ：　　（ｊＨ，ＯＮ：Ｈ２Ｏ１：　１中の浴液（１ｍ
？／ｍ／）の２〜５１Ｉｔ可視化：　ａ）ヨク累蒸気　ｂ）紫外線、２５４　ｎｍ
１）、２）−シラン化シリカゲル６０Ｆ２５４板（Ｍｅ
ｒｋ）：可視化ａ）　、ｂ）；３）、４）、ｓ）　−シＩＪ　力？ルｂ　ｏ　Ｆ２．．
４板（Ｍｅｒｃｋ）：可視化ａ）。

（本内部標準：　　カフェインＲｆα６０；コーチシン
Ｒｆ；デクサメタゾーンＲｆ（１３０）；１１０℃にお
ける６時間の６Ｎ塩酸中の酸性加水分解後のＡ７１６６
Ｂ６フアクターＡ３のアミノ酸分析は少なくとも次のア
ミノ酸の存在を示すニアラニノ、ロイシン、グリシン、
アスパラギン酸、フェニルアラニン、オルニチン、ｐ−
とドロキシフェニルクリシリン、およびヒドロキシ、ク
ロロ置換フェニルグリシン；２Ｎ　Ｈ２ＳＯ４中の１００℃において２時１間後のＡ
／１６６８６フアクターＡ３の酸加水分解物の分析は中
性の炭水化物でろるＤ−マンノースの存在を示す。

μｍボンダバックＣ１８カラム（内径五９．ＪｌｊＩ×
３００１ｊＪ）および流速２−７分の移動相として混合
物ＨＣＯＯＮＨ４α０２５　　ＭｌｏＨ，ＯＮ　　６０
／４０（Ｖ／Ｖ　）を用いる抗生物質Ａ／１６６８６フ
アクターＡ、ＨＰＬＣ分析はｔ　ａ　鍋６　’　８４　
／　１００＃を与エル（内部標準：アントラセンｔＲ５
５／　　１　ａ／、。。、；α−ニトロナフタレンｔ３
１１１１４／１ｏｏ、；トルエンｔＩＬ８′６４／１ｏ
ｏ、）。

抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ２、ならびにファ
クターＡ、およびＡ３は抗微生物剤であり、ことにダラ
ム陽生微生物に対して活性である。

とくに、Ａ／１６６８６抗体の生体外（ｉｎ　　ｖｉ−
ｔｒｏ）活性スペクトルを下表に要約する。

表　ＸＳ、　　ａｕｒｅｕｓ　　ＡＴＣ０６５３８α１　　　　　α１１．６８、　　ａｕｒｅｕｓ　　Ｔｏｕｒ（接種１０’／ｍｔ）　　　　　α２　　　α２１．６
Ｓ、　　ａｕｒｅｕｓ　　Ｔｏｕｒ（接種１０’／ｉ）　　　　　ａ４　　　α８　　　五
１Ｓ、　　ａｕｒｅｕｓ　　Ｔｏｕｒ（＋５０％の９シ血清）　　　（１４Ｑ、８　　　１．
６ｓ、　　ｐｙｏｇｅｎｅθ Ｃ２０５Ｓ［Ｆ　１３４００　　　α０１１　　α０１
２　　α０１２Ｓ、　ｐｎ８ｕｍｏｎｉ５ＬｅＦｅｌｔｏｎ　　ＵＣ４１［ＬＯ２５（ｌＬ０２５　　
　α０２５Ｓ、　　ｆｏｅｃｉｕｍＡＴＣＩＣ１０５４１（ＬＩ　　　　　Ｑ、０５　　　
　α１Ｌ　　ｃｏｌｔ　　５ＫＦ１２１４０　　＞１０
０　　）１ｏｏ　　：）１ｏ。

また、Ａ／１６６８６抗生物質は、種々の病原性有機体
に対する高度の生体外活性を有することがわη・つた。

Ａ／１６６８６抗体の効果は、２種の微生物に対するマ
ウスにおけるＥＤ５ｏ値を記載する表ＸＩから容易に明
らかでらる。

表　ＸＩｘ　Ｄ　５０　Ｗ／−日８．Ｃ。

ファクターＡ、　　　（α０１２〜α０６４）（α１７
〜α１４）Ａ／１６６８６　　　（ＬＯ４８α１８フア
クターＡ２　　（ＣＬ０２６〜α０７０）　　（α２０
〜α１６）Ａ／１６６８６化合物は、歯根膜（７）（ｐ
ｅｒｉｏ　−ｄｏｎｔａｌ）病気の進展に寄与する微生
物の生育を阻止する。Ａ　／　１６６８６化合物のこの
重要な性質は、人工５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　突然
変異体ＡＴＣＣ２５１７５プラク（ｐｌａｑｕｅ）系ヲ
用イる試験によシ評価さｎる。こ１らの実験において、
Ａ／１６６８６化合物は非常に低い濃度レベルにおいて
プラグの形成を阻止した。したがりて、Ａ／１６６８６
化合物は、そｎらに感受性の病原性有機体を原因とする
病気の処置に使用できる。

