JPS6150976A - 新規物質ａｃ５ｙ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は、新規物質に、さらに詳しくｉエストレプトミ
セス・カポアムスに属する菌株ｆｆ１Ｚ３−４１株によ
って産生される抗腫瘍性並びに抗菌性を有する新規抗生
物質ＡＣ５Ｙに、関する。

！ｒＬ肺鳥性物質並びに抗凶注物買に関しては、弐に多
数のものが医薬として実用化されている。一般に、化学
物質の生理活性はその化学構造に依存するところが大き
いから、抗Ｂ瘍性または抗菌ヶを有する新規な化合物に
対しては不断の希求があるといえよう。

発明の概要 本発明は、上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明（よる新規物質ＡＣ５Ｙは、下式側で
示されるものである。

１）化学構造 本発明による新規物質ＡＣ５Ｙは、上記の式（Ａ）で示
される化学構造を有する。

この化学構造は、次のようにして決定された。

ＡＣ５ＹＧ工、　Ｈ−ＮＭＲ（第３図）の解析によリ、
部分構造として、２位に置換基を持つ４，５−ジヒドロ
キシ−６−メチルテトラヒドロピラン、２．４−デカ・
クエン酸、およびキノン・クロモフォア構造を有するこ
とが明らかとなった。また、２′位のプロトン（δＨ４
，８７）と１０位のプロトン（δＨ７，８４）がロング
・レンジ・カップリングを持つことから、テトラヒドロ
ピラン環の２′位がキノン・クロモ７オアの９位と結合
し、５′位のプロトンのケミカル・シフトが比較的低磁
場側（δＨ４，６４）　にあることから、デカツエン酸
はテトラヒドロピラン環の５′位のヒドロキシル基にエ
ステル結合しているものと考えられた。

さらに、ＡＣ５Ｙの１３Ｃ−ＮＭＲをセレクティヴ・プ
ロトン・デカップリング法およびロング・レンジ・セレ
クティグ・プロトン・デカンプリング法を用いて解析し
た結果、キノン・クロモフォア部分は４ｍ、１２ｂ−ジ
ヒドロ−４ａ、８，１２ｂ−）ジヒドロキシ−３−メチ
ル−ベンズ（ａ）７ントラ七ンー１．７．１２（４）Ｉ
）−トリオ／構造と判明した。

また、ＡＣ５Ｙを０．１規定水酸化ナトリウム中で室温
で１時間加水分解して、２，４−デカジエン酸を得た。

これを１Ｈ−ＮＭＲで解析した結果、二個のオレフィン
はともにＥ配位であった。

ＡＣ５Ｙについて最近普及しつつある３ｅｃｏｎｄａｒ
ｙｉｏｎマススペクトル分析により分子イオノピークを
求めた結果、ジェタノールアミン（ＤＥＡ　）　ヲマト
リックスとして用いてｍ／ｚ　７２４　（Ｍ＋ＤＥＡ＋
１　）のピークを示したことから、ＡＣ５Ｙの分子式は
Ｃ３５’３８０１Ｏと決定された。

以上の結果より、ＡＣ５Ｙの化学構造は（Ａ）のように
決定された。

２）物理化学的性状 （１）外　　観：黄橙色粉末 （２）元素分析：　　旦　　　旦　　　旦分析値　６８
．０３　　６．２６　　２５．７１計算値　６７．９５
　　６，１９　　２５．８６（Ｃ３５Ｈ３８０１０） （３）分子量：　６１８．７ （４）融　　点：明確な融点は示さない。７０℃付近か
ら分解し始める。

