JPS6244186A - 抗生物質６２７０物質の製法及びその生産菌 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質６２７０物質の製法及びその生産菌に
関するものである。

本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
の微生物を土壌より分離し、その産生ずる抗生物質を探
索した。

その結果青森県野辺地にて採取した土壌より分離したス
トレプトマイセス属に属する微生物を適宜の培地で培養
すると、グラム陽性細菌に強い抗菌力を示す抗生物質が
培地中に蓄積されることを見出した。そこでこの抗生物
質を単離し、その理化学的性質及び生物学的性質を検討
したところ、さきに日下部らがノカルディオプシス属菌
を用いて採取した抗生物質６２７０物質と同一であるこ
とを認めた（特願昭５９−７２９１２号参照）。

本発明はこの知見に基づくもので抗生物質６２７０物貿
を生産する能力を有するストレプトマイセス屈菌を培養
し、その培養物から抗生物質６２７０物質を採取するこ
とを特徴とする抗生物質６２７０物質の製法である。

抗生物質６２７０物質の製造に用いられる微生物として
は、抗生物質６２７０物質の産生能を有する限りすべて
のストレプトマイセス属に属する微生物を用いることが
できるが１例えば本発明者らが新たに分離したストレプ
トマイセス　ミサキエンシス　ナカムラ　Ｔ−８４８号
株 （ＳＩＺｒｅｐｔ、ｏｍｙｃｅｓ　　ｍ１ｓａｋｉｅｎ
ｓｉ、ｓ　　Ｎａｋａｍｕｒａ　　丁−８４８）（受託
番号：微工研菌寄第８３６７号）が好まししＡ　。

本発明に用いられるストレプトマイセス　ミサキエンシ
ス　ナカムラ　Ｔ−８４８号株は１分岐する真正の菌糸
を有し空中にのびる気菌糸は分断して長い胞子の連鎖と
なり、１０個からそれ以上の胞子を形成する。

全細胞の加水分解物からはＬ　Ｌ−ジアミ、ノピメリン
酸が検出されるが、メソジアミノピメリン酸は検出され
ない。

また糖成分としてガラクトースとグルコースが検出され
るが、アラビノースとマジュロースは検出されない。

これらの点で、本菌株は明らかに放線菌日中のストレプ
トマイセス科ストレプトマイセス属に属する一菌株とし
て認められる。

ストレプトマイセス　ミサキエンシス　ナカムラＴ−８
４８号株は下記の菌学的性質を有する。

（Ｉ）形態学的性質 基土菌糸はよく発達し分岐し、菌糸のｌ】はほぼ０．６
〜０．８μｍである。十分に発達すると培地表面はもり
−にかり、しばしばヒダ状になる。

数種の培地例えばグルコース・アスパラギン寒天培地、
スターチ寒天培地、千〇シン寒天培地、イースト・スタ
ーチ寒天培地、酵母エキス・麦芽エキス寒天培地などで
、非常に良好に気菌糸を着生する。気菌糸は良好に発育
し分岐し直線状である。胞子の表面は平滑で形状は球状
である。大きさはほぼ０．８Ｘ１μｍである。胞子のう
、菌核。

束菌糸などは観察されない。

（ＴＩ）培養上の諸性質 実験の方法はイー・ビー・シャーリングらの報告（イン
ターナショナル・ジャーナル・オブ・システマチック・
バグテリオロジー１６巻、３１３〜３４０頁、１９６６
年）に準じ、その他付加的に公知の培地及び実験方法を
併用した。色調の決定にはキセノンランプを光源とする
標章光源下で標準色票としてカラー・ハーモニー・マニ
ュアル第４版を用い、一致する色票があれば初めに一船
名を示し、次いで括弧内に色票コードを併記した。

繰返し同色が現われた場合は色票コードのみを示した。

以下特記しないかぎり、２８℃、３週日の生育の状態で
あり、寒天平板培養である。ａａにはその生育状況、ｂ
欄には気菌糸の状態、ｃｔｌａには可溶性色素を記載し
た。

（１）シュークロース・硝酸塩寒天培地（ディフコ・ツ
アペック　ソリューション　アガー）ａ：はじめは遅い
が次第に良好。パール・シェル・ティンにアグレー、３
ｈａ） ｂ：僅かに着生。パール・シェル・ティンＣ：認められ
ない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地ａ：良好、隆
起する。初めナチュラルにツーグレー３ｄｃ）からチェ
スナツト・ブラウン・スペース；ブラウン（４ｎｉ）。