たとえば、Ａ／１６６８６化合物は、５ｔｒｅｐ−ｔｏ
ｃｏｃｃｕｓまたは５ｔａｐｈｙ１ｏｃｃｕｓの感染の
処置に、わるいは虫歯による歯のエナメルおよび歯質の
溶解および崩壊の予防および処置に使用できる。このよ
うな処置において、Ａ／１６６８６化合物は遊離塩基と
して、または対応する非毒性の生理学的に許容しうる酸
付加塩として使用できる。その上、そ几らは、単一のフ
ァクターとして便用することができ、あるいはそれらの
活・龜パターンの類似性を考慮すると、任意の比率の３
種のファクターの２りま友はすべての混合物の形で使用
することもできる。

次の実施釧によシ、本発明をさらに説明する。

実施例　１菌株Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ　　ａｐ、ＡＴＯＯ３３
０７６の発酵Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ　ｓｐ、ＡＴＯＯ５５０７６
Ｑ）培地を、次の組成（ｆ／ｌ）を有する水性栄養培地
の各１００−を含有する振とりフラスコ中で菌株を生育
させることにより、予備培養する：肉エキス　　　　　
　ｓ　　ｔ７ｔ。

酵母エキス　　　　　５　　ｔ／ｌトリプトン　　　　　　５　　ｆ／を可溶性でんぷん　　２４　　ｆ／ｌグルコース　　　　　　１　タ／ｌＣａＣＯｓ　　　　　　　　４　９　／　Ｚフラスコを
２８〜３０℃で約９６時間振とうし、次いで４ｔの同じ
栄養型培地を含有するびん発酵器に注入し、そして同じ
温度で４８時間予備培養する。次いでこの予備培養物の
３ｔを、前述の同じ栄養培地のｓａｄを含有する大きい
びん発酵器を接種する几めに使用し、２８℃で２４時間
好気的に予備培養物の２０１を使用して、次の組成を有
する水性栄養培地の２００−を含有する楢を接種する：肉エキス　　　　　　４２／ｌペプトン　　　　　　４１／を酵母エキス　　　　　１２／を塩化ナトリ９ム　　　２．５　　ｔ７１大豆ミール　　
　　　１０ｔ／１ダルツース　　　　　ｚｓｙ／ｚｃａｃｏ３　　　　　　　ｓ　　ｙ／ｌ発酵バッチを、
２８〜５０℃においてかきまぜながら培養する。間隔を
置いて、控生活性を、試薬有機体として５ａｒｃｉｎａ
　　１ｕｔｅａ　　ＡＴＣＣ９３４１を用いて寒天拡散
法によシ、微生物学的に検定する。最大活性は、発酵の
７２〜１２０時間後に到達する。

実施例　２抗生Ａ／１６６８６鎖体の分離実施例１に記載するようにして製造した全発酵培養液（
１７０ｔ）を１０℃に冷却し、１８％Ｈ（、ｔによりｐ
Ｈ五５にする。得らｎる酸性培養液を濾過助材（Ｃ１ａ
ｒｃｅｌ　　Ｆｌｏｗ−Ｍａ）で濾過し、そして菌糸体
ケーキを水で洗浄する。

メタノール（３０ｔ）を使用して菌糸住棟を抽出し、濾
過後、再びメタノール／水混合物（３０ｔのメタノール
＋５ｔの水）で抽出する。抽出した菌糸体を廃棄し、２
つのメタノール抽出に’ｃ４０℃より低い温度で真空濃
縮して、水性濃縮物（６ｔ）を得る。この水性濃厚物を
各回１０ｔのｎ−ブタノールで抽出し、抽出液を合わせ
、小さい体積に真空濃縮する。

このａｍ物を石油エーテルに加え、生ずる沈殿をデカチ
ージョンにより分離し、追７１Ｄ量の石油エーテルに刃
口える。沈殿を濾過により分離し、室温で真空乾燥して
、８０２の抗生Ａ／１６６８６錯坏が組成物質として得
ら１、こｎはＳ、ｐｎｅｕ−ｍｏｎｉａｅ　　ＵＯ４１
に対するＭ、工、Ｃ０がα１μｔ／−である。

実施例　５生Ａ／１６６８６錯体の精製ａ）実施例２において得らルた組視抗性Ａ／１６６８６
錯体の４Ｚ７２を、１．４ｔのクロロホルム：エタノー
ル：水混合″＊（４ニア：２）（ｖ／ｖ／ｖ）で処理し
、形成した油状生成物をｍｌ−らデカンテーションによ
り分離する。さらに、上の混合物７０ｄを次いで油状生
成物に加え、分離を反復する。油状生成物を水（４４０
ｄ）で処理することにより、油状生成物は固化し、そ几
を遠心分離または濾過により分離する。

分離した固体を水（１７０＋ｄ）中に懸濁し、メタノー
ル（４００ｍ）の添加により溶かし、Ｆ遇する。この水
性メタノール溶液のｐＨをｉ　、Ｎ　Ｈ（！ｔのｆＡ　
、７１１１により五５にし、次いで溶媒をｎ−ブタノー
ルの添加により５５℃より決して高くない温度において
真空除去して、約５Ｏｒ！ｔのブタノール濃縮物を得る
。ジエチルエーテル（５００ｄ）の添加により、形成し
友沈殿濾過により分離し、室温で真空乾燥すると、かな
り純粋なＡ／１６６８６錯体が得らｎｌこｎはＳ、ｐｙ
ＯｇｅｎθＢに吋するＭ、工、Ｃ０がｌ１ｏ２５μｆ／
−である。