（６）紫外部可ＪＡｒｒ収スペクトル：第２図（メタノ
ール中）λｒｎａ工（Ｆ、１％） ０ｍ ２３５（７０４）、２５７（７８２）、３０５（１３９
）、４４２（１００）（７１溶解性：メタノール、エタ
ノール、ｎ−ブタノール、アセトン、クロロホルム、酢 酸エチル、ベンゼンに可溶 水、ｎ−へキサンに千尋 （８）Ｒｆ値（メルク社［シリカゲル−Ｆ２５４使用）
クロロホルム：メタノール＝２０：１　０．６２ベンゼ
ン　：メタノール＝２０４１　　Ｏ，３３（９）赤外吸
収スペクトル（Ｋ）Ｂｒ：　ディスク法）第２図 （１０）　ｇｍ気共鳴スペクトル（４００メガヘルツ、
重クロロホルム中） 第３図 ＡＣ５Ｙの製造 概要 抗生物質ＡＣ５Ｙは現在のところ微生物の培養によって
のみしか得られていないが、類縁化合物の合成化学的ま
たは微生物学的修飾によって製造することも、あるいは
全合成化学的に製造することもできよう。

微生物の培養による場合の菌株としＣは、ストなしたス
トレプトミセス・カボアムス１４Ｚ３−４１株がＡＣ５
Ｙを生産することが本発明者らによって明らかにされて
いるが、その他の菌株については抗生物質生厘笛単離の
常法によって過半なものを自然界より分離することが可
能である。また、Ｓ。

カボアムスＮｎＺ３−４１株を含めてＡＣ５Ｙ生産菌を
放射線照射その他の処理に付して、ＡＣ５Ｙ生産能を高
める余地も残されている。

Ｎｈ２３−４１株 ＡＣ５Ｙ生成能を有するストレプトミセス属の菌株とし
て本発明者らの見ぺ出しているＮｎＺ３−４１株舎工、
下記の内容のものである。

１）由来および寄託番号 ｈ　Ｚ３−４１株は、群馬県藤岡市金井の桑畑で採取し
た上場から分離されたものであり、昭和５９年８月１３
日に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて「ｇ
工研菌寄第７７７１号」の番号を得ている。

２）菌学的性状および生理学的性質 本菌株はＡＣ５Ｙを生産する放線−であって、菌学的諸
性状は次のとおりである。なお、遅ルー＝ｉ１株の各種
培地上の性状は、特許庁産業別審査基準「応用微生物工
業」に従って各種培地を調製して観察して得たものであ
る。また、以下の各試験は、シャーリングらの方法（Ｉ
ｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｋ、止、３１３−３
４０（１９６０）　）により行なったものである。

（１）形態 気菌糸は、玉軸を長く伸し、短板を不規則に分枝する単
純分枝で、胞子鎖は、その先端に鉤状（ｈｏｏｋ　）　
　または不完全ならせん状（ｒｅｔｉｎａｃｕｌｉａｐ
ｅｒ−ｔｉ　：　ＲＡ　）に形成される。胞子舎工１０
−５０個の連鎖をなし、その形状は円筒形ないし卵形で
あって、大ざさは０．７〜０．９μ×０．８〜１．２μ
であり、その表面は平滑である。Ｖ毛胞子、胞子浪およ
び運動性胞子は有さない。

（２）各種培地上の生育状態 各種培地上でｎ℃で３週間培黛したときの性状は、第１
表に示すとおりである。

（３）生理的性質 嵐Ｚ３−４１株の生理的性質は、第２表に示すとお第　
２　表 （４）炭素源の利用性 ｈ２３−４１株の炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリ
ープ寒天培地）は、第３表に示すとおりである。