ｂ＝良好に着生。シルバーグレーにアーグレー３ｆｅ） Ｃ：認められない。

（３）グリセロール・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−
５ディフコ） ａ：不良、初めサンドにアーグレー３ｃｂ）からナチュ
ラルになる。

ｂ二着生不良。

Ｃ：認められない。

（４）スターチ寒天培地（ＴＳＰ−４デイフコ、無機塩
スターチ・アガー） ａ：旺盛に生育し、粉状、しわがあり、初めダーク・ブ
ラウン・アポガニ−；ダーク・ブラウン（６ｐｎ）、チ
ョコレート・ブラウン；ダークブラウン（５ｐ　ｎ）チ
ョコレート・ダーク・ブラウン（４ｎＱ）になる。

ｂ＝良好に着生。プシーウィロー・グレーにアーグレー
５ｄｃ）。

Ｃ：赤に近い茶色。

（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−７ディフコ、チロシ
ンアガー） ａ：旺盛に生育し、粉状で拡散。ブラック・プラムにア
ーグレー１０ｐｏ）になる。

ｂ＝旺盛に生育。アシニスにアーグレー５ｆｅ）Ｃ：う
す茶。

（６）栄養寒天培地 ａ：不良ないし普通。ビスケット・エクル・オーミール
・サンド（２ｅ　ｃ）から（エクストラ・パステル・シ
リーズ、２ｄｃ）になる。

ｂ：良好着生。シェル・ピンクにアグレー５ｈａ）。

Ｃ：作らない （７）イースト・マルト寒天培地（ＩＳＰ−２゜ディフ
コ、イースト・マルト・エキストラクト・アガー） ａ：旺盛。初めにチョコレート・ブラウン；ダーク・ブ
ラウン（４ｐｎ）からクローブ・ブラウン；ディープ・
ブラウン（３ｐ　Ｑ）となる。

ｂ：旺盛に生育。パール・グレー・スモークにツーグレ
ー１３ｄｃ）。

Ｃ：茶色。

（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−３デイ。

フコ） ａ：不良。バーガンディ・コードパン；ディープ・マロ
ン（７１／２ｐｆｌ）からヴイスク・ライト・ベージュ
（３ｅｃ）。

ｂ＝普通から良好に着生。プシーウィロー・グレーにな
る。

Ｃ：赤に近いピンク色。

（９）イース１へ・スターチ寒天培地 ａ：旺盛で拡散。ブラック・プラムにアーグレー１０ｐ
ｏ）から黒色。

ｂ：旺盛に着生。プシーウィロー・グレー。

Ｃ：認められない。

（１０）ヌートリエント寒天培地（ディフコ、ヌートリ
エント・アガー） ａ：不良から良好になり、拡散。ダーク・カバード・グ
レーにアーグレー２ｉｈ）。

ｂ：非常に良好。綿状。オーキト・ミストにアーグレー
１０ｃｂ）。

Ｃ：認められない。

（ＩＩＩ）生理生化学的性質 （１）生育温度範囲（イースト・スターチ寒天培地、滅
菌前ｐＨ７，２、温度勾配装置使用、２週目の生育） 適温：１９．Ｏ℃〜３４．２℃生育 可能温度：１０．５〜３８．０℃（２）ゼラチンの液化
（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地穿刺培養）：陽
性 （３）脱脂乳の凝固・ペプトン化（ディフコ、スキムミ
ルク２８℃ないし３７℃） ２８℃：ペプトン化は陽性、凝固は陰性３７℃：ペプト
ン化は陽性、凝固は陰性（４）メラニンの生成 チロシン寒天培地：疑陽性 メラニン生成培地：陰性 トリプトン・イースト液体培地：陰性 ペプトン・イースト鉄寒天培地：陰性 （５）アデニン、キサンチン、ヒポキサンチン、チロシ
ンの溶解 チロシン：陽性 キサンチン、ヒボキサンチン、アデニン：陰性 （６）耐塩性（イースト・スターチ寒天培地中食塩） ニア％迄生育するが、１０％では生育しない。

（ＩＶ）炭素源の利用能（ディフコ、カーボン・ユティ
リゼイション寒天培地、２８℃、２週目）陽性＝Ｄ−グ
ルコース、Ｌ−アラビノース、フラクトース、シューク
ロース、 疑陽性：Ｄ−キシロース、ラフィノース。