ｂ）前述のようにして得らｎた抗生Ａ／１６６８６錯体
の１．５８　Ｆを１００−の混合物アセトニトリル：Ｈ
Ｏ１：　１　（ｖ／ｖ）中に溶カシ、生ずる溶液を、同
じ混合物で準備しｆｃ４５０　ｔのシリカ５’ｋ　６０
　（Ｍｅｒｃｋ　％　０６〜１１２　ｒＪｕｌ）を含有
するカラムに供給する。このカラムをまず同じアセトニ
トリル−水混合物を用いて展開し、各２０−の７０のプ
ラク２ヨンを集め、次いでアセトニトリル：　Ｎ　／Ｈ
Ｃ２１：　１　（Ｖ／　Ｖ　）を用い、さらに各２０１
Ｒｔの２９０のフラクションを集める。

カラムの溶離は”０Ｆ２５４シリカダル板の薄層クロマ
トグラフィーにより、そして５ａｒｃｉｎａｌｕｔｅ＆
対するフラクションの検定により監視する。

フラクション１３０〜２６５を合わせ、溶媒をｎ−ブタ
ノールを用いて真空除去して、２０＋ｉ７！のｎ−ブタ
ノール濃酪物を得る。この残留本漬を大量のエチルエー
テル中に注ぎ、形成した沈殿をＥ過により分離し、室温
においてＰ　Ｏで真空乾燥すると、１．０１５　ｆの抗
生Ａ／１６６８６錯体が得ら几る。

Ｃ）上の物質の１６７りを２４−の水および７６−のメ
タノールに溶かす。生ずる溶液を、メタノール：水７　
：　ｓ　（ｖ　／　ｖ　）中で準備した、２２０２のセ
ファデックス（Ｂｅ　ｐｈａｄ　ｅｘ　）ＬＨ−２０を
含有する１０Ｘ６２．０ｃＩＩｈのカラムへ捲こす。こ
のカラ＾を同じ溶媒で展開して、１０ｒｎｔのフラクシ
ョンを合わせ、溶媒を３５℃より低い温度でｎ−プタノ
ールによシ真空除去して約１０−の残留ブタノール体積
にする。この溶液をエチルエーテルに加えて、純粋な抗
生Ａ／１６６８６錯体を得る。

沈殿を濾過により分離し、エチルエーテルで洗浄し、室
温でＰ２Ｏ５で真空乾燥して、α２６２の純粋な抗生Ａ
／１６６８６錯体を得る。

このようにして得らｔＬり抗生Ａ／１６６８６錯体は、
２２４〜２２６℃で溶融する白色結晶性物質であり、わ
ずかに吸湿性である。七１は水およびジメチルホルムア
ミドに非常に可溶性でｈ’）、メタノール、エタノール
、プロパツールおよびブタノールに可溶性であるが、エ
チルエーテル、石油エーテルおよびベンゼンに不溶性で
ある。このようにして得らｎた抗生Ａ　／　１６６８６
錯体を、不活性雰囲気中で１４０℃で前もって乾燥した
後、元素分析すると、次の近似百分率組成（数回の分析
の平均値）から得らｎる：炭素５１．７３％；水素６．
５４％；窒素９９６％；残留物１％、塩素分析によシ、
次の結果が得ら扛る：＠素（合計含量）５４８％；塩素
イオン４．７４％。ヌジョール中での赤外吸収スペクト
ルは、次の吸収極大（（７７１”−’）を示す：３２９０．５０７０．２９３０　および（ｎｕｊｏｌ）
、１７６５．１６３０．１５１０．１４５５および１３
７５　（ｎｕｊｏｌ）、　１２５０．１１７５．１１３
０、１０６５、１０３０、１０１５．９８０．８４０お
よび８２０゜実捲例３に記載するようにして得らｆ’Ｌ７’ｃ抗生物
質Ａ　／　１６６８６錯体の紫外吸収スペクトルは、次
の吸収極大を示す：ａ）メタノール中２５２　　ｎｍ　　（Ｋ’、ニー１７８）２６５　　ｎ
ｍ　　（Ｅ”−１０７）ａｎｂ）αＩＮＨＣ６を含有するメタノール中２３１　　ｎ
ｍ　　（Ｅ’％−１６７）１儂１％２７°　ｎｍ　　（Ｉ、ａ％−９６）ｃ）　　（Ｌ　ＩＮ　ＮａＯＨを含有するメタノール中
１％２５０　　ｎｍ　　（Ｋ１．−２５２）２９５　　ｎｍ
　　（肩）ｄ）ｐＨ７，３８の緩衝剤を含有するメタノール中２３１　　ｎｍ　　（Ｅ：ニー１６７）２７０　　ｎｍ
　　（Ｉｃ’％−９６）１ｃＩＩ＆それに〔α］　Ｄ　ｍＩ＋　４９．７　　（ｃ−１４３
％、　ＤＭＦ）の比旋光度を有する。