第３表 以上の性状を要約してＮｎＺ３−４１株の特徴をあげれ
ば、下記の通りである。

■気菌糸は、鉤状または不完全ならせん状を呈する。

■胞子は、円筒形ないい工卵形で、その表面を工平滑で
ある。

■気歯糸の色調は、灰色ないし赤色である。

■集落の裏面の色調は、茶色から暗橙色ないし赤味をお
びた紫色である。

■本菌株は、メラニン様色素を産生ずる。

上記性状より、へ２３−４１株は明らかにストレプトミ
セス属に属しており、ｌ５Ｐ（インターナショナル・ス
トレプトミセス・プロジェクト）の記載（Ｉｎｔ、　Ｊ
、　５ｙｓｔ、Ｂａｅ３１８．６９−１８９、Ｚ７２−
３９２（１９６８）、炬、３９１−５１２（１９６９）
および芽、２６５−３９４（１９７２））およびパーシ
イの細菌同定便覧（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　
ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎｍｔｎｅ　Ｈａｅｔｅｒｉｏｌ
ｏｒｙ、８　ｔｈ　Ｅｄ、　（１９７４））を参考にし
て既知菌種を検索したところ、８ｇ４表に示すようにス
トレプトミセス・カボアムス（５Ｌｒｅｐｔｏｒｒ＋ｙ
ｅｅｓ　ｃａｐｏａｍｕｓ　）およびストレプトミセス
・シネレオルーパー・サブスペシイズ・シネレオルーバ
ー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ　ｃｉｎｅｒｅｏｒｕｂ
ｅｒｓｕｈｓｐ、ｃｉｎｅｒｅｏｒｕｂｅｒ　）　　に
類似している。ｌ’４１Ｚ３−４１株とこれら２近Ｒ種
とを比較すると、裏面の色調ではＳ、ｃｉｎｅｒｅｏｒ
ｕｂｅｒ　５ｕｂｓｐ、　ｃｉｎｅｒｅｏｒｕｂｅｒ　
に近いが、胞子鎖の形態および胞子の形態からはむしろ
Ｓ、　ｃａｐｏａｒｒ＋ｕｓに近いといえる。次表源の
利用性で若干の相違点が見られるが、その他基本的性状
の同一性から、１Ｚ４−４１株ｋｌ　Ｓ、　ｃａｐｏａ
ｍｕｓの一菌株を同定するのが妥当である。

したがって、本発明者はＮｎＺ３−４１株をストレプト
ミセス・カボアムス（５ｔｒｅｐｔｏ＋ｙｃｅｓ　ｃａ
ｐｏａｍｕｓ　）と同定した。

培養／　Ａ　Ｃ５Ｙの生−汚 抗生物質ＡＣ５Ｙは、ストレプトミセス属に属するＡＣ
５Ｙ生産菌を適当な培地で好気的に培安し、培養物から
目的物を採取することによって製造することができる。

培地シュ、ＡＣ５Ｙ生産菌が利用し５る任意の栄養源を
含有するものでありうる。具体的には、例えば、炭素源
としてグルコース、シュークロース、マルトース、スタ
ーチ、および油脂類などが使用でき、窒素源として大豆
粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキス、およびコー／スチ
ープリカーなどの有機物並びにアンモニウム塩または硝
酸塩、たとえば硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、お
よび塩化アンモニウム等の無機物が使用できる。また、
必要に応じて、食塩、塩化カリウム、リン酸塩、ｌ金属
塩なと無機塩類を添加することができる。

発酵中の発泡を抑制する為に、常法に従って適当な消泡
剤、たとえばシリコーンを添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培養＠夏はｗ℃〜３７℃がｊ適当であるが、δ℃〜
刀℃が好ましい。この方法でＡＣ５Ｙの生産期は、振盪
培養、通気攪拌培養共に２日〜３日で最高に達する。

このようにしてＡＣ５Ｙの蓄積された培養物が得られる
。培養物中では、ＡＣ５Ｙ！’ｊ−その一部は培養Ｆ液
中に存在するが、その大部分は菌体中に存在する。

このような培養物からＡＣ５Ｙを採取するには、合目的
的な任意の方法が利用可能である。その一つの方法は、
抽出の原理に基くものであって、具体的にｔ工、たとえ
ば、培養Ｆ液中のＡＣ５Ｙについてはこれを水不混和性
のＡＣ５Ｙ用浴媒（前記参照）例えば酢酸エチル等で抽
出する方法、あるいは菌体内のＡＣ５Ｙについては濾過
、遠心分離等で得た菌体集体をメタノール、エタノール
、ア化トノなどで処理して回収する方法等がある。菌体
を分雄七丁に培養物そのヱまを上記の抽出操作に付すこ
ともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出の範
切に入れることができる。