ラムノース。

陰性：サリシン、イノシトール、マンニトール以上の諸
性質によって公知の文献から類似種を検索するとストレ
プトマイセス　ミサキエンシスナカムラ　（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｍ１ｓａｋｉｅｎｓｉｓ　Ｎａｋａｍ
ｕｒａ）、ストレプトマイセスラムローサス　エトリン
ゲル、ゴイマン、ヒュッター、ケラー−シーエルライン
、ゲランドルファー、ナイプ、プレログ　アンド　ツエ
ーナ−（Ｓｊｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｒａｎ＋ｕｌｏＳ
ｕｓ　Ｅｔ、ｔ、１ｉｎｇｅｒ、　　ＧＨｕｍａｎｎ、
　　ＨＧｔｔｅｒ、　　Ｋａｌｌｅｒ−５ｃｈｉｅｒｌ
ｅｉｎ。

にｒａｇｏｌｆｅｒ、　Ｎｅ１ｐｐ、　Ｐｒｅｌｏｇ　
ａｎｄ　Ｚ’５ｈｎｅｒ　）が見い出される。しかし、
ストレプトマイセスラムローサスはシュークロース、ラ
ムロース、キシロースを資化せず、マンニトールを資化
し、メラニンを産生ずる点、耐塩菌で１３％まで生育す
る点が異なる。

ストレプトマイセス　ミサキエンシスはメラニン生成培
地、トリプトン・イースト液体培地でのメラニン産生が
陽性又は疑陽性になること以外一致した。

従って本菌株はストレプトマイセス　ミサキエンシスの
１菌株として同定しストレプトマイセスミサキエンシス
　ナカムラ　Ｔ−８４８と命名した。

本発明の製法としては一般に通気撹拌培養することが好
適である。生産培地としては、ストレプトマイセス属菌
の培養に用いられる通常の原料が使用され、すなわち各
種の炭素源、窒素源及び有機又は無機塩類並びに場合に
より消泡剤などを適宜に組合せて用いることができる。

一般には炭素源としてはグルコース、澱粉、グリセリン
、デキストリン、シュクロース、動植物油等、窒素源と
しては大豆粉、コーンスチープリカー、ペプトン。

肉エキス、酵母エキス、小麦はい芽、アンモニア等を使
用することができる。その他必要に応じ、炭酸カルシウ
ム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸塩等の無機
塩を添加し、また菌の発育を助けて抗生物質６２７０物
質の生産を促進する作用を有する有機又は無機塩を適宜
に添加することもできる６ 培養温度は一般に２５〜３５℃の範囲であるが３０℃付
近が好ましい。培養時間は種々の条件により異なるが通
常は９２〜１６４時間にて抗生物質６２７０物質の産生
蓄積量は最大となる。

培養物から抗生物質６２７０物質を単離、精製するため
には、本物質の理化学的性質を利用し、公知の手段５例
えば不純物との溶解度の差を利用する手段、イオン交換
樹脂又は各種吸着剤に対する吸着力の差を利用する手段
、水と混和しない有８！溶媒による抽出手段、あるいは
沈殿、不純物の除去、透析、乾燥、再結晶などの手段を
適宜選択し組合わせて行うことができる６ 培養物中に生産された抗生物質６２７０物質は。

例えば次のようにして採取することが好ましい。

培養液に濾過助剤５例えば珪藻土、ラジオライト７００
等を加えて培養液を濾過し、濾液及び菌体を夫々適当な
溶媒、例えば酢酸エチル、アセトン等で抽出する。次い
で、菌体抽出液と濾液抽出液を合わせ、この抽出液から
溶媒を留去すると抗生物質６２７０物質の粗抽出物が得
られる。

この粗抽出物より抗生物質６２７０物質を単離するため
には、例えばアルミナ及びシリカゲルのカラムグロマト
グラフィー、セファデックスＬＨ−２０のカラムクロマ
トグラフィー精製し、活性区分を集め、濃縮、乾燥する
ことにより抗生物質６２７０物質は高純度の粉末として
得られる。

次にこの粉末を酢酸エチルにとかし、希塩酸溶液で処理
し、溶媒層を濃縮すると抗生物質６２７０物質が遊離酸
として結晶する。

ナトリウム塩として得るためには前記希塩酸溶液で処理
した溶媒層を次に希炭酸ナトリウム溶液で処理し、溶媒
層を濃縮すると抗生物質６２７０物質がナトリウム塩と
して得られる。ここに得た遊離酸型及びナトリウム塩型
の抗生物質６２７０物質は適当な溶媒例えばｎ−ヘキサ
ン−酢酸エチル等で再結晶することにより純粋な結晶と
して得ることか出来る。こうして得られた遊離酸型の抗
生物質６２７０物貿の性状は次のとおりである。