検出有機体としてＳ、ａｕｒｅｕ８　　ＡＴＣＣ！　　
６５３８を用いる、種々の紙クロマトグラフ峯における
抗生物質Ａ／１６６８６錯体のＲｆ値を、次の表に記載
する：表Ｘ■　　抗生Ａ／１６６８６錯体のクロマトグラフィ
ー挙動（ホワノトマン随１ペーパー）溶離系　　　　　
　Ｒｆ値する水で飽和し７’（ｎ−ブタノール　　　　　α００
５）２％の水酸化アンモニウムを官省する水で飽和した
ｎ−ブタノール　　　　　　　α００４）ｎ−ブタノー
ルで飽和したゼーレンセン緩衛却Ｊ％　ｐＨ６，０１０
５５）　ｎ−ブタノール：メタノール：水　　　　　（１
４３４：１：２６）水で飽和した酢酸エチル　　　　　　　　　α００
７）ｎ−ブタノール：酢酸：水２：１：１　　　　　　　　　　　　　　　　α５２下
降クロマトグラフイーＲｍ：　　ａｏｃｎ量：　水メタノール中に溶け７’（２０μ２の化合物（
２グ／−）種々の薄層クロマトグラフィー系における抗生物質Ａ／
１６６８６錯体のＲｆ値を、下表に記載する（条件を下
表に記載する）：表　Ｘ１ｌｌＮ水酸化アンモニウム２：５：４　　（上層）１１１５２）ｎ−ブタノール：酢酸：水４：２：５　　　　　　　　　　　　　　　　α６１３
）　ｎ−ブタノール：エタノール：１１Ｎ塩酸　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　α６１４）クロロホ
ルム：エタノール８１０％酢酸４ニア：２　　　　　　
　　　　　　　　　　　α００５）ｎ−ブタノール：酢
酸：水４：１：５　　　　　　　　　　　　　　　　　α１７
１０：９：ｉ　　　　　　　　　　　　　　　　α５２
７）ｎ−ブタノール：ピリジン：水：酢酸６：４：５：
１　　　　　　　　　　　　　　０．４５１０％水酸化
アンモニクム　　　　　　　　　α１１ム　　１：１　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（Ｌ６
５Ｒｍ：　　約１４０Ｕ量：　アセトニトリル−水　１　：　１　（ｖ／ｖ）中
の化合物の溶液（１■／ゴ）の２〜５　μＬ可視化：　ａ）Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ　　ＡＴＣ！０６
６３３の種々を加えた寒天板上のバトオオートグラフィー（ｂｉｏ− ａｕｔｏｇｒａｐｈ７）；　ｂ）　α−ナフトール硫酸
を用いる７１Ｄ熱による炭素化；Ｃ）ヨタ素蒸気；ｄ）
塩素−トルイミジン試験；ｅ）２ｓ４ｎｍの紫外線１）〜７）−シリカダル６０Ｆ２５４板（Ｍｅｒｃｋ）
；可視化ａ）、ｂ）、Ｃ）、ｄ）、ｅ）８）、９）−シリカダル６０Ｆ２５４シラン化（Ｍｅｒ
ｃｋ）；可視化ｅ）１０）、１１）−セルｏ−スＦ板（Ｍｅｒｃｋ）　；可
視化ａ）、ｅ）実施例３に記載するように単離および精製した抗生物質
Ａ／１６６８６錯体のＨＩ’ＬＯ分析は、抗生物質Ａ／
１６６８６フアクターＡ１、Ａ２およびＡ３と名命する
３つのファクターの存在を明らかにし、そのほぼ７０〜
８７％のモファクターはＡ／１６６８６フアクターＡ２
である。とくに、実施した１（ＰＬＯ分析の結果および
条件を下表に記載スる（トルエン、α−ニトロナフタレ
ンおよびアントラセンを内部漂準として使用しｆｃ）：
表　薙ピークの番号　　　　　　ｔＲＡ１３’　ａ’／’ｉｏｎ・Ａ２４Ｉ９９／、Ｏｏ。

Ａ３”　８４／／１ｏｏ・トルエン　　　　　　　　　　８′　６４イｏｏ’α−
ニトロナフタレン　　　１１’　　１４イｏｏ’アント
ラセン　　　　　　　５５’　　１８イ。。。

カラウニ　μｍボンダパックＣ４８（内径Ａ９ＷＸ３００１ｆｌ）移動相：　　ＨＣ！０ＯＮＨ４α０２５　　Ｍ　　：ａ
ｎ、ｃｕ　　６Ｇ：４０　　（Ｆ／Ｖ）流ｒＬ：２ＷＬ
ｔ／分圧カニ　　２０００　ｐｓｉ検出器；　　ＵＶ２５４ｎｍ実施例　４実施例５に記載するようにして得らｆｌ、−ｆｃＡ／１
６６８６錯体（１６９■）を、α０１Ｎ塩酸（＆５ｒｄ
）および蒸留水（１α４−）中に溶かす。逆相ＨＰＵＯ
（カラム：μｍボンダパックＣ４８（内径７．ｌ＊Ｘ３
００Ｒ２１）−流ｉ：４ｍｊ／分−圧力：２０００ｐｓ
ｉ−移動相：　ＨＣＯＯＮＨ４α０２５　Ｍ：　ＣＨ，
Ｃ！Ｎ　６５　：　５５　（ｖ、／ｖ）　）によシ、上
の溶液の１−または２−を反復注入し、単一ファクター
を含有するフラクションを集め、そしてさらに分析ＨＰ
ＬＯにより検量する。フラクションを、泡の形成を減少
するためにブタノールを刃口えることによシ、６５℃よ
シ低い温度において真空濃縮する。残留溶液を凍結乾燥
し、得らｎた固体を別々に蒸留水で俄シ、再び凍、渭す
ると、抗生Ａ／１６６８６フアクターＡ、（Ｉ　Ｑ■）
、Ａ２（９５■）、およびＡ３（１２■）が得ら几る。