培養物からＡＣ５Ｙを採取する他の方法の一つは、吸着
の原理に基くものであって、既に液状となっているＡＣ
５Ｙ含有物、例えば培養戸液あるいは上記のよ５にして
抽出操作を行なうことによって得られる抽出液、全対象
として、適当な吸着４］ないしゲルー過剤、例えばシリ
カゲル、「セファデックスＬ、Ｈ２０Ｊ　（ファルマシ
ア社製）、「トヨ、ｅ−ルＨＷ４（ＪＪ（東浮四達社裂
）等、を用いたカラムクロマトグラフィー、「ヌクレオ
シル：）Ｃ１８Ｊ（西独ナーゲル社１１）等を用いた扁
運液体クロマトグラフィー、その他によって目的ＡＣ５
Ｙをａ看させ、その後溶離させることによって、ＡＣ５
Ｙを得ることができる。このようにして得られたＡＣ５
Ｙ浴孜を戚圧貞縮乾固丁れば、ＡＣ５Ｙの粗標品が得ら
れる。

このようにし℃得られるＡＣ５Ｙの粗標品をさらＫ　ｎ
ｔ製するためには、上記の抽出法および吸着法を必要に
応じて組合せて必要回収行なえばよい。

１７＋１えば、シリカゲル、「セファデックスＬＨ２０
Ｊなとの吸着剤またシエゲル濾過剤を用いたカラムクロ
マトグラフィー、「ヌクレオシル５　Ｃｌ８Ｊ　等を用
いた高速履体クロマトグラフィー、および向流分配法ｔ
−ｉ４宜組合わせて実施することができる。

具体的には、例えば、ＡＣ５Ｙ粗標品’ｔ／Ｊ）量のメ
タノールに浴解し、「トヨ／２−ル１（Ｗ４０Ｊカラム
を用いて、適当な溶媒で展開して活性成分を浴出させ、
索線・乾固するとＡＣ５Ｙ（７）黄橙色粉末が得られる
。

ＡＣ５Ｙの用途 本発明による抗生物質ＡＣ５Ｙは、制癌活性および抗菌
活性を有するという点で有用である。

生卵活性 ｌ）抗腫瘍性 ＡＣ５Ｙは、実験動物の腹水癌に対して著しい抗腫瘍作
用を示した。例えば、ｄｄＹマウスに対し、エーリツヒ
腹水癌Ｊｆｆ＋胞の、懸濁液ｌＸｌ０’ケ／マウスを腹
腔内に１多植し、移イπ後１日目および５日目にＡＣ５
Ｙを腹腔内投与し、生理０塩水を投与した対照群のマウ
スの生存日数を１００とした延命ぶ（チ）で効果分示す
と、下記の通りであった。

１．２５　　　　　　　　１０４ ２・５　　　　　　　　１０２ ２）抗菌性 ＡＣ５Ｙは独々の微生物に対して抗ω作用を示す物質で
あり、寒天平板希釈法により求めた最小増殖阻止嬢良（
ＭＩＣ）は下記の通りであった。

（１）検定間の接種及び培養 １０６１固／ｍｌＫ調製した検定ビ白の自体懸濁液ある
いを工胞子愁濁ｌ夜とミクロプランタ−を用いて接種し
、下記の温度及び時間培養後、生育の有無を判定した。

＠）恢定函が細口の場合　　；１７°Ｃ／２０時間（ロ
）検定間が偕母の場合　　δ℃７４８時間（ハ）検定函
がカビの場合　　δ”Ｃ１５日上記のように、本発明の
ＡＣ５Ｙは抗菌作用を百し、特にペニシリウム・クリソ
ゲナム等に対して抗Ｍ注を示すので、・−Ｊｔらに起因
する。感染症に対して有効な抗生物質として使用するこ
とができる。