（１）無色針状結晶、酸性物質 （２）融点　１１５〜１１８℃ （３）元素分析値（実測値　％） Ｃ６２，７２％、　　８　９．４９％。

０　２７．７８％ （４）比旋光度　〔α］”＝−１１，５°　（ｃ１．０
，メタノール） （５）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中で測定
すると、２１０ｎｍ以上に吸収極大を示さない。

（６）赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム錠で測定）
における特性吸収（ｃｍ−’）：３４７０．２９８０，
２９４５，２８９０，１７３５．１４６０，１３８０，
１３１５，１１６５゜１１０２．１０７５，９８７，９
８０ 吸収スペクトルを第１図に示す。

（７）溶解性： メタノール、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム、
エーテル、アセトン、ベンゼン等に可溶。

水に不溶。

（８）呈色反応： バニリン−硫酸反応、ドラーゲンドルフ反応陽性。

ニンヒドリン反応に陰性。■２気体で着色。

（９）薄層クロマトグラフィー（メルク社製キーセルゲ
ルＧＦ２５４使用）： （１０）　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：　ＴＭＳを内部標
準として、重クロロホルム中１００ＭＨｚで測定した結
果を第２図に示す。δｐｐｍ３．３９（３Ｈ）、３．４
９　　（６Ｈ）に３個のメトキシル基の存在を示す。

（１１）”　Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＴＭＳを内部標準
として、重クロロホルム中２５　Ｍ　Ｈｚで測定した結
果を第３図に示す。

（１２）抗菌スペクトルを第１表に示す。

第１表 表中の記号ａは栄養寒天培地、ｂはグ リセリン栄養寒天培地、Ｃはばれいしょ一ショ糖寒天培
地を示す。

以上の理化学的及び生物学的性質から、本物質はポリエ
ーテル群と総称される抗生物質に属する。

本物質は’　）ｌ−ＮＭＲスペクトルから分子中に３個
のメトキシル基を有することが推定されるが、ポリエー
テル群抗生物質のうち分子中に３個のメトキシル基を有
する既知の抗生物質としてはｃ２０−１２（特開昭５８
−５３９１９号）、Ａ−２０４Ｂ（ハンドブック　オブ
　マイクロバイオロジイ　４１０．Ｖｏｌ、３．　　　
ＣＲＣＰｒｅｓｓ）　、Ｔ−４２０８２（特開昭５１−
７９７３０号）、Ｔ−４０５１７（特開昭５０−１０５
８１号）、３８２９５　（特開昭５１−１２５７９３号
）、Ｎｏ、６０１６　（特開昭５４−８４５７６号）、
Ｘ−１４８６８ｃ（特開昭５６−１２０６９６号）、Ｃ
Ｐ−４７４３３（特開昭５７−１５４１０８号）、４７
４３４　（特開昭５７−１５４１８７号）、ＬＬ−Ｃ２
３０２４β（特開昭５８−７８５９８号）があげられる
。

しかし６２７０物質は融点、比旋光度、元素分析値又は
赤外線吸収スペクトルなどの性質が前記既知物質と異な
る抗生物質である。

抗生物質６２７０物質は特にダラム陽性菌に対して強力
な抗菌作用を有することから、抗菌剤として有用である
。更に、低濃度にて抗コクシジウム作用、殺ダニ作用及
び抗ウィルス作用を有し、そのほか牛、豚等の家畜の下
痢及び治療剤並びに飼料効率改善剤及び発育促進剤とし
て有用である。

実施例１ グルコース２％、スターチ１％、肉エキス０゜５％、酵
母エキスＯ９５％、Ｎ−Ｚ−アミン０゜５％及び炭酸カ
ルシウム０．１％を含有する培地（殺菌前ｐＨ７，０）
を用いた。

上記の種培地を５００ｍＱ、容フラスコに各々７０ｍＱ
を分取し、各フラスコにストレプトミセスミサキエンシ
ス　ナカムラ　Ｔ−８４８株（受託番号：微工研菌寄第
８３６７号）を接種し、２８℃、４８時間の振どう培養
を行った。