上のようにして得らｎ、几Ａ／　１６　ｂ　８６フアク
ターＡ２の塩酸塩溶液を凍結乾燥することによシ、対応
する塩酸塩が非晶質白色粉末として得らｎｌこｎは２５
０℃で分解する。

実施例　５実施例３ｂ）のようにして得らｎた抗生物質Ａ／１６６
８６錯体（１００■）（力価：約４０％）を、１１Ｎ　
塩酸（１５ゴ）中に溶かす。生ずる溶液をアンバーライ
１ＸＡＩ）−２のカラム（１５６ｍ、床の高さ８６０俵
）％前もってＯＨ３ＣＭ　およびび蒸留水で洗したもの
、に供給する。このカラムを直線勾配０〜３４　％　Ｃ
Ｈ，ＯＮ／水（Ｖ／Ｖ　）の希釈物で展開し、２５０の
１０−のフラクションヲ集める。

Ａ／１６６８６フアクターＡ２のみを含有するフラクシ
ョン１８５〜２２５を合わせ、泡の形成を減少するため
にブタノールを加えることによシ、３５℃より低い温度
で真空乾燥する。残留溶液を凍結乾燥すると、抗生物質
Ａ／１６６８６フアクターＡ２（６，７ｑ）が得らする
。

実施例　６実施例３ａ）におけるようにして得らｎ、ｆｃ抗生物質
Ａ／１６６８６錯体（１００■）（力価＝５五５％）を
、１０ゴのＣＨ，ＣＮ／［ＬＯ２５Ｍ水性ＨＣ０ＯＮＨ
４２７／２７　（Ｖ／Ｖ　）中に溶かす、生ｆる溶液を
、前もってまずαＯ２５Ｍ　ＨＣ！０ＯＮＨ４で、次イ
テＣ！Ｈ３Ｃ！Ｎ／Ｑ、０２５Ｍ　ＨＣＯＯＮＨ４２７
／２７（Ｖ／Ｖ　）で洗浄した、アンバーライト　ＸＡ
Ｄ−２０カラム（２００ｍ／−床の高さ＝５２偏〕に供
給する。このカラムを直線勾配２７〜４０％ＣＨ３ＣＮ
／１１．０２５Ｍ　　ＨＯＯＯＮＨ４−？’展開し、１
０．Ｉｌのフラクションを４００−まで集め、次いで６
ゴのフラクションを合計体積２ｔの溶出液まで集める。

溶出フラクションを、分析用ＨＰＬＣによシ検査し、フ
ァクターの含量に従って合わせ、ＨＰＬＣ！によシ滴定
し、次の結果が得らｎる：３１〜４１　　　　９α１　
　　　　　　　　９９　　　　　　　０４２〜５０　　
　　　５ｉ９　　　　　　　　　４６．１　　　　　　
　　　０５１〜５９　　　１７．９　　　　　８２．１
０６０〜６５　　　　４．４　　　　　９ｉ７　　　　
　１．９６６〜７５　　　　０　　　　　　９４．２　
　　　　５．８７６〜８０　　　０　　　　　８五７　
　　　１６．３８１〜９９　　　　０　　　　　　４６
．１　　　　５＆８１００〜１１０　　　０　　　　　
　　６．７　　　　９５３９４％の純度の抗生物質Ａ／
１６６８６フアクターＡ２を含有するフラクション６０
〜７５を、ブタノールの添加によシ３５℃より低い温度
で真空濃縮し、残菌溶液を凍結乾燥し、蒸留水で取シ、
そして再び凍結乾燥すると、１９．７ＪＩ９のＡ７１６
６８６フアクターＡ２が得ら几る。

実施例　７の分離実施例３ａ）におけるようにして得ら−ｎｉ抗生物質Ａ
／１６６８６錯体（６５０■）（力ｆｉｌｆｉ：５五５
％）の溶液を混合物０Ｈ３ＯＮ／ＨＣＯＯＮＨ４α０２
５　　Ｍ　２６／７４　　（ｖ／ｖ）　に溶がｔ、、得
う几た溶液をアンバーライトＸＡＤ−２のカラム（１９
００ｍ−床の高さ：１３０ｃｍ）、同じ溶媒混合物で前
もって洗浄したもの、に約９−７分の流速で通す。

１００ゴの体積を集め、次いで同じ溶媒系で同じ流速に
おいて展開し、３００−のフラクションを１ａ３／、ま
で集め、次いで５００ゴのフラク７ヨ／を３１．３ｔの
合計体積まで集める。溶出フラククヨンヲ分析用ＨＰＬ
Ｏで検査し、ファク！−の含量に従って合わせ、ＨＰＬ
Ｏにより滴定すると次の結果が得らｎる：％Ａ／１６６８６　　％Ａ／１６６８６　４Ａ／１６６
８６フアクターＡ　＋　　　ファクターＡ２＋　　ファ
クターＡ、＋１錯体７ラクシヨ／１９〜２４　　　　　　　　１００　　　　　　　　　
　０　　　　　　　　０２５〜２６　　　　　　　　　
８０　　　　　　　　　２０　　　　　　　　　０２７
　　　　　　　　　　　７エ８　　　　　　２＆２　　
　　　　　　　　Ｇ２８〜３１　　　　　　　　　４２
．２　　　　　　５７．８　　　　　　　　　０５２〜
５５　　　　　　　　　１５　　　　　　　　８５　　
　　　　　　　　　０３６〜３８　　　　　　　　　　
工４　　　　　　９４Ｌ６　　　　　　　　　０５９〜
４８　　　　　　　　　　０　　　　　　　１００　　
　　　　　　　　　　Ｇ４９〜５８　　　　　　　　　
　０　　　　　　　９２．７　　　　　　　　　７．５
５９〜６１　　　　　　　　　０　　　　　　７αＱ　
　　　　　　　２９．２６２〜６３　　　　　　　　　
　０　　　　　　　　４Ａ５　　　　　　　　５４５６
４〜６７　　　　　　　　　０　　　　　　　　１　（
Ｌ　６　　　　　　　８９．４＋　相対的ピークの高さ
に基づいて計算した。

＋十　相対的ピーク高さをＡ／１６６８６フアクターＡ
λの標％Ａ／１６６８６　　　蒼Ａ／１６ｉ６　　　％
Ａ／１６６８６１４．４　　　　　　　　−−１４．４
ａ２　　　　　　　　　２．１　　　　　　　　　　　
　　　　　　１　（：Ｌ５！Ｌ６　　　　　　　　　１
，５　　　　　　　　　　　　　　　　４．９９５　　
　　　　　１五１２２．６４、８　　　　　　　　２７．２　　　　　　　　　　
　　　　　　３２１．２　　　　　　　３五６　　　　
　　　−　　　　　　　　３４．８−１０７．１　　　
　　　　　−　　　　　　　１０７．１−　　　　　　
　　４（Ａ８　　　　　　　、Ａ２　　　　　　４４．
０−　　　　　　　　　　４．　Ｏｊ、　７　　　　　
　　　５．７＋　　　　　　　　　　２．６　　　　　
　　１４　　　　　　　　ｔｈｏ−五５　　　　　　　
２８　　　　　　　　３１．３準試料のそ１と比較する
ことにより決定し友。

毒」１１群５〜１０匹の動物を用い、通常の方法に従い急性毒
性Ｌ　Ｄ　ｓ。を測定した結果は次のとおりである。

抗生物質Ａ／１６６８６ファクターＡ　１−　Ａ　２及
びＡ３の錯体のＬＤ、。は、マウスに対して３２８ｍｇ
／ｋｇ　　ｉ、ｐ、及び１２２　ｍｇｌ　ｋｇ　ｉ、ｖ
、であり、そしてラット１こ対して＞２０００論ｇ／ｋ
ｇｐ、ｏ、であった。

また、実質的に純粋な抗生物質Ａ／１６６８６ファクタ
ーＡ２も上記錯体とほぼ同じ程度の毒性を有しているこ
とが判明した。

さらに、抗生物質Ａ／１６６８６ファクターＡ、及びＡ
、はそれぞれ、毒性において上記錯体と有意な差はみら
れない。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ２の赤
外吸収スペクトルを示す。第２図は、抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ２の紫
外吸収スペクトルを示す。第３図は、抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ２０２
７０ＭＨｚＱ）’ＨＮＭＲスペクＦｌを示す。第４図は、抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ１　の
赤外吸収スペクトルを示す。第５図は、抗生物質Ａ　／　１６６８６フアクターＡ１
の紫外吸収スペクトルを示す。第６図は、抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ５の赤
外吸収スペクトルを示す。オフ図は、抗生物質Ａ／１６６Ｂ６フアクター３の紫外
吸収スペクトルを示す。手続補正書動式）昭和６２年１１月２６日特許庁長官　　小　川　邦　夫　　殿１、事件の表示昭和６２年特許願第１４２３９８号２、発明の名称抗生物質Ａ／１６６８６フアクターＡ、およびＡ。３、補正をする者事件との関係　　　　特許出願人名称　グルポ・レペチット・ニス・ピー・エイ４、代理
人　〒１０７５、補正命令の日付　　昭和６２年１０月２７日（発送
日）６、補正の対象図面７、補正の内容

Claims

【特許請求の範囲】１、抗生物質Ａ／１６６８６ファクターＡ＿１および抗
生物質Ａ／１６６８６ファクターＡ＿３並びにそれらの
非毒性の生理学的に許容しうる酸付加塩から選ばれ、抗
生物質Ａ／１６６８６ファクターＡ＿１は次の特性：（Ａ）約２１０〜２２０℃において分解しながら溶融す
る白色非晶質物質であり；（Ｂ）水、ジメチルホルムアミドおよび水性メタノール
に非常に可溶性であり；メタノールおよびエタノールに
可溶性であるが；しかしエチルエーテル、石油エーテル
およびベンゼン中に不溶性であり；（Ｃ）元素分析はほぼ５０．３１％の炭素、６．００％
の水素、９．９２％の窒素、１．６１％の塩素（合計含
量）、０．９０％の塩素イオン、残留物６．０７％を示
し；（Ｄ）ヌジヨール（ｎｕｊｏｌ）中で次の観測可能な吸
収極大を有する赤外吸収スペクトル：３２９０、２９３
０および２８６０（ｎｕｊｏｌ）、１７６５、１６３０
、１５１０、１４５５（ｎｕｊｏｌ）、１２６０、１２
３５、１１７５、１１５０、１１３０、１０６０、１０
１５、１３７５、９７５、８４０および８１０ｃｍ＾−
＾１；（Ｅ）次の吸収極大を有する紫外吸収スペクトル：ａ）
中性メタノール中２３３ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝２０２）２６６
ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝１０６）ｂ）０．１Ｎ
ＨＣｌを含有するメタノール中２３２ｎｍ（Ｅ＾１＾％
＿１＿ｃ＿ｍ＝２１９）２７０ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿
ｃ＿ｍ＝１１０）ｃ）０．１Ｎ　ＮａＯＨを含有するメ
タノール中２５１ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝２６
４）約２９０ｎｍ（肩）（Ｆ）比旋光度［α］＾２＾０＿Ｄ＝＋５７±４°（￥
ｃ￥＝０．５１、Ｈ＿２Ｏ）（Ｇ）検出系として枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｓｕｂ
ｔｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ６６３３を用いるホワットマンＮ
ｏ．１紙上のペーパークロマトグラフィーにおける次の
Ｒ＿ｆ値：溶離系（Ｖ：Ｖ：Ｖ）　Ｒ＿ｆ値１）ゼーレンセン緩衝剤、ｐＨ６．０、で飽和したｎ−ブタノール　０．００２）２％のｐ−トルエンスルホン酸を含有する水で飽和したｎ−ブタノール　０．００３）２％の水酸化アンモニウムを含有する水で飽和したｎ−ブタノール　０．００４）ｎ−ブタノールで飽和したゼーレンセン緩衝剤、ｐＨ６．０　０．０５５）ｎ−ブタノール：メタノール：水、４：１：２　０．４８６）水で飽和した酢酸エチル　０．００７）ｎ−ブタノール：酢酸：水２：１：１　０．４４（Ｈ）次に示すシリカゲルの薄層クロマトグラフ系にお
ける次のＲ＿ｆ値：溶離系（Ｖ：Ｖ：Ｖ）　Ｒ＿ｆ値１）水性２．５％ＨＣＯＯＮＨ＿４：ＣＨ＿３ＣＮ６５
：３５＾＊　０．４０２）ｎ−ブタノール：酢酸：水４：２：５　０．８０３）ｎ−ブタノール：酢酸：水４：２：５　０．５２４）ｎ−プロパノール：ｎ−ブタノール：１Ｎ　ＮＨ＿４ＯＨ２：３：４（上相）　０．１２５）ｎ−ブタノール：酢酸：水４：１：５　０．１５１）、２）−シラン化したシリカゲル６０Ｆ＿２＿５＿
４板上にて３）、４）、５）−シリカゲル６０Ｆ＿２＿５＿４板上
にて（＾＊内部標準：カフェインＲ＿ｆ０．６０；コー
チゾンＲ＿ｆ０．３５；デクサメタゾーンＲ＿ｆ０．３
０）；（ I ）少なくとも次のアミノ酸の存在を示す、
１１０℃における６時間の６Ｎ塩酸中の酸性加水分解後
のアミノ酸分析：アラニン、ロイシン、グリシン、アス
パラギン酸、フェニルアラニン、オルニチン、ｐ−ヒド
ロキシフェニルグリシン、およびヒドロキシ、クロロ置
換フェニルグリシン；（Ｊ）Ｄ−マンノースの存在を示
す、２ＮＨ＿２ＳＯ＿４中の１００℃において２時間後の酸加水
分解物の炭水化物の分析；（Ｋ）μ−ボンダパックＣ＿１＿８カラム（内径３．９
ｍｍ×３００ｍｍ）および流速２ｍｌ／分の移動相とし
て混合物ＨＣＯＯＮＨ＿４０．０２５Ｍ／ＣＨ＿３ＣＮ
６０／４０（ｖ／ｖ）を用いる逆相ＨＰＬＣにより分析
したときの保持時間（ｔ＿Ｒ）＝３′８４／１００″（
内部標準：アントラセンｔ＿Ｒ３５′１８／１００″；
α−ニトロナフタレンｔ＿Ｒ１１′１４／１００″；ト
ルエンｔ＿Ｒ８′６４／１００″）；を有し、そして抗
生物質Ａ／１６６８６ファクターＡ＿３は次の特性：（Ａ）約２２０℃において分解しながら溶融する白色非
晶質粉末であり；（Ｂ）水、ジメチルホルムアミドおよび水性メタノール
に非常に可溶性であり；メタノールおよびエタノールに
可溶性であるが；しかしエチルエーテル、石油エーテル
およびベンゼンに不溶性であり；（Ｃ）元素分析はほぼ４８．４１％の炭素、５．８４％
の水素、９．０９％の窒素、１．６８％の塩素（合計含
量）、１．１６％の塩素イオン、残留物９．１％を示し
；（Ｄ）ヌジョール中で次の観測可能な吸収極大を有する
赤外吸収スペクトル：３２９０、２９３０および２８６
０（ｎｕｊｏｌ）、１７６５、１６３５、１５１０、１
４５５および１３７５（ｎｕｊｏｌ）、１２６０、１２
４０、１１７５、１１００、１０６０、１０２０、９７
５、８４０、８０５ｃｍ＾−＾１；（Ｅ）次の吸収極大を有する紫外吸収スペクトル：ａ）
中性メタノール中２３４ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝１４７）２６７
ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝７４）ｂ）０．１Ｎ　
ＨＣｌを含有するメタノール中２３２ｎｍ（Ｅ＾１＾％
＿１＿ｃ＿ｍ＝１３２）２７０ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿
ｃ＿ｍ＝７６）ｃ）０．１Ｎ　ＮａＯＨを含有するメタ
ノール中２５０ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝２０２
）約２９５ｎｍ（肩）（Ｆ）比旋光度［α］＾２＾０＿Ｄ＝＋５０±４°（￥
ｃ￥＝０．４８、ＨＣｌ　Ｎ／１００）（Ｇ）検出微生
物として枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｓｕｂｔｉｌｉｓ
）ＡＴＣＣ６６３３を用いるホワットマンＮｏ．１紙上
のペーパークロマトグラフィーにおける次のＲ＿ｆ値：溶離系（Ｖ：Ｖ：Ｖ）　Ｒ＿ｆ値１）ゼーレンセン緩衝剤、ｐＨ６．０、で飽和したｎ−ブタノール　０．００２）２％のｐ−トルエンスルホン酸を含有する水で飽和したｎ−ブタノール　０．００３）２％の水酸化アンモニウムを含有する水で飽和したｎ−ブタノール　０．００４）ｎ−ブタノールで飽和したゼーレンセン緩衝剤、ｐＨ６．０　０．０５５）ｎ−ブタノール：メタノール：水、４：１：２　０．４８６）水で飽和した酢酸エチル　０．００７）ｎ−ブタノール：酢酸：水２：１：１　０．４４（Ｈ）次に示すシリカゲルの薄層クロマトグラフ系にお
ける次のＲ＿ｆ値：溶離系（Ｖ：Ｖ：Ｖ）　Ｒ＿ｆ値１）水性２．５％ＨＣＯＯＮＨ＿４：ＣＨ＿３ＣＮ６５
：３５＾＊　０．３２２）ｎ−ブタノール：酢酸：水４：２：５　０．８０３）ｎ−ブタノール：酢酸：水４：２：５　０．５２４）ｎ−プロパノール：ｎ−ブタノール：１Ｎ　ＮＨ＿４ＯＨ　０．１２５）ｎ−ブタノール：酢酸：水４：１：５　０．１５１）、２）−シラン化シリカゲル６０Ｆ＿２＿５＿４板
上にて３）、４）、５）−シリカゲル６０Ｆ＿２＿５＿４板上
にて（＾＊内部標準：カフェインＲ＿ｆ０．６０；コー
チゾンＲ＿ｆ０．３５；デクサイメタゾーンＲ＿ｆ０．
３０）；（Ｉ）少なくとも次のアミノ酸の存在を示す、
１１０℃における６時間の６Ｎ塩酸中の酸性加水分解後
のアミノ酸分析：アラニン、ロイシン、グリシン、アス
パラギン酸、フェニルアラニン、オルニチン、ｐ−ヒド
ロキシフェニルグリシン、およびヒドロキシ、クロロ置
換フェニルグリシン；（Ｊ）Ｄ−マンノースの存在を示
す、２ＮＨ＿２ＳＯ＿４中の１００℃において２時間後の酸加水
分解物の炭水化物の分析；（Ｋ）μ−ボンダパックＣ＿１＿８カラム（内径３．９
ｍｍ×３００ｍｍ）および流速２ｍｌ／分の移動相とし
て混合物ＨＣＯＯＮＨ＿４０．０２５Ｍ／ＣＨ＿３ＣＮ
６０／４０（ｖ／ｖ）を用いる逆相ＨＰＬＣにより分析
したときの保持時間（ｔ＿Ｒ）＝６′８４／１００″（
内部標準：アントラセンｔ＿Ｒ３５′１８／１００″；
α−ニトロナフタレンｔ＿Ｒ１１′１４／１００″；ト
ルエンｔ＿Ｒ８′６４／１００″）；を有することを特
徴とする抗生物質。２、菌株アクチノプラネス・エス・ピー（Ａｃｔｉｎｏ
ｐｌａｎｅｓ　ｓｐ．）ＡＴＣＣ３３０７６を、液中好
気発酵条件下に、炭素および窒素の同化源と無機塩類を
含有する水性栄養培地中で、実質的なレベルの抗生活性
が生じるまで培養し、抗生活性物質を発酵培地から回収
し、そして本質的に純粋な抗生物質Ａ／１６６８６ファ
クターＡ＿１およびＡ＿３をカラムクロマトグラフィー
により分離することを特徴とする抗生物質Ａ／１６６８
６ファクターＡ＿１およびＡ＿３の製造方法。３、該抗生活性物質を、発酵の終りにおいて、菌糸体塊
を低級アルカノールおよびアセトンから選ばれる有機溶
液で抽出することによって回収する特許請求の範囲第２
項記載の方法。４、該抽出溶媒がメタノールである特許請求の範囲第３
項記載の方法。５、該抗生物質をアンバーライト（Ａｎｂｅｒｌｉｔｅ
＾■）Ｘ−ＡＤカラムおよび溶離系として水とアセトニ
トリルとの混合物または水性アンモニウムホルミエート
とアセトニトリルとの混合物を用いるカラムクロマトグ
ラフィーにより分離する特許請求の範囲第２項記載の方
法。６、該分離を、μ−ボンダパック＾■Ｃ＿１＿８カラム
および移動相として変化する比の水性アンモニウムホル
ミエートとアセトニトリルとの混合物を用いる逆相ＨＰ
ＬＣにより行う特許請求の範囲第２項記載の方法。７、抗生物質Ａ／１６６８６ファクターＡ＿１および抗
生物質Ａ／１６６８７ファクターＡ＿３並びにそれらの
非毒性の生理学的に許容しうる酸付加塩から選ばれる抗
生物質を有効成分として含有することを特徴とする抗菌
剤。