３）急性毒性（ＬＤ５Ｕ　） ＡＣ５Ｙのマウスリ腔内江射によるＬＤ５０は、１５　
ｍｇ／ｋｇであった。

４）抗生物質 上記のように、本発明のＡＣ５Ｙｋ工抗庇瘍性および抗
ω性士示すことが明らかにされた。

したがって、本発明のＡＣ５Ｙは抗腫瘍剤ないし抗ｔａ
ｆｆ　Ｍｌｌとして使用することかでざる。

実験例 以下におい℃「チ」讐工「Ｗ／■悌」である。

実施例１ １）種ｅの調製 使用した培地は、下記の組成の成分をｌ　ＩＪントルの
水に浴解してｐ）Ｌ　７，０に調整したものである。

グルコース　　　０．４％ 麦芽エキス　　　１．０％ 酵母エキス　　　０．４％ 上記培地１５　ｍｌ　′ｆ！：５０　ｍｌの人捜試験管
へ分注し、殺菌後、ストレプトミセス・カボアムスｆｆ
１２３−４１分ス２ントより１白金耳凄禎しＩ″ＣＫて
４８時間振盪培養したもの全種母とした。

２）培養 使用した培地は、下肥の組成の成分を１リツトルの水に
俗解して、ｐＨ７，０に調整したものである。

グルコース　　　２，５チ 大豆粉　１．５％ 乾燥酵母　　０．２％ 炭酸カルシウム　　０．４％ 上記培地を１００　ｍｌずつ５００　ｍｌの三角フラス
コへ分圧殺菌したものへ、上記ａ８２ｍｌ　　を添加し
、ロータリーシ毒−カーを用いてＺ７　”ＣＫて回転理
髪を行なった。３日後に培養を工終了し、戸別した泊体
を５００　ｍｌ　　のア七トンで２回抽出する。

抽出７夜を０稲し、２００　ｍｌ　　の酢酸エチルで２
回抽出する。抽出ｆＬを無水１匝改ナトリウムで脱水し
、濃縮乾固した後、１０ｒｒ、ｌ　　のクロロホルムに
溶解する。６０ｍ１　のｎ−ヘキサンを加え、生じた沈
殿を除き、再び濃縮乾固する。これをＬＯｎｉｌ　のメ
タノールに浴解し、メタノールで平衡化した［トヨ・ξ
−ルＨＷ　４０　Ｊカラム（５ａｍφＸ５０ｃｍ）を通
過させる。得られた活性フラクション″５ｒ：濃縮乾固
すると、ＡＣ５Ｙの黄澄色Ｘ！ｆ宋１４０　ｒｕｇ　　
が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＡＣ５Ｙの紫外部吸収スペクトル（メタノー
ル中）を模写したものである。 第２図は、Ａ、ｃ５Ｙの赤外吸収スペクトルを模写した
ものである。 第３図は、ＡＣ５ＹのｌＨ−ＮＭＲスペクトル金模写し
たものである。 出願人代耽人　　　猪　股　　　　τ１１１手続主１３
正書 昭和５９年１０月；を日 特許９長ｇ　志賀　　学　殿 １　事件の表示 昭和５９年　特許願　第１７１２９’Ｏ号２　発明の名
称 新規物質ＡＣ５Ｙ ３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 ｆａｌｔ　　　悶　　麦　　酒　　株　　式　　会　　
社４　　代　　理　　人 ７　　？＋［ｉ正の対象　　　′ 明１１１　？！ｆの「特許請求の範囲」の；閑。 ８１０正の内容 ＶＩ許二１１求の範囲を、別紙の通り補正する。 ゛特許請求の範囲

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 次式で示される新規物質ＡＣ５Ｙ ▲数式、化学式、表等があります▼