次いでこの培養液ＩＱをグルコース２％、シュークロー
ス５％、大豆粉１％、小麦胚芽３．５％、肉エキス０．
５％、ビール酵母０．５％、硫酸アンモニウム０．２％
、硫酸マグネシウム０．２％、炭酸カルシウム０．５％
、塩化アンモニウム０゜２％及び消泡剤ＣＡ−１２３（
日本油脂■製）０゜２％からなる組成の培地１００Ωに
接種し、３０℃で９６時間、２００Ｑ容タンク中で通気
撹拌培養する。通気量は１００１２／分、ベラ回転数は
２００ｒｐｍとする。

培養終了後、培養液に濾過助剤（商品名：セライト）を
加えて濾過し、濾液と菌体とに分離する。

菌体部分を９０％アセトン水１００Ｑを加え１時間撹拌
後、濾過し次いでアセトンを減圧留去し、水溶液１０Ｑ
を得る。

この水溶液は前記培養濾液と合し、酢酸エチル５０Ｑで
２度抽出し、酢酸エチル層を減圧濃縮し、５Ｑの酢酸エ
チル濃縮液を得る。

次に酢酸エチル濃縮液を予め酢酸エチルで調製したアル
ミナカラム（５，５ｃｍ径Ｘ１０ｃｍ）にかけ、メタノ
ールで展開すると活性部分が溶出される。活性部分を集
め減圧濃縮してメタノールを留去し乾燥すると、約Ｌｏ
ｇの粗粉末が得られる。　さらに、この粗粉末ｌｏｇを
少量の酢酸エチルに溶解し、シリカゲル８００　ｍ　Ｑ
を充填したカラムにかけ、酢酸エチル−ベンゼン（１：
１）を用いて展開し、活性部分を集めて減圧濃縮、乾燥
することにより、抗生物質６２７０物質の粗粉末１．２
ｇが得られる。

次いで、粗粉末１．２ｇを少量のアセトンに溶解し、ア
セトンで充填したセファデックスＬ　Ｈ−２０（ファル
マシア社製）のカラムに吸着させ、アセトンで展開溶出
を行ない、得られた活性フラクションを濃縮すると抗生
物質６２７０物質の粗結晶ｔｔｏｍｇが得られる。

得られた抗生物質６２７０物質の粉末１１０ｍｇを酢酸
エチルに溶解し、少欲の希塩酸と共に振とうしたのち、
酢酸エチル層を減圧下に濃縮すると、抗生物質６２７０
物質の遊離酸が５６　ｍ　ｇ得られる。

こうして得られた抗生物質６２７０物質遊離酸は前記の
理化学的性質及び生物学的性質を示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は臭化カリウム錠で測定した抗生物質６２７０物
質の赤外線吸収スペクトル、第２図はＴＭＳを内部標準
とし、重クロロホルム中で測定した抗生物質６２７０物
質の１８−ＮＭＲスペクトル、第３図はＴＭＳを内部標
準とし、重クロロホルム中で測定した抗生物質６２７０
物質の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）抗生物質６２７０物質を生産する能力を有するスト
   レプトマイセス属菌を培養し、その培養物から抗生物質
   ６２７０物質を採取することを特徴とする下記の理化学
   的性質を有する抗生物質６２７０物質の製法。 （１）無色針状結晶、酸性物質。 （２）融点１１５〜１１８℃ （３）元素分析値（実測値％） Ｃ６２．７２％、Ｈ９．４９％、 Ｏ２７．７８％ （４）比旋光度〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝−１１．５°（ｃ
   １．０，メタノール） （５）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中で測定
   すると、２１０ｎｍ以上に吸収極大を示さない。 （６）赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム錠で測定）
   における特性吸収（Ｃｍ＾−＾１） ３４７０、２９８０、２９４５、２８９０、１７３５、
   １４６０、１３８０、１３１５、１１６５、１１０２、
   １０７５、９８７、９８０ （７）溶解性： メタノール、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム、
   エーテル、アセトン、ベンゼン等に可溶、水に不溶。 （８）呈色反応： バニリン−硫酸反応、ドラーゲンドルフ反応陽性。 ニンヒドリン反応に陰性。Ｉ＿２気体で着色。 （９）薄層クロマトグラフィー（メルク社製キーセルゲ
   ルＧＦ＿２＿５＿４使用）： ▲数式、化学式、表等があります▼ （１０）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＴＭＳを内部標準
   として重クロロホルム中１００ＭＨｚで測定した結果、
   δｐｐｍ３．３９（３Ｈ）、３．４９（６Ｈ）に３個の
   メトキシル基の存在がみとめられる。 ２）抗生物質６２７０物質生産菌ストレプトマイセス　
   ミサキエンシス　ナカムラＴ−８４８